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문제 정의
- CCl4를 투여하여 간손상을 유발한 흰 쥐를 대상으로 양릉천 고주파 전침이 간손상에 미치는 영향을 관찰하여 다음과 같은 결과를 얻었다.
- 이에 저자는 흰 쥐에 CCl4를 투여하여 간손상을 유발하고 陽陵泉에 고주파 전침 자극을 가한 후 체중, 간비중, 혈액학적 변화, 조직학적 분석을 통해 관찰한 바 유의한 결과를 얻었기에 보고하는 바이다.
제안 방법
- CCl4로 유발된 간 손상에 의한 간비중의 변화를 관찰하였다. 정상군에 비하여 대조군 및 구속대조군에서 간비중이 증가하였으며, 양릉천 유침군 및 양릉천 전침군에서 대조군, 구속대조군에 비하여 간비중이 감소하였으나, 유의성은 없었다(Fig.
- CCl4로 유발된 간 손상에 의한 몸무게의 변화를 관찰하였다. 정상군에 비하여 모든 실험군에서 실험동물의 몸무게가 감소하였으나, 유의성은 없었다(Fig.
- CCl4와 Olive oil을 동량 희석한 희석액(1㎖/㎏)을 흰 쥐의 복강에 10주 동안 주 2회 투여하여 간 손상을 유발 하였다
- Rat는 실험 종료 24시간 후 ethyl ether를 이용해 마취한 후 심장 채혈법으로 채혈하였다. 채혈한 혈액은 CBC bottle에 넣어 Biotech(한국)에 의뢰하여 RBC, WBC, PLT, leukocyte, neutrophils, moncytes, hemoglobin level을 분석하였다.
- 각 실험군의 whole blood로부터 RBC, WBC, PLT의 함량과, hemoglobin의 농도, WBC 중 lymphocyte, neutrophils, monocyte의 백분율을 측정하였다(Table 1).
- 각 실험군의 혈액으로부터 분리한 혈청에서 ALT, AST, ALP, total cholesterol의 함량을 확인하였다(Table 2).
- 각 실험군의 혈청에서 ALT의 함량을 측정하였다. 정상군에 비하여 구속대조군에서 ALT 함량이 유의하게 증가하였다.
- 각 실험군의 혈청에서 AST의 함량을 측정하였다. 정상군에 비하여 대조군, 구속대조군의 AST 함량이 유의하게 증가하였다.
- 길이 20 ㎝, 지름 5 ㎝의 원통형 아크릴 홀더를 제작하여 4개의 구멍을 뚫어 실험동물의 사지를 노출하여 자침 및 전침을 시행할 수 있도록 하였다. 정상군과 대조군을 제외한 모든 실험군은 실험 1주일 전에 3회에 걸쳐 홀더에 넣고 홀더 적응 훈련을 시킨후 실험을 시작하였다.
- 정상군과 대조군을 제외한 모든 실험군은 실험 1주일 전에 3회에 걸쳐 홀더에 넣고 홀더 적응 훈련을 시킨후 실험을 시작하였다. 멸균된 stainless steel 호침으로 골도분촌법에 준하여 인체의 양릉천(GB34)에 상응하는 부위를 실험동물의 좌측 후지에서 취하여 약 2～3 ㎜ 깊이로 자입 하였다. 전침 자극군은 자침한 양릉천(GB34)과 동측의 해계(ST41) 상응 부위에 0.
- 본 실험에서는 양릉천 고주파 전침자극이 간손상에 미치는 영향을 알아보기 위하여, CCl4 투여로 간손상이 유발된 흰 쥐의 양릉 천에 100 Hz의 고주파 전침 자극을 가하였으며, 실험종료 후 몸무게, 간비중, hematology 분석, blood chemistry 분석 및 조직학적 분석을 통하여 간손상 정도를 평가하였다.
- 실험 종료 24시간 후 ethyl ether를 이용해 실험동물을 마취한 후 심장 채혈법으로 채혈하였다. 채혈한 혈액은 6500 rpm으로 15 분간 원심 분리한 후 ALT, AST, ALP, total cholesterol level을 측정하였다.
