무균 구리금파리 유충 생산용 배지의 선발과 알 및 유충의 저장을 위한 온도 및 기간 Selection of Rearing Media, Proper Temperature and Period for Storage of Sterile Lucilia sericata (Diptera: Calliphoridae) Eggs and Larvae원문보기
구더기 치료에 널리 이용되고 있는 무균 구리금파리 [Phaenicia (=Lucilia) sericata (Meigen)]를 보다 손쉽게 사육하기 위한 배지를 선발하고, 알과 유충의 저장조건을 실험하였다. 시판되고 있는 8가지의 미생물 배양용 선택배지에서 실험한 결과, 알의 부화율은 배지 간에 차이가 없었고, 유충의 생존율은 1, 2차 실험결과 blood agar(BA), sabouraud dextrose agar 및 brucella blood agar 배지에서 가장 높았다. BA 및 chocolate agar 배지에서 양의 혈액 함량을 20${\sim}$40%로 높일수록 유충의 생육이 좋았다. 알은 부화율의 저하 없이 $8^{\circ}C$에서는 12일까지 저장할 수 있었고, 3령 초기 유충은 생존율의 저하 없이 $6^{\circ}C$에서 15일까지 저장할 수 있었다.
구더기 치료에 널리 이용되고 있는 무균 구리금파리 [Phaenicia (=Lucilia) sericata (Meigen)]를 보다 손쉽게 사육하기 위한 배지를 선발하고, 알과 유충의 저장조건을 실험하였다. 시판되고 있는 8가지의 미생물 배양용 선택배지에서 실험한 결과, 알의 부화율은 배지 간에 차이가 없었고, 유충의 생존율은 1, 2차 실험결과 blood agar(BA), sabouraud dextrose agar 및 brucella blood agar 배지에서 가장 높았다. BA 및 chocolate agar 배지에서 양의 혈액 함량을 20${\sim}$40%로 높일수록 유충의 생육이 좋았다. 알은 부화율의 저하 없이 $8^{\circ}C$에서는 12일까지 저장할 수 있었고, 3령 초기 유충은 생존율의 저하 없이 $6^{\circ}C$에서 15일까지 저장할 수 있었다.
Rearing media were selected for the production of sterile larvae of greenbottle blowfly, Phaenicia (=Lucilia) sericata (Meigen) which is widely used in maggot therapy. Eight media available in the market were used in this study. Egg hatchability was not different among the media. Survivorship of the...
Rearing media were selected for the production of sterile larvae of greenbottle blowfly, Phaenicia (=Lucilia) sericata (Meigen) which is widely used in maggot therapy. Eight media available in the market were used in this study. Egg hatchability was not different among the media. Survivorship of the larvae was higher in blood agar (BA), sabouraud dextrose agar, and brucella blood agar than the others. A higher content (20${\sim}$40%) of sheep blood in BA and chocolate agar increased the survivorship of larvae. The eggs and the early 3rd larvae could be stored for 12 days at $8^{\circ}C$ and for 15 days at $6^{\circ}C$ without decrease in hatchability and larval survivorship, respectively.
Rearing media were selected for the production of sterile larvae of greenbottle blowfly, Phaenicia (=Lucilia) sericata (Meigen) which is widely used in maggot therapy. Eight media available in the market were used in this study. Egg hatchability was not different among the media. Survivorship of the larvae was higher in blood agar (BA), sabouraud dextrose agar, and brucella blood agar than the others. A higher content (20${\sim}$40%) of sheep blood in BA and chocolate agar increased the survivorship of larvae. The eggs and the early 3rd larvae could be stored for 12 days at $8^{\circ}C$ and for 15 days at $6^{\circ}C$ without decrease in hatchability and larval survivorship, respectively.
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문제 정의
따라서 본 실험에서는 무균 구리금파리를 보다 간편하게 생산하기 위한 적절한 배지를 선발하고, 생산된 구리금파리의 온도별 적정 보존기간을 검토하였다.
