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문제 정의
- 본 논문의 이전 연구에서 케라틴 함량이 10, 20 wt%인 3차원 지지체에서 골수간엽줄기세포의 지속적 인 세포증식률을 확인하였고 이러한 세포의 성장과 증식에 긍정적인 영향을 미치는 이유는 케라틴이 가지는 생체적합성과 친수성 때문으로 확인되었다 이러한 케라틴의 뛰어나 생체적합성에 관한 결과와 더불어 케라틴이 희석된 배양액이 슈반세포의 복사조절에 긍정적인 영향을 끼치는 연구결과에 착안하여 본 실험을 진행하였다. 본 연구는 신경손상 모델에서 신경재생을 유도하는 슈반세포의 배양^ 케라틴이 미치는 영향을 확인하기 위한 실험으로써, 다양한 케라틴이 함유된 케라틴/PLGA 필름에 신경세포 중 하나인 슈반세포를 파종하고 이의 복사조절에 영향을 미치는 최적의 케라틴 함량의 확인과 케라틴 함량에 따른 슈반 세포의 특성 분석을 시도하였다
- 본 실험을 진행하였다. 본 연구는 신경손상 모델에서 신경재생을 유도하는 슈반세포의 배양^ 케라틴이 미치는 영향을 확인하기 위한 실험으로써, 다양한 케라틴이 함유된 케라틴/PLGA 필름에 신경세포 중 하나인 슈반세포를 파종하고 이의 복사조절에 영향을 미치는 최적의 케라틴 함량의 확인과 케라틴 함량에 따른 슈반 세포의 특성 분석을 시도하였다
- 본 연구에서는 세포의 행동을 조절하는 미량의 분자와 세포의 이동부착, 그리고 자가집결을 조절하는 많은 양의 단백질 기질을 포함하는 케라틴을 함량별(0, 10, 20, 그리고 50 wt%) 로 함유하는 케라탄/ PLGA 필름을 제조하여 SC를 배양한 후 세포의 증식 거동 및 표현형 유지를 관찰하였으며 SC의 증식과 표현형 유지에 적합한 케라틴의 함유량을 찾고자 하였다. 접촉각 측정 결과 PLGA 필름과 비교하여 케라틴 함유량이 증가할수록 낮은 접촉각을 보였으며 초기접촉각 측정에서 20과 50% 케라탄 LGA 필름이 다른 필름에 비하여 작은 접촉각을 보였다.
제안 방법
- 케라틴을 함유한 PLGA 필름제조. PLGA 0.3 g을 MC 6 mL에 용해시켜 5(w/v)%의 PLGA 용액을 준비한 후 각각 0, 10, 20, 그리고 50 wt%에 해당하는 0.03, 0.06, 그리고 0.15 g의 케라틴을 첨가하였다. 케라틴과 PLGA의 혼합용액(케라틴PLGA)을 직경이 40 mm인 유리접시 표면에 도포한 후 실온에서 2~3일간 상온에서 건조시켰다.
- 케라틴 GA 필름의 친수성 평가. PLGA 필름과 케라틴함량에 따른 케라틴PLGA 필름 표면의 친수성을 알아보기 위하여 접촉각 측정을 실시하였다. 시료와 물방울:이 이루는 각도가 작을수록 친수성을 나타내며 평가결과는 Figure 2에 나타내었다.
- 케라틴이 함유된 필름이 SC의 표현형 유지에 미치는 영향을 mRNA 관점에서 확인하였다. SC 배양 후 1, 3, 그리고 5 일째에 RT-PCR을 통해 신경 세포에서 특이적으로 발현하는 단백질인 NF와 S-100의 mRNA 발현 정도를 확인하였고 이를 Figures 5 및 6으로 나타내었다. 1일째 모든 실험군에서 mRNA 발현은 큰 차이를 보이지 않았지만 3, 5일 째에서 케라틴 함량 10, 20 wt % 의 필름에서 mRNA 발현이 높게 나타남을 확인하였다.
- SEM 관찰 다양한 비율의 케라틴ELGA 필름을 지름 1.5 cm로 잘라 세포 배양용 24-웰에 실리콘 튜브로 고정시켜 70% 알코올로 멸균하였다. 여기에 SC를 각각의 필름에 3.