- 실험 종료 시 실험동물의 간을 적출하여간 무게를 측정하고, 체중에 대한 간 무게의 비율을 계산하여 전체 몸무게에서 차지하는 간의 비중을 확인 하였다.
- 실험 종료 시 실험동물의 몸무게를 측정하여, CCl4 투여로 인한 몸무게의 차이를 확인하였다.
- 실험동물은 각각 정상군(normal), 대조군(control), 구속대조군(holder), 양릉천 유침군(GB34-NR), 양릉천 전침군(GB34-EA)의 5군으로 분류하고, 각 실험군에는 실험동물을 10마리씩 배정하였다.
- 5×1 ㎠ 크기의 패드를 부착한 후, 저주파 치료기의 한쪽 극을 자입된 침의 끝에 연결하고 다른 한쪽 극을 패드에 연결하여 100 Hz에서 근육의 수축이 육안으로 확인되는 정도로 amplitude를 조절하여 15 분간 전침자극을 가하였다. 양릉천유침군은 좌측 양릉천에 자침 후 전침 자극을 가하지 않고 15 분간 유침 후 발침하였다.
- 전침 자극군은 자침한 양릉천(GB34)과 동측의 해계(ST41) 상응 부위에 0.5×1 ㎠ 크기의 패드를 부착한 후, 저주파 치료기의 한쪽 극을 자입된 침의 끝에 연결하고 다른 한쪽 극을 패드에 연결하여 100 Hz에서 근육의 수축이 육안으로 확인되는 정도로 amplitude를 조절하여 15 분간 전침자극을 가하였다.
- 각 실험군의 간 조직을 적출하여 H&E 염색법을 이용하여 염색하였다. 정상군에 비해 대조군 및 구속대조군의 간 조직에서 간세포의 괴사, 간조직의 조밀도 저하 등을 확인하였다. 양릉천 전침군에서는 간세포의 괴사가 적고, 간조직의 조밀도가 정상군과 유사하게 유지되었다(Fig.
- 실험 종료 24시간 후 ethyl ether를 이용해 실험동물을 마취한 후 심장 채혈법으로 채혈하였다. 채혈한 혈액은 6500 rpm으로 15 분간 원심 분리한 후 ALT, AST, ALP, total cholesterol level을 측정하였다.
- Rat는 실험 종료 24시간 후 ethyl ether를 이용해 마취한 후 심장 채혈법으로 채혈하였다. 채혈한 혈액은 CBC bottle에 넣어 Biotech(한국)에 의뢰하여 RBC, WBC, PLT, leukocyte, neutrophils, moncytes, hemoglobin level을 분석하였다.
- 혈액을 완전히 제거한 후, 간의 일부분을 절단하여 10% 포르말린에 고정한 다음, Hematoxylin and eosin 염색과 Masson's Trichrome 염색을 하였다.
대상 데이터
- Masson's Trichrome stain of liver sections of CCl4-intoxicated rats.
- 동물은 체중 200-250 g의 Sprague-Dawley계 웅성 흰 쥐를 대한 바이오 링크 (경기도, 한국)에서 공급받아 실험 당일까지 고형사료(삼양사, 한국)와 물을 충분히 공급하고, 실온(22±2℃)를 유지하여 2주일간 실험실 환경에 적응시킨 후 실험에 사용하였다.
데이터처리
- ‡‡: P<0.01, ‡‡‡: P<0.001 as compared with holder, by one way ANOVA test.
- ‡: P<0.05 as compared with holder, by one way ANOVA test.
- SPSS for windows version 14.0 통계프로그램의 일원배치 분산 분석(one way ANOVA)을 사용하여 유의성을 검증하였고 사후검정은 Scheffe's test를 이용하였다.
- 본 실험에서 얻은 결과는 평균 ± 표준편차로 나타내었다.
이론/모형
- 각 실험군의 간 조직을 적출하여 H&E 염색법을 이용하여 염색하였다.
- 각 실험군의 간 조직을 적출하여 M&T 염색법을 이용하여 염색하였다.
성능/효과
- 1. CCl4 투여로 인해 증가한 WBC는 양릉천 유침 및 고주파전침자극에 의해 감소하는 경향을 보였다.
