Objective : Yinjinchunggan-tang(YJCGT) is reported previously as having theraputic effects on hepatitis such as anti-implammatory, anti-apoptotic, anti-viral(HBV), etc. Though this prescription is not studied on its anti-fibrogenic effect, it is still expected to have the effect in the liver. Thus, ...
Objective : Yinjinchunggan-tang(YJCGT) is reported previously as having theraputic effects on hepatitis such as anti-implammatory, anti-apoptotic, anti-viral(HBV), etc. Though this prescription is not studied on its anti-fibrogenic effect, it is still expected to have the effect in the liver. Thus, this study was performed to investigate the anti-fibrogenic effect of YJCGT on thioacetamide(TAA)-induced liver fibrosis in rats. Method: Rat liver fibrosis was induced by intraperitoneal TAA injection(150mg/kg) 3 times a week for 5 weeks. After the YJCGT (YJCGT 1g/kg, YJCGT 2g/kg)-treatment, body weight, liver and spleen weights, liver function test, the complete blood count and the portal pressure were studied. In addition, gene expressions of ASMA, procollagen type Ia2, MMP2, TIMP1 and TIMP2, all of which are known to be associated with liver fibrosis, were analyzed by RT-PCR. After YJCGT (YJCGT 1g/kg, YJCGT 2g/kg) treatment, percentages of collagen in TAA-induced rat liver tissue were measured by image analyzer. Results : The body weight of the normal group increased more than that of the control and YJCGT-treated groups. The AST level of the YJCGT lg/kg-treated group significantly decreased compared to that of the control. The ALT and the GGT levels of the YJCGT 2g/kg-treated group significantly increased compared to those of the control. In the YJCGT-treated groups. WBC, RBC and Hgb elevated by TAA injection decreased but platelet count increased. In the YJCGT lg/kg-treated group, the portal pressure elevated by TAA injection significantly decreased. The significant decreases in the gene expressions of procollagen type Ia2, MMP2 and TIMP2 were observed in the YJCGT-treated groups. In histological findings. TAA injections caused severe liver fibrosis, but the YJCGT treatment significantly reduced the amounts of hepatic collagens. Conclusions: These results suggest that YJCGT has beneficial effects on the treatment of patients with liver cirrhosis as well as chronic hepatitis. Further study should be done to decide the optimal concentration of the YJCGT for the treatment of liver cirrhosis.
Objective : Yinjinchunggan-tang(YJCGT) is reported previously as having theraputic effects on hepatitis such as anti-implammatory, anti-apoptotic, anti-viral(HBV), etc. Though this prescription is not studied on its anti-fibrogenic effect, it is still expected to have the effect in the liver. Thus, this study was performed to investigate the anti-fibrogenic effect of YJCGT on thioacetamide(TAA)-induced liver fibrosis in rats. Method: Rat liver fibrosis was induced by intraperitoneal TAA injection(150mg/kg) 3 times a week for 5 weeks. After the YJCGT (YJCGT 1g/kg, YJCGT 2g/kg)-treatment, body weight, liver and spleen weights, liver function test, the complete blood count and the portal pressure were studied. In addition, gene expressions of ASMA, procollagen type Ia2, MMP2, TIMP1 and TIMP2, all of which are known to be associated with liver fibrosis, were analyzed by RT-PCR. After YJCGT (YJCGT 1g/kg, YJCGT 2g/kg) treatment, percentages of collagen in TAA-induced rat liver tissue were measured by image analyzer. Results : The body weight of the normal group increased more than that of the control and YJCGT-treated groups. The AST level of the YJCGT lg/kg-treated group significantly decreased compared to that of the control. The ALT and the GGT levels of the YJCGT 2g/kg-treated group significantly increased compared to those of the control. In the YJCGT-treated groups. WBC, RBC and Hgb elevated by TAA injection decreased but platelet count increased. In the YJCGT lg/kg-treated group, the portal pressure elevated by TAA injection significantly decreased. The significant decreases in the gene expressions of procollagen type Ia2, MMP2 and TIMP2 were observed in the YJCGT-treated groups. In histological findings. TAA injections caused severe liver fibrosis, but the YJCGT treatment significantly reduced the amounts of hepatic collagens. Conclusions: These results suggest that YJCGT has beneficial effects on the treatment of patients with liver cirrhosis as well as chronic hepatitis. Further study should be done to decide the optimal concentration of the YJCGT for the treatment of liver cirrhosis.
