[논문]인삼양영탕(人蔘養營湯)의 산화적 stress에 대한 뇌세포 보호효과

김승현; 이창훈; 이진무; 조정훈; 장준복; 이경섭

doi:10.15204/jkobgy.2009.22.1.001

인삼양영탕(人蔘養營湯)의 산화적 stress에 대한 뇌세포 보호효과
Neuroprotective Effect of Insamyangyung-tang 원문보기

大韓韓方婦人科學會誌 = The Journal of Korean obstetrics & gynecology, v.22 no.1, 2009년, pp.1 - 14

김승현 (경희대학교 한의과대학 한방부인과학 교실) , 이창훈 (경희대학교 한의과대학 한방부인과학 교실) , 이진무 (경희대학교 한의과대학 한방부인과학 교실) , 조정훈 (경희대학교 한의과대학 한방부인과학 교실) , 장준복 (경희대학교 한의과대학 한방부인과학 교실) , 이경섭 (경희대학교 한의과대학 한방부인과학 교실)

Abstract ▼ AI-Helper

Purpose: Oxidative stress was thought to play a critical role in neurodegenerative disease. Many in vivo and in vitro reports explained the possible pathway of human aging. But in therapeutic aspects, there was no clear answers to prevent aging associated with neural diseases. In this study, we investigated the antioxidant and neuroprotective effects of the Insamyangyung-tang (IYT). Methods: To estimate the antioxidant effects, we carried out 1.1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) free radical scavenging assay, 2,2'-azinobis-(3- ethylbenzothiazoline-6- sulfonic acid (ABTS) radical cation decolorization assay, and measurement of total polyphenolic content. To evaluate neuroprotective effect of IYT in vitro. We performed thiazolyl blue tetrazolium bromide (MTT) assay, reactive oxygen species (ROS) creation in SH-SY5Y. Tyrosine hydroxylase (TH) immunocytochemistry, nitric oxide (NO) assay, and TNF-${\alpha}$ assay in primary rat mesencephalic dopaminergic neurons. Results: The $IC_{50}$ values were $571.6{\mu}g/m{\ell}$ and $202.3{\mu}g/m{\ell}$ in DPPH and ABTS assay respectively. Total polyphenolic content was 1.05%. In SH-SY5Y culture, IYT significantly increased the decreased cell viability by 6-OHDA at the concentrations of $10{\mu}g/m{\ell}$ in pre-treatment group, $10-100{\mu}g/m{\ell}$ in post-treatment group, and $100{\mu}g/m{\ell}$ in co-treatment group. The production of ROS induced by 6-OHDA was significantly inhibited in IYT treated group. In mesencephalic dopaminergic cell culture, the IYT group reduced the dopaminergic cell loss against 6-OHDA toxicity and the production of No and TNF-${\alpha}$ at the concentration of $0.2{\mu}g/m{\ell}$. Conclusion: These results showed that IYT has antioxidant and neuroprotectctive effects in the dopaminergic cells through decreasing the production of ROS, NO and TNF-${\alpha}$ which can cause many neurodegenerative changes in brain cell.

주제어

AI 본문요약
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문제 정의

人蔘養營湯의 항산화 효과 및 뇌세포 보호효과를 알아보기 위해 人蔘養營湯 추출물이 human neuroblastoma cell과 태아중뇌 도파민세포에서 6-OHDA로 유도된 세포독성에 대한 보호효과를 관찰하여 다음과 같은 결론를 얻었다.
폐경기의 증상을 心脾虛로 인한 血虛로 발생하는 증상으로 볼 때 心脾虛를 치료하는 人蔘養營湯을 응용하여 폐경기 증상의 호전을 가져올 수 있을 것으로 사료되며 人蔘養營湯을 이용하여 인지기능을 향상을 가져왔다는 논문이 발표되었으나¹⁸⁾ 그 기전에 대해서 명확하게 밝혀진 것은 없다. 따라서 저자는 虛勞로 인한 제 병증에 사용되는 人蔘養營湯이 노화와 관련된 뇌질환에 있어서 그 한 원인으로 꼽히는 산화적 스트레스에 대한 항산화 효과 및 뇌세포 보호 작용이 있음을 확인함으로서 폐경 여성의 인지 기능 향상에 대한 기전을 밝히고 향후 폐경기 클리닉에서의 응용 방안을 모색하고자 하였다. 이를 바탕으로 임상실험 연구가 이루어져서 실제 환자에게 적용되었을 때의 효과를 확인하는 연구가 이루어져야 하겠다.
이에 저자는 人蔘養營湯의 뇌신경세포에 대한 보호효과를 알아보고자, 人蔘養營湯 추출물의 항산화 효과 및 human neuroblastoma cell과 태아중뇌 도파민 세포에서 6-OHDA로 유도된 세포 독성에 대한 보호효과를 관찰하여 유의한 결과를 얻었기에 보고하는 바이다.