- 2. CCl4 투여로 인해 감소한 Lymphocytes의 비율은 양릉천 유침 및 고주파전침자극에 의해 유의하게 증가하였다.
- 3. Neutrophils는 양릉천 유침군 및 양릉천 전침군에서 대조군에 비하여 neutrophils 의 비율이 감소하는 경향을 보였다.
- 4. CCl4 투여에 의해 증가한 ALT와 AST는 양릉천 유침 및 고주파 전침 자극에 의해 유의하게 감소하였다
- 5. CCl4 투여에 의한 간조직의 세포간질 손상은 양릉천 고주파 전침 자극에 의해 억제되었다.
- WBC 함량이 정상군에 비하여 대조군 및구속대조군에서 증가하여 조 등30)의 CCl4에 의한 간손상 모델에서 간세포의 손상에 의해 면역기능이 활성화 되어 백혈구의 수가 전체적으로 증가한다는 것과 일치하는 결과를 보여주었으며, 양릉천 유침군 및 양릉천 전침군에서 대조군, 구속대조군에 비하여 백혈구수가 감소하는 경향을 보였으나 유의성이 있을 정도는 아니었다(Fig. 4) 이는 양릉천의 자침 및 전침자극이 간손상에 의한 면역기능 활성화를 억제하는데는 유의한 영향을 미치지는 못하는 것으로 사료된다.
- 각 실험군의 whole blood에서 RBC의 함량을 측정한 결과, 모든 군에서 유의한 차이가 나타나지 않았다(Fig. 3).
- 각 실험군의 whole blood에서 WBC 중 lymphocytes의 비율을 측정한 결과, 정상군에 비하여 구속대조군에서 lymphocytes의 비율이 유의하게 감소하였으며, 양릉천 유침군 및 양릉천 전침군에서 구속대조군에 비하여 lymphocytes 비율이 유의하게 증가하였다(Fig. 6).
- 각 실험군의 whole blood에서 WBC 중 monocyte의 비율을 측정한 결과, 정상군에 비하여 대조군에서 monocyte의 비율이 유의하게 증가하였다. 양릉천 유침군과 양릉천 전침군의 monocyte 비율은 대조군 및 구속 대조군에 비하여 감소하였으나, 유의성은 없었다(Fig.
- 각 실험군의 whole blood에서 WBC 중 neutrophils의 비율을 측정한 결과, 대조군 및 구속대조군에서 정상군에 비하여 neutrophils의 비율이 증가하였으며, 양릉천 유침군 및 양릉천 전침군에서 대조군 및 구속대조군에 비하여 neutrophils의 비율이 감소하였으나, 유의성은 없었다.(Fig.
- 각 실험군의 whole blood에서 WBC의 함량을 측정한 결과, 정상군에 비하여 대조군 및 구속대조군에서 WBC 함량이 증가하였으며, 양릉천 유침군 및 양릉천 전침군에서 대조군, 구속대조군에 비하여 감소하였으나, 유의성은 없었다(Fig. 4).
- 각 실험군의 whole blood에서 hemoglobin 의 함량을 측정한 결과, 대조군 및 구속대조 군에서 정상군에 비하여 hemoglobin 함량이 유의하게 감소하였다. 양릉천 유침군 및 양릉천 전침군의 hemoglobin 함량은 대조군 및 구속대조군에 비하여 약간 증가하였으나, 유의한 차이를 나타내지는 않았다(Fig.
- 각 실험군의 간 조직을 적출하여 H&E 염색법을 이용하여 염색 후 관찰한 결과 정상군에 비해 대조군 및 구속대조군의 간 조직에서 간세포의 괴사, 간조직의 조밀도 저하 등을 확인하였으며 양릉천 전침군에서는 간세포의 괴사가 적고, 간조직의 조밀도가 정상군과 유사하게 유지되었다(Fig. 14).
- 각 실험군의 간 조직을 적출하여 M&T 염색법을 이용하여 염색 후 관찰한 결과 정상군에 비해 대조군 및 구속대조군의 간조직에서 세포간질이 증가하고 간조직의 구조가 흐트러진 것을 관찰하였다.
