십전대보탕(十全大補湯) 및 가미십전대보탕(加味十全大補湯)의 항산화 효과 및 신경교세포주 보호 효과 Protective Effects and Anti-oxidative Effects of Sipjeon-Daebo-Tang and Gami-Sipjeon-Daebo-Tang in C6 Glioma Cell원문보기
Sipjeon-Daebo-Tang (SDT) is indicated for deficiency syndrome of both gi and blood, marked by pale or sallow complexion, dizziness, lassitude, shortness of breath, dislike for talking, poor appetite, pale tongue with thin whitish fur, thready and weak pulse. Gami-Sipjeon-Daebo-Tang(GSDT) is composed...
Sipjeon-Daebo-Tang (SDT) is indicated for deficiency syndrome of both gi and blood, marked by pale or sallow complexion, dizziness, lassitude, shortness of breath, dislike for talking, poor appetite, pale tongue with thin whitish fur, thready and weak pulse. Gami-Sipjeon-Daebo-Tang(GSDT) is composed of 10 herbs within SDT and Cervi Pantotrichum Cornu (CPC). CPC can noursh kidney-yang, promote the production of the essence and blood, strengthen tendons and bones. Recently SDT is known as anti-cancer drug. Especially CPC is reported to have anti-oxidative action. For these reasons, we investigated the protective effects on cell death induced by chemicals such as paraquat, hydrogen peroxide and anti-oxidative effects in C6 glioma cells. In our results, GSDT accelerated proliferation rates of C6 cells in vitro. In addition, protective effects on cell death induced by hydrogen peroxide and rotenone. In addition, SOD activities were increased by treatment with both SDT and GSDT. In conclusion, these results suggest the possibility of GSDT to protect brain cell or neuronal cell from damage induced by oxidative stress. And also suggest that related mechanisms are involved in SOD activities.
Sipjeon-Daebo-Tang (SDT) is indicated for deficiency syndrome of both gi and blood, marked by pale or sallow complexion, dizziness, lassitude, shortness of breath, dislike for talking, poor appetite, pale tongue with thin whitish fur, thready and weak pulse. Gami-Sipjeon-Daebo-Tang(GSDT) is composed of 10 herbs within SDT and Cervi Pantotrichum Cornu (CPC). CPC can noursh kidney-yang, promote the production of the essence and blood, strengthen tendons and bones. Recently SDT is known as anti-cancer drug. Especially CPC is reported to have anti-oxidative action. For these reasons, we investigated the protective effects on cell death induced by chemicals such as paraquat, hydrogen peroxide and anti-oxidative effects in C6 glioma cells. In our results, GSDT accelerated proliferation rates of C6 cells in vitro. In addition, protective effects on cell death induced by hydrogen peroxide and rotenone. In addition, SOD activities were increased by treatment with both SDT and GSDT. In conclusion, these results suggest the possibility of GSDT to protect brain cell or neuronal cell from damage induced by oxidative stress. And also suggest that related mechanisms are involved in SOD activities.
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문제 정의
신경교세포주에 대하여 증식율 증가 소견을 보인 GSDT에 대하여 산화적 스트레스를 유발한다고 알려져 있는 4가지 chemical의 처치에 의해 발생하는 세포 사멸에 미치는 영향을 살펴보았다. 4가지 chemical 중 첫 번째로 paraquat는 그라목손 (Gramoxone)으로 알려져 있는 강력한 제초제로 실험실에서는 주로 각종 중독 작용, 산화적 스트레스에 의한 세포 손상을 일으키는 자극원으로 사용된다33,34).
이에 본 저자들은 신경교세포주인 C6 glioma cell에 각종 산화적인 스트레스를 유발하고, SDT 및 GSDT의 항산화 효과 및 주어진 스트레스에 의하여 유발되는 신경교세포주의 사멸을 효과적으로 보호할 수 있는지를 관찰한 결과 유의성을 얻었기에 보고하는 바이다.
