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문제 정의
- 따라서 본 실험에서는 무균 구리금파리를 보다 간편하게 생산하기 위한 적절한 배지를 선발하고, 생산된 구리금파리의 온도별 적정 보존기간을 검토하였다.
제안 방법
- 알의 접종방법은 배지 선발 실험과 동일하였디' 이 실험 도중 8笆에 저장한 유충이 느린 속도지만 계속 성장하고 있는 것이 관찰되어 저장온도를 더 낮추어 추가로 실시하였다. 4 ±0.5笆 와 6±0.5°C에 3령 유충을 10, 15, 20일간 저장한 후 2 5笆로 옮기고 24시간 후에 유충의 생존 여부를 확인하고 전술한 것과 동일한 방법으로 무게를 측정하였다. 이 실험은 1회 3반복 실시하였다.
- 배지 plate의 뚜껑을 덮고 parafilm 으로 감싼 후 외부와 공기를 순환시키기 위해 연필 끝으로 5개의 작은 구멍을 뚫어 준 후 25 ± 1°C 항온기에 48시간 동안 배양하였다. 48시간 후 알껍질 수와 구더기의 생존 수를 세고, 생존한 구더기의 무게를 판 자동저울(HM-200, AND, Japan)을 이용하여 측정하였다. 배지에 따른 생존율 비교는 알부터 부화한지 48시간이 경과한 유충까지의 생존수로 계산하였다.
- BAP 배지에 알과 3령 유충을 20마리씩 접종하고 4 士 0.5°C와 8±0.5°C의 항온기에 0, 3, 6, 9, 12일 동안 저장하였다. 각 저장 기간 후 25笆로 옮긴 뒤 24시간 후에 알의 부화 여부를 확인하였다.
- 5°C의 항온기에 0, 3, 6, 9, 12일 동안 저장하였다. 각 저장 기간 후 25笆로 옮긴 뒤 24시간 후에 알의 부화 여부를 확인하였다. 알의 접종방법은 배지 선발 실험과 동일하였디' 이 실험 도중 8笆에 저장한 유충이 느린 속도지만 계속 성장하고 있는 것이 관찰되어 저장온도를 더 낮추어 추가로 실시하였다.
- 배지에 따른 생존율 비교는 알부터 부화한지 48시간이 경과한 유충까지의 생존수로 계산하였다. 구더기의 무게는 측정하기 전에 필터페이퍼에 구더기를 굴려 표피의 수분을 제거한 후 측정하였다. 이 실험은 2회 실시하였고, 각 회수별 3반복 실험하였다.
- 나머지는 상기의 배지선발실험과 동일한 방법으로 20개의 알에서 부화한 유충을 접종 한 뒤 25 ± 1 °C 에서 48시간 후에 부화수를 세고, 구더기의 생존 여부를 확인하고 전술한 것과 동일한 방법으로 무게를 측정하였다. 이 실험은 1회 4반복 실험하였다.
- 48시간 후 알껍질 수와 구더기의 생존 수를 세고, 생존한 구더기의 무게를 판 자동저울(HM-200, AND, Japan)을 이용하여 측정하였다. 배지에 따른 생존율 비교는 알부터 부화한지 48시간이 경과한 유충까지의 생존수로 계산하였다. 구더기의 무게는 측정하기 전에 필터페이퍼에 구더기를 굴려 표피의 수분을 제거한 후 측정하였다.
- 살균 메스로 배지에 여러 개의 직선 모양의 흠집을 낸 후 소독된 알을 작은 붓(00호, Babara)으로 각 배지에 20개씩 접종하였다. 배지 plate의 뚜껑을 덮고 parafilm 으로 감싼 후 외부와 공기를 순환시키기 위해 연필 끝으로 5개의 작은 구멍을 뚫어 준 후 25 ± 1°C 항온기에 48시간 동안 배양하였다.
