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문제 정의
- 이에 本 實驗에서는 육군자탕가감방 에탄올 추출물이 高脂 肪食餌로 유발된 흰쥐에서 肥滿 및 高脂血證 抑制 효과를 얻었기에 보고하는 바이다.
- 또한 金")은 고지혈증 환자의 혈중지질과 항산화 효소체계에 미치는 영향硏究, 朴功은 식이성 고콜레스테롤 혈중 및 CCI4 독성에 미치는 영향을 李는 혈청 성분에 미치는 영향, 李列는 동맥경화성 병변에 미치는 영향에 관한 硏究, 李 등21)은 초기진단 고지혈증 환자의 식습관 조사와 양파가루 섭취가 혈중지질에 미치는 영향을, 남 등끄)은 양파의 알코올 추출물이 고콜레스테롤혈증 환자의 지질 성상에 미치는 영향을 통하여 양파의 콜레스테롤 억제효능을 입증하였으며, 裴 꺼는 "다이어트 샐러드와 소스만들기 에서 양배추 다이어트에 대하여 논하였다. 이에 著者는 肥滿을 치료하기 위하여 上記 處 方과 食品을 合方하여 더욱 우수한 효과를 얻을 수 있을 것으로 생각하였다.
- 이에 著者는 肥滿의 원인을 濕과 熱의 實證으로 판단하여 치료하는 太陰調胃湯을 根幹으로 한 硏究와 달리 氣虛證을 치료하면서 利水作用을 원활하게 하는 肥滿治療를 위하여 上記 處方 및 食品의 合方과 加減을 通해서 더욱 우수한 효과를 얻을 수 있을 것으로 생각하였다.
제안 방법
- 본 硏究에 활용된 六君子湯加減方의 구성은 六君子湯과 五 苓散을 合方과 加減한 것으로 六君子湯은 健脾養胃하는 四君子 湯에 燥濕化痰하는 二陳湯을 合方한 方劑로© 『醫學正傳』에 "治痰挾氣虛發食虎"7)이라 수록된 이후 許&는 氣虛痰盛에 汪9)은 氣虛有痰에 사용하였고, 「景岳全書』에서는 "人多氣虛之證 然 肥人多濕多滯故氣道多有不利若果痰氣壅滯, …(中略)…, 宜四君 六君.*1)이라 하여 氣虛多濕多滯한 肥人들의 治方으로 六君子湯 을 사용해야 한다.
- - 간 조직중 지질 함량측정 : F이ch와 마anley의 방법을 이용하여 중성지방과 콜레스테롤 측정용 효소시약으토 유화제토서 0.5% triton X-100과 3 mM sodium cholate를 혼합하여 간 조직의 지질함량을 측정하였다.
- - 체중 및 지방 조직의 무게 측정 : 체중 변화는 실험 개시일로부터 1주일마다 측정하였으며, 지방 조직의 무게는 복강 및 고환 주위의 지방을 채취하여 산출하였다.
- 사용하여 실험하였다. 4℃에서 효소시약(cholesterol esterase 20.5 U/ /, cholesterol oxidase 10.7 U/ sodium hydroxide 1.81 g//함유)을 효소시약 용해액 (potassium phosphate monobasic 13.6g/ 2, phenol 1.88 g/ 함유)에 용해한 용액에 시료 20 에 조제한 효소시액 3.0 을 첨가한 후 37℃ 에서 5분간 incubation하여 시약 blank틀 대조군으로 정하고 파장 500 에서 흡광도를 측정하였다. 표준곡선에 준해 혈중 함량은 ing/로 표시하였다.
- 사용하여 실험하였다. 4℃에서 효소시약(lipoprotein lipase 10800 U, glycerol kinase 5.4 U, peroxidase 135000 U, L-a -glycero phosphooxidase 160 U 함유)을 효소시약 용해액 [N, N-bis(2-hydroxyethyl)-2-aminom어:hane sulfonic acid 0.427 g/함유 용해한 용액에 시료 20 에 조제한 효소시액 3.0 을 첨가한 후 37℃에서 10 분간 incubation하여 시약 blank를 대조군으로 정하고 파장 500 nm 에서 흡광도를 측정하였다. 표준 곡선에 준해 혈중 함량을 표시하였다.
- Aebi의 방법에 준하여 50 mM potassium phosphate buffer(pH 7.0)중에 기질인 10 mM H2O2의 환원되는 정도를 파장 240 에서 흡광도의 변화를 읽고 분자흡광계수 0.041 mM-lcm-l을 이용하여 활성도를 산정하였다. 효소 활성의 단위는 1분당 1 mg protein이 분해하는 hydrogen peroxide의 양을 u mole로 표시하였다.