제안 방법

96 well plate에 2.5×104/well의 SH-SY5Y 세포를 분주하고 37℃, 5% CO2 에서 48 시간 배양 후 농도별 人蔘養營湯抽出物(5, 10 및 25㎍/㎖) 100㎕를 처리하였다.
96 well plate에 2.5×10⁴/well의 SHSY5Y 세포를 분주하고 37℃, 5% CO2에서 48 시간 배양 후, 농도별 人蔘養營湯 추출물(1, 5, 10, 25, 50 및 100㎍/㎖) 100㎕를 PBS에 녹여 24시간 동안 배양하였다.
96 well plate에 2.5×10⁴/well의 SHSY5Y 세포를 분주하고 37℃, 5% CO2에서 48시간 배양 후 농도별 人蔘養營湯 추출물 (1, 5, 10, 25, 50 및 100㎍/㎖) 100㎕와 6-OHDA를 처리하였다.
희석된 용액 950㎕에 농도별 人蔘養營湯(1, 10, 100, 500 및 1000㎍/㎖)을 각각 50㎕를 가하여 5분간 상온에서 반응시킨 후 spectrophotometer로 732㎚에서 흡광도를 측정하였다. ABTS cation inhibition activity를 아래와 같이 계산하였고, IC₅₀도 측정하였다.
ABTS cation inhinition activity를 측정하기 위해 7mM ABTS와 2.45mM potassium persulfate를 혼합하여 상온의 암실에서 24시간 반응시켰다. ABTS와 potassium persulfate 혼합액을 pH 7.
DPPH free radical inhibition activity를 측정하기 위해 0.2mM DPPH ethanolic solution 100㎕에 농도별 人蔘養營湯 추출물(1, 10, 100, 500 및 1000㎍/㎖)을 100㎕씩 가하여 반응시켰다. 반응 30분 후 37℃에서 spectrophotometer (Versamax; Molecular Devices, Sunnyvale, USA)를 이용하여 517㎚에서의 흡광도를 측정하였다.
FBS가 없는 MEM에서 태아중뇌세포에 0.2와 1㎍/㎖의 人蔘養營湯 추출물을 가하고 6시간 배양 후 10µM의 6-OHDA를 처리하였다.
Gelatin-coated slide에 coverslip을 mounting 후, 각 군당 무작위로 4개를 선택하고 각 sample당 9구역에서 현미경 (Axioskop 2; Carl Zeiss Inc., Göttingen, Germany)를 이용하여 세포수를 계측 (400X) 후, 무처치 대조군에 대한 백분율 (%)로 표시하였다.
PBS로 세척 후, 200µM의 6-OHDA를 처리하여 0, 15, 30, 60 및 120분에서 fluorescence excitation 495㎚, emission 530㎚로 측정하였다.
ROS 측정은 H₂ DCF-DA를 사용해 fluorescence를 측정하는 방법을 이용하였다. 96 well plate에 2.
SH-SY5Y에서의 6-OHDA에 대한 人蔘養營湯 추출물의 보호효과를 알아보고자 MTT assay를 통한 cell viability를 측정하였다. 人蔘養營湯 추출물만을 처리했을 때 cell viability가 감소하였다.
2와 1㎍/㎖의 人蔘養營湯 추출물 및 10µM의 6-OHDA를 처리하여 20 시간 배양한 다음, 배양액 100㎕을 회수하여 Griess reagent 100㎕를 첨가하고 상온 암실에서 10분간 반응시켰다. Spectrophotometer를 이용하여 540 ㎚에서 흡광도를 측정하였으며 sodium nitrite를 이용해 표준곡선을 그려 NO 농도를 결정하였다.