- SEM 관찰 케라틴 함량에 따른 각 필름 표면에서 SC의 부착과 형태에 케라틴이 끼치는 영향을 알아보기 위하여 SEM분석을 실시하였으며 이를 Figure 4에 나타내었다. 10, 20%가 함유된 필름에 부착된 SC에서 신경돌기가 잘 뻗어 나온 것을 확인할 수 있었으며 PLGA 필름과 케라틴 50 wt%가 함유된 필름에서는 신경돌기의 뻗음이 매우 미약하고 둥근형태의 세포만 관찰되었다.
- 5% 글루타르알데하이드(Gibco)로 24시간 고정한 후 일련의 알코올을 이용하여 탈수 및 동결 건조하였다. 각 시료를 잘라 샘플폴더에 고정시킨 후 플라즈마 스퍼터 (Emscope, Model SC500K, UK) 를 이용하여 200 |im 의 두께로 백금코팅하고 주사전자현미경 (Hitachi Co., Model S- 2250 N, Japan)을 이용하여 케라틴 함량에 따른 케라탄/PLGA 필름에서의 세포의 부착 거동 및 세포 형태를 관찰하였다.
- 57 err?) 의 농도로 파종한 다음 배양액을 공급하여주고 37 °C의 세포 배양기에서 1, 3, 그리고 5일 동안 세포를 배양하였다. 각각의 날짜마다 배양액을 제거하고 PBS로 세척한 다음 트립신 처리를 하고 원심분리 후 배양액 1 ml을 넣어 세포를 계수하여 케라틴 함량에 따른 세포 성장차이를 비교하였다.
- 각 시료에서 무작위로 영역을 선택하여 3회 분석을 실시한 후 평균값을 취하여 사용하였다. 또한 시료의 시간별 물 흡수정도를 측정하기 위해 증류수를 떨어뜨리고 5분 및 10분 간격으로 접촉각을 측정하여 물 흡수성 정도를 확인하였다.
- 5 cm로 잘라 세포배양용 24- 웰플레이트에 실리콘몰드로 고정시켜 70% 알코올로 멸균하였다 그리1X105 celV필름농도로 세포를 파종하여 1, 3, 그리고 5일간 배양하여 각 날짜에 RT-PCR을 실시하였다. 세포 배양 후 각 TRIzoKlnvitrogen™, USA) 을 처리하여 세포로부터 mRNA 를 분리하고 Super Script™ H RT (Invitrogen™) 를 사용하여 cDNA 로 전사하였다. 이렇게 전사시킨 cDNA는 2유니트 Taq DNA 폴리머라제를 포함한 PCR 마스터키트(Roche, Germany) 를 이용하여 각 프라이머 (GAPH, NF, S100)를 신장시켜 원하는 DNA의 특정 영역을 증폭시켰다 PCR 수행 후 증폭된 DNA를 1.
- 5 cm로 잘라 세포 배양용 24-웰에 실리콘 튜브로 고정시켜 70% 알코올로 멸균하였다. 여기에 SC를 각각의 필름에 3.0 X104 세포수 필름 (필름의면적약 1.54 CM) 의 농도로 파종하고 1, 3, 그리고 5일간 배양하였다 이 후 배양액을 제거하고 PBS로 세척한 다음 2.5% 글루타르알데하이드(Gibco)로 24시간 고정한 후 일련의 알코올을 이용하여 탈수 및 동결 건조하였다. 각 시료를 잘라 샘플폴더에 고정시킨 후 플라즈마 스퍼터 (Emscope, Model SC500K, UK) 를 이용하여 200 |im 의 두께로 백금코팅하고 주사전자현미경 (Hitachi Co.
- 05% 콜라게나아제를 넣고 인큐베이터에서 6~1시간 동안 방치한 후 파스퇴르 피펫을 이용해서 신경의 기질을 제거하고 단일세포로 분리하였다. 이 과정에서 얻어낸 SC를 새로운 용기에 옮긴 후 섬유아세포의 수를 감소시키는 역할을 하는 포스콜린 (Sigma Chem. Co., USA) 을 배양액에 2ML의 농도로 첨가하여 SC의 순도를 높였으며, 성장영양인자인 소뇌하수체 추출물(Gibe) 을 20/mL의 농도로 첨가하여 SC의 증식을 높였다.