- Oyan&gui의 방법에 준하여 Cytochrome c, 2 μM xanthine sodium, 50 mM sodium phosphate buffer의 기질액에 효소액을 넣고 안정화 시킨 후 xanthine oxidase 50 를 넣고 흡광도를 사용하여 550 nm에서 2분간의 흡광도를 측정하였다. Xanthine/ xanthine oxidase반응으로 생성된 superoxide anion에 의해 cytochrome c가 환원되는 것을 측정하는데, SOD 에 의해 superoxide anion의 양이 감소하여 cytochrome c의 변화 속도를 현상을 이용하여 SOD활성을 측정하였다.
- Pagila와 Valentine의 방법에 준해 hydrogen peroxide, glutathione 및 NADPH가 함유된 0.1 mM Tris buffer(pH 7.2) 중에 효소액을 가하여 파장 340 에서 흡광도를 측정하고 표준 곡선에 준하여 활성도를 산정하였다. 효소 활성의 단위는 1분간 1 uM NADPH를 산화시키는 효소의 양으로 정의하였다.
- 효소의 활성도는 SOD의 U/g protein으로 표시하였다. SOD의 1 Unit는 50% 억제되는 adrenochrome의 생성율로서 산출하였다.
- 고지방식 시작후 6주째에 Wout등의 방법에 따라 poloxamer-407(300 ㎎/㎏)을 ice bath에서 생리식염수에 용해하여 생쥐의 복강 내에 투여하고 24시간 후에 치사하였다. Triton WR-1339 투여 유발 고지혈증 흰쥐에 미치는 영향은 Kusama등의 방법에 준하여 Triton WR-1339 투여 16시간 전부터 절식시킨 후 Triton WR-1339 200 ㎎/㎏틀 꼬리정맥에 주사하여 고지혈증을 유발시킨 후 18시간 후에 CO2 gas로 마취하여 채혈하고 고지혈증 관련 생화학지표를 측정하였다.
- Xanthine/ xanthine oxidase반응으로 생성된 superoxide anion에 의해 cytochrome c가 환원되는 것을 측정하는데, SOD 에 의해 superoxide anion의 양이 감소하여 cytochrome c의 변화 속도를 현상을 이용하여 SOD활성을 측정하였다. Cytochrome c의 환원을 50% 억제하는 양을 SOD의 1 unit로 정의하였다.
- 0 를 가하여 혼합하.고 10% phosphotunstic acid 0.5 를 가하여 실온에서 5분간 방치한 후 원심분리 하여 침전물인 혈청 단백질만 취해서 다시 1/12 N H2SO4 2.0 와 10% phosphotungstic acid 0.3 를 첨가하여 원심분리 하였다. 침전물만을 취하여 증류수 4.
- 고지방식 시료를 투입한지 6주후 실험동물에 sodium phenobarbital 200 ㎎/㎏ 을 복강 주사하여 마취시킨 후 bleeding time을 측정하였다. 측정 후 C6로 가볍게 마취시켜 복부 대동맥으로부터 혈액을 채취하였고, 채취한 혈액은 30분간 방치한 후 3, 000 rpm에서 10분간 원심 분리하여 혈청을 분리하여지질, lipid peroxide, hydroxyl radical 함량 및 superoxide dismutase 활성 측정에 사용하였다.
- 동물 병태 모델을 위해 poloxamer-40754 WR-1339(TWR)을이용하였는데 poloxamer-407은 계면활성제의 하나로 간에서 cholesterol 을 합성하는데 가장 중요한 효소 중의 하나인 HMG-CoA reductase의 활성을 증진시키며 순환하고 있는 혈중 triyceride의 가수분해에 관여 하는 효소인 lipoprotein lipase를 강력히 억제함으로써 고지 혈이나 고콜레스테롤증을 유발시키고, WR-1339는 세포의 lipase활성을 억제하여 혈액 내 triglyceride와 LDL 을 증가시키고 high molecular apo B, free Z2 리고 ester-bound cholesterol, phospolipid, fatty acid의 농도를 증가시키며, 또한 세포 내 lipase활성 억제에도 관여하여, 세포 내 triglyceride 의 축적을 증가시킨다. Poloxamer-407과 WR-1339(TWR)을 처리한 결과 콜레스테롤과 triyceride의 양은 상당수 증가 하였지만 육군자탕가감방 투여군에서는 고지혈증 유발 시점 전에 처리함에도 불구하고, triglyceride의 경우에는 증가량이 6%, 16% 가량 감소하였고, cholesterol의 경우에도 증가량이 육군자탕가감방의 농도 의존적으로 감소하는 것을 알 수 있었다(Table 3, 4).
