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문제 정의
- 따라서 본 연구에서는 곤달비 주줄물의 항산화 효과와펠라닌 생성 억제 효능을 평가하여 화장품 원료로서의 사용 가능성을 검토하였다.
- 본 연구에서는 곤달비를 잎과 줄기로 나누고 3개의 추출용매를 사용해 n-Hexane, ethyl acetate, H2O분획으로 나누어 6가지 시료를 가지고 항산화효과, 멜라닌 생성 억제 효능에 대한 평가를 통하여 화장품 원료로서의 가능성을 알아보았다.
제안 방법
- 얻어진 잎, 줄기의 농축액에 증류수를 현탁시킨 후 n-Hexane 을 가하여 H20층으로부터 분리하였으며, 이 과정을 삭 회 반복하여 감압 농축하여 n-Hexane 분획물을 얻었다. HQ층에 ethyl acetate를 가하여 분리하였으며 층과 동일하게 4회 반복하여 감압 농축하여 H20층으로부터 ethyl acetate분획물을 획득하였다. 그리하여 곤달비잎의 n-Hexane, ethyl acetate, H20분획물 그리고 줄기의 n-Hexane, ethyl acetate, H20분획물로 총 6가지의 분획물을 가지고 실험하였다.
- 곤달비 추출물의 항산화 효과를 알아보기 위하여 DPPH를 이용하여 항산화 효과를 측정하였다. 대부분의 라디칼은 반응성이 커서 매우 불안정하지만, DPPH radicale 안정한 free radical로서 517nm에서 강한 흡수를 가지는 진한 보라색의 화합물이다.
- 그늘진 곳에서 건조한 곤달비의 잎과 줄기 부분을 분리하여 분쇄기틀 이용하여 세절하고 99.8% methanol로 실온에서 일주일동안 3회 반복 추출하였다. 추출액은 여과지를 사용하여 여과한 후, rotary vacuum evaporator> 이용하여 감압 농축하였다.
- 이 효소는 티로 신으로부터 시작되는 멜라닌 생합성 과정 중, 티로신에서 DOPA, DOPA에서 DOPAquinone, 그리고 DHI 로부터 eiimelanin으로의 전환을 촉매 하는데 관여한다. 본 실험은 이 효소의 기능을 억제하여 tyrosine이 산화되어 멜라닌이라는 흑색의 고분자를 형성하는 것을 억제하는 정도를즉정하는 방법 [12]을 응용하였다. 시료 0.
- 의 EPR 신호 세기의 감소를 통해[15] 곤달비 잎, 줄기 추출물의 superoxide anion radical 소거활성을 정량적으로 측정하였다. 양성대조군으로 DL~a-tocopherol를 이용하여 곤달비 추출물의 superoxide anion radical 소거효과를 비교하였다. Fig.
- 양성대조군으로는 항산화 효과가 알려진 L-ascorbic acid 와 DL- a - tocopherol < 이용하여 곤달비추출물의 항산화 효과를 비교하였다. Fig.
- 추출액은 여과지를 사용하여 여과한 후, rotary vacuum evaporator> 이용하여 감압 농축하였다. 얻어진 잎, 줄기의 농축액에 증류수를 현탁시킨 후 n-Hexane 을 가하여 H20층으로부터 분리하였으며, 이 과정을 삭 회 반복하여 감압 농축하여 n-Hexane 분획물을 얻었다. HQ층에 ethyl acetate를 가하여 분리하였으며 층과 동일하게 4회 반복하여 감압 농축하여 H20층으로부터 ethyl acetate분획물을 획득하였다.
- 이를 이용하여 superoxide anion radical 소거에 따른 DMPO-OOH.의 EPR 신호 세기의 감소를 통해[15] 곤달비 잎, 줄기 추출물의 superoxide anion radical 소거활성을 정량적으로 측정하였다. 양성대조군으로 DL~a-tocopherol를 이용하여 곤달비 추출물의 superoxide anion radical 소거효과를 비교하였다.
- 자유라디칼 소거활성 시험은 안정한 자유라디칼 l, l-diphenyl~2-picrylhydrazyl radical (DPPH, Sigma, USA)욜 사용하는 방법으로 메탄올에 용해시킨 0.2 mM의 DPPH 용액 1 mL에 시료 각각의 농도를 메탄올에 녹여 2 mL로 하여 혼합하고, 실온에서 10 min 동안 반응시킨 후 UV-'VIS spectrophotometer (Shimadzu, UVT&Jl, Japan)로 517 nm에서 흡광도를 측정하였다. 양성 대조군으로는 L-ascorbic aeid와 DL~a-tocopherol> 사용하여 같은 방법으로 측정하였다, 자유라디칼 소거율은 아래의 식에 따라 계산하였다.
대상 데이터
- HQ층에 ethyl acetate를 가하여 분리하였으며 층과 동일하게 4회 반복하여 감압 농축하여 H20층으로부터 ethyl acetate분획물을 획득하였다. 그리하여 곤달비잎의 n-Hexane, ethyl acetate, H20분획물 그리고 줄기의 n-Hexane, ethyl acetate, H20분획물로 총 6가지의 분획물을 가지고 실험하였다.