- 3일에 한 번씩 배양액을 교체하고 7일에 한 번씩 새로운 용기로 신경조직을 옮겨주면서 배양하였다. 이러한 방법으로 섬유아세포가 일차적으로 제거되면 신경조직을 걷어 1.25 U/mL 디스파제(Boehringer Mannheim, Mannheim, Germany) 와 0.05% 콜라게나아제를 넣고 인큐베이터에서 6~1시간 동안 방치한 후 파스퇴르 피펫을 이용해서 신경의 기질을 제거하고 단일세포로 분리하였다. 이 과정에서 얻어낸 SC를 새로운 용기에 옮긴 후 섬유아세포의 수를 감소시키는 역할을 하는 포스콜린 (Sigma Chem.
- 세포 배양 후 각 TRIzoKlnvitrogen™, USA) 을 처리하여 세포로부터 mRNA 를 분리하고 Super Script™ H RT (Invitrogen™) 를 사용하여 cDNA 로 전사하였다. 이렇게 전사시킨 cDNA는 2유니트 Taq DNA 폴리머라제를 포함한 PCR 마스터키트(Roche, Germany) 를 이용하여 각 프라이머 (GAPH, NF, S100)를 신장시켜 원하는 DNA의 특정 영역을 증폭시켰다 PCR 수행 후 증폭된 DNA를 1.2% (w/v) 아가 로스 겔에 넣어 100V에서 25분 동안 전기영동을 한 후, 상대적 발현을 SYBR 녹색형광(SYBRTM Green I Nucleic Acid Gel Stain, Cam- brex, U.K) 에 의해 시각화하였으며 자외선 투과조사기 (Vilber Lourmat ETX-20.M, France) 에 위치하여 관찰하였다.% 프라이머는 제노텍(Korea)으로부터 구입하였으며 프라이머의 염기서열은 Table 1에 나타내었다
- RT-PCR. 케라탄/PLGA 필름에서 슈반세포의 표현형 유지를 확인하기 위해 역전사 중합효소연쇄반응(RT-PCR)을 수행하였다. 케라틴이 다양하게 함유된 케라틴/PLGA 필름에 파종된 슈반세포의 mRNA를 확인하고자 케라탄/PLGA 필름을 지름 1.
- 케라탄/PLGA 필름에서의 SC배양 및 증식 앞서 분리한 SC를 1~2 회 계대 배양하여 세포를 대량배양한 후 트립신 처리를 하였다. 케라틴을 함유하지 않은 PLGA 필름을 대조군으로 하고 케라틴을 힘량별로 함유한 케라틴/ LGA 필름에 SC를 각각 3 세포수/필름(필름의 면적; 약 12.
- 케라틴/PLGA 필름에서 슈반세포의 증식거동 다양한 함유량의 케라틴 필름 표면에서 SC의 증식 정도를 1, 3, 그리고 5일 동안 세포 계수를 통하여 확인하였고 그 결과를 Figure 3에 나타내었다 증식률 (%) = [ (날짜별 세포 수 1 day의 세포 수)/1 day의 세포 수] x 100 식에 대입함으로써 세포 증식률을 측정하였다. 세포 수 측정에서 케라틴 50%가 함유된 케라탄/PLGA 필름이 다른 실험군에 비해 1일째에 확연히 높은 세포 수를 보였고, 이후 모든 측정 날짜에서디른 실험군 보다 세포수가 높게 나타났다.
- 케라틴/PLGA 필름의 표면 분석 케라틴 LGA 필름의 케라틴 힘량별 친수성을 확인하기 위해 증류수를 떨어뜨려 접촉각을 측정하였다. 물 접촉각 측정기 (Tantec™ CAM-PLUS micro, USA)를 이용하여 각각의 필름에 5 의 증류수를 떨어뜨려 시료의 표면과 물방울이 이루는 각도를 측정하였다* 일반적으로 시료와 물방울이 이루는 각도가클수록 소수성을 띠며 각도가 작을수록 친수성을 나타낸다.
- 케라틴을 함유하지 않은 PLGA 필름을 대조군으로 하고 케라틴을 힘량별로 함유한 케라틴/ LGA 필름에 SC를 각각 3 세포수/필름(필름의 면적; 약 12.57 err?) 의 농도로 파종한 다음 배양액을 공급하여주고 37 °C의 세포 배양기에서 1, 3, 그리고 5일 동안 세포를 배양하였다. 각각의 날짜마다 배양액을 제거하고 PBS로 세척한 다음 트립신 처리를 하고 원심분리 후 배양액 1 ml을 넣어 세포를 계수하여 케라틴 함량에 따른 세포 성장차이를 비교하였다.