가설 설정
, 등이 있음이 밝혀져 SDT와 좋은 조합을 이룬다고 생각하였다. 또한, CPC는 항산화 효과에 기인한 항노화 기능19)과 항염증 작용20,21)을 가지고 있어 GSDT는 항산화 효과를 통하여 신경세포를 보호해 줄 수 있을 것이라는 가설을 세우고 실험을 진행하였다.
제안 방법
간단히 정리하면, 100mm dish에 각각 1×106 개의 세포를 분주하고 37℃, % CO2를 유지하며 24시간 동안 pre-incubation시킨 후, 0, 250, 500, 1000㎍/㎖ 농도의 약물을 처리하고 다시 24시간 동안 배양하였다. 24시간의 배양이 끝나고, 세포를 부유 시킨 다음 trypan blue (Sigma, USA)를 1:1 비율로 첨가하고 세포계수기 (Hematocytometer) 위에서 광학현미경으로 관찰하였다. 살아있는 세포의 개수는 총 세포 개수에서 trypan blue에 염색된 세포의 개수를 차감하여 계산하였다.
세포의 부착이 끝난 후, SDT 및 GSDT를 처리하고 동일한 환경에서 24시간 동안 방치하였다. 24시간의 배양이 끝난 후, 15 mM의 paraquat, 0.8 mM의 rotenone, 0.8 mM의 sodium nitroprusside (SNP) 그리고, 0.5 mM의 과산화수소 (hydrogen peroxide, H2O2)를 각각 처리하고 37℃, 5% CO2가 공여되는 환경에 4시간 동안 방치하였다. 4시간동안의 배양이 끝난 후, 배양액을 제거하고 각 well에 생성된 formazan결정을 DMSO를 첨가하여 녹인 후 Microplate Reader (Molecular Device, USA)를 이용하여 540 ㎚에서 광도를 측정하였다.
5 mM의 과산화수소 (hydrogen peroxide, H2O2)를 각각 처리하고 37℃, 5% CO2가 공여되는 환경에 4시간 동안 방치하였다. 4시간동안의 배양이 끝난 후, 배양액을 제거하고 각 well에 생성된 formazan결정을 DMSO를 첨가하여 녹인 후 Microplate Reader (Molecular Device, USA)를 이용하여 540 ㎚에서 광도를 측정하였다.
C6세포에 500 ㎍/㎖의 SDT 및 GSDT를 전처치하고, paraquat, SNP, hydrogen peroxide, rotenone으로 산화적 스트레스를 유발한 다음 SDT 및 GSDT의 세포 사별 방지 효과를 측정하였다. paraquat, SNP, rotenone 및 hyrogen peroxide 단독 처리 군에서는 아무것도 처리하지 않은 Naive 군에 비하여 유의한 세포 생존율 감소가 관찰되었고, SDT 및 GSDT를 전처리 한후, paraquat를 처리한 군과 SNP를 처리한 군의 세포 생존율은 약물의 전처리 없이 chemical 만을 처리한 수준으로 나타났다 (Fig.
SDT 84 g과 GSDT 96 g 1첩 분량을 증류수 1,200 ㎖과 함께 전기약탕기(대웅, 한국)으로 3시간 동안 전탕하여 얻어진 추출액을 거즈로 거른 다음, 원심분리기(eppendrof, Germany)를 이용하여 5,000 rpm에서 15분간 원심분리하여 찌꺼기를 버리고 상층액을 얻었다. 얻어진 상층액은 감압 농축기 (EYELA, Japan)를 이용하여 감압 농축된 다음, 동결건조하여 최종적으로 SDT는 15.
SDT 및 GSDT가 세포 생존율에 미치는 영향 측정은 trypan blue exclusion assay를 시행하여 관찰하였다. 간단히 정리하면, 100mm dish에 각각 1×106 개의 세포를 분주하고 37℃, % CO2를 유지하며 24시간 동안 pre-incubation시킨 후, 0, 250, 500, 1000㎍/㎖ 농도의 약물을 처리하고 다시 24시간 동안 배양하였다.