- 본 실험에서 사용한 곤달비 (Ligularia Stenocephala)는 경상북도 경주 산내면의 백천 농원에서 구입하였다. 시료 추출을 위해 사용한 유기 용매는 Samchun(한국)에서 구입하였고, 실험을 위해 사용한 시약 DPPH, L~ascorbic acid, DL-a-tocopherol, Xanthine/Xanthine oxidase, Nitroblue tetrazolium, NasCOs, Bovine serum albumin 등은 Sigma의 것을 사용하였고, 물질의 분리 농축에는 Rotary vacuum evaporator (RE121, BUCHI, 스위스).
- 구입하였다. 시료 추출을 위해 사용한 유기 용매는 Samchun(한국)에서 구입하였고, 실험을 위해 사용한 시약 DPPH, L~ascorbic acid, DL-a-tocopherol, Xanthine/Xanthine oxidase, Nitroblue tetrazolium, NasCOs, Bovine serum albumin 등은 Sigma의 것을 사용하였고, 물질의 분리 농축에는 Rotary vacuum evaporator (RE121, BUCHI, 스위스). 흡광도측정에는 UV-VIS spectrophotometer (Shimadzu, UVT601, Japan)를 사용하였다.
- 시료 추출을 위해 사용한 유기 용매는 Samchun(한국)에서 구입하였고, 실험을 위해 사용한 시약 DPPH, L~ascorbic acid, DL-a-tocopherol, Xanthine/Xanthine oxidase, Nitroblue tetrazolium, NasCOs, Bovine serum albumin 등은 Sigma의 것을 사용하였고, 물질의 분리 농축에는 Rotary vacuum evaporator (RE121, BUCHI, 스위스). 흡광도측정에는 UV-VIS spectrophotometer (Shimadzu, UVT601, Japan)를 사용하였다.
이론/모형
- Xanthine oxidase를 넣고 25 ℃ 에서 20 min 동안 반응시킨 후에 6 mM CuCh(Sigma, USA)를 넣어 반응을 정지시키고 517nm에서 흡광도를 측정하였다. 양성대조군은 DL-a -tocopherol를 사용하여 같은 방법으로 측정하였다. 소거율은 다음의 식에 따라 계산하였다.
- 활성산소(superoxide anion) 소거활성 평가는 Noro 등의 방법을 [1 이 활용하여 xanthine/ xanthine oxidase(Sigma, USA) 효소반응에 의한 활성산소 발생계를 이용하여 활성산소에 의한 nitroblue tetrazoiium (NBT, Sigma, USA) 의 산화에 의한 흡광도 변화를 측정하였다. 0.
성능/효과
- 에서 보는 바와 같이 잎의 ethyl acetate 분획, 줄기의 ethyl acetate분획, 잎의 H20분획은 활성이 우수했다. Fig. 2.에서는 활성이 좋은 곤달비 잎의 ethyl acetate 분획, 줄기의 ethyl acetate분획, 잎의 HK)분획이 농도증가에 따라 소거효과가 증가함을 확인할 수 있었다. Table 1.
- 양성대조군으로 DL~a-tocopherol를 이용하여 곤달비 추출물의 superoxide anion radical 소거효과를 비교하였다. Fig. 3.에서 보는 바와 같이 곤달비잎의 ethyl acetate 분획, 줄기의 ethyl acetate분획, 잎의 H2O분획은 활성이 우수하였다. Fig.
- Superoxide radical 소거효과는 잎의 ethyl acetate분 획 이 양성 대조군 인 DL-a-tocopherol 과 비슷한 소거효과를 나타내었으며, 추출물의 농도증가에 따라 소거효과가 증가함을 확인할 수 있었다.
- 곤달비의 tyrosinase 활성에 대한 저해 능력은 줄기의 n-Hexane 분획 < 줄기의 ethyl acetate 분획< 잎의 ethyl acetate분획 순으로 높게 나타났다.
- 곤달비추출물의 tyrosinase 활성에 대한 저해능력은 잎의 ethyl acetate분획이 29, 477%로 가장 높았으며, 줄기의 ethyl acetate 분획은 13.583%, 줄기의 n-Hexane분획은 0.935% 순으로 나타났다(Fig. 5).
- 따라서 본 연구에서 부위별과 용매별로 효능에 차이를 쉽게 확인할 수 있었으며, 곤달비 잎의 ethyl acetate분획은 높은 항산화 효과와 tyrosinase 저해활성으로 화장품소재에 응용할 경우 효과가 있을 것으로 사료된다.
- 에서는 50%소거효율에 대한 농도ICso값을 비교하여 나타내었다. 잎의 ethyl acetate분획 ICso 값이 10.512t/g/mL, 줄기의 ethyl acetate분획 IC50값이 31.877㎍/mL, 잎의 H20분획 IC50값이 129.194㎍/mL이며, 양성대조군인 DL-ascorbic acid 의 ICso 값이 3.01zzg/mL, DL - a - tocopherol ICs0값은 18.31ug/mL로 잎의 ethyl acet기:e 분획은 양성대조군인 DLTtTocopherol보다 높은 저해 활성을 나타내었다.
- 자유라디칼소거 효과에서 잎의 ethyl acetate 분획은 양성대조군인 DL-a-tocopherol 보다 항산화 활성이 높은 것으로 나타났다.
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