- 상기 실험에서 선발된 BA, BBA, CA 배지에 양 (sheep)의 혈액을 5%, 20%, 40% 첨가하여 실험에 사용하였다. 나머지는 상기의 배지선발실험과 동일한 방법으로 20개의 알에서 부화한 유충을 접종 한 뒤 25 ± 1 °C 에서 48시간 후에 부화수를 세고, 구더기의 생존 여부를 확인하고 전술한 것과 동일한 방법으로 무게를 측정하였다.
- 4 g을 넣고 다시 갈아 준다. 생간-agar액을 체로 거른 다음 삼각플라스크에 붓고 고압 멸균하고, 멸균한 간 배지를 무균 작업 대안에서 100 ml당 1 ml의 항생제를 첨가한 후 잘 섞어서 Petri dish에 3/2 정도씩 부어 배지를 제조하였다.
- 각 저장 기간 후 25笆로 옮긴 뒤 24시간 후에 알의 부화 여부를 확인하였다. 알의 접종방법은 배지 선발 실험과 동일하였디' 이 실험 도중 8笆에 저장한 유충이 느린 속도지만 계속 성장하고 있는 것이 관찰되어 저장온도를 더 낮추어 추가로 실시하였다. 4 ±0.
- 유충은 생 닭고기 약 240 g을 잘라 먹 이로 하여 사육하였다. 우화 후 10일 이상 된 암 수 성충이 약 100마리가 들어 있는 사육 상자에 소의 생간 조각 10 g을 2~3시간 정도 넣어 채란하였고, 무균작업대에서 소의 생간에 낳은 난괴 약 800~1, 000개를 떼어내 튜브(50 ml)에 넣고 0.5%의 sodium hypochlorite 용액과 5% formaldehyde 용액으로 소독한 후 3차 증류수로 3~4회 세척하였다.
- 5°C에 3령 유충을 10, 15, 20일간 저장한 후 2 5笆로 옮기고 24시간 후에 유충의 생존 여부를 확인하고 전술한 것과 동일한 방법으로 무게를 측정하였다. 이 실험은 1회 3반복 실시하였다.
- 나머지는 상기의 배지선발실험과 동일한 방법으로 20개의 알에서 부화한 유충을 접종 한 뒤 25 ± 1 °C 에서 48시간 후에 부화수를 세고, 구더기의 생존 여부를 확인하고 전술한 것과 동일한 방법으로 무게를 측정하였다. 이 실험은 1회 4반복 실험하였다.
- 구더기의 무게는 측정하기 전에 필터페이퍼에 구더기를 굴려 표피의 수분을 제거한 후 측정하였다. 이 실험은 2회 실시하였고, 각 회수별 3반복 실험하였다.
대상 데이터
- 배지는 한국배지(주)에서 구입하여 사용하였으며 각 배지의 조성은 Table 1과 같다. 간배지의 제조는 Kim et al.
- 본 실험을 위해 Blood agar(BA), Sabouraud dextrose agar(SDA), Salmonella-shigella(SS), Phenylethyl alcohol (PEA), Thiosulfate citrate bile salts sucrose agar(TCBS), Chocolate agar(CA), MacConkey agar(MC), Brucella blood agar(BBA)를 사용하였고, 대조구로서 간 배지를 사용하였다. 배지는 한국배지(주)에서 구입하여 사용하였으며 각 배지의 조성은 Table 1과 같다.
데이터처리
- 각 배지별 부화율과 유충의 생존율, 유충의 무게는 일원 배치 분산분석(one-way ANOVA)을 하였고, 저장 온도 및 저장 기간별 부화율과 유충의 생존율 및 체중은 이원배치 분산분석(two-way ANOVA)을 하였다. 분산분석 후 Tukey's studentized range test (SAS, 1998)를 이용하여 5% 유의수준에서 평균간 차이를 검정하였다.
- 분산분석 후 Tukey's studentized range test (SAS, 1998)를 이용하여 5% 유의수준에서 평균간 차이를 검정하였다.
