[논문]상추 7 품종의 Quinic Acid 유도체 분석 및 Peroxynitrite 소거효과

누그로호 아궁; 장석우; 김원배; 이강노; 최재수; 박희준

상추 7 품종의 Quinic Acid 유도체 분석 및 Peroxynitrite 소거효과
Analysis of Quinic Acid Derivatives on Seven Cultivars of the Lettuce (Lactuca sativa L.) and Peroxynitrite Scavenging Effect 원문보기

생약학회지, v.40 no.4 = no.159, 2009년, pp.376 - 381

누그로호 아궁 (상지대학교 제약공학과) , 장석우 (농촌진흥청 고령지농업연구센터) , 김원배 (농촌진흥청 고령지농업연구센터) , 이강노 (성균관대학교 약학대학) , 최재수 (부경대학교 식품생명공학부) , 박희준 (상지대학교 제약공학과)

Abstract ▼ AI-Helper

The compositional analysis and the peroxynitrite ($ONOO^-$) scavenging assay were undertaken to demonstrate beneficial dietary effect of lettuce (Lactuca sativa L., Compositae). Quinic acid derivatives of the seven cultivars were qualitatively and quantitatively analyzed by HPLC to lead to the finding of 3,4-di-O-caffeoyquinic acid and 3-O-p-coumaroylquinic acid and their contents ranged over 2.72-4.47 mg/g and 8.97-23.26 mg/g, respectively. A cultivar Hacheong had the highest quantity of quinic acid derivatives. The peroxynitrite scavenging effect of the five cultivars (Jangsu, Gosina 27, Gopung, Yeolpungjeogchima, and Mipungjeogchugmyeon) were ranged over 7.45-8.26${\mu}g$/ml as $IC_{50}s$ while those of Hacheong and Mihong had less effect ($IC_{50}$ >10 ${\mu}g$/ml).

주제어

AI 본문요약
AI-Helper

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문제 정의

⁷⁾ 그 뿐 아니라, 과량생성된 peroxynitrite는 고콜레스테롤혈증, 동맥경화, 당뇨병 및 비만을 일으킬 수 있다고 한다.^8-10) 그러므로, 본 연구에서는 상추 품종 추출물의 peroxynitrte 소거효과를 관찰함으로써 이러한 질병의 예방에 유효한 품종을 선발하고자 하였다.
세계적으로 이용되는 채소인 상추(Lactuca sativa L., 국화과) 섭취가 미치는 건강상의 유익한 점을 밝히고 우수 품종을 밝히기 위한 일환으로 peroxynitrite 소거효과와 HPLC 분석을 수행하였다. 상추 7 품종에 대해 HPLC에 의한 정성 및 정량 분석을 수행하여 3,4-di-O-caffeoyquinic acid and 3-O-p-coumaroylquinic acid의 존재를 확인하고 전자가 2.
저자들은 산채 자원과 약용식물에 대하여 이러한 연구를 수행하면서 식용으로 하고 있는 상추에 대하여 quinic acid derivative의 분석과 peroxynitrite 소거효과를 규명하고자 하였다. 특히 상추 7품종에 대하여 이러한 연구를 수행하여 peroxynitrite 소거효과에 따른 성인병 예방효과가 있는지를 파악하기 위하여 실험을 수행하였다.
저자들은 산채 자원과 약용식물에 대하여 이러한 연구를 수행하면서 식용으로 하고 있는 상추에 대하여 quinic acid derivative의 분석과 peroxynitrite 소거효과를 규명하고자 하였다. 특히 상추 7품종에 대하여 이러한 연구를 수행하여 peroxynitrite 소거효과에 따른 성인병 예방효과가 있는지를 파악하기 위하여 실험을 수행하였다. 실험에 사용된 7 품종의 특성을 설명하면 다음과 같다.

