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문제 정의
- 본 연구에서는 S. fradiae을 토양으로부터 분리하여, 그 생화학적 특성을 밝힘과 동시에 가금티푸스의 원인체인 S. gaHinarwn에 대한 항균효과 및 항병력에 대한 효과를 입증하고자 하였다.
- 한편, S. fradiae은 그람 양성과 음성 세균에 모두 항균성을 가지는 것으로 알려져 있어 [11], 가금티푸스의원인체인 S. gallinarum에 감수성 유무를 조사하고자 하였다. 본 연구에서는 가금티푸스의 원인체인 S.
제안 방법
- Kohn gelatin 배지와 nutrient gelatin stab 배지를 사용하여 선별 균주의 gelatin 액화능력을 관찰하였다. Gelatin 배지를 37℃에서 48시간 배양한 후 4℃ 냉장고에 두었다가 시험관을 기울여 응고유무로 액화능력을 측정하였다. 탄소화합물의 이용 특성을 조사하기 위하여, 탄소원 이용성 배지를 살균하여 -60℃로 냉각시키고 살균한 탄소원을 1% 혼합하여 평판을 만든후 균주를 접종하여 16일째 생육도를 glucose를 사용하여 배양한 것과 비교하여 산(acid) 생성능을 조사하였다.
- Nitrate 환원능의 확인을 위해 potassium nitrate 배지에 선별한 균주를 도말하여 37℃에서 24시간 동안 배양후, 그 색의변화를 확인하였다. Kohn gelatin 배지와 nutrient gelatin stab 배지를 사용하여 선별 균주의 gelatin 액화능력을 관찰하였다. Gelatin 배지를 37℃에서 48시간 배양한 후 4℃ 냉장고에 두었다가 시험관을 기울여 응고유무로 액화능력을 측정하였다.
- 간단히 설명하면 다음과 같다. Melanin 색소의생성능의 확인을 위해, 선별한 균주를 peptone yeast extract agar와 tyrosine agar 에 도말하여 37℃에서 24시간 동안 배양 후, 그 색의 변화를 확인하였다. Nitrate 환원능의 확인을 위해 potassium nitrate 배지에 선별한 균주를 도말하여 37℃에서 24시간 동안 배양후, 그 색의변화를 확인하였다.
- Melanin 색소의생성능의 확인을 위해, 선별한 균주를 peptone yeast extract agar와 tyrosine agar 에 도말하여 37℃에서 24시간 동안 배양 후, 그 색의 변화를 확인하였다. Nitrate 환원능의 확인을 위해 potassium nitrate 배지에 선별한 균주를 도말하여 37℃에서 24시간 동안 배양후, 그 색의변화를 확인하였다. Kohn gelatin 배지와 nutrient gelatin stab 배지를 사용하여 선별 균주의 gelatin 액화능력을 관찰하였다.
- 2%(w/w) 첨가한 사료(이때에 부형제로 fhicto-oligosaccharide와 (3-glucan을 적당량 넣었다)를 7주간 급여하였다. 급여 4주 후, 병원성 이 있는 S. gallinammi: 한 마리당 1 ml(4 x 10 cfb/ml)을 구강을 통해 접종하였다. 닭에 대한 방어효능에 미치는 영향을 조사하기 위하여 공격접종 후 감염계군의 생존율을 조사하였다.
- gallinammi: 한 마리당 1 ml(4 x 10 cfb/ml)을 구강을 통해 접종하였다. 닭에 대한 방어효능에 미치는 영향을 조사하기 위하여 공격접종 후 감염계군의 생존율을 조사하였다.
- 나누었다. 대조군은 상업용 양계사료를 급여하였고, S. fradiae 급여군은 대조군과 동일한 성분의 사료에 S fradiae을 각각 0.01%, 0.05%, 0.1%, 0.2%(w/w) 첨가한 사료(이때에 부형제로 fhicto-oligosaccharide와 (3-glucan을 적당량 넣었다)를 7주간 급여하였다. 급여 4주 후, 병원성 이 있는 S.