Total glutathione 함량 측정은 Total glutathione Quantification Kit (Dojindo, Japan)을 이용하여 측정하였다. SOD 활성 측정과 동일한 방법으로 효소액을 제조한 다음, Pseudo-end point method를 이용하여 glutathione 함량을 측정하였으며, 측정 과정은 제조자가 제시한 치침에 따라 진행되었다.
十全大補湯 (SDT) 및 加味十全大補湯 (GSDT)이 뇌교세포주에서 항산화 효과를 발휘하는지 살펴보기 위하여 C6 glioma cell에 SDT 및 GSDT 추출물을 투여하고 세포 증식율 및 생존율에 미치는 영향과 산화적 스트레스를 유발하는 paraquat, SNP, hydrogen peroxide 그리고 rotenone에 의하여 유발되는 세포 사멸에 미치는 영향을 관찰하였고, SOD 활성과 total glutathione 함량에 미치는 영향을 관찰하였다.
간단히 정리하면, 100mm dish에 각각 1×106 개의 세포를 분주하고 37℃, % CO2를 유지하며 24시간 동안 pre-incubation시킨 후, 0, 250, 500, 1000㎍/㎖ 농도의 약물을 처리하고 다시 24시간 동안 배양하였다.
세포는 T-75 플라스크의 80% 정도 자랐을 때 세포의 탈착을 위하여 인산완충액 (Phosphate buffered saline, PBS)으로 가볍게 세척한 다음, Trypsin-EDTA (Sigma, USA)을 처리한 후, 37℃에서 5분간 방치하였다가 세포를 채집하였다. 계대 배양은 2~3일에 1회씩 시행하였다.
그 후 3-(4,5-dimethylthiazol-2yl)-2,5- diphenyl-2H-tetrazolium bromide (MTT)를 처리하여 4시간을 배양하였다. 배양이 끝난 후, 각 well에 생성된 formazan결정을 DMSO를 첨가하여 녹이고, Microplate Reader (Molecular Device, USA)를 이용하여 540㎚에서 흡광도를 측정하였다.
본 실험에서 사용한 十全大補湯 (Sipjeon-Daebo-Tang, SDT)의 구성은 太平惠民和劑局方에 준하였고, SDT에 CPC 8 g을 첨가하여 加味十全大補湯 (Gami-Sipjeon-Daebo-Tang, GSDT)을 구성하였다. 실험에 사용된 약재는 시중 (전남생약조합, 한국)에서 구입하였으며, 처방 내용은 Table 1과 같다.
산화적 스트레스에 의한 세포 사멸 보호효과는 MTT법23)을 변형하여 측정하였다. 먼저 C6 세포주를 96-well plate에 well 당 1×104개씩 분주한 후, 37℃, 5% CO2가 공여되는 환경에 4시간동안 방치하여 부착을 시행하였다.
24시간의 배양이 끝나고, 세포를 부유 시킨 다음 trypan blue (Sigma, USA)를 1:1 비율로 첨가하고 세포계수기 (Hematocytometer) 위에서 광학현미경으로 관찰하였다. 살아있는 세포의 개수는 총 세포 개수에서 trypan blue에 염색된 세포의 개수를 차감하여 계산하였다.
24시간의 배양이 끝나고, 세포를 수집한 다음 -20℃에서 20분간 냉동 후, 항온 수조를 이용하여 37℃에서 10분간 방치하기를 2회 반복하여 세포를 파쇄하였다. 세포 파쇄가 끝난 후, 3,000 g에서 10분간 원심분리하여 상층액을 기질로 사용하였으며, 측정 과정은 제조자가 제시한 치침에 따라 진행되었다. 측정된 Optical density (OD) 값으로부터 SOD 활성도를 계산하였으며, 계산 공식은 아래와 같다.