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문제 정의
이에 저자는 인진청간탕이 thioacetamide(TAA) 유도 간경변모델 흰쥐에 대해 간섬유화 억제에 미치는 영향을 관찰하고자 간기능검사, 일반혈액검사 및 문맥압 측정을 시행하였고, collagen 합성과 분해 관련 인자에 대한 유전자 발현에 미치는 영향을 관찰하기위해 RT-PCR을 통해 섬유화 관련 유전자의 mRNA 발현량을 관찰하여 그 효과를 검증하였다. 또한 간조직의 병리조직 검사를 통해 collagen 형성에 미치는 영향과 인진청간탕의 농도별 효과를 비교검증하여 유의성 있는 결과를 얻었기에 보고하는 바이다.
본 연구에서는 TAA로 유발 동물실험에서 정상군, 대조군(TAA 단독투여), TAA+인진청간탕 1g/kg 투여군(YJCGT 1g군), TAA+인진청간탕 2g/kg투여군(YJCGT 2g군)으로 나누어 인진청간 탕의 간기능개선 및 간보호에 미치는 영향을 살펴보았다. 항목으로는 간의 무게, 간기능검사, 일반혈액검사, 문맥압 측정을 채택하였다.
이에 저자는 인진청간탕이 thioacetamide(TAA) 유도 간경변모델 흰쥐에 대해 간섬유화 억제에 미치는 영향을 관찰하고자 간기능검사, 일반혈액검사 및 문맥압 측정을 시행하였고, collagen 합성과 분해 관련 인자에 대한 유전자 발현에 미치는 영향을 관찰하기위해 RT-PCR을 통해 섬유화 관련 유전자의 mRNA 발현량을 관찰하여 그 효과를 검증하였다. 또한 간조직의 병리조직 검사를 통해 collagen 형성에 미치는 영향과 인진청간탕의 농도별 효과를 비교검증하여 유의성 있는 결과를 얻었기에 보고하는 바이다.
인진청간탕이 간섬유화 억제에 미치는 영향을 알아보기 위하여, 흰쥐에 TAA유도 간섬유화를 유발하여 다음과 같은 결과를 얻었다.
가설 설정
a) Normal, b) Control: TAA injectiononly, c) TAA injection + YJCGT 1g/kg and d) TAA injection + YJCGT 2g/kg.
제안 방법
6ul(15U), targetRNA 1ug을 넣고 나머지는 DEPC water를 첨가하여 총 용량이 20. 1ul가 되게 하여 25℃ 10분, 42℃ 1시간, 95℃ 5분동안 처리하여 cDNA를 제작하고 5℃에서 차게 해서 -20℃에 보관하였으며 필요할 때마다 사용하였다.
TAA는 150mg/kg의 농도로 normalsaline에 녹인 후 0. 22 um syringefilter로 여과멸균하여 주 3회 5주간 복강주사하였다. 검액은 실험기간동안 주 5일간 오전 10시경 1회씩 경구투여하였다.
실험동물을 마취제(zoletill)를 0. 3ml/kg 농도로 근육주사하여 마취시킨 후 개복하고 문맥을 찾아 18G antiocatheter(BD bioscience)를 삽입한 후 문맥압 측정장치에 연결 후 문맥압에 비례하여 상승되는 물기둥의 높이를 측정하였다.
5주간 TAA injection 및 약재투여 후 동물을 에테르 마취 하에 채혈 및 방혈치사시킨 다음 간장을 적출하여 10% 중성포르말린 용액에 고정한 후 파라핀포매 후 로타리 마이크로톰으로 4um 두께로 조직절편을 제작한 다음 Hematoxylin & Eosin(H&E)염색 및 Masson-Trichrome염색을 시행하여 광학현미경으로 관찰하였고 MediaCybernetics 사의 ImageProPlusprogram을 이용하여 섬유화 정도를 전체 면적에 대한 비율로 표시하였다.