- 탄소화합물의 이용 특성을 조사하기 위하여, 탄소원 이용성 배지를 살균하여 -60℃로 냉각시키고 살균한 탄소원을 1% 혼합하여 평판을 만든후 균주를 접종하여 16일째 생육도를 glucose를 사용하여 배양한 것과 비교하여 산(acid) 생성능을 조사하였다. 분리된 S. fradiae^ 형태는 scanning electron micros- cope(HllACHl S-2400, Japan)을 이용하여 관찰하였다.
- fradiae를 7주간 급여 후에 penicillin G, oxytetracycline, sulfamethazine, sulfiimerazine sulfedime-thoxine, sulfamonomethoxine, sulfaquinoxaline의 항생물질의 생육내의 잔류 정도를 측정하기 위해 국가공인 항생제 잔류검사기관(중부대학교 산학협력단)에 분석의뢰하였다. 분석시료는 흉부 근육과 대퇴부 근육, 내장으로서 신장과 간을 중심으로 한 시료를 1 g씩 채취하여 HPLC(high performance liquid chromatography)를 이용하여 검사하였다.
- 산란계 에 S. fradiae를 7주간 급여 후에 penicillin G, oxytetracycline, sulfamethazine, sulfiimerazine sulfedime-thoxine, sulfamonomethoxine, sulfaquinoxaline의 항생물질의 생육내의 잔류 정도를 측정하기 위해 국가공인 항생제 잔류검사기관(중부대학교 산학협력단)에 분석의뢰하였다. 분석시료는 흉부 근육과 대퇴부 근육, 내장으로서 신장과 간을 중심으로 한 시료를 1 g씩 채취하여 HPLC(high performance liquid chromatography)를 이용하여 검사하였다.
- fradiae의 분리시료로 사용하였다. 채집한 각종 시료들은 멸균된 PBS 에 희석하여 방선균 및 토양미생물 선택 평판배지인 starch-casein nitrate, humic acid-vitamin, Ml, arginine- glyceol에 도말하여 27℃에서 4-6주 동안 배양하였다. 형성된 집락 중 S.
- Gelatin 배지를 37℃에서 48시간 배양한 후 4℃ 냉장고에 두었다가 시험관을 기울여 응고유무로 액화능력을 측정하였다. 탄소화합물의 이용 특성을 조사하기 위하여, 탄소원 이용성 배지를 살균하여 -60℃로 냉각시키고 살균한 탄소원을 1% 혼합하여 평판을 만든후 균주를 접종하여 16일째 생육도를 glucose를 사용하여 배양한 것과 비교하여 산(acid) 생성능을 조사하였다. 분리된 S.
대상 데이터
- 사양실험에는 120 마리의 7주령 갈색 실용 산란계를 사용하였으며, 임의로 각 그룹 당 24마리씩 나누었다. 대조군은 상업용 양계사료를 급여하였고, S.
- 우리나라의 전역에서 채집 한 토양을 S. fradiae의 분리시료로 사용하였다. 채집한 각종 시료들은 멸균된 PBS 에 희석하여 방선균 및 토양미생물 선택 평판배지인 starch-casein nitrate, humic acid-vitamin, Ml, arginine- glyceol에 도말하여 27℃에서 4-6주 동안 배양하였다.
이론/모형
- S. fradiae의 항균물질 생성능 실험은 균체를 직접 가하는 direct method를 사용하였다 [1]. 하루 전에 배양된 S.
- 분리 선별한 균주의 동정은 형태학적, 배양적 및 생화학적 특성을 조사하여 실시하였으며, Bergey's manual of systematic bacteriology의 분류 방법 에 따라 분석 하였다[10]. 간단히 설명하면 다음과 같다.
- fradiae의 항균물질 생성능 실험은 균체를 직접 가하는 direct method를 사용하였다 [1]. 하루 전에 배양된 S. gallinanim과 E. c湖를 새로운 배지에서 3시간 정도 배양하여 대수기 초기상태의 세포로 준비하여 Luria 평판 배지에 도말하고 여기에 0.8 mm의 내경을 가진 구멍을 뚫어 S. fi-adiae을 100 μl씩 분주한 후 37℃에서 24시간 동안 배양하여 지시균주에 대한 well-diffusion 방법으로 저지 환을 측정하였다.