- 또한 간 조직 내의 항산화 효소인 SOD 외에 GSH-Px 및 catalase의 activity를 측정한 결과 실험군에서 농도 의존적으로 유의성 있는 증가를 나타내었다(Table 13). 또한 육군자탕가감방이 식이성 동맥경화를 유발한 동물 모델에서 간 조직의 지질 및 '간백질 산화를 억제하는지 알아보기 위하여 TBARS(liobarbituric acid reactive substance) 함량과 카르보닐함량을 측정하였다. TBARS 는 지질의 산화로 생성된 malondialdehyde(MDA)7} 그thiobarbi-turic acid(TBA)와 반응하여 생성된 물질로 과산화지질의 정도를 측정하는 지표이고, carbonyl기는 단백질이 활성산소와 결합 하여 생성되는 산물이며 이를 단백질 산화의 지표로 사용하였다 단백질 카르보닐법은 지질과산화보다 예민한 방법으로 지적되고 있는데, 이는 지질이 산화되면 생성되는 유리기들이 생체내의 단백질과 반응하여 이들을 파괴시킴으로서 단백질 카르보닐 화합물이 생성되고, 이러한 단백질의 파괴는 지질 산화생성물인 hydroperoxide나 malondialdehyde보다 먼저 일어나며, 산화된 단백질이 비교적 안정하므로 측정이 용이하기 때문이다 그 결과 단백질 카르보닐 함량 및 TBARS는 육군자탕가감방을 투여한 군이 대조군에 비해 증가가 억제되는 것을 알 수 있었다(Table 12).
- 또한 항산화 기능의 변화를 알아보기 위하여 SOD, GSH-Px 및 catalase의 활성도를 측정하여 육군자탕가감방의 고지혈증에 대한 전반적인 효능을 실험해보았다.
- 감소에 기인한다. 본 실험에서 고지방식으로 고지혈증이 유도된 rat의 간조직 및 혈중 total cholesterol, triglycelide의 변화를 측정 하였고, 혈중 HDL, LDL-cholesterol의 변동 및 육군자탕가감방 섭취시의 변화도 확인 하였다(Table 7, 8, 9). 그 결과 육군자탕가감방섭 취 군이 대 조군에 비하여 HDL-cholester 이 함량의 감소는 줄어드는 것을 알 수 있었고 cholesterol, phospholipid 및 triglyceride함량의 증가량은 약 2-3배 정도였지만 육군자탕가감방의 처리로 상당수 줄어든 것으로 확인되었다.
- 본 실험에서는 기존의 이러한 硏究결과를 바탕으로 육군자탕가감방으로 인한 혈청 지질의 변화 및 체중에 변화, 지방조직의 무게변화, 동맥경화 유발 물질인 phospholipid와 triglyceride 의 변화를 확인하였고, cholesterol운반체인 HDL(high density lipoprotein), LDL(low density lipoprotein)의 변화를 통하여 동맥경화의 위험도 변화, 간 조직내의 지질 및 지질산화물인 mak)ndialdehyde(MDA) 양 및 thiobarbituric acid(TBA)와의 반응에 의한 TBARS(thiobarbituric acid reactive substance)의 양을 측정하였다. 또한 항산화 기능의 변화를 알아보기 위하여 SOD, GSH-Px 및 catalase의 활성도를 측정하여 육군자탕가감방의 고지혈증에 대한 전반적인 효능을 실험해보았다.
- 사육을 거쳐 건강한 동물만을 실험에 이용하였다. 본시험의 사육환경은 온도 22+3℃, 상대습도 50±10%, 조명시간 12시간(07:00~19:00)로 설정된 실험동물 사육실(TECNIPLAST, Italy)에서 실시되었다. 사료는 실험동물용 고형사료(중앙실험동물, 서울)를 음수는 상수도를 자유 섭취시켰다.
- 실험동물의 비만 및 식이성 고지혈증의 유발은 beef tallow 를 첨가한 조제 시료를 6주간 사육하여 유발시켰다(Table 2).
- 1% sodium dodecyl sulfate 75 , 20% acetic acid 500 및 2차 증류수 25 를 넣어 혼합하였다. 여기에 다시 1.2% thiobarbituric acid 333 를 가하여 water bath(100℃)에서 30 분간 가열한 후 실온에서 냉각한 다음 700 X g에서 5분간 원심분리 하여 얻은 상층 액을 파장 532 에서 흡광도를 측정하여 표준곡선에 의하여 hydroxyl radical(nmole/mg protein)의 함량을 정량하였다.