5주간의 실험이 끝난 후 2일이 경과하여 동물들을 희생하여 간과 비장을 적출한 후 중량을 측정하였다.
5주의 실험기간동안 4군의 체중을 주 1회씩 측정하였다.
RNeasyMiniKit(Qiagen, TX, USA)를 사용하여 RNA를 분리하였다. 즉, 동물을 희생한 후 간조직을 적당량 취하여 RNAlater solution(Qiagen, TX, USA)에 넣었다가 24시간 이상 지난 다음에 간조직을 70mg내외로 채취하여 50mltube에 넣고 RLT-BME buffer(Qiagen, TX, USA)1ml을 가한 후 TissueMiser(FisherScientific, CA, USA)를 이용하여 homogenize한 후 얼음 위에서 10분간 방치하여 상층액을 얻고 이것을 Shredder column(Qiagen, TX, USA)에 통과시켜 잡질을 제거하였다.
Reverse Transcription System(Promega, WI, USA)을 이용하여 cDNA를 합성하였다. 즉, MgCl2(25mM)4ul, 10X RT buffer2ul, dNTP(10mM) 2ul, Random primer1ul(0.
Top DNA Polymerase Kit(Bioneer, 대전, Korea)을 사용하여 수행하였다. 10X buffer 5ul, dNTP 4ul, primers FWD, REV 각 20 pmoles, ddH2O 35.
간기능검사는 Beckman Coulter, LX-20을 이용하여 수행하였으며, 검사항목으로는 aspartateaminotransferase(AST), alanine aminotransferase(ALT), total bilirubin, alkaline phosphatase(ALP), γ-glutamyltransferase(GGT)등이었고, CBC검사는 SIEMENSHematologysystem ADVIA 120을 이용하여 수행하였으며, 검사항목으로는 whitebloodcell(WBC), redbloodcell(RBC), hemoglobin(Hgb), hematocrit(Hct), platelet(PLT) 등을 선택하였다.
22 um syringefilter로 여과멸균하여 주 3회 5주간 복강주사하였다. 검액은 실험기간동안 주 5일간 오전 10시경 1회씩 경구투여하였다. 또한 대조군에는 주 5일간 생리식염수를 동량으로 경구투여 하였다.
동물을 희생하고 혈액을 채취하여 간기능검사 및 CBC검사를 시행하였다. 간기능검사는 Beckman Coulter, LX-20을 이용하여 수행하였으며, 검사항목으로는 aspartateaminotransferase(AST), alanine aminotransferase(ALT), total bilirubin, alkaline phosphatase(ALP), γ-glutamyltransferase(GGT)등이었고, CBC검사는 SIEMENSHematologysystem ADVIA 120을 이용하여 수행하였으며, 검사항목으로는 whitebloodcell(WBC), redbloodcell(RBC), hemoglobin(Hgb), hematocrit(Hct), platelet(PLT) 등을 선택하였다.
검액은 실험기간동안 주 5일간 오전 10시경 1회씩 경구투여하였다. 또한 대조군에는 주 5일간 생리식염수를 동량으로 경구투여 하였다.
항목으로는 간의 무게, 간기능검사, 일반혈액검사, 문맥압 측정을 채택하였다. 또한 인진청간 탕의 농도 차이를 두고 각 항목을 비교관찰 하였다.
실험동물들을 ① 정상군(Normaldietwithout treatment)② 대조군(TAAonly)③ TAA+인진청 간탕 1g/kg투여군(YJCGT 1g군), ④ TAA+인진 청간탕 2g/kg투여군(YJCGT 2g군)의 4군으로 나누고 군 당 5마리씩 배치하였다. TAA는 150mg/kg의 농도로 normalsaline에 녹인 후 0.