그 후 MTT 1㎎/㎖를 처리하여 3시간 배양하고, 생성된 formazan을 DMSO로 녹여 15분간 shaking하였다. Spectrophotometer를 이용하여 570㎚에서 흡광도를 측정하였으며, 세포 생존율은 무처치 대조군에 대한 백분율 (%)로 표시하였다.
人蔘養營湯 1貼 분량 (51g)에 증류수 510㎖를 가하여 100℃에서 2시간 동안 환류추출 한 후, Whatman filter #2를 이용하여 여과하였다. 여과액을 55℃에서 감압 농축 (R-200; Buchi.
人蔘養營湯의 항산화 효과 측정을 위해 DPPH와 ABTS radical inhibition activity 실험과 총 폴리페놀의 양을 조사하였다. 농도별 人蔘養營湯 추출물의 DPPH inhibition activity는 농도 의존적으로 증가하였으며 1000㎍/㎖ 농도에서 95.
반응 종결 후 ELISA leader를 이용하여 450㎚에서 흡광도를 측정하였으며, 0pg/㎖∼1,000pg/㎖의 TNFα standard를 이용한 standard curve에 측정한 흡광도를 대입하여 TNF-α의 농도 (pg/㎖)를 구하였다.
이 때 pre-treatment군은 농도별 人蔘養營湯 추출물을 가한 다음 21시간 후 6-OHDA 200µM을 가하여 3시간 처리 하였고, co-treatment군은 농도별 人蔘養營湯 추출물과 6-OHDA 150µM을 가한 후 동시에 24시간 배양하였으며, post-treatment 군은 먼저 6-OHDA 150µM을 처리하고 3시간 후 농도별 人蔘養營湯抽出物을 21시간 배양하였다.
5×10⁴/well의 SHSY5Y 세포를 분주하고 37℃, 5% CO₂에서 48 시간 배양 후, 농도별 人蔘養營湯 추출물(1, 5, 10, 25, 50 및 100㎍/㎖) 100㎕를 PBS에 녹여 24시간 동안 배양하였다. 이 후 MTT 1㎎/㎖를 처리하여 3시간 배양한 다음 DMSO로 생성된 formazan을 녹여 15분간 shaking 하고 spectrophotometer를 이용하여 570㎚에서 흡광도를 측정하였으며, 생존율은 무처치 대조군에 대한 백분율로 표시하였다.
총 폴리페놀 함량을 측정하기 위해 人蔘養營湯抽出物 10㎎/㎖를 증류수를 이용해 희석하여 2N folin 200㎕와 Na2CO3 2㎖를 첨가하여 실온에서 1시간 동안 암실에서 방치한 후 spectrophotometer를 이용하여 725㎚에서 흡광도를 측정하였다.
태아중뇌세포에 0.2와 1㎍/㎖의 人蔘養營湯 추출물 및 10µM의 6-OHDA를 처리하여 20 시간 배양한 다음, 배양액 100㎕을 회수하여 Griess reagent 100㎕를 첨가하고 상온 암실에서 10분간 반응시켰다.
태아중뇌세포에 0.2와 1㎍/㎖의 人蔘養營湯 추출물 및 10µM의 6-OHDA를 처리하여 20시간 배양한 다음, 배양액 50㎕를 incubation buffrer 50㎕, diluent buffer가 포함된 rat TNF-α 항체코팅 96 well plate에 가하였다.
태아중뇌세포에서 6-OHDA로 인해 생성된 NO와 TNF-α에 대해 人蔘養營湯 추출물을 0.2㎍/㎖ 처리한 군에서 가장 유의한 수준의 제거가 이루어졌다.
02가 되게 하였다. 희석된 용액 950㎕에 농도별 人蔘養營湯(1, 10, 100, 500 및 1000㎍/㎖)을 각각 50㎕를 가하여 5분간 상온에서 반응시킨 후 spectrophotometer로 732㎚에서 흡광도를 측정하였다. ABTS cation inhibition activity를 아래와 같이 계산하였고, IC₅₀도 측정하였다.