제안 방법

0.2N sodium hydroxide에 용해된 peroxynitrite (10 μM)을 첨가한 후 5분 지나서 마지막 형광 강도를 측정하였다.
50, 100 and 200 μg/mL의 세 농도에서 각각의 피크 면적을 얻은 회귀직선방정식을 얻었다.
HPLC 분석 − 7종 추출물과 표준 화합물을 각각 80% 메탄올에 녹이고 HPLC에 주입하기 전 0.50 μm syringe filter로 여과하였다.
, Winooski, VT, USA)를 이용하여 각각 480 nm와 530 nm의 excitation과 emission에서 측정하였다. Peroxynitrite 소거활성은 DHR 123 산화의 검출을 통하여 마지막 형광 값에서 배경 형광 값을 빼서 산출하였다. 그 결과는 이 검색법을 3회 실시하여 IC₅₀ 값으로 평균±표준오차(SEM)으로 나타내었다.
2N sodium hydroxide에 용해된 peroxynitrite (10 μM)을 첨가한 후 5분 지나서 마지막 형광 강도를 측정하였다. 바탕 값(background)를 측정하기 위하여 같은 방법으로 peroxynitrite 용액의 첨가 없이 마지막 형광 강도를 측정하였다. 산화된 DHR 123의 형광강도는 microplate fluorescence reader FL 500 (Bio-Tek Instruments Inc.
바탕 값(background)를 측정하기 위하여 같은 방법으로 peroxynitrite 용액의 첨가 없이 마지막 형광 강도를 측정하였다. 산화된 DHR 123의 형광강도는 microplate fluorescence reader FL 500 (Bio-Tek Instruments Inc., Winooski, VT, USA)를 이용하여 각각 480 nm와 530 nm의 excitation과 emission에서 측정하였다. Peroxynitrite 소거활성은 DHR 123 산화의 검출을 통하여 마지막 형광 값에서 배경 형광 값을 빼서 산출하였다.
이 완충액은 사용 직전에 조제하여 빙상에 보관하면서 사용하였다. 상추 품종 추출물은 10% DMSO에 녹여 검액으로 하였다. 0.
gigantea),¹⁵⁾ 참취(Aster scaber)¹⁶⁾ 등에 함유되어 있다. 이와 같이 국화과 산채류에 quinic acid 유도체가 풍부하게 함유되어 있음에 따라 본 연구에서는 식용채소인 상추 7종의 표준 화합물을 이용하여 quinic acid 유도체의 동정과 함유량을 HPLC를 이용하여 밝혔다. 본 연구 중 3,4-di-Ocaffeoylquinic acid와 3-p-coumaroylquinic acid의 단 2종의 quinic acid 유도체 성분이 밝혀졌고 그 함유량도 취나물류에 비하여 매우 낮은 것으로 평가되었다.
추출 − 500 ml 삼각 플라스크에 10 g의 상추 7품종 식물 재료를 각각 넣고 400 ml의 MeOH을 넣어서 ultrasonic cleaner (Branson 8510)을 이용하여 60oC에서 24시간 sonication하였다. 추출액을 여과하여 진공농축기를 이용하여 감압 하에 농축한 다음 이들을 각각 동결건조기를 이용하여 24시간 동결건조하였다. 그 수득률을 계산한 결과 다음과 같다.