혈청검사로부터 각종 감염이 인정되지 않고, 일반증상과 체중감소가 없는 300g내외의 Sprague-Dawley 흰쥐 수컷((주)샘타코)을 실험에 사용하였다. 실험동물은 멸균한 polycarbonatecage에 방사선 멸균한 시판 고형사료(대한실험동물센터)와 정제한 물을 자유 공급하였으며 2주 동안 실험실 환경에 적응시킨 후 본 실험을 시작하였다. 실험기간 동안 명암주기 12시간 간격, 온도 25±2℃, 습도 55%로 실험실 환경을 유지하였다.
첫 번째 cycle에서는 95℃ 5분, 55℃ 1분, 72℃ 1분으로 하였고, 이후 각 primer에 따라 23-31cycles는 95℃ 1분, 55℃ 1분, 72℃ 1분으로 하였으며, 마지막 cycle은 95℃ 1분, 55℃ 1분, 72℃ 10분으로 하였다. 이렇게 하여 생긴 산생물은 2% agarosegel을 이용하여 전기영동(110 Volt, 20분간) 한 후 I-Solution(iMTechnology, Vancouver, Canada) program을 사용하여 각 밴드의 density를 정량화 하였다.
이제까지 흰쥐를 대상으로 한 인진청간탕의 간섬유화 연구는 CCl413, DMN18으로 유발된 간경변 모델을 대상으로 하였으나, 본 연구는 TAA로 유발된 흰쥐 모델을 통해 인진청간탕의 간섬유화 억제 효과를 검증하였다.
인진청간탕 1710g을 두차례로 나누어 환류추출기(Duksan, Korea)에 넣고, 냉각기를 부착한 상태에서 증류수를 5000ml를 가하여 2시간씩 2회 가열 추출하였다. 추출액을 filterpaper로 여과 후, Rotary evaporator(RE121, Buchi社, SWISS)로 감압 농축하여 농축액을 얻었다.
RNeasyMiniKit(Qiagen, TX, USA)를 사용하여 RNA를 분리하였다. 즉, 동물을 희생한 후 간조직을 적당량 취하여 RNAlater solution(Qiagen, TX, USA)에 넣었다가 24시간 이상 지난 다음에 간조직을 70mg내외로 채취하여 50mltube에 넣고 RLT-BME buffer(Qiagen, TX, USA)1ml을 가한 후 TissueMiser(FisherScientific, CA, USA)를 이용하여 homogenize한 후 얼음 위에서 10분간 방치하여 상층액을 얻고 이것을 Shredder column(Qiagen, TX, USA)에 통과시켜 잡질을 제거하였다. 그런 다음 RNeasyMiniKit를 이용하여 RNA를 분리하였다.
2ul, cDNA 1ul를 넣어 총 volume이 50ul가 되게 하여 PCR을 수행하였다. 첫 번째 cycle에서는 95℃ 5분, 55℃ 1분, 72℃ 1분으로 하였고, 이후 각 primer에 따라 23-31cycles는 95℃ 1분, 55℃ 1분, 72℃ 1분으로 하였으며, 마지막 cycle은 95℃ 1분, 55℃ 1분, 72℃ 10분으로 하였다. 이렇게 하여 생긴 산생물은 2% agarosegel을 이용하여 전기영동(110 Volt, 20분간) 한 후 I-Solution(iMTechnology, Vancouver, Canada) program을 사용하여 각 밴드의 density를 정량화 하였다.
최근 간섬유화와 관련하여 MMPs와 TIMPs에 대한 연구가 많이 진행되고 있는데, 본 연구에서도 인진청간탕이 TAA 유발 간경변동물 모델에서 간섬유화 관련 유전인자인 ASMA, Procollagen Type Ia2, MMP2, TIMP1, TIMP2의 mRNA 발현에 미치는 영향을 관찰하기 위해 RT-PCR을 이용하였다.
본 연구에서는 TAA로 유발 동물실험에서 정상군, 대조군(TAA 단독투여), TAA+인진청간탕 1g/kg 투여군(YJCGT 1g군), TAA+인진청간탕 2g/kg투여군(YJCGT 2g군)으로 나누어 인진청간 탕의 간기능개선 및 간보호에 미치는 영향을 살펴보았다. 항목으로는 간의 무게, 간기능검사, 일반혈액검사, 문맥압 측정을 채택하였다. 또한 인진청간 탕의 농도 차이를 두고 각 항목을 비교관찰 하였다.