세포 파쇄가 끝난 후, 3,000 g에서 10분간 원심분리하여 상층액을 기질로 사용하였으며, 측정 과정은 제조자가 제시한 치침에 따라 진행되었다. 측정된 Optical density (OD) 값으로부터 SOD 활성도를 계산하였으며, 계산 공식은 아래와 같다.
대상 데이터
4가지 chemical 중 첫 번째로 paraquat는 그라목손 (Gramoxone)으로 알려져 있는 강력한 제초제로 실험실에서는 주로 각종 중독 작용, 산화적 스트레스에 의한 세포 손상을 일으키는 자극원으로 사용된다33,34). 두 번 째로, 생체 내에서 nitric oxide (NO)를 발생시켜 산화적 스트레스를 유발하는 sodium nitro-prusside (SNP)35), 과산화수소 (hydrogen peroxide, H2O2) 그리고 농약, 살충제 용도로 사용되며, 생체 내의 각종 세포에 산화적 손상을 통하여 apoptosis를 유발하는 rotenone36,37)을 사용하였다.
SDT는 八珍湯에 黃芪와 肉桂를 더하여 諸虛不足과 五勞七傷으로 발생하는 食慾不振, 久病虛損으로 인한 時發潮熱, 夜夢遺精 등의 증상을 치료한다24). 본 연구에서 사용한 GSDT는 SDT에 補腎陽, 益精血, 强筋骨, 調衝任의 효능을 가진 鹿茸9)을 첨가하여 鹿茸, 黃芪, 人蔘, 白朮, 茯笭, 熟地黃, 當歸, 白芍藥, 川芎, 肉桂, 甘草와 生薑, 大棗로 구성되었다.
신경교세포주인 C6 glioma cell은 RPMI 배지에 10% (v/v) Fetal Bovine Serum (FBS, Gibco)과 항생제(Antibiotic antimycotic)를 첨가한 후 37℃, 5% CO2의 배양기에서 배양하였다. 세포는 T-75 플라스크의 80% 정도 자랐을 때 세포의 탈착을 위하여 인산완충액 (Phosphate buffered saline, PBS)으로 가볍게 세척한 다음, Trypsin-EDTA (Sigma, USA)을 처리한 후, 37℃에서 5분간 방치하였다가 세포를 채집하였다.
본 실험에서 사용한 十全大補湯 (Sipjeon-Daebo-Tang, SDT)의 구성은 太平惠民和劑局方에 준하였고, SDT에 CPC 8 g을 첨가하여 加味十全大補湯 (Gami-Sipjeon-Daebo-Tang, GSDT)을 구성하였다. 실험에 사용된 약재는 시중 (전남생약조합, 한국)에서 구입하였으며, 처방 내용은 Table 1과 같다.
흰쥐의 뇌세포에서 유래한 신경교세포주인 C6 glioma cell은 한국세포주은행 (서울, 한국)에서 동결 상태로 구입하여 사용하였다.
데이터처리
제시된 모든 결과에 대한 통계처리는 SPSS 10.0 for windows program을 사용하여 실시하였으며, Student-Newman-Keuls multiple range test를 이용하여 P값이 0.05 미만 일 때 유의성이 있는 것으로 판단하였다.
이론/모형
C6 Cells were attached 100 mm plate, and added SDT and GSDT as indicated concentrations respectively. After 24 hr incubation, cell viabilities were measured using trypan blue exclusion methods. Result are presented as mean±SD of three independent experiments.
C6 Cells were attached 96-well plate, and added SDT and GSDT as indicated concentrations respectively. After 24 hr incubation, proliferation rates were measured using MTT methods. Result are presented as mean±SD of three independent experiments.
SDT 및 GSDT가 세포 증식율에 미치는 영향 측정은 MTT assay23)를 통해 확인하였다. C6 glioma cell을 96 well plate에 5×103 cell/well의 농도로 분주하여 배양기에서 37℃, % CO2를 유지하며 24시간동안 pre-incubation시킨 후 0~1000 ㎍/㎖의 농도로 약물을 처리하여 24시간 배양하였다.