성능/효과
- fradiae^ peptone yeast extract agar와 tyrosine agar 모두에서 적 황색을 나타내 었으나, potassium nitrate 배지에서는 적색으로의 변화가 없었다. Kohn gelatin 배지와 nutrient gelatin stab 배지에서 응고 유무를 확인한 결과 skim milk의 가수분해와 응고를 확인할수 있었다(Table 1). 탄소화합물의 이용 특성을 측정한결과, D-glucose, L-arabinose, D-xylose, D-mannitol, D-fructose, L-rhamnose, sucrose, raffinose 등은 탄소화합물을 이용하였으며, cellulose, inositol 은 탄소화합물을 미약하게 이용하고 inulin은 탄소화합물을 이용하지 않았다(Table 2).
- S. gallinanm 공격 접종 후 생존율 0.2%(w/w) 급여군에서는 유의적인 생존율의 증가0.01)를 보여주었다. 또한 시험계군에서 S.
- S. gallinarum 공격 접종 3주 후, 대조군에서는 19.9%(4/ 24)의 생존율을 보인 반면, S. fi^adiae 0.01%, 0.05%, 0.1%, 0.2%(w/w) 급여 군에서는 각각 83.3%(20/24), 87.5%(21/ 24), 87.5%(21/24), 그리고 95.8%(23/24)로 유의적인 생존율 증가(p V 0.01)를 보여주었다(Table 3).
- gallinarum에 감수성 유무를 조사하고자 하였다. 본 연구에서는 가금티푸스의 원인체인 S. gallinarum뿐만 아니라 설사증의 주 원인체인 E. coli에 대한항균능도 함께 측정 하였는데, 그 결과 S. fradiae 의 농도 의존적인 항균효능의 증가가 있음을 알 수 있었다. 이러한 결고]를 바탕으로, S.
- 본 연구의 결과를 종합하여 보면, S. fi-adiae가 증체율을 감소시키거나 생육에 항생물질을 잔류시키는 부작용없이, S. gaHbiamm에 대한 우수한 항균 효과를 가질 뿐아니라 S. gaHbiarum의 감염에 의한 폐사를 강력히 억제하는 효과를 가짐을 알 수 있었다. 따라서 S.
- 분리된 S. fradiae의 형태는 전형적인 방선균의 모습인 smooth surface를 가진 oval-shaped spore를 확인할 수있었다. 포자 크기는 0.
- 산란계에 S. fradiue를 3주간 급여 후에 항생물질의 생육내의 잔류 검사결과 penicillin G, oxytetracycline, sulfamethazine, sullamerazine sulladimethoxine, sulfamo-nomethoxine, sulfaquinoxaline^; 모두 검출되지 않았다.
- fradiae 의 농도 의존적인 항균효능의 증가가 있음을 알 수 있었다. 이러한 결고]를 바탕으로, S. fradiae를 첨가한 사료를 산란계에 급여 한 결과 가금티푸스의 원인체인 S. gallinanm 의 공격접종 실험에서 생존율이 현저히 증가하였다. S.
- Kohn gelatin 배지와 nutrient gelatin stab 배지에서 응고 유무를 확인한 결과 skim milk의 가수분해와 응고를 확인할수 있었다(Table 1). 탄소화합물의 이용 특성을 측정한결과, D-glucose, L-arabinose, D-xylose, D-mannitol, D-fructose, L-rhamnose, sucrose, raffinose 등은 탄소화합물을 이용하였으며, cellulose, inositol 은 탄소화합물을 미약하게 이용하고 inulin은 탄소화합물을 이용하지 않았다(Table 2).
후속연구
- 01)를 보여주었다. 또한 시험계군에서 S. fradiae를 7주간 급여 후에 항생물질의 생육내의 잔류 검사결과 이들이 모두 검출되지 않은 점에 미루어 S. fi-adiae^c 국내 양계장에서 심각한 문제를 야기하는 가금티푸스를 예방할 수 있는 대안이 될 수 있다고 생각한다.
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