- 육군자탕가감방 에탄올추출물(mYGJT)의 비만 및 고지혈증 억제 효과를 실험적으로 입증하기 위하여 고지방식으로 유도 된 고지혈증 흰쥐에 체중의 변화, 복강 및 부고환 주위 지방의 중량변화, 혈액학적 변화 및 간장조직 내 지질의 변화, 항산화 물질의 활성 변화 등을 평가하여 다음과 같은 결과를 얻었다.
- 육군자탕가감방을 생리식염수토 희석한 4% tween 80에 100, 200 ㎎/㎏ 용량으토 고지방식 시작과 동시에 4주간 각각의 실험군에 경구용 needle zonde을 사용하여 투여하였다. 고지방식 시작후 6주째에 Wout등의 방법에 따라 poloxamer-407(300 ㎎/㎏)을 ice bath에서 생리식염수에 용해하여 생쥐의 복강 내에 투여하고 24시간 후에 치사하였다.
- 이를 실온에서 냉각 후에 n-BuOH : Pyridine (15:1)을 첨가하여 15분간 원심분리하여 생성된 홍색의 n-BuOH : pyridine 층을 취하여 파장 532에서 그 홉광도를 측정하였다. 이때 표준물질로 l, L3, 3-tetramethoxypropane(TMPe 사용하였으며, 측정한 값은 표준 곡선에 대입시켜 malondialdehyde(MDA)의 양으로 환산하였다. 단백질 산화는 Oliver 등의 방법에 준하여 DNPH(2z4-dinitrophenyl hydrazine)# 이용하여 카르보닐 그룹의 함량을 측정하였다.
- 이 시료 액을 다시 105000 X g에서 60분간 원심분리하여 microsomal 분획을 얻었다. 이렇게 얻어진 homogenate 분획에서는 lipid peroxide 함량을 측정하였고, cytosol분획에서는 superoxide dismutase, catalase, glutathione peroxidase활성 측정의 효소원으로 사용하였다.
- 8% thiobarbituric acid를 첨가한 후 95℃에서 1시간 동안 반응시켰다. 이를 실온에서 냉각 후에 n-BuOH : Pyridine (15:1)을 첨가하여 15분간 원심분리하여 생성된 홍색의 n-BuOH : pyridine 층을 취하여 파장 532에서 그 홉광도를 측정하였다. 이때 표준물질로 l, L3, 3-tetramethoxypropane(TMPe 사용하였으며, 측정한 값은 표준 곡선에 대입시켜 malondialdehyde(MDA)의 양으로 환산하였다.
- time을 측정하였다. 측정 후 C6로 가볍게 마취시켜 복부 대동맥으로부터 혈액을 채취하였고, 채취한 혈액은 30분간 방치한 후 3, 000 rpm에서 10분간 원심 분리하여 혈청을 분리하여지질, lipid peroxide, hydroxyl radical 함량 및 superoxide dismutase 활성 측정에 사용하였다. 간 조직은 생리식염수로 관류 시켜 조직 내 혈액을 제거하고, 간 조직을 적출하여 생리식염수토 씻은 다음 여과지로 조직에 남아 있는 혈액 및 기타 이물질을 제거하고 간 조직을 1 g당 4배량의 0.
- 3 를 첨가하여 원심분리 하였다. 침전물만을 취하여 증류수 4.0 와 0.67% thiobarbituric acid와 acetic acid를 1:1로 혼합한 용액을 1.0 를 가하고 95℃에서 60분간 반응시켜 실온에서 냉각 후 n-BuOH을 5.0 틀 첨가하여 3000 rpm에서 15분간 원심분리한 후 생성된 홍색의 n-BuOH 을 취해 spectrofluorometer# 사용하여 (Ex : 515 nm, Em : 553 nm) 흡광도를 측정하였다. 표준 용액으로 tetraethoxypropane 0.
- 4), 10 mM NaN* 7 mM deoxyribose, 5 mM ferrous ammonium sulfate 및 증류수로서 3333 가 되도록 첨가하여 vortex에서 잘 혼합하여 37℃ 에서 15분간 정치하였다. 혈청 67 를 취하고 여기에 8.1% sodium dodecyl sulfate 75 , 20% acetic acid 500 및 2차 증류수 25 를 넣어 혼합하였다. 여기에 다시 1.
- Mirsa와 Fridovich의 방법에 따라 정량하였다. 혈청을 일정량 반응액 [1 mm /L adrenalin(pH 2), 50 mmol/L glycin(pH 10.2)]에 첨가하고 30에서 3분간 반응시킨 후 480 nm에서 생성되는 adrenochrome의 생성량을 측정하였다. 효소의 활성도는 SOD의 U/g protein으로 표시하였다.
대상 데이터
- 본 시험에 사용된 약재는 본디올 한의원 네트워크에서 사용하는 약재를 구입한 후 정선하여 사용하였으며, 농산물은 유기농 제품을 사용하였다. 육군자탕가감방의 처방 구성은 다음과 같다 (Table 1).