대상 데이터

표준 화합물로 사용한 3,4-di-Ocaffeoylquinic acid(3,4-DQ), 3,5-Di-O-dicaffeoyl-muco-quinic acid(3,5-DeQ), 3,5-di-O-caffeoylquinic acid (3,5-DQ), 4,5- di-O-caffeoylquinic acid(4,5-DQ), 5-O-caffeoylquinic acid (5-CQ), 3-O-caffeoylquinic acid(3-CQ), 3-O-p-coumaroylcaffeoylquinic acids(3-pCQ)의 7종 화합물은 Lactuca indica 에서 분리된 것이다.¹²⁾ Dihydrorhodamine 123(DHR 123)과 peroxynitrite는 생리활성 실험을 위하여 각각 Molecular Probes (Eugene, OR, USA)와 Cayman Chemical Co. (Ann Arbor, MI, USA)로부터 구입하여 사용하였다.
)이었다. HPLC 분석용 이동상의 용매는 J.T. Baker (Philipsburg, NJ, USA)사로부터 구입한 HPLC급 용매이었다. 표준 화합물로 사용한 3,4-di-Ocaffeoylquinic acid(3,4-DQ), 3,5-Di-O-dicaffeoyl-muco-quinic acid(3,5-DeQ), 3,5-di-O-caffeoylquinic acid (3,5-DQ), 4,5- di-O-caffeoylquinic acid(4,5-DQ), 5-O-caffeoylquinic acid (5-CQ), 3-O-caffeoylquinic acid(3-CQ), 3-O-p-coumaroylcaffeoylquinic acids(3-pCQ)의 7종 화합물은 Lactuca indica 에서 분리된 것이다.
기기 및 시약 −분석에 사용한 HPLC는 Prostar 210 solvent delivery module, Prostar 325-Vis detector 및 20 μL sample loop (Rheodyne, Rohnert Park, CA, USA)로 구성된 Varian HPLC system이었다.
분리를 위해 사용한 컬럼은 Hamilton (Reno, Nevada, USA)에서 구입한 Shiseido (Chouku, Tokyo, Japan) 사의 Capcell Pak C18 comlumn (5 μL, 250 mm × 4.6 mm I.D.)이었다.
50 μm syringe filter로 여과하였다. 자외선 검출기의 고정 파장 246 nm를 사용하여 검출하였다. 이동상으로 solvent A로서 0.

데이터처리

그 결과는 이 검색법을 3회 실시하여 IC50 값으로 평균±표준오차(SEM)으로 나타내었다.

이론/모형

Peroxynitrite 소거활성 실험 − Peroxynitrite scavenging activity를 측정하기 위하여 Kooy의 방법에13) 준하여 수행하였다.