제안 방법
알의 접종방법은 배지 선발 실험과 동일하였디' 이 실험 도중 8笆에 저장한 유충이 느린 속도지만 계속 성장하고 있는 것이 관찰되어 저장온도를 더 낮추어 추가로 실시하였다. 4 ±0.5笆 와 6±0.5°C에 3령 유충을 10, 15, 20일간 저장한 후 2 5笆로 옮기고 24시간 후에 유충의 생존 여부를 확인하고 전술한 것과 동일한 방법으로 무게를 측정하였다. 이 실험은 1회 3반복 실시하였다.
배지 plate의 뚜껑을 덮고 parafilm 으로 감싼 후 외부와 공기를 순환시키기 위해 연필 끝으로 5개의 작은 구멍을 뚫어 준 후 25 ± 1°C 항온기에 48시간 동안 배양하였다. 48시간 후 알껍질 수와 구더기의 생존 수를 세고, 생존한 구더기의 무게를 판 자동저울(HM-200, AND, Japan)을 이용하여 측정하였다. 배지에 따른 생존율 비교는 알부터 부화한지 48시간이 경과한 유충까지의 생존수로 계산하였다.
BAP 배지에 알과 3령 유충을 20마리씩 접종하고 4 士 0.5°C와 8±0.5°C의 항온기에 0, 3, 6, 9, 12일 동안 저장하였다. 각 저장 기간 후 25笆로 옮긴 뒤 24시간 후에 알의 부화 여부를 확인하였다.
5°C의 항온기에 0, 3, 6, 9, 12일 동안 저장하였다. 각 저장 기간 후 25笆로 옮긴 뒤 24시간 후에 알의 부화 여부를 확인하였다. 알의 접종방법은 배지 선발 실험과 동일하였디' 이 실험 도중 8笆에 저장한 유충이 느린 속도지만 계속 성장하고 있는 것이 관찰되어 저장온도를 더 낮추어 추가로 실시하였다.
배지에 따른 생존율 비교는 알부터 부화한지 48시간이 경과한 유충까지의 생존수로 계산하였다. 구더기의 무게는 측정하기 전에 필터페이퍼에 구더기를 굴려 표피의 수분을 제거한 후 측정하였다. 이 실험은 2회 실시하였고, 각 회수별 3반복 실험하였다.
나머지는 상기의 배지선발실험과 동일한 방법으로 20개의 알에서 부화한 유충을 접종 한 뒤 25 ± 1 °C 에서 48시간 후에 부화수를 세고, 구더기의 생존 여부를 확인하고 전술한 것과 동일한 방법으로 무게를 측정하였다. 이 실험은 1회 4반복 실험하였다.
48시간 후 알껍질 수와 구더기의 생존 수를 세고, 생존한 구더기의 무게를 판 자동저울(HM-200, AND, Japan)을 이용하여 측정하였다. 배지에 따른 생존율 비교는 알부터 부화한지 48시간이 경과한 유충까지의 생존수로 계산하였다. 구더기의 무게는 측정하기 전에 필터페이퍼에 구더기를 굴려 표피의 수분을 제거한 후 측정하였다.
살균 메스로 배지에 여러 개의 직선 모양의 흠집을 낸 후 소독된 알을 작은 붓(00호, Babara)으로 각 배지에 20개씩 접종하였다. 배지 plate의 뚜껑을 덮고 parafilm 으로 감싼 후 외부와 공기를 순환시키기 위해 연필 끝으로 5개의 작은 구멍을 뚫어 준 후 25 ± 1°C 항온기에 48시간 동안 배양하였다.
상기 실험에서 선발된 BA, BBA, CA 배지에 양 (sheep)의 혈액을 5%, 20%, 40% 첨가하여 실험에 사용하였다. 나머지는 상기의 배지선발실험과 동일한 방법으로 20개의 알에서 부화한 유충을 접종 한 뒤 25 ± 1 °C 에서 48시간 후에 부화수를 세고, 구더기의 생존 여부를 확인하고 전술한 것과 동일한 방법으로 무게를 측정하였다.