SOD 활성은 SOD assay kit (Dojindo, Japan)을 이용하여 측정하였다. 100㎜ dish에 각각 1×106 개의 세포를 분주하고 37℃, 5% CO2를 유지하며 24시간 동안 pre-incubation시킨 후, 500 ㎍/㎖ 농도의 약물을 처리하고 다시 24시간 동안 배양하였다.
Total glutathione 함량 측정은 Total glutathione Quantification Kit (Dojindo, Japan)을 이용하여 측정하였다. SOD 활성 측정과 동일한 방법으로 효소액을 제조한 다음, Pseudo-end point method를 이용하여 glutathione 함량을 측정하였으며, 측정 과정은 제조자가 제시한 치침에 따라 진행되었다.
성능/효과
C6세포에 500 ㎍/㎖의 SDT 및 GSDT를 처치한 후, SOD 활성도 (inhibition rates)를 측정한 결과 두 약물군 모두에서 유의한 수준의 SOD 활성도 증가가 관찰되었다(Fig. 4).
3A, B). GSDT 전처리 후, rotenone 및 hyrogen peroxide를 처리한 군에서 rotenone 및 hyrogen peroxide를 단독으로 처리한 군에 비하여 유의하게 높은 수준의 세포 생존율이 관찰되었으며, SDT 전처리 군에서는 chemical 단독 처리군과 유의한 차이를 발견할 수 없었다(Fig. 3C, D).
SDT 및 GSDT가 신경교세포주의 증식율에 미치는 영향을 알아보기 위하여 C6 glioma cell에 농도별로 SDT 및 GSDT를 투여하고 24시간 후, 세포 증식율을 측정한 결과 SDT에서는 유의한 세포 증식율의 변화를 관찰할 수 없었으나, GSDT군에서는 250 ㎍/㎖ 이상에서 유의한 수준의 세포 증식율 증가가 관찰되었으며, 그 양상은 농도 의존적이었다(Fig. 1).
C6세포에 500 ㎍/㎖의 SDT 및 GSDT를 전처치하고, paraquat, SNP, hydrogen peroxide, rotenone으로 산화적 스트레스를 유발한 다음 SDT 및 GSDT의 세포 사별 방지 효과를 측정하였다. paraquat, SNP, rotenone 및 hyrogen peroxide 단독 처리 군에서는 아무것도 처리하지 않은 Naive 군에 비하여 유의한 세포 생존율 감소가 관찰되었고, SDT 및 GSDT를 전처리 한후, paraquat를 처리한 군과 SNP를 처리한 군의 세포 생존율은 약물의 전처리 없이 chemical 만을 처리한 수준으로 나타났다 (Fig. 3A, B). GSDT 전처리 후, rotenone 및 hyrogen peroxide를 처리한 군에서 rotenone 및 hyrogen peroxide를 단독으로 처리한 군에 비하여 유의하게 높은 수준의 세포 생존율이 관찰되었으며, SDT 전처리 군에서는 chemical 단독 처리군과 유의한 차이를 발견할 수 없었다(Fig.
그 결과 GSDT 추출물은 250 ㎍/㎖ 농도 이상에서 유의한 수준으로 세포 증식율을 증가시켰고, SDT 및 GSDT 두군 모두에서 특별한 세포 독성을 관찰할 수 없었다. 또한, 500 ㎍/㎖ 농도의 GSDT 추출물은 hydrogen peroxide와 rotenone의 자극에 의한 세포 사멸을 유의한 수준으로 방지함을 알 수 있었다.
3). 그러나, GSDT의 경우 paraguat와 SNP를 사용한 경우 세포 생존율에 특별한 영향을 미치지 않았지만, rotenone과 hydrogen peroxide에 의한 산화적 스트레스로부터 C6 세포의 사멸을 효율적으로 방지하였다(Fig. 3). 기존의 SDT는 주로 면역 기능 증진과 면역 기능 증진에 의한 항암 작용을 보이는데, 일반적으로 면역 기능 증진과 항암 작용의 기전에는 산화적 스트레스를 이용할 가능성이 높다는 것을 감안할 때38,39), 본 연구의 결과는 기존의 연구 결과와 유사하며, GSDT에서 보인 효과는 CPC에 기인하는 것으로 생각된다.