대상 데이터

Orient Bio. (Osan, Korea)에서 14일된 Sprague-Dawley 태아를 구매하여 forceps으로 태아 중뇌 조직을 얼음위에서 박리하고 10% FBS를 포함한 MEM에 모은 후, pipet을 이용하여 기계적으로 dissociation하였다. 조직에 trypsin을 처리하여 세포 수를 counting 한 후, PLL로 미리 coating한 coverslip에 1.
American Type Culture Collection (Rockville, USA)로부터 human neuroblastoma인 SH-SY5Y를 분양 받아, 60㎜ dish에서 10% (v/v) FBS, 1% penicillin/streptomycin을 포함하는 DMEM으로 37℃, 5% CO₂에서 배양하였다.
Neuroblastoma cell 보호효과 연구에 사용한 Dulbeco's Modified Eagle's Medium (이하 DMEM), minimum essential medium (MEM), fetal bovine serum (이하 FBS), 1% penicillin/streptomycin 등은 Gibco Industries Inc. (Auckland, New Zealand)에서, 3-(4, 5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5- diphenyltetrazolium bromide (이하 MTT), 6-hydroxydopamine (이하 6-OHDA), 2,7-dichlorodihydrofluorescein diacetate (H2 DCF-DA), dimethyl sulfoxide (이하 DMSO) 및 Griess reagent 등은 Sigma-Aldrich (St. Louis, USA)에서 구입하였다.
Primary culture에 사용한 para-formaldehyde (이하 PFA), poly-L-lysine (이하 PLL) 및 diaminobenzidine (이하 DAB) 등은 Sigma-Aldrich (St. Louis, USA)에서, biotinylated anti-rabbit antibody, normal goat serum, avidin biotin peroxidase complex (이하 ABC) standard kit 등은 Vector laboratories (Burlingame, USA)에서, rat tumor necrosis factor-α (이하 TNF-α) ELISA kit는 Invitrogen Corp. (Carlsbad, USA)에서, tyrosine hydroxylase (이하 TH)-rabbit in goat primary antibody는 Chemicon Iinternational Inc. (Temecula, USA)에서 구입하여 사용하였다.
실험에서 사용한 人蔘養營湯은 <東醫寶鑑>²⁹⁾의 處方에 의해 구성되었으며 각 약재들은 경희대학교 한의과대학 부속한방병원 약재과에서 구입하여 사용하였고, 약재의 구성과 1貼의 분량은 Table 1과 같다.
항산화 효과 연구에 사용한 1.1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (이하 DPPH), 2,2'-azinobis-3-ethyl-benzothiazoline-6-sulfonic acid (이하 ABTS), potassium persulfate, tannic acid, folin 등은 Sigma-Aldrich (St. Louis, USA)에서 구입하여 사용하였다.

데이터처리

실험 결과는 SPSS ver 12.0K for windows를 이용하여 one-way ANOVA test로 통계적 유의성을 검증하였으며, p<0.05인 경우를 통계적 유의성이 있는 것으로 하였다.