성능/효과

47 mg/g의 값으로 큰 차이를 보이지 않았고, 이 중 가장 낮은 값을 보인 품종은 고풍이었으며 가장 높은 값을 보인 품종은 열풍적치마이었다. 3-p-coumaroylquinic acid는 8.97-23.26 mg/g의 값을 나타내 큰 차이를 보이지 않았고, 이 중 가장 낮은 값을 보인 품종은 역시 고풍이었으며 가장 높은 값을 보인 품종은 역시 열풍적치마이었다. 총함량에서도 고풍은 가장 낮은 함량을, 열풍적치마는 가장 높은 함량을 보였다.
7 품종 중 미홍과 하청은 효과가 상대적으로 약하여 peroxynitrite 소거효과로서 그 IC50 값이 10 μg/ml 이상이었으나 그 외 장수, 고풍, 고시나 27호, 미풍적축면, 열풍적치마는 7.45-8.26 μg/ml 범주에서 관찰되었으므로 비만, 고지혈증, 동맥경화, 당뇨병 등에 유익할 것으로 예상된다.
표준 화합물로 사용된 다른 5종의 quinic acid 유도체는 관찰되지 않았다. 그 함량 값을 Table I에 나타내었듯이, 3,4-dicaffoylquinic acid는 2.72-4.47 mg/g의 값으로 큰 차이를 보이지 않았고, 이 중 가장 낮은 값을 보인 품종은 고풍이었으며 가장 높은 값을 보인 품종은 열풍적치마이었다. 3-p-coumaroylquinic acid는 8.
총함량에서도 고풍은 가장 낮은 함량을, 열풍적치마는 가장 높은 함량을 보였다. 메탄올 추출물 중 함량은 9.50-23.51%로서 비교적 고른 함량을 보였다.
이와 같이 국화과 산채류에 quinic acid 유도체가 풍부하게 함유되어 있음에 따라 본 연구에서는 식용채소인 상추 7종의 표준 화합물을 이용하여 quinic acid 유도체의 동정과 함유량을 HPLC를 이용하여 밝혔다. 본 연구 중 3,4-di-Ocaffeoylquinic acid와 3-p-coumaroylquinic acid의 단 2종의 quinic acid 유도체 성분이 밝혀졌고 그 함유량도 취나물류에 비하여 매우 낮은 것으로 평가되었다.
, 국화과) 섭취가 미치는 건강상의 유익한 점을 밝히고 우수 품종을 밝히기 위한 일환으로 peroxynitrite 소거효과와 HPLC 분석을 수행하였다. 상추 7 품종에 대해 HPLC에 의한 정성 및 정량 분석을 수행하여 3,4-di-O-caffeoyquinic acid and 3-O-p-coumaroylquinic acid의 존재를 확인하고 전자가 2.72-4.47 mg/g dried weight의 함량을 보였고 후자가 8.97-23.26 mg/g의 함량을 보였다. 특히 하청 품종은 quinic acid 유도체가 가장 많이 함유하는 것으로 나타났다.
실험에 사용된 7종의 상추 품종에 대하여 quinic acid 유도체 표준 화합물 7종으로 HPLC에서 분석한 결과 3,4- dicaffeoylquinic acid와 3-p-coumaroylquinic acid만이 각각 retention time 3.5분과 3.8분에서 검출되었다. Retention time이 3.
특히 하청 품종은 quinic acid 유도체가 가장 많이 함유하는 것으로 나타났다. 장수, 고시나 27호, 고풍, 열풍적치마, 미풍적축면은 peroxynitrite 소거 효과의 IC₅₀가 7.45-8.26 μg/ml 수준에서 나타나고 하청과 미홍은 10.0 μg/ml 이상의 값을 나타냄으로써 그 효과가 상대적으로 낮은 것으로 밝혀졌다.
26 mg/g의 값을 나타내 큰 차이를 보이지 않았고, 이 중 가장 낮은 값을 보인 품종은 역시 고풍이었으며 가장 높은 값을 보인 품종은 역시 열풍적치마이었다. 총함량에서도 고풍은 가장 낮은 함량을, 열풍적치마는 가장 높은 함량을 보였다. 메탄올 추출물 중 함량은 9.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	상추의 학명과 목적은?	상추는 한국뿐 아니라 세계적으로도 널리 식용되고 있는 채소 중 하나이다. 상추는 국화과의 식물로서 그 학명이 Lactuca sativa L.이며 그 잎을 식용하며 약용으로 할 때는 건위, 최면, 진정, 항창종 등의 목적으로 사용한다.1) 최근에는 식생활의 변화로 인해 당뇨병, 고지혈증, 비만, 동맥경화 알츠하이머 질환 등 다양한 성인병으로 인해 채식을 통해 이러한 질병의 예방과 치료를 도모하고자 하는 사람들이 많다.
	Peroxynitrite(ONOO-)는 어디에서 생성된다고 알려져있는가?	Peroxynitrite(ONOO-)는 superoxide anion radical(·O2-)와 nitric oxide(·NO)의 반응에 의해 생체 내에서 생성된다고 알려져 있으며, 이것은 감염성질환에 대응하기 위해 필요하다고 한다.6) 그러나, 과량으로 생성된 peroxynitrite는 오히려 지질과 단백질을 과산화시키고 나아가 세포독성을 야기할수 있다.
	세계적으로 이용되는 채소인 상추(Lactuca sativa L., 국화과) 섭취가 미치는 건강상의 유익한 점을 밝히고 우수 품종을 밝히기 위한 일환으로 peroxynitrite 소거효과와 HPLC 분석을 수행한 결과는?	, 국화과) 섭취가 미치는 건강상의 유익한 점을 밝히고 우수 품종을 밝히기 위한 일환으로 peroxynitrite 소거효과와 HPLC 분석을 수행하였다. 상추 7 품종에 대해 HPLC에 의한 정성 및 정량 분석을 수행하여 3,4-di-O-caffeoyquinic acid and 3-O-p-coumaroylquinic acid의 존재를 확인하고 전자가 2.72-4.47 mg/g dried weight의 함량을 보였고 후자가 8.97-23.26 mg/g의 함량을 보였다. 특히 하청 품종은 quinic acid 유도체가 가장 많이 함유하는 것으로 나타났다. 장수, 고시나 27호, 고풍, 열풍적치마, 미풍적축면은 peroxynitrite 소거 효과의 IC50가 7.45-8.26 μg/ml 수준에서 나타나고 하청과 미홍은 10.0 μg/ml 이상의 값을 나타냄으로써 그 효과가 상대적으로 낮은 것으로 밝혀졌다.

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표제어: PCR

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용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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