이론/모형
- 배지는 한국배지(주)에서 구입하여 사용하였으며 각 배지의 조성은 Table 1과 같다. 간배지의 제조는 Kim et al. (2007)의 방법을 따랐다. 즉 소의 생간을 갈아서 힘줄과 지방, 껍질 등을 제거한 후, 생간 분말 2, 000 g을 증류수 2, 526 ml와 agar 88.
- 실험에 사용한 구리금파리의 사육과 채란한 알의 소독 방법은 Kim et al. (2007)의 방법을 따랐다. 성충은 각설탕 6개(20 g), 20 g의 분유와 물(1 : 1 : 1)을 먹 이로하여 20x40x30 cm 크기의 사육 상자에서 사육하였다.
성능/효과
- 332)에서 배지 간에 차이가 없었다(Table 2). 1차 실험에서 유충의 생존율은 BA 배지와 SDA 배지에서 가장 높았고, SS, CA, MC, 간배지 등도 BA 배지와 차이가 없었다<F=16.5; P=0.0001), 2차 실험에서는 BBA 배지에서 유충의 생존율이 가장 높았는데 BA, SDA, CA, MC, 간배지 등도 BBA 배지와 차이가 없었다世 =6.71; P=0.0004). 유충의 무게는 2차 실험에서만 측정하였는데 BBA에서 가장 높았다世 =12.
- 0008) 저장할 수 있었다 (Table 5). 그러나 4C 에서보다 6°C 에서 유충의 무게가 무거웠고 (F= 42.50; P=<0.0001), 6°C에서도 저장기간이 길어짐에 따라 체중이 증가하여 6°C 에 저장 중에도 유충이 서서히 발육하고 있었음을 알 수 있었다.
- 상기 실험에서 유충의 생존율과 생육이 비교적 좋았던 BA, BBA 및 CA 배지에 양의 혈액을 첨가하여 실험했을 때, 부화율과 유충의 생존율은 배지 간에 차이가 없었으나(부화율, F=1.이; P=0.1001; 생존율, F= 1.25; P=0.308), 유충의 무게는 세 배지 모두 첨가한 혈액의 함량이 높아짐에 따라 증가하는 경향이었다(尸= 29.03; P=0.0001) (Table 3).
- 저장기간에 따라 알의 부화율 (尸 =18.79; 尸<0.0001)과유충의 생존율 (F=13.15; R=<0.0001)은 차이가 있었고, 또한 저장온도에 따라 부화율 (F=54.58; PvO. OOOl)과유충의 생존율 (F=44.69; P=<0.0001)o]l 차이가 있었다 (Table 4). 즉, 알과 3령 유충을 4°C에 6일 이상 저장하면 부화율과 유충 생존율이 크게 저하하였지만 8°C 에서는 12일까지도 저장할 수 있었다 저장온도 6°C에서는 4笆 에서보다 유충의 생존율이 월등히 높았으며(尸 =145.
- 0001)o]l 차이가 있었다 (Table 4). 즉, 알과 3령 유충을 4°C에 6일 이상 저장하면 부화율과 유충 생존율이 크게 저하하였지만 8°C 에서는 12일까지도 저장할 수 있었다 저장온도 6°C에서는 4笆 에서보다 유충의 생존율이 월등히 높았으며(尸 =145.45 ; P<0.0001) 15일까지도 생존율의 의미 있는 차이 없이 (尸 =9.86; 阵<0.0008) 저장할 수 있었다 (Table 5). 그러나 4C 에서보다 6°C 에서 유충의 무게가 무거웠고 (F= 42.
후속연구
- 그러나 대량으로 제조. 시판되고 있는 배지를 구입해서 사용한다면 생산과정을 획기적으로 줄일 수 있을 것이다. 또한 배지에 함유되는 양 혈액의 양을 증가시킴으로써 사육하는 유충의 발육을 높일 수 있을 것으로 판단된다.
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