대상 데이터
Housekeepinggene으로는 GAPDH를 사용하였고, targetgene으로는 ASMA, Procollagen Type Ia2, MMP2, TIMP1, TIMP2등의 gene을 사용하였으며 각 primer의 sequence는 다음과 같다.
본 실험에 사용한 약재는 대한약전 및 대한약전 외 한약규격주해19에 근거하여 경희대 부속 한방병원에서 구입하여 엄선한 것을 사용하였으며 1첩당 내용 및 용량은 Table1과 같다.
혈청검사로부터 각종 감염이 인정되지 않고, 일반증상과 체중감소가 없는 300g내외의 Sprague-Dawley 흰쥐 수컷((주)샘타코)을 실험에 사용하였다. 실험동물은 멸균한 polycarbonatecage에 방사선 멸균한 시판 고형사료(대한실험동물센터)와 정제한 물을 자유 공급하였으며 2주 동안 실험실 환경에 적응시킨 후 본 실험을 시작하였다.
데이터처리
0K를 이용하여 one-way ANOVA를 사용했고 사후검증으로는 LSD 검증을 하였으며, p<0.05인 경우를 유의성이 있는 것으로 보았다.
성능/효과
1. 정상군은 체중이 점진적으로 증가하였으나, 대조군과 YJCGT 1g군 및 YJCGT 2g군 모두 정상군에 비해 체중은 감소하였다. 간과 비장의 중량은 YJCGT 1g군과 YJCGT 2g군에서 대조군에 비하여 증가하는 경향이 있었으나 통계적 유의성은 없었다.
2. 간기능검사 결과 YJCGT 1g군은 대조군에 비하여 AST치는 유의하게 감소하였고(p<0. 01), ALT, Alp및 GGT는 감소하는 경향을 보였다.
05), Alp는 증가하는 경향을 보였으나 통계적 유의성은 없었다(Fig. 3).
CBC검사 결과 YJCGT 1g군과 YJCGT 2g군에서 WBC, RBC 및 Hgb은 대조군에 비하여 감소하는 경향을 보였고, PLT는 증가하는 경향을 보였으며, Hct는 YJCGT 1g군에서는 증가하는 경향을, YJCGT 2g군에서는 감소하는 경향을 보였다(Fig
. 4).
4. 문맥압 측정결과 YJCGT 1g군에서는 대조군에 비하여 유의성 있게 문맥압이 하강하였으나(p<0. 01), YJCGT 2g군에서는 대조군에 비해 유의한 하강은 없었다.
5. RT-PCR을 통한 섬유화 관련 유전인자의 mRNA 발현량 조사 결과 인진청간탕 처리군이 대조군에 비하여 ASMAmRNA 발현량은 증가하는 경향을 나타내었고, Procollagen type Ia2, MMP2 및 TIMP2 mRNA 발현량은 유의하게 감소하였으며, TIMP1 mRNA 발현량은 감소하는 경향을 나타내었다.
6. 간조직 병리검사에서 인진청간탕 처리군이 대조군에 비하여 간조직 중 collagen의 축적을 유의성있게 억제하였다.
CBC검사 결과 YJCGT 1g군과 YJCGT 2g군에서 WBC, RBC 및 Hgb은 대조군에 비하여 감소하는 경향을 보였고, PLT는 증가하는 경향을 보였으며, Hct는 YJCGT 1g군에서는 증가하는 경향을, YJCGT 2g군에서는 감소하는 경향을 보였다(Fig. 4).
MMP2 mRNA expressions of the YJCGT-treated group were significantly decreased compared to those of the control group(*;p<0. 05, **;p<0. 01).
YJCGT 1g군과 YJCGT 2g군은 대조군에 비하여 collagen의 양이 유의하게 감소하였다(p<0. 05, Fig. 13).