- 케라탄/PLGA 필름에서 슈반세포의 표현형 유지를 확인하기 위해 역전사 중합효소연쇄반응(RT-PCR)을 수행하였다. 케라틴이 다양하게 함유된 케라틴/PLGA 필름에 파종된 슈반세포의 mRNA를 확인하고자 케라탄/PLGA 필름을 지름 1.5 cm로 잘라 세포배양용 24- 웰플레이트에 실리콘몰드로 고정시켜 70% 알코올로 멸균하였다 그리1X105 celV필름농도로 세포를 파종하여 1, 3, 그리고 5일간 배양하여 각 날짜에 RT-PCR을 실시하였다. 세포 배양 후 각 TRIzoKlnvitrogen™, USA) 을 처리하여 세포로부터 mRNA 를 분리하고 Super Script™ H RT (Invitrogen™) 를 사용하여 cDNA 로 전사하였다.
- 유전자 발현. 케라틴이 함유된 필름이 SC의 표현형 유지에 미치는 영향을 mRNA 관점에서 확인하였다. SC 배양 후 1, 3, 그리고 5 일째에 RT-PCR을 통해 신경 세포에서 특이적으로 발현하는 단백질인 NF와 S-100의 mRNA 발현 정도를 확인하였고 이를 Figures 5 및 6으로 나타내었다.
대상 데이터
- M, France) 에 위치하여 관찰하였다.% 프라이머는 제노텍(Korea)으로부터 구입하였으며 프라이머의 염기서열은 Table 1에 나타내었다
- PLGA(락타이드/글라이콜라이드 몰비 75/25, Resomer® RG 756, Boehringer Ingelheim Chem. Co. Ltd., Germany)는 평균분자량이 90000 g/mole인 것을 사용하였다. 메틸렌클로라이드(MC, Tedia Co.
- , USA) 및 이외의 모든 유기용매는 HPLC 등급을 사용하였다. 세포 배양액으로는 Dulbecco's Modified Essential Media (DMEM) 및 우태아혈청 (FBS), 페니실린-스트렙토마이신 (PS) 를 Gibco BRL.0JSA) 에서 구입하여 사용하였다
- 시약 및 재료 케라틴은 인간 머리에서 유래된 것으로 미국의 Wake Forest 의대(Wake Forest University School of Medicine, Winston-Salem, USA) 에서 제공 받았다. PLGA(락타이드/글라이콜라이드 몰비 75/25, Resomer® RG 756, Boehringer Ingelheim Chem.
- 케라틴을 함유한 PLGA 필름제조. PLGA 0.
데이터처리
- 물 접촉각 측정기 (Tantec™ CAM-PLUS micro, USA)를 이용하여 각각의 필름에 5 의 증류수를 떨어뜨려 시료의 표면과 물방울이 이루는 각도를 측정하였다* 일반적으로 시료와 물방울이 이루는 각도가클수록 소수성을 띠며 각도가 작을수록 친수성을 나타낸다. 각 시료에서 무작위로 영역을 선택하여 3회 분석을 실시한 후 평균값을 취하여 사용하였다. 또한 시료의 시간별 물 흡수정도를 측정하기 위해 증류수를 떨어뜨리고 5분 및 10분 간격으로 접촉각을 측정하여 물 흡수성 정도를 확인하였다.
이론/모형
- SC의 분리 및 배야 SC의 배양법 중 손쉽고 안전하게 순수한 세포 분리가 가능한 Morrissey의 방법을 이용하였다. 먼저 Fischer 쥐의 대퇴부에서 좌골신경을 분리하여 PBS로 여러 번 세척하고 상피를 벗겨낸 후 약 1 mm로 잘게 잘라 6 웰 프레이트에 옮겨주었다.
성능/효과
- 이를 Figure 4에 나타내었다. 10, 20%가 함유된 필름에 부착된 SC에서 신경돌기가 잘 뻗어 나온 것을 확인할 수 있었으며 PLGA 필름과 케라틴 50 wt%가 함유된 필름에서는 신경돌기의 뻗음이 매우 미약하고 둥근형태의 세포만 관찰되었다. SEM을 통하여 케라틴이 세포의 부착형태에 영향을 끼침을 확인할 수 있었는데 이는 케라틴에 포함되어 있는 세포의 이동을 조절하는 미량의 분자와 세포의 부착, 지가 집결을 조절하는 많은 양의 단백질 기질이 SC/] 영향을 준 결과라 사료된다.