- 본 시험에 사용한 SPF 25 ± 3 g의 ICR계 웅성 생쥐 및 140 士 10 g의 Sprague Dawley(SD)계 흰쥐[(주) 효창사이언스로부터 4주령의 수컷을 구입한 후 1주일 간 검역과 순화 . 사육을 거쳐 건강한 동물만을 실험에 이용하였다.
- 본시험의 사육환경은 온도 22+3℃, 상대습도 50±10%, 조명시간 12시간(07:00~19:00)로 설정된 실험동물 사육실(TECNIPLAST, Italy)에서 실시되었다. 사료는 실험동물용 고형사료(중앙실험동물, 서울)를 음수는 상수도를 자유 섭취시켰다. 실험 시간 전 24시간 동안 물만 주고 절식하였다.
- 수컷을 구입한 후 1주일 간 검역과 순화 . 사육을 거쳐 건강한 동물만을 실험에 이용하였다. 본시험의 사육환경은 온도 22+3℃, 상대습도 50±10%, 조명시간 12시간(07:00~19:00)로 설정된 실험동물 사육실(TECNIPLAST, Italy)에서 실시되었다.
- 육군자탕가감방의 처방 구성은 다음과 같다 (Table 1). 시료는 육군자탕가감방 1056 g을 에탄올 4 [, 에 3일간 여과 및 추출하여 감압농축 후 동결건조를 하여 96.8 g(수율 =9.167%)의 분말을 얻었다.
데이터처리
- (n=6). Vaiues sharing the same superscript lettef are not significantly differert from each other(p<0.05) oy Durcan.s multiple range test.
- 단백질의 함량은 Lowry 등의 방법에 준하여 bovine serum albumin(Sima, Fr. V)을 기준으로 하여 측정하였다' 본 실험에서 얻어진 결과는 평균치土표준편차로 표시하였고, 통계적 유의성 검증은 Duncan's multiple range test로 그 유의성을 나타내었다
이론/모형
- Chen 등의 효소법에 의하여 조제된 kit(Iatron Chem. Co.)틀 사용하여 실험하였다. 4 ℃ 에서 효소시약(phospholipase 3.
- Kobatake 등의 방법에 따라 혈청 34, 8 에 0.54 M NaCl, 0.1 M potassium phosphate buffer(pH 7.4), 10 mM NaN* 7 mM deoxyribose, 5 mM ferrous ammonium sulfate 및 증류수로서 3333 가 되도록 첨가하여 vortex에서 잘 혼합하여 37℃ 에서 15분간 정치하였다. 혈청 67 를 취하고 여기에 8.
- Low density lipoprotein-cholesterol (LDL-C) 함량은 Fridewald 등의 방법에 따라 다음의 식에 의하여 산출하였다.
- McGowan 등의 방법에 준하여 조제된 kit(AM 157S-K, Asan)를 사용하여 실험하였다. 4℃에서 효소시약(lipoprotein lipase 10800 U, glycerol kinase 5.
- Mirsa와 Fridovich의 방법에 따라 정량하였다. 혈청을 일정량 반응액 [1 mm /L adrenalin(pH 2), 50 mmol/L glycin(pH 10.
- Noma등의 효소법에 의하여 조제된 kit(AM 203-K, Asan)를사용하여 실험하였다. 혈청 20 에 침전시약(dextran sulfate 0.
- Richmond 등의 효소법에 의하여 조제된 kit(AM 202-K, Asan)틀 사용하여 실험하였다. 4℃에서 효소시약(cholesterol esterase 20.
- Ya임 등의 방법에 따다라 혈청 20 에 1/12 N H2SO4 4.0 를 가하여 혼합하.고 10% phosphotunstic acid 0.
- 고지방식 시작후 6주째에 Wout등의 방법에 따라 poloxamer-407(300 ㎎/㎏)을 ice bath에서 생리식염수에 용해하여 생쥐의 복강 내에 투여하고 24시간 후에 치사하였다. Triton WR-1339 투여 유발 고지혈증 흰쥐에 미치는 영향은 Kusama등의 방법에 준하여 Triton WR-1339 투여 16시간 전부터 절식시킨 후 Triton WR-1339 200 ㎎/㎏틀 꼬리정맥에 주사하여 고지혈증을 유발시킨 후 18시간 후에 CO2 gas로 마취하여 채혈하고 고지혈증 관련 생화학지표를 측정하였다.