11-b). YJCGT 1g군에서는 중등도의 간소엽의 입체구조가 부분적으로 소실되었고 중등도의 섬유화가 관찰되었으며(Fig 11-c), YJCGT 2g군에서는 병리조직 소견이 대조군보다는 경미하였으나, YJCGT 1g군에 비하여 간세포 괴사와 염증이 더 심하게 나타났다(Fig. 11-d).
YJCGT 1g군은 대조군에 비하여 ASMA mRNA 발현량은 증가하는 경향을 보였고, Procollagen Type Ia2(p<0. 05), MMP2(p<0. 01 ) 및 TIMP2 mRNA(p<0. 05) 발현량은 유의하게 감소하였으며, TIMP1 mRNA 발현량은 감소하는 경향을 보였다.
YJCGT 1g군은 대조군에 비하여 ASMA mRNA 발현량은 증가하는 경향을 보였고, Procollagen Type Ia2(p<0. 05), MMP2(p<0. 01) 및 TIMP2 mRNA(p<0. 05) 발현량은 유의하게 감소하였으며, TIMP1 mRNA 발현량은 감소하는 경향을 보였다.
YJCGT 1g군은 대조군에 비하여 AST치는 유의하게 감소하였고(p<0. 01), ALT, Alp 및 GGT는 감소하는 경향을 보였으나 통계적 유의성은 없었다.
YJCGT 1g은 대조군에 비하여 WBC, RBC및 Hgb은 수치가 감소하는 경향을 보였고, Hct와 PLT는 증가하는 경향을 보였다. YJCGT 2g은 대조군에 비하여 WBC, RBC, Hgb및 Hct은 수치가 감소하는 경향을 보였고, PLT는 증가하는 경향을 보였다(Fig.
YJCGT 2g군은 대조군에 비하여 ASMA mRNA 발현량은 증가하는 경향을 보였고, Procollagen Type Ia2(p<0. 05), MMP2(p<0. 05) 및 TIMP2 mRNA(p<0. 05) 발현량은 유의하게 감소하였으며, TIMP1 mRNA 발현량은 감소하는 경향을 보였다(Fig. 6-10).
YJCGT 2g군은 대조군에 비하여 AST치는 감소하는 경향을 보였으나, ALT와 GGT는 유의하게 증가하였고(p<0. 05), Alp는 증가하는 경향을 보였다.
YJCGT 2g군은 대조군에 비하여 AST치는 감소하는 경향을 보였으며, ALT와 GGT는 유의하게 증가하였고 (p<0. 05), Alp는 증가하는 경향을 보였으나 통계적 유의성은 없었다(Fig. 3).
YJCGT 2g군은 대조군에 비하여 AST치는 감소하는 경향을 보였으며, ALT와 GGT는 유의하게 증가하였고(p<0. 05), Alp는 증가하는 경향을 보였으나 통계적 유의성은 없었다(Fig. 3).
YJCGT 1g은 대조군에 비하여 WBC, RBC및 Hgb은 수치가 감소하는 경향을 보였고, Hct와 PLT는 증가하는 경향을 보였다. YJCGT 2g은 대조군에 비하여 WBC, RBC, Hgb및 Hct은 수치가 감소하는 경향을 보였고, PLT는 증가하는 경향을 보였다(Fig. 4).
간경변증을 유발한 흰쥐에 대하여 Hematoxylin & Eosin염색하여 간조직을 관찰한 결과, 대조군에서는 간소엽의 입체구조가 소실되었고 심한 정도의 섬유화 및 광범위한 심한 간세포 괴사와 염증반응이 관찰되었다(Fig. 11-b).
간기능검사 결과 YJCGT 1g군은 대조군에 비하여 AST치는 유의하게 감소하였고(p<0. 01), ALT, Alp 및 GGT는 감소하는 경향을 보였다.