그 결과 GSDT 추출물은 250 ㎍/㎖ 농도 이상에서 유의한 수준으로 세포 증식율을 증가시켰고, SDT 및 GSDT 두군 모두에서 특별한 세포 독성을 관찰할 수 없었다. 또한, 500 ㎍/㎖ 농도의 GSDT 추출물은 hydrogen peroxide와 rotenone의 자극에 의한 세포 사멸을 유의한 수준으로 방지함을 알 수 있었다. 또한, SDT와 GSDT군 모두에서 유의한 수준으로 SOD활성을 증가시킴을 확인하였다.
또한, 500 ㎍/㎖ 농도의 GSDT 추출물은 hydrogen peroxide와 rotenone의 자극에 의한 세포 사멸을 유의한 수준으로 방지함을 알 수 있었다. 또한, SDT와 GSDT군 모두에서 유의한 수준으로 SOD활성을 증가시킴을 확인하였다.
산화된 GSH는 glutathione reductase에 의하여 다시 환원형으로 돌아간다45). 본 연구에서 SDT 및 GSDT는 total glutathione 함량에 특별한 영향을 미치지 않았다(Fig. 5). 이전 연구 결과에서 CPC에 의하여 활성이 증가하는 것으로 알려진 thioredoxin이 glutathione의 농도와 반비례 관계46)에 있다는 것과 비교하면, 본 연구의 결과로부터 GSDT의 항산화 효과에는 glutathione 관련 기전 이외의 다른 기전이 관여한다는 것을 알 수 있다.
본 연구의 결과에서 GSDT는 C6 세포주에 대하여 250 ㎍/㎖ 이상에서 유의한 수준의 증식율 증가를 나타냈다(Fig. 1). 또한, SDT 및 GSDT 모두 특별한 세포 독성은 나타나지 않았다(Fig.
. 본 연구의 결과에서 SDT와 GSDT군 모두에서 유의한 수준의 SOD 활성 증가가 관찰되었다(Fig. 4). GSDT에서의 SOD 활성 증가는 산화적 스트레스에 대한 보호 효과를 보인 Fig.
본 연구의 결과에서 상기한 4가지 chemical은 모두 C6 세포의 생존율을 유의한 수준으로 감소시켰다. 이러한 생존율 감소에 대하여 SDT는 특별한 보호효과를 발휘하지 못하였으며, SNP 자극에 의하여 오히려 세포 생존율이 더 낮아지는 경향을 보였다(Fig.
세포 증식율 측정에 이어, 세포 생존율에 미치는 영향을 관찰한 결과 SDT 및 GSDT 두 군 모두에서 유의할 만한 세포 생존율의 감소는 관찰되지 않았다(Fig. 2).
2). 이러한 결과로부터 GSDT가 신경 손상 환자의 뇌 또는 신경 조직을 재생 시킬 수 있다는 가능성을 발견하였다. 이에 부가하여, GSDT 및 SDT의 최소 유효 농도는 250 ㎍/㎖ 이상으로 결정되었으며, 이후 실험에서는 500 ㎍/㎖ 농도를 사용하였다.
이러한 결과로부터 본 저자는 加味十全大補湯이 항산화 효과를 통하여 뇌 및 신경 세포의 손상을 방지해 줄 수 있는 가능성이 있으며, 그 기전으로는 SOD 활성의 증가가 관여한다고 생각된다.