성능/효과

1. DPPH free radical inhibition activity와 ABTS radical cation decolorization activity를 측정한 결과, 人蔘養營湯 추출물의 농도 의존적 소거능을 확인하였고, IC50은 각각 571.6, 202.3µg/㎖였다.
10㎎/㎖人蔘養營湯 추출물의 total polyphenolic contents를 tannic acid 표준곡선으로부터 구한 결과 1.05%로 나타났다.
2. SH-SY5Y세포에서 6-OHDA 처리 전 人蔘養營湯 추출물 투여 시에는 10㎍/㎖ 투여군에서, 동시 처리 시에는 100㎍/㎖ 투여군에서, 6-OHDA 처리 후 人蔘養營湯 추출물 투여 시에는 1㎍/㎖ 투여군을 제외한 모든 투여군에서 통계적으로 유의한 세포보호 효과가 관찰되었다.
3. 모든 농도의 人蔘養營湯 추출물 처리군에서 6-OHDA 처리 후 30, 60 및 120분 반응시간에 따라 ROS의 생성은 대조군에 비해 통계적으로 유의하게 억제되었다.
4. 태아중뇌세포에서 6-OHDA에 의해 감소된 도파민 세포를 0.2㎍/㎖人蔘養營湯 추출물이 6-OHDA 단독 투여군에 비하여 통계적으로 유의하게 도파민세포를 증가시켰다
5. 태아중뇌세포에서 6-OHDA에 의해 증가된 NO와 TNF-α를 0.2㎍/㎖의 人蔘養榮湯 추출물이 6-OHDA 단독 투여군에 비하여 통계적으로 유의하게 감소시켰다.
6-OHDA는 신경독성물질로서 in-vitro는 물론 in-vivo에서도 dopamine 세포의 degeneration model에 많이 사용하는 물질이다. 6-OHDA와 人蔘養營湯 추출물을 시간차를 두고 처리하여 pre-treatment, co-treatment and post treatment group으로 나눈 실험에서, pre-treatment 군에서는 10㎍/㎖의 人蔘養營湯 추출물을 투여한 군에서 통계적으로 유의하게 증가하였고, co-treatment 군에서는 100㎍/㎖의 人蔘養營湯 추출물을 투여한 군에서 유의하게 증가하였으며, post-treatment 군에서는 1㎍/㎖의 농도의 人蔘養營湯 추출물 투여 군을 제외한 모든 농도에서 유의한 증가를 보였다.
6-OHDA와 농도별 人蔘養營湯 추출물을 처리한 결과, 6-OHDA단독에 비하여 0.2㎍/㎖人蔘養營湯 추출물에서 47.92%로 통계적으로 유의하게 (p<0.001) 도파민세포를 증가시켰다(Fig. 6, 7).
6-OHDA와 농도별 人蔘養營湯 추출물을 처리한 경우 6-OHDA 단독에 비해 0.2㎍/㎖人蔘養營湯 추출물에서 2.34±0.69pg/㎖로 통계적으로 유의하게 (p<0.01) TNF-α가 감소되었고, 1㎍/㎖人蔘養營湯 추출물에서도 3.00±0.56pg/㎖로 통계적으로 유의하게 (p<0.05) TNF-α가 감소되었다(Fig. 9).
6-OHDA와 농도별 人蔘養營湯 추출물을 처리한 경우 6-OHDA 단독에 비해 0.2㎍/㎖人蔘養營湯 추출물에서 통계적으로 유의하게 (p<0.01) NO가 감소되었다(Fig. 8).
3㎍/㎖이였다. ABTS radical cation를 이용한 IC₅₀ 수치가 DPPH free radical을 사용한 경우보다 높게 나타난 이유는 이 실험에 사용한 약재는 증류수를 사용하여 추출하였기 때문에 수용성, 지용성 모두에 반응하는 ABTS³⁰⁾가 보다 더 반응성이 좋았다. 폴리페놀은 플라보노이드가 풍부한 식물에서 유래하는 천연항산화 물질로 노화에 관련된 질환의 위험성을 낮추어진다고 알려져 있다³¹⁾.
ABTS radical inhibition activity는 농도별 人蔘養營湯 추출물을 가했을 때 농도 의존적으로 증가하였으며 최대 1000µg/㎖에서 94.11%의 활성을 나타냈고 IC50은 202.3㎍/㎖이였다.
SH-SY5Y cell에서 농도별 人蔘養營湯 추출물 처리에 따른 6-OHDA에 대한 cell viability를 측정한 결과 人蔘養營湯 추출물 pre-treatment 군의 경우 6-OHDA 200µM 단독에 의한 cell viability는 control에 비해 57.32%로 감소되었고, 10㎍/㎖의 人蔘養營湯 추출물 투여군에서 6-OHDA 단독 투여군에 비해 cell viability가 통계적으로 유의하게 증가하였다(p<0.01).