4 g을 넣고 다시 갈아 준다. 생간-agar액을 체로 거른 다음 삼각플라스크에 붓고 고압 멸균하고, 멸균한 간 배지를 무균 작업 대안에서 100 ml당 1 ml의 항생제를 첨가한 후 잘 섞어서 Petri dish에 3/2 정도씩 부어 배지를 제조하였다.
각 저장 기간 후 25笆로 옮긴 뒤 24시간 후에 알의 부화 여부를 확인하였다. 알의 접종방법은 배지 선발 실험과 동일하였디' 이 실험 도중 8笆에 저장한 유충이 느린 속도지만 계속 성장하고 있는 것이 관찰되어 저장온도를 더 낮추어 추가로 실시하였다. 4 ±0.
유충은 생 닭고기 약 240 g을 잘라 먹 이로 하여 사육하였다. 우화 후 10일 이상 된 암 수 성충이 약 100마리가 들어 있는 사육 상자에 소의 생간 조각 10 g을 2~3시간 정도 넣어 채란하였고, 무균작업대에서 소의 생간에 낳은 난괴 약 800~1, 000개를 떼어내 튜브(50 ml)에 넣고 0.5%의 sodium hypochlorite 용액과 5% formaldehyde 용액으로 소독한 후 3차 증류수로 3~4회 세척하였다.
5°C에 3령 유충을 10, 15, 20일간 저장한 후 2 5笆로 옮기고 24시간 후에 유충의 생존 여부를 확인하고 전술한 것과 동일한 방법으로 무게를 측정하였다. 이 실험은 1회 3반복 실시하였다.
나머지는 상기의 배지선발실험과 동일한 방법으로 20개의 알에서 부화한 유충을 접종 한 뒤 25 ± 1 °C 에서 48시간 후에 부화수를 세고, 구더기의 생존 여부를 확인하고 전술한 것과 동일한 방법으로 무게를 측정하였다. 이 실험은 1회 4반복 실험하였다.
구더기의 무게는 측정하기 전에 필터페이퍼에 구더기를 굴려 표피의 수분을 제거한 후 측정하였다. 이 실험은 2회 실시하였고, 각 회수별 3반복 실험하였다.
대상 데이터
배지는 한국배지(주)에서 구입하여 사용하였으며 각 배지의 조성은 Table 1과 같다. 간배지의 제조는 Kim et al.
본 실험을 위해 Blood agar(BA), Sabouraud dextrose agar(SDA), Salmonella-shigella(SS), Phenylethyl alcohol (PEA), Thiosulfate citrate bile salts sucrose agar(TCBS), Chocolate agar(CA), MacConkey agar(MC), Brucella blood agar(BBA)를 사용하였고, 대조구로서 간 배지를 사용하였다. 배지는 한국배지(주)에서 구입하여 사용하였으며 각 배지의 조성은 Table 1과 같다.
데이터처리
각 배지별 부화율과 유충의 생존율, 유충의 무게는 일원 배치 분산분석(one-way ANOVA)을 하였고, 저장 온도 및 저장 기간별 부화율과 유충의 생존율 및 체중은 이원배치 분산분석(two-way ANOVA)을 하였다. 분산분석 후 Tukey's studentized range test (SAS, 1998)를 이용하여 5% 유의수준에서 평균간 차이를 검정하였다.
분산분석 후 Tukey's studentized range test (SAS, 1998)를 이용하여 5% 유의수준에서 평균간 차이를 검정하였다.
이론/모형
배지는 한국배지(주)에서 구입하여 사용하였으며 각 배지의 조성은 Table 1과 같다. 간배지의 제조는 Kim et al. (2007)의 방법을 따랐다. 즉 소의 생간을 갈아서 힘줄과 지방, 껍질 등을 제거한 후, 생간 분말 2, 000 g을 증류수 2, 526 ml와 agar 88.