- 이때 표준물질로 l, L3, 3-tetramethoxypropane(TMPe 사용하였으며, 측정한 값은 표준 곡선에 대입시켜 malondialdehyde(MDA)의 양으로 환산하였다. 단백질 산화는 Oliver 등의 방법에 준하여 DNPH(2z4-dinitrophenyl hydrazine)# 이용하여 카르보닐 그룹의 함량을 측정하였다. 카르보닐 농도는 Livine등의 방법에 따라 370 nm에서 각 시료의 흡광도를 측정한 후 지방족 하이드라존 화합물의 평균분자흡광계수를 22,000으로 삼아 가르보닐 그룹의 몰수로 산정하였다.
- 단백질 산화는 Oliver 등의 방법에 준하여 DNPH(2z4-dinitrophenyl hydrazine)# 이용하여 카르보닐 그룹의 함량을 측정하였다. 카르보닐 농도는 Livine등의 방법에 따라 370 nm에서 각 시료의 흡광도를 측정한 후 지방족 하이드라존 화합물의 평균분자흡광계수를 22,000으로 삼아 가르보닐 그룹의 몰수로 산정하였다.
성능/효과
- 43 mg/g으로 감소하여, 육군자탕가감방 200 ㎎/㎏ 고용량 투여군에서만 유의성이 인정되었다. Epididymal fat에서도 정상군 에서는 7.31±0.44 nig/g 이었으나 대조군에서는 10.53±0.91 哩/g으로 유의하게 증가되었으며, 육군자탕가감방 100 ㎎/㎏ 및 200 ㎎/㎏ 투여군에서는 각각 9.86±0.43 mg/g, 9.61±0.46 mg/g으로 나타나 모두 대조군에 비해 유의한 억제 효과를 보였다.
- 7 mg/dt으로 대조군에 비해 유의하게 감소하였다. Phospholipid 변화에서는 정상군에 비하여 고지혈증을 유발한 대조군에서 증가하는 경향을 보였으며, 육군자탕가감방 200 ㎎/㎏ 고용량 투여군에서만 유의성 있는 감소를 보였다. 한편 triglyceride의 경우 phospholipid의 함량과 유사한 결과를 보였다.
- Poloxamer-407과 WR-1339(TWR)을 처리한 결과 콜레스테롤과 triyceride의 양은 상당수 증가 하였지만 육군자탕가감방 투여군에서는 고지혈증 유발 시점 전에 처리함에도 불구하고, triglyceride의 경우에는 증가량이 6%, 16% 가량 감소하였고, cholesterol의 경우에도 증가량이 육군자탕가감방의 농도 의존적으로 감소하는 것을 알 수 있었다(Table 3, 4). 이로써 육군자탕가감방은 고지혈증 상황이 아니더라도 섭취하면 고지혈증 발생을 일부 예방할 수 있다는 것을 예측할 수 있었다.
- 99 mg/으로 약 10배 이상 증가되었으며, 육군자탕가감방투여군은 대조군에 비해 현저히 감소되었다. T-Cholesterol활성에서는 정상군은 67.3±9.06 mg/dl 으로 대조군 810.5±81.68 mg/dl 으토 triglyceride함량 같이 증가하였으며, 반면 육군자탕가감방 투여군에서는 현저한 감소 효과를 보였다.
- Table 11에 제시된 바와 같이 혈중 hydroxyl radical 함량이 정상군은 2.77+0.25 nmole/mg protein인데 비하여 대조군은 5.48±0.19 nmole/rag protein으로 약 2배 증가되었으며, 육군자탕가감방 투여군은 대조군에 비해 hydroxyl radical생성이 현저히감소되었다, 혈중 superoxide dismutase활성에서는 대조군은 1.96+0.12 unit/mg protein으로 정상군 3.27±0.41 unit/mg protein 보다 억제된 반면, 육군자탕가감방 투여군에서는 고지혈증 유도 군에 비하여 현저한 증가 효과를 보였다.
- Table 4에 제시된 바와 같이 triyceride함량이 정상군은 98.5+17.56 mg/dl인데 비하여 조군은 77L3±53.97 mg/dl으로약 8배 이상 증가되었으며, 육군자탕가감방투여군은 대조군에 비해 현저히 감소되었다. T-Cholesterol활성에서는 정상군은 70.
- Table 5에 제시된 바와 같이 정상군의 체중 증가 속도에 비례하여 대조군에서는 고지방식 투여 후 2주부터 유의한 체중 증가를 보였으나, 육군자탕가감방을 100㎎/㎏과 200 ㎎/㎏ 의용량으로 투여한 실험군에서는 모두 고지방식 투여 3주 후부터 유의한 체중감소 효과를 보였다. 그러나 고지방식 투여 6주 후에는 정상군은 304.