- SC 배양 후 1, 3, 그리고 5 일째에 RT-PCR을 통해 신경 세포에서 특이적으로 발현하는 단백질인 NF와 S-100의 mRNA 발현 정도를 확인하였고 이를 Figures 5 및 6으로 나타내었다. 1일째 모든 실험군에서 mRNA 발현은 큰 차이를 보이지 않았지만 3, 5일 째에서 케라틴 함량 10, 20 wt % 의 필름에서 mRNA 발현이 높게 나타남을 확인하였다. 이에 반해 0,50 wt%에서는 mRNA 발현정도가 시간이 지나면서 낮아짐을 보였다 RT-PCR을 통하여 케라틴 10, 20 wt%가 함유된 필름과 PLGA 필름 및 케라틴 50 wt% 필름을 비교 분석한 결과 10, 20 wt%의 케라틴을 첨가하면 케라틴 안에 포함되어 있는 세포의 행동을 조절하는 미량의 신호 분자가 SC의 표현형 유지에 도움을 주는 것으로 사료된다
- 그러나, 증식률 결고를 통하여 케라틴 10%와 20%가 함유된 필름에서는 5일 동안 지속적으로 세포의 증식률이 증가함을 확인한 반면 50%가 함유된 필름에서는 3일 이후로 증식률이 크게 증가하지 않음을 확인하였다. 결과적으로 케라탄을 함유한 케라탄/PUGA 필름은 PLGA 필름과 비교 시 높은 세포부착도와 지속적인 세포 증식률을 확인할 수 있었다
- 그러나, 50 wt%가 함유된 케라탄 LGA 필름에서 3일 이후로 세포 증식률이 감소하였고 세포형태와 신경세포 단백질 마커의 발현 정도에서도 세포의 표현형 유지가 미약함을 확인하였다. 그러나 케라틴 10, 20 wt%가 함유된 케라틴 LGA 필름에서는 지속적인 세포 증식률과 신경세포의 뚜렷한 형태를 보였으며, NF, S-100 의 높은 mRNA 발현을 확인할 수 있었다. 이러한 결과를 토대로 케라틴 10, 20 wt%가 함유된 케라틴/MGA 필름은 SC 성장과 표현형 유지에 긍정적인 영향을 미침을 확인하였다.
- 이것은 세포의 부착 및 퍼짐에 좋은 결과를 예상할 수 있었고 세포 계수와 SEM 관찰을 통하여 그 결과를 확인할 수 있었다. 그러나, 50 wt%가 함유된 케라탄 LGA 필름에서 3일 이후로 세포 증식률이 감소하였고 세포형태와 신경세포 단백질 마커의 발현 정도에서도 세포의 표현형 유지가 미약함을 확인하였다. 그러나 케라틴 10, 20 wt%가 함유된 케라틴 LGA 필름에서는 지속적인 세포 증식률과 신경세포의 뚜렷한 형태를 보였으며, NF, S-100 의 높은 mRNA 발현을 확인할 수 있었다.
- 세포 수 측정에서 케라틴 50%가 함유된 케라탄/PLGA 필름이 다른 실험군에 비해 1일째에 확연히 높은 세포 수를 보였고, 이후 모든 측정 날짜에서디른 실험군 보다 세포수가 높게 나타났다. 그러나, 증식률 결고를 통하여 케라틴 10%와 20%가 함유된 필름에서는 5일 동안 지속적으로 세포의 증식률이 증가함을 확인한 반면 50%가 함유된 필름에서는 3일 이후로 증식률이 크게 증가하지 않음을 확인하였다. 결과적으로 케라탄을 함유한 케라탄/PUGA 필름은 PLGA 필름과 비교 시 높은 세포부착도와 지속적인 세포 증식률을 확인할 수 있었다
- 대입함으로써 세포 증식률을 측정하였다. 세포 수 측정에서 케라틴 50%가 함유된 케라탄/PLGA 필름이 다른 실험군에 비해 1일째에 확연히 높은 세포 수를 보였고, 이후 모든 측정 날짜에서디른 실험군 보다 세포수가 높게 나타났다. 그러나, 증식률 결고를 통하여 케라틴 10%와 20%가 함유된 필름에서는 5일 동안 지속적으로 세포의 증식률이 증가함을 확인한 반면 50%가 함유된 필름에서는 3일 이후로 증식률이 크게 증가하지 않음을 확인하였다.