또한 간경변시 상승하는 문맥압을하강시키는 효과를 관찰할 수 있었다. 간섬유화와 관련된 유전인자인 Procollagen Type Ia2 mRNA 발현량을 감소시킴으로써 간성상세포의 활성억제 및 TIMP2 mRNA 발현량을 감소시킴으로써 세포 외기질의 분해를 촉진시키는 효과를 나타내었다. 또한 MMP2 mRNA 발현량을 감소시킴으로써 정상 collagen분해작용을 억제시켜 간조직을 유지시키는 효과를 관찰할 수 있었다.
간조직 면적 중 collagen이 차지하는 면적의 비율을 측정하여 percentage로 표시한 결과 YJCGT 1g군과 YJCGT 2g군은 대조군에 비하여 collagen의 양이 유의하게 감소하였다(p<0. 05, Fig. 13).
11-a). 대조군에서는 간소엽의 입체구조가 소실되었고 문맥역과 중심정맥 주위로 심한 정도의 섬유화가 관찰되었다. 간조직 전반에 걸쳐 심한 간세포 괴사와 이에 동반된 염증반응도 관찰되었다(Fig.
간섬유화와 관련된 유전인자인 Procollagen Type Ia2 mRNA 발현량을 감소시킴으로써 간성상세포의 활성억제 및 TIMP2 mRNA 발현량을 감소시킴으로써 세포 외기질의 분해를 촉진시키는 효과를 나타내었다. 또한 MMP2 mRNA 발현량을 감소시킴으로써 정상 collagen분해작용을 억제시켜 간조직을 유지시키는 효과를 관찰할 수 있었다. 간조직 검사에서는인진청간탕이 collagen형성을 억제하는 효과를 나타내었다.
또한 Masson-Trichrom 염색하여 간조직을 관찰한 결과 대조군에서는 문맥역 및 중심정맥 주위로 현저한 collagen 침착이 관찰되었으며(Fig. 12-b), YJCGT 1g군에서는 문맥역과 중심정맥 주위로 collagen의 침착이 대조군에 비하여 감소하였으나 (Fig. 12-c). YJCGT 2g군에서는 YJCGT 1g군에 비하여 collagen침착이 더 심했다(Fig, 12-d).
이상의 결과에서 인진청간탕은 TAA 유발 간경변 동물모델에서 간기능검사 수치의 호전을 통해 간기능개선과 간보호 효과를 보였으나, 농도가 높은 경우 오히려 간기능을 악화시키는 결과를 관찰할 수 있었다. 또한 간경변시 상승하는 문맥압을하강시키는 효과를 관찰할 수 있었다. 간섬유화와 관련된 유전인자인 Procollagen Type Ia2 mRNA 발현량을 감소시킴으로써 간성상세포의 활성억제 및 TIMP2 mRNA 발현량을 감소시킴으로써 세포 외기질의 분해를 촉진시키는 효과를 나타내었다.
문맥압 측정결과 YJCGT 1g군에서는 대조군에 비하여 유의성 있게 문맥압이 하강하였으나(p<0. 01), YJCGT 2g군에서는 대조군에 비해 유의한 하강은 없었다(Fig. 5).
간조직 검사에서는인진청간탕이 collagen형성을 억제하는 효과를 나타내었다. 상기의 결과들에서 공통적으로 YJCGT 1g군은 YJCGT 2g군에 비하여 간섬유화 억제효과가 우수한 것으로 관찰되었다. 따라서 간경변증의 임상 치료에 있어서 인진청간탕의 적정 농도 확정을 위한 추가 연구가 필요할 것으로 사료된다.
이상의 결과에서 인진청간탕은 TAA 유발 간경변 동물모델에서 간기능검사 수치의 호전을 통해 간기능개선과 간보호 효과를 보였으나, 농도가 높은 경우 오히려 간기능을 악화시키는 결과를 관찰할 수 있었다. 또한 간경변시 상승하는 문맥압을하강시키는 효과를 관찰할 수 있었다.
이상의 실험결과에서 인진청간탕은 간섬유화 억제 및 간세포보호 효과가 있는 것으로 판단되었다. 그러나 본 병태모델에서는 인진청간탕의 고농도 투여군에서는 효과가 감소하여 향후 간경변증 및 간섬유화 치료에 있어서 인진청간탕의 적정용량 수립에 대한 추가 연구가 필요하리라 사료된다.