- 본 실험에서 고지방식으로 고지혈증이 유도된 rat의 간조직 및 혈중 total cholesterol, triglycelide의 변화를 측정 하였고, 혈중 HDL, LDL-cholesterol의 변동 및 육군자탕가감방 섭취시의 변화도 확인 하였다(Table 7, 8, 9). 그 결과 육군자탕가감방섭 취 군이 대 조군에 비하여 HDL-cholester 이 함량의 감소는 줄어드는 것을 알 수 있었고 cholesterol, phospholipid 및 triglyceride함량의 증가량은 약 2-3배 정도였지만 육군자탕가감방의 처리로 상당수 줄어든 것으로 확인되었다. 이러한 결과는 혈중에서의 지질변동에 따른 결과로서, 육군자탕가감방이 조직의 지방함량, 조직 중 지방의 변동을 조절하는 효능에 기인한 것으로 여겨진다.
- 체중감소 효과를 보였다. 그러나 고지방식 투여 6주 후에는 정상군은 304.5±5.7 (응)이었으나, 대조군은 339.7±6.5 (g) 으로유의한 증가를 보였고, 육군자탕가감방 100 ㎎/㎏ 및 200 ㎎/㎏ 투여군에서는 각각 320.8±3.8 (g) 및 314.5±4.1 (g)으로 나타나 대조군에 비해 용량 의존적으로 유의한 억제 효과를 보였다.
- 또한 고지방식으로 6주간 비만을 유도하여 육군자탕가감방투여군의 체중을 측정 하였는데, 4주간육군자탕가감방 100 ㎎/㎏, 200 ㎎/㎏ 투여 군이 고지 방식 으로비만을 유도한 대조군에 비하여 체중 증가량이 각각 62%, 69% 가량 감소하는 것으로 나타났다(Table 5). 다음으로 체지방량의 변동을 알아보기 위해 본 실험에서는 복강 및 부고환 주위의 지방 조직의 총 함량 변화를 관찰하였고, 그 결과 복강 및 부고환 주위의 체지방량 함량이 육군자탕가감방 섭취시 현저히 감소되었음을 관찰할 수 있었다(Table 6).
- 이는 콜레스테롤로 인해 증가된 rat의 간 조직의 지질과산화를 육군자탕가감방의 항산화물질이 이를 억제한 것으로 사료된다. 또한 MDA의 함량도 육군자탕가감방의 농도 의존적으로 증가량이 감소하는 것을 알 수 있었다(Table 10). 하지만 MDA는 지질의 과산화 산물이나 지질 과산화에 비례하여 생산되는 물질이 아니므로 지질의 과산화 경향을 보는데 의의를 가질 수 있을 것이다.
- 수 있었다(Table 11). 또한 간 조직 내의 항산화 효소인 SOD 외에 GSH-Px 및 catalase의 activity를 측정한 결과 실험군에서 농도 의존적으로 유의성 있는 증가를 나타내었다(Table 13). 또한 육군자탕가감방이 식이성 동맥경화를 유발한 동물 모델에서 간 조직의 지질 및 '간백질 산화를 억제하는지 알아보기 위하여 TBARS(liobarbituric acid reactive substance) 함량과 카르보닐함량을 측정하였다.
- 이로써 육군자탕가감방은 고지혈증 상황이 아니더라도 섭취하면 고지혈증 발생을 일부 예방할 수 있다는 것을 예측할 수 있었다. 또한 고지방식으로 6주간 비만을 유도하여 육군자탕가감방투여군의 체중을 측정 하였는데, 4주간육군자탕가감방 100 ㎎/㎏, 200 ㎎/㎏ 투여 군이 고지 방식 으로비만을 유도한 대조군에 비하여 체중 증가량이 각각 62%, 69% 가량 감소하는 것으로 나타났다(Table 5). 다음으로 체지방량의 변동을 알아보기 위해 본 실험에서는 복강 및 부고환 주위의 지방 조직의 총 함량 변화를 관찰하였고, 그 결과 복강 및 부고환 주위의 체지방량 함량이 육군자탕가감방 섭취시 현저히 감소되었음을 관찰할 수 있었다(Table 6).
- 본 硏究에서 고지방식을 이용 고지혈증을 유발시킨 후 육군자탕가감방을 투여한 고지혈증 rat의 혈중 hydroxyl radical의 생성과 superoxide dismutase(SOD)의 활성을 측정하였던 바, 고지혈증의 유발로서 hydroxyl radical의 생성은 증가되던 것이 육군자탕가감방투여로 감소되었으며/ superoxide anion을 환원시키는 효소인 SOD의 활성은 감소하던 것이 오히려 증가되는 것을 알 수 있었다(Table 11). 또한 간 조직 내의 항산화 효소인 SOD 외에 GSH-Px 및 catalase의 activity를 측정한 결과 실험군에서 농도 의존적으로 유의성 있는 증가를 나타내었다(Table 13).