- 각 실험군의 혈청에서 ALP의 함량을 측정한 결과, 정상군에 비하여 양릉천 유침군에서 ALP의 함량이 유의하게 증가하였으며, 다른 군에서는 유의한 변화를 보이지 않았다(Fig. 12).
- 각 실험군의 혈청에서 total cholesterol의 함량을 측정한 결과, 모든 군에서 유의한 차이가 나타나지 않았다(Fig. 13).
- 각 실험군의whole blood에서 PLT의 함량을 측정한 결과, 양릉천 유침군 및 양릉천 전침군에서 다른 군에 비하여 PLT 함량이 감소하는 경향을 보였으나, 유의성은 없었다(Fig. 5).
- . 따라서 본 실험에서 대조군 및 구속 대조군에서 정상군에 비하여 neutrophils와 monocytes의 비율이 증가하고 lymphocytes의 비율이 구속대조군에 비하여 유의하게 감소하였음은 CCl4로 인한 간손상으로 대사 이상 및 염증이 유발되었다고 볼 수 있다.
- 로 간손상을 유발하고 刺鍼 및 고주파 전침자극을 가한 후, 몸무게, 간비중, hematology 분석, blood chemistry 분석 및 조직학적 분석을 통해 관찰한 결과, 대조군 및 구속대조군에 비하여 백혈구수와 PLT가감소하는 경향을 보였으며 Lymphocyte가유의성 있게 증가하고 neutrophils와 monocytes가 감소하는 경향을 보였으며 AST와 ALT가 유의성 있게 감소하였다. 또한 조직학적으로 간조직이 정상에 가깝게 유지되고 세포간질 손상이 억제된 것을 알 수 있었다.
- 본 실험에서 RBC의 함량은 모든 군에서 유의한 차이가 나타나지 않았으며(Fig. 3), hemoglobin의 함량은 대조군 및 구속대조군 에서 정상군에 비하여 유의하게 감소하여 조30)의 연구와 부분적으로 일치하는 결과를 보였다. 양릉천 유침군 및 양릉천 전침군의 hemoglobin 함량은 대조군에 비하여 유의한 차이를 나타내지는 않아(Fig.
- 실험 결과 정상군에 비하여 구속대조군에서 ALT와 AST의 함량이 유의하게 증가하였으며 양릉천 유침군 및 양릉천 전침군의 ALT와 AST의 함량은 구속대조군에 비해 유의하게 감소하였다(Fig. 10, 11). 이러한 결과는 양릉천의 유침 및 전침 자극에 의하여 간세포의 파괴가 감소하여 혈중으로 방출되는 효소의 양이 줄었기 때문인 것으로 생각된다.
- . 실험결과 다른 군에서는 유의한 변화를 보이지 않았으나 정상군에 비하여 양릉천 유침군에서 유의하게 증가하였다(Fig. 12). 이는 양릉천 유침군이 다른 지표에서 간손상을 감소시키는 경향을 보여주었던 것과는 상반된 결과로 이에 대한 추가적 검증이 필요하다고 생각된다.
- 양릉천 유침군 및 양릉천 전침군에서 구속대조군에 비하여 lymphocytes의 비율이 유의하게 증가하였고(Fig. 6), neutrophils와 monocyte의 비율이 감소하는 경향을 보였으나 유의성이 없었다(Fig. 7, 8). lymphocytes의 비율의 변화에서는 양릉천의 刺鍼 및 전침자극이 간손상으로 인한 대사 이상의 회복을 촉진하는 것으로 생각되나 neutrophils와 monocyte의 비율에서는 유의한 결과를 보이지 않으므로 추가적인 사례 수집을 통한 검증이 필요하다고 보여진다.
- 정상군에 비하여 구속대조군에서 ALT 함량이 유의하게 증가하였다. 양릉천 유침군 및 양릉천 전침군의 ALT 함량은 구속대조군에 비하여 유의하게 감소하였다(Fig. 10).
- 정상군에 비하여 대조군, 구속대조군의 AST 함량이 유의하게 증가하였다. 양릉천 유침군의 AST 함량은 대조군 및 구속대조군에 비하여 유의하게 감소하였으며, 양릉천 전침군의 AST 함량은 구속대조군에 비하여 유의하게 감소하였다(Fig. 11).