본 연구의 결과에서 상기한 4가지 chemical은 모두 C6 세포의 생존율을 유의한 수준으로 감소시켰다. 이러한 생존율 감소에 대하여 SDT는 특별한 보호효과를 발휘하지 못하였으며, SNP 자극에 의하여 오히려 세포 생존율이 더 낮아지는 경향을 보였다(Fig. 3). 그러나, GSDT의 경우 paraguat와 SNP를 사용한 경우 세포 생존율에 특별한 영향을 미치지 않았지만, rotenone과 hydrogen peroxide에 의한 산화적 스트레스로부터 C6 세포의 사멸을 효율적으로 방지하였다(Fig.
5). 이전 연구 결과에서 CPC에 의하여 활성이 증가하는 것으로 알려진 thioredoxin이 glutathione의 농도와 반비례 관계46)에 있다는 것과 비교하면, 본 연구의 결과로부터 GSDT의 항산화 효과에는 glutathione 관련 기전 이외의 다른 기전이 관여한다는 것을 알 수 있다.
재료 및 방법에서 논술한 바와 같이, C6세포에 500 ㎍/㎖의 SDT 및 GSDT를 처치한 후, Total glutathione 함량를 측정한 결과 모든 군에서 유의할 만한 변화는 발견할 수 없었다(Fig. 5).
후속연구
3의 결과를 보충 설명할 수 있는 자료라 생각된다. 일반적으로 항산화 효과가 알려지지 않은 SDT에서도 SOD 활성 증가 소견이 관찰된 것은 새로운 사실이라 할 수 있으며, 추후 SDT의 항산화 관련 연구를 통하여 재확인함과 동시에 명확한 기전을 밝혀야 할 것으로 생각된다.
질의응답
핵심어
질문
논문에서 추출한 답변
十全大補湯이란?
十全大補湯 (Sipjeon-Daebo-Tang, SDT)은 宋대에 편찬된 太平惠民和劑局方에 처음으로 소개된 처방으로 四物湯과 四君子湯, 黃芪健中湯의 合方으로 구성되었으며7,8), 氣血虛弱의 대표적인 처방으로 인식되고 있다7). 본 연구에 사용된 加味十全大補湯 (Gami-Sipjeon-Daebo-Tang, GSDT)은 기존의 SDT에 鹿茸 (Cervi Pantotrichum Cornu, CPC)을 첨가하여 새롭게 구성된 처방이다.
十全大補湯 (SDT) 및 加味十全大補湯 (GSDT)이 뇌교세포주에서 항산화 효과를 발휘하는지 살펴보기 위하여 C6 glioma cell에 SDT 및 GSDT 추출물을 투여하고 세포 증식율 및 생존율에 미치는 영향과 산화적 스트레스를 유발하는 paraquat, SNP, hydrogen peroxide 그리고 rotenone에 의하여 유발되는 세포 사멸에 미치는 영향을 관찰하였고, SOD 활성과 total glutathione 함량에 미치는 영향을 관찰한 결과는?
그 결과 GSDT 추출물은 250 ㎍/㎖ 농도 이상에서 유의한 수준으로 세포 증식율을 증가시켰고, SDT 및 GSDT 두군 모두에서 특별한 세포 독성을 관찰할 수 없었다. 또한, 500 ㎍/㎖ 농도의 GSDT 추출물은 hydrogen peroxide와 rotenone의 자극에 의한 세포 사멸을 유의한 수준으로 방지함을 알 수 있었다. 또한, SDT와 GSDT군 모두에서 유의한 수준으로 SOD활성을 증가시킴을 확인하였다.
十全大補湯의 구성은?
十全大補湯 (Sipjeon-Daebo-Tang, SDT)은 宋대에 편찬된 太平惠民和劑局方에 처음으로 소개된 처방으로 四物湯과 四君子湯, 黃芪健中湯의 合方으로 구성되었으며7,8), 氣血虛弱의 대표적인 처방으로 인식되고 있다7). 본 연구에 사용된 加味十全大補湯 (Gami-Sipjeon-Daebo-Tang, GSDT)은 기존의 SDT에 鹿茸 (Cervi Pantotrichum Cornu, CPC)을 첨가하여 새롭게 구성된 처방이다.
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