- 그러나 케라틴 10, 20 wt%가 함유된 케라틴 LGA 필름에서는 지속적인 세포 증식률과 신경세포의 뚜렷한 형태를 보였으며, NF, S-100 의 높은 mRNA 발현을 확인할 수 있었다. 이러한 결과를 토대로 케라틴 10, 20 wt%가 함유된 케라틴/MGA 필름은 SC 성장과 표현형 유지에 긍정적인 영향을 미침을 확인하였다. 현재 본 연구팀에서는 케라틴 0, 20 그리고 50 wt%가 함유된 다양한 함유량의 3차원 케라탄/PLGA 지지체 상에서 케라틴이 신경세포의 성장거동 및 표현형 유지에 미치는 영향과 골수간엽줄기세포의 신경세포화로의 분화에 미치는 영향에 관한 연구가 진행 중에 있다.
- SEM을 통하여 케라틴이 세포의 부착형태에 영향을 끼침을 확인할 수 있었는데 이는 케라틴에 포함되어 있는 세포의 이동을 조절하는 미량의 분자와 세포의 부착, 지가 집결을 조절하는 많은 양의 단백질 기질이 SC/] 영향을 준 결과라 사료된다. 이로써 케라틴을 10, 20 wt%를 함유한 필름은 SC의 생존 환경에 도움을 주며, SC의 부착을 유도하여 세포의 이동 및 활발한 증식과 돌기의 뻗음 등, 본연의 형태를 유지하는데 도움을 주는 것으로 사료되며 과량의 함량(50 wt%) 은 세포부착에는 도움을 주나 SC의 형태유지에는 부적절한 영향을 주는 것으로 사료된다.
- 1일째 모든 실험군에서 mRNA 발현은 큰 차이를 보이지 않았지만 3, 5일 째에서 케라틴 함량 10, 20 wt % 의 필름에서 mRNA 발현이 높게 나타남을 확인하였다. 이에 반해 0,50 wt%에서는 mRNA 발현정도가 시간이 지나면서 낮아짐을 보였다 RT-PCR을 통하여 케라틴 10, 20 wt%가 함유된 필름과 PLGA 필름 및 케라틴 50 wt% 필름을 비교 분석한 결과 10, 20 wt%의 케라틴을 첨가하면 케라틴 안에 포함되어 있는 세포의 행동을 조절하는 미량의 신호 분자가 SC의 표현형 유지에 도움을 주는 것으로 사료된다
- 함유량을 찾고자 하였다. 접촉각 측정 결과 PLGA 필름과 비교하여 케라틴 함유량이 증가할수록 낮은 접촉각을 보였으며 초기접촉각 측정에서 20과 50% 케라탄 LGA 필름이 다른 필름에 비하여 작은 접촉각을 보였다. 이것은 세포의 부착 및 퍼짐에 좋은 결과를 예상할 수 있었고 세포 계수와 SEM 관찰을 통하여 그 결과를 확인할 수 있었다.
- PLGA 용액의 부피는 일정하게 고정하고 케라틴의 함량을 다르게 하였다. 제조된 각각의 케라틴/PLGA 필름은 갈색의 원형의 형태를 나타냈으며 케라틴의 함량이 높을수록 진갈색을 나타내었다. 표면은 덮개를 씌워 MC의 증발을 적당히 조절하였으며 함량5] 높을수록 거칠어지는 경향을 나타냈으며 유리면에 접촉한 부분은 균일하고 매끄러웠다.
- 시료와 물방울:이 이루는 각도가 작을수록 친수성을 나타내며 평가결과는 Figure 2에 나타내었다. 측정 결과 케라틴 함량이 증가할수록 접촉각이 작고 물방울의 펴짐이 좋았으며 초기접촉각측정에서 20과 50% 케라틴伯LGA 필름이 다른 필름에 비하여 작은 접촉각을 보였다. 이러한 결과는 글루탐산, 알기닌, 시스틴 등의 친수성 아미노산으로 구성되어 있는 케라틴 자체가 PLGA와 혼합되어 필름의 친수성을 증가시킨 것이라 사료된다.
후속연구
- 이러한 결과를 토대로 케라틴 10, 20 wt%가 함유된 케라틴/MGA 필름은 SC 성장과 표현형 유지에 긍정적인 영향을 미침을 확인하였다. 현재 본 연구팀에서는 케라틴 0, 20 그리고 50 wt%가 함유된 다양한 함유량의 3차원 케라탄/PLGA 지지체 상에서 케라틴이 신경세포의 성장거동 및 표현형 유지에 미치는 영향과 골수간엽줄기세포의 신경세포화로의 분화에 미치는 영향에 관한 연구가 진행 중에 있다.
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