- 양릉천에 고주파 전침자극이 흰 쥐의 간손상에 미치는 영향을 알아보기 위하여 CCl4로 간손상을 유발하고 刺鍼 및 고주파 전침자극을 가한 후, 몸무게, 간비중, hematology 분석, blood chemistry 분석 및 조직학적 분석을 통해 관찰한 결과, 대조군 및 구속대조군에 비하여 백혈구수와 PLT가감소하는 경향을 보였으며 Lymphocyte가유의성 있게 증가하고 neutrophils와 monocytes가 감소하는 경향을 보였으며 AST와 ALT가 유의성 있게 감소하였다. 또한 조직학적으로 간조직이 정상에 가깝게 유지되고 세포간질 손상이 억제된 것을 알 수 있었다.
- 이상의 실험결과에서 양릉천의 고주파 전침자극은 실험동물의 간손상에 대한 간보호 효과를 보였다.
- 이와 같은 결과를 통해 양릉천은 간손상을 억제하고 간기능을 개선하는 효과가 있음을 확인할 수 있었다. 그러나 양릉천 유침군 및 양릉천 전침군 사이에 유의한 결과의 차이는 나타나지 않아, 향후 전침의 주파수 및 유침시간 등을 달리하여, 이에 대한 새로운 연구가 필요할 것으로 사료된다.
- 이와 같이 조직학적 관찰결과에서도 양릉천 전침 자극이 CCl4 투여에 의한 간의 세포간질 손상을 억제하고 간조직을 정상적으로 유지하는데 효과가 있음을 확인할 수 있었다.
- 각 실험군의 혈청에서 ALT의 함량을 측정하였다. 정상군에 비하여 구속대조군에서 ALT 함량이 유의하게 증가하였다. 양릉천 유침군 및 양릉천 전침군의 ALT 함량은 구속대조군에 비하여 유의하게 감소하였다(Fig.
- 로 유발된 간 손상에 의한 간비중의 변화를 관찰하였다. 정상군에 비하여 대조군 및 구속대조군에서 간비중이 증가하였으며, 양릉천 유침군 및 양릉천 전침군에서 대조군, 구속대조군에 비하여 간비중이 감소하였으나, 유의성은 없었다(Fig. 2).
- 각 실험군의 혈청에서 AST의 함량을 측정하였다. 정상군에 비하여 대조군, 구속대조군의 AST 함량이 유의하게 증가하였다. 양릉천 유침군의 AST 함량은 대조군 및 구속대조군에 비하여 유의하게 감소하였으며, 양릉천 전침군의 AST 함량은 구속대조군에 비하여 유의하게 감소하였다(Fig.
- 각 실험군의 간 조직을 적출하여 M&T 염색법을 이용하여 염색하였다. 정상군에 비해 대조군 및 구속대조군의 간조직에서 세포간질이 증가하고 간조직의 구조가 흐트러진 것을 관찰하였다. 양릉천 전침군에서는 세포간질의 축적이 대조군에 비하여 감소하였으며, 간조직의 구조가 단정하여 정상군과 유사하게 유지되었다(Fig.
후속연구
- 7, 8). lymphocytes의 비율의 변화에서는 양릉천의 刺鍼 및 전침자극이 간손상으로 인한 대사 이상의 회복을 촉진하는 것으로 생각되나 neutrophils와 monocyte의 비율에서는 유의한 결과를 보이지 않으므로 추가적인 사례 수집을 통한 검증이 필요하다고 보여진다.
- 이와 같은 결과를 통해 양릉천은 간손상을 억제하고 간기능을 개선하는 효과가 있음을 확인할 수 있었다. 그러나 양릉천 유침군 및 양릉천 전침군 사이에 유의한 결과의 차이는 나타나지 않아, 향후 전침의 주파수 및 유침시간 등을 달리하여, 이에 대한 새로운 연구가 필요할 것으로 사료된다.
- 12). 이는 양릉천 유침군이 다른 지표에서 간손상을 감소시키는 경향을 보여주었던 것과는 상반된 결과로 이에 대한 추가적 검증이 필요하다고 생각된다.
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