人蔘養營湯 추출물 co-treatment군의 경우 6-OHDA 150µM 단독에 의한 cell viability는 control에 비해 36.10%로 감소되었고, 100㎍/㎖의 人蔘養營湯 추출물 투여군에서 6-OHDA 단독 투여군에 비해 cell viability가 통계적으로 유의하게 증가하였다(p<0.05).
人蔘養營湯 추출물 post-treatment군의 경우 6-OHDA 150µM 단독에 의한 cell viability는 control에 비해 36.13%로 감소되었고, 1㎍/㎖의 人蔘養營湯 추출물 투여군을 제외한 모든 경우에서 6-OHDA 단독투여군에 비해cell viability가 통계적으로 유의하게 증가하였다(p<0.001)(Fig. 4).
농도별 人蔘養營湯 추출물에 따른 ROS의 변화를 6-OHDA에 반응하는 시간에 따라 H₂DCF-DA를 사용하여 측정한 결과, 6-OHDA 단독으로 처리한 군에서 control에 비해 통계적으로 유의한 수준의 ROS 증가를 나타내었으나, 5, 10 및 25㎍/㎖人蔘養營湯 추출물 처리군에서 ROS의 생성은 6-OHDA를 단독으로 처리한 군에 비해 30, 60 및 120분에서 통계적으로 유의하게 억제되었다(Fig. 5).
농도별 人蔘養營湯 추출물의 ABTS cation inhibition activity를 측정한 결과 농도 의존적으로 증가하여 최대 활성은 1,000㎍/㎖에서는 94.11%로 나타났으며 IC₅₀은 202.3㎍/㎖이었다(Fig. 2).
농도별 人蔘養營湯 추출물의 DPPH free radical inhibition activity를 측정한 결과 농도 의존적으로 증가하여 최대 활성은 1,000㎍/㎖에서 95.66%로 나타났으며, IC₅₀은 571.6㎍/㎖이었다(Fig. 1).
人蔘養營湯의 항산화 효과 측정을 위해 DPPH와 ABTS radical inhibition activity 실험과 총 폴리페놀의 양을 조사하였다. 농도별 人蔘養營湯 추출물의 DPPH inhibition activity는 농도 의존적으로 증가하였으며 1000㎍/㎖ 농도에서 95.66%의 활성을 나타냈으며 IC₅₀은 571.6㎍/㎖였다. ABTS radical inhibition activity는 농도별 人蔘養營湯 추출물을 가했을 때 농도 의존적으로 증가하였으며 최대 1000µg/㎖에서 94.
농도별 人蔘養營湯 추출물의 SH-SY5Y cell에 대한 cell viability를 측정한 결과, 5, 10㎍/㎖人蔘養營湯 추출물에서 각각 90.89, 89.83%의 cell viability로 통계적으로 유의한 (p<0.01) 감소를 보였고, 25, 50 및 100㎍/㎖人蔘養營湯 추출물에서도 92.53, 92.98 및 92.03%의 cell viability로 통계적으로 유의한 (p<0.05) 감소를 나타내었다(Fig. 3).
2㎍/㎖ 처리한 군에서 가장 유의한 수준의 제거가 이루어졌다. 이결과로서 흰쥐 중뇌세포에 대해 人蔘養營湯이 6-OHDA로 유발된 염증매개물질 생성을 억제함으로서 태아 중뇌 세포 보호효과를 나타내는 것을 확인 할 수 있다.
3µg/㎖였다. 총 폴리페놀 함량은 1.05% 였다.
태아중뇌세포를 이용하여 人蔘養營湯 추출물의 6-OHDA 처리 후 배양액 내 NO의 농도를 측정한 결과, 6-OHDA 10µM 단독의 경우 control에 비하여 132.48%로 통계적으로 유의하게 (p<0.001) 증가되었다.
태아중뇌세포를 이용하여 人蔘養營湯 추출물의 6-OHDA에 대한 TH positive 세포수를 측정한 결과, 6-OHDA 10µM을 단독의 경우 control에 비하여 32.01%로 통계적으로 유의하게(p<0.001) 도파민세포의 분화 및 생존을 억제시켰다.
태아중뇌세포에 人蔘養營湯 추출물과 6-OHDA를 처리 후 배양액 내TNF-α의 농도를 관찰한 결과, 6-OHDA 10µM 단독의 경우 4.90±0.26pg/㎖로 control에 비하여 증가되었다.
태아중뇌세포에서 TH positive cell의 측정은 도파민의 생성에 관여하는 TH를 염색함으로서 도파민 세포 보호효과를 확인할 수 있는 방법으로 이 실험에서 人蔘養營湯 추출물이 6-OHDA로 유발된 도파민 세포 독성을 감소시킴을 확인할 수 있었다.