- 분화를 유도한 후 배양한 3T3 LI adipocyte에 육군자탕가감방을 투여한 결과, 지방체의 염색에서 농도의존적인 감소 효과를 확인할 수 있었으며(Fig. 1), Oil-Red O의 염색에 의한 지방체의발현에서도 농도의존적인 뚜렷한 억제 효과를 확인할 수 있었다 (Fig. 2).
- 감소시켰다. 육군자탕가감방은 혈청 내 total lipid, phospholipid, triglyceride, total cholesterol, LDL, AI(Atherosclerosis Index)는 유의성 있게 감소시켰으며, HDLe 거의 정상수준까지 증가시켰다. 육군자탕가감방은 간장 내 total lipid, triglyceride, cholesterole- 감소시켰다.
- Poloxamer-407과 WR-1339(TWR)을 처리한 결과 콜레스테롤과 triyceride의 양은 상당수 증가 하였지만 육군자탕가감방 투여군에서는 고지혈증 유발 시점 전에 처리함에도 불구하고, triglyceride의 경우에는 증가량이 6%, 16% 가량 감소하였고, cholesterol의 경우에도 증가량이 육군자탕가감방의 농도 의존적으로 감소하는 것을 알 수 있었다(Table 3, 4). 이로써 육군자탕가감방은 고지혈증 상황이 아니더라도 섭취하면 고지혈증 발생을 일부 예방할 수 있다는 것을 예측할 수 있었다. 또한 고지방식으로 6주간 비만을 유도하여 육군자탕가감방투여군의 체중을 측정 하였는데, 4주간육군자탕가감방 100 ㎎/㎏, 200 ㎎/㎏ 투여 군이 고지 방식 으로비만을 유도한 대조군에 비하여 체중 증가량이 각각 62%, 69% 가량 감소하는 것으로 나타났다(Table 5).
- 이상의 결과를 종합하면, 고지방식을 이용하여 비만을 유도한 흰 쥐에 육군자탕가감방을 투여한 경우 체지방과 관련된 혈액학적 지표와 간장 내의 지질 변화 등에서 농도 의존적으로 항비만과 항고지혈 효과가 유의하게 나타났는데, 여기에는 활성산소의 해독계 등도 유의성 있는 영향을 미쳤던 것으로 사료된다. 이로서 육군자탕가감방은 향후 비만과 관련된 질병의 치료에 유용하게 활용될 수 있을 것으로 기대되며, 이에 사용된 개별 약물에 대한 평가와 유전적 비만을 가진 병태모델을 통한 실험, 비만 조절인자에 대한 기전의 硏究, 사람을 대상으로 한 임상실험에서의 유의성 등에 대한 硏究가 계속 이어져야 할 것으로 기대된다.
- 67 MDA nmole/mg protein으로 나타나 정상군에 비하여 약 3배 정도 증가를 보였다. 이에 비해 육군자탕가감방 100, 200 ㎎/㎏ 투여군에서는 각각 30.7±3.19 MDA nmole/mg protein, 29.2±4.17 MDA nmole/mg protein으로 나타나 대조군에 비하여 간 조직의 지질과산화 함량이 현저히 억제된 결과를 보였다. 카르보닐 함량 조사를 통한 단백질 산화 정도 역시 지질 과산화 함량과 유사한 경향을 보였다.
- 32 U/mg protein으로 나타난 반면, 대조군은 정상군에 비하여 약 50% 정도 억제를 보였다. 이에 비해 육군자탕가감방 4주간 투여군에서는 대조군에 비하여 고지방 식이에 의하여 억제된 효소의 활성이 현저하게 회복되는 것을 관찰할 수 있었다. 이러한 결과는 glutathione peroxidase(GSH-Px) 및 catalse의 활성에서도 유사한 경향을 보였다.
후속연구
- 사료된다. 이로서 육군자탕가감방은 향후 비만과 관련된 질병의 치료에 유용하게 활용될 수 있을 것으로 기대되며, 이에 사용된 개별 약물에 대한 평가와 유전적 비만을 가진 병태모델을 통한 실험, 비만 조절인자에 대한 기전의 硏究, 사람을 대상으로 한 임상실험에서의 유의성 등에 대한 硏究가 계속 이어져야 할 것으로 기대된다.
- 이상의 결과로 보아 육군자탕가감방이 비만 및 고지혈증 유도 흰쥐에 대하여 고지혈증 유발 물질 의 감소 외에 항산화 작용을 통한 비만 및 고지혈증에 대한 유의적 억제 효과도 보임으로써 향후 이 분야에 대한 임상적 활용이 가능할 것으로 사료된다.
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