실험에 사용한 구리금파리의 사육과 채란한 알의 소독 방법은 Kim et al. (2007)의 방법을 따랐다. 성충은 각설탕 6개(20 g), 20 g의 분유와 물(1 : 1 : 1)을 먹 이로하여 20x40x30 cm 크기의 사육 상자에서 사육하였다.
성능/효과
332)에서 배지 간에 차이가 없었다(Table 2). 1차 실험에서 유충의 생존율은 BA 배지와 SDA 배지에서 가장 높았고, SS, CA, MC, 간배지 등도 BA 배지와 차이가 없었다<F=16.5; P=0.0001), 2차 실험에서는 BBA 배지에서 유충의 생존율이 가장 높았는데 BA, SDA, CA, MC, 간배지 등도 BBA 배지와 차이가 없었다世 =6.71; P=0.0004). 유충의 무게는 2차 실험에서만 측정하였는데 BBA에서 가장 높았다世 =12.
0008) 저장할 수 있었다 (Table 5). 그러나 4C 에서보다 6°C 에서 유충의 무게가 무거웠고 (F= 42.50; P=<0.0001), 6°C에서도 저장기간이 길어짐에 따라 체중이 증가하여 6°C 에 저장 중에도 유충이 서서히 발육하고 있었음을 알 수 있었다.
상기 실험에서 유충의 생존율과 생육이 비교적 좋았던 BA, BBA 및 CA 배지에 양의 혈액을 첨가하여 실험했을 때, 부화율과 유충의 생존율은 배지 간에 차이가 없었으나(부화율, F=1.이; P=0.1001; 생존율, F= 1.25; P=0.308), 유충의 무게는 세 배지 모두 첨가한 혈액의 함량이 높아짐에 따라 증가하는 경향이었다(尸= 29.03; P=0.0001) (Table 3).
저장기간에 따라 알의 부화율 (尸 =18.79; 尸<0.0001)과유충의 생존율 (F=13.15; R=<0.0001)은 차이가 있었고, 또한 저장온도에 따라 부화율 (F=54.58; PvO. OOOl)과유충의 생존율 (F=44.69; P=<0.0001)o]l 차이가 있었다 (Table 4). 즉, 알과 3령 유충을 4°C에 6일 이상 저장하면 부화율과 유충 생존율이 크게 저하하였지만 8°C 에서는 12일까지도 저장할 수 있었다 저장온도 6°C에서는 4笆 에서보다 유충의 생존율이 월등히 높았으며(尸 =145.
0001)o]l 차이가 있었다 (Table 4). 즉, 알과 3령 유충을 4°C에 6일 이상 저장하면 부화율과 유충 생존율이 크게 저하하였지만 8°C 에서는 12일까지도 저장할 수 있었다 저장온도 6°C에서는 4笆 에서보다 유충의 생존율이 월등히 높았으며(尸 =145.45 ; P<0.0001) 15일까지도 생존율의 의미 있는 차이 없이 (尸 =9.86; 阵<0.0008) 저장할 수 있었다 (Table 5). 그러나 4C 에서보다 6°C 에서 유충의 무게가 무거웠고 (F= 42.
후속연구
그러나 대량으로 제조. 시판되고 있는 배지를 구입해서 사용한다면 생산과정을 획기적으로 줄일 수 있을 것이다. 또한 배지에 함유되는 양 혈액의 양을 증가시킴으로써 사육하는 유충의 발육을 높일 수 있을 것으로 판단된다.
참고문헌 (14)
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Kim, H.C., SJ. Kim, IE. Yun, T.H. Jo, B.R. Choi and e.G. Park. 2007. Development of the greenbottle blowfly, Lucilia sericata, under different temperatures. Korean J. Appl. Entomol. 46: 141-145
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