정상군은 체중이 점진적으로 증가하였으나, 대조군과 YJCGT 1g군 및 YJCGT 2g군 모두 정상군에 비해 체중은 감소하였다(Fig. 1).
정상군은 체중이 점진적으로 증가하였으나, 대조군과 인진청간탕 처리군 모두 정상군에 비해 체중은 감소하였다. 간과 비장의 중량은 인진청간탕 처리군에서 대조군에 비하여 증가하는 경향이 있으나 통계적 유의성은 없었다.
후속연구
이상의 실험결과에서 인진청간탕은 간섬유화 억제 및 간세포보호 효과가 있는 것으로 판단되었다. 그러나 본 병태모델에서는 인진청간탕의 고농도 투여군에서는 효과가 감소하여 향후 간경변증 및 간섬유화 치료에 있어서 인진청간탕의 적정용량 수립에 대한 추가 연구가 필요하리라 사료된다.
상기의 결과들에서 공통적으로 YJCGT 1g군은 YJCGT 2g군에 비하여 간섬유화 억제효과가 우수한 것으로 관찰되었다. 따라서 간경변증의 임상 치료에 있어서 인진청간탕의 적정 농도 확정을 위한 추가 연구가 필요할 것으로 사료된다.
질의응답
핵심어
질문
논문에서 추출한 답변
간섬유화란?
간섬유화는 원인에 관계없이 선행되는 염증에 의하여 간조직에서 나타나는 상처치유 과정의 일종이며2 세포외기질 단백질의 과도한 침착을 특징으로 하는 만성 간질환의 최종적인 병변3이다.
간경변증의 주된 기전은 무엇인가?
간경변증의 주된 기전인 섬유화 억제제에 대한 연구가 다양하게 이루어지고 있으나4-7, 현재 효과적인 치료제가 제시되고 있지 못하고 있는 실정이다.
인진청간탕이 간섬유화 억제에 미치는 영향을 알아보기 위하여, 흰쥐에 TAA유도 간섬유화를 유발하여 얻은 결과는?
1. 정상군은 체중이 점진적으로 증가하였으나, 대조군과 YJCGT 1g군 및 YJCGT 2g군 모두 정상군에 비해 체중은 감소하였다. 간과 비장의 중량은 YJCGT 1g군과 YJCGT 2g군에서 대조군에 비하여 증가하는 경향이 있었으나 통계적 유의성은 없었다.
2. 간기능검사 결과 YJCGT 1g군은 대조군에 비하여 AST치는 유의하게 감소하였고(p<0. 01), ALT, Alp및 GGT는 감소하는 경향을 보였다. YJCGT 2g군은 대조군에 비하여 AST치는 감소하는 경향을 보였으나, ALT와 GGT는 유의하게 증가하였고(p<0. 05), Alp는 증가하는 경향을 보였다.
3. CBC검사 결과 YJCGT 1g군과 YJCGT 2g군에서 WBC, RBC및 Hgb은 대조군에 비하여 감소하는 경향을 보였고, PLT는 증가하는 경향을 보였으며, Hct는 YJCGT 1g군에서는 증가하는 경향을, YJCGT 2g군에서는 감소하는 경향을 보였다.
4. 문맥압 측정결과 YJCGT 1g군에서는 대조군에 비하여 유의성 있게 문맥압이 하강하였으나(p<0. 01), YJCGT 2g군에서는 대조군에 비해 유의한 하강은 없었다.
5. RT-PCR을 통한 섬유화 관련 유전인자의 mRNA 발현량 조사 결과 인진청간탕 처리군이 대조군에 비하여 ASMAmRNA 발현량은 증가하는 경향을 나타내었고, Procollagen type Ia2, MMP2 및 TIMP2 mRNA 발현량은 유의하게 감소하였으며, TIMP1 mRNA 발현량은 감소하는 경향을 나타내었다.
6. 간조직 병리검사에서 인진청간탕 처리군이 대조군에 비하여 간조직 중 collagen의 축적을 유의성있게 억제하였다.
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