후속연구

따라서 저자는 虛勞로 인한 제 병증에 사용되는 人蔘養營湯이 노화와 관련된 뇌질환에 있어서 그 한 원인으로 꼽히는 산화적 스트레스에 대한 항산화 효과 및 뇌세포 보호 작용이 있음을 확인함으로서 폐경 여성의 인지 기능 향상에 대한 기전을 밝히고 향후 폐경기 클리닉에서의 응용 방안을 모색하고자 하였다. 이를 바탕으로 임상실험 연구가 이루어져서 실제 환자에게 적용되었을 때의 효과를 확인하는 연구가 이루어져야 하겠다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	노화란 무엇인가?	노화는 각 장기들의 항상성이 점차 손상되는 것으로 과도한 산화 스트레스와 염증반응으로 인한 DNA의 손상, 단백질 손상, mitochondria의 기능 이상 및 지질과산화 등이 원인으로 제기되고 있다1,5). 인간의 뇌는 단위세포 당 산소 함량이 높아 산화 스트레스에 취약한 특징을 가지며6-10) 특히 여성은 폐경 이후 에스트로겐이 감소하여 뇌세포에 대한 항산화, 항염증 및 신경전달물질 분비 작용을 저하시켜 대뇌 인지기능에 영향을 끼치는 것으로 보여 진다11-13).
	노화의 원인으로 제기되고 있는 것은 무엇인가?	노화는 각 장기들의 항상성이 점차 손상되는 것으로 과도한 산화 스트레스와 염증반응으로 인한 DNA의 손상, 단백질 손상, mitochondria의 기능 이상 및 지질과산화 등이 원인으로 제기되고 있다1,5). 인간의 뇌는 단위세포 당 산소 함량이 높아 산화 스트레스에 취약한 특징을 가지며6-10) 특히 여성은 폐경 이후 에스트로겐이 감소하여 뇌세포에 대한 항산화, 항염증 및 신경전달물질 분비 작용을 저하시켜 대뇌 인지기능에 영향을 끼치는 것으로 보여 진다11-13).
	人蔘養營湯의 항산화 효과 및 뇌세포 보호효과를 알아보기 위한 관찰 결과 무엇을 알게 되었는가?	1. DPPH free radical inhibition activity와 ABTS radical cation decolorization activity를 측정한 결과, 人蔘養營湯 추출물의 농도 의존적 소거능을 확인하였고, IC50은 각각 571.6, 202.3µg/㎖였다. 총 폴리페놀 함량은 1.05% 였다. 2. SH-SY5Y세포에서 6-OHDA 처리 전 人蔘養營湯 추출물 투여 시에는 10㎍/㎖ 투여군에서, 동시 처리 시에는 100㎍/㎖ 투여군에서, 6-OHDA 처리 후 人蔘養營湯 추출물 투여 시에는 1㎍/㎖ 투여군을 제외한 모든 투여군에서 통계적으로 유의한 세포보호 효과가 관찰되었다. 3. 모든 농도의 人蔘養營湯 추출물 처리군에서 6-OHDA 처리 후 30, 60 및 120분 반응시간에 따라 ROS의 생성은 대조군에 비해 통계적으로 유의하게 억제되었다. 4. 태아중뇌세포에서 6-OHDA에 의해 감소된 도파민 세포를 0.2㎍/㎖人蔘養營湯 추출물이 6-OHDA 단독 투여군에 비하여 통계적으로 유의하게 도파민세포를 증가시켰다 5. 태아중뇌세포에서 6-OHDA에 의해 증가된 NO와 TNF-α를 0.2㎍/㎖의 人蔘養榮湯 추출물이 6-OHDA 단독 투여군에 비하여 통계적으로 유의하게 감소시켰다.

참고문헌 (37)

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저자의 다른 논문 :

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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