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문제 정의
- 등의 연구에서 氣虛, 血虛 동물모델의 일반 특성 및 피부 특성에 관하여 다루었으나, 노화의 지표 중 하나인 활성산소 및 항산화력에 관해서는 다루어지지 않았다. 이에 본 연구에서 이전 신 등의 변증 모델을 참고로 하여 氣虛, 血虛 동물 모델을 유발하고 각 모델에서의 활성산소 및 항산화력을 측정하여 두 모델간의 차이를 살펴보고자 하였다.
제안 방법
- 꼬리를 75% 에탄올 솜으로 문질러 혈관을 확장 충혈 시키고, 꼬리의 첨단에서 0.4㎖ 출혈시켰다. 실험 1, 4, 8, 10, 12, 14, 16, 19일째 시행하여 총 8 회 시행하였다.
- 등의 연구에서와 같이 섭식량 제한 모델을 채택하였고, 血虛동물모델도 신 등의 연구에서와 같이 꼬리를 75%에탄올 솜으로 문질러 혈관을 확장시킨 후 꼬리 첨단에서 出血 시키는 실혈법 모델을 채택하였다. 단, 실험 시작일부터 종료일까지 사료 양을 개체당 1일 12g으로 제한하여 신14) 등의 연구에서 1일 75g과 차이를 두었고, 출혈양은 총 8회 0.4㎖/회로 하여, 신14) 등의 연구에서 0.3㎖/회와 차이를 두어 이전 신14) 등의 연구보다 정상군과의 차이가 분명한 氣虛, 血虛 병태 동물모델을 유발하고자 하였다. 이와 같이 氣虛, 血虛 병태 동물모델을 유발하여 활성산소 및 항산화력을 측정하였다.
- 활성산소와 항산화력은 노화와 관련한 측정지표이다. 본 연구는 자연스러운 노화과정을 겪고 있는 동물모델을 통한 측정이 아닌, 인위적으로 氣虛, 血虛를 유발한 동물모델을 가지고 측정을 하였다.
- 본 연구에서 氣虛 동물모델로 신14) 등의 연구에서와 같이 섭식량 제한 모델을 채택하였고, 血虛동물모델도 신 등의 연구에서와 같이 꼬리를 75%에탄올 솜으로 문질러 혈관을 확장시킨 후 꼬리 첨단에서 出血 시키는 실혈법 모델을 채택하였다. 단, 실험 시작일부터 종료일까지 사료 양을 개체당 1일 12g으로 제한하여 신14) 등의 연구에서 1일 75g과 차이를 두었고, 출혈양은 총 8회 0.
- 본 연구에서는 SD Rat에서 氣虛, 血虛 動物模型을 실험적으로 유발하고, 각 변증 모형들의 활성 산소, 항산화력을 측정하여 다음과 같은 결론을 얻었다.
- 본 연구에서는 섭식량 제한을 통해 氣虛 모델14) 을 유발하고 인위적으로 실혈시켜 血虛 모델14)을 유발하여 활성산소 및 항산화력을 측정하였다. 이러한 음식섭취 부족 및 실혈로 인해 유발된 氣虛, 血虛 모델 외에도 다양한 stress, 疲勞 등 다양한 형식으로 유발 된 氣虛, 血虛 모델 및 氣虛와 血虛를 동반하는 경우나 瘀血과 같은 다른 病理를 동반하는 경우 등 보다 다양하고 세분화된 모델을 통한 활성산소 및 항산화력에 대한 연구가 필요할 것으로 사료된다.
- 4㎖ 출혈시켰다. 실험 1, 4, 8, 10, 12, 14, 16, 19일째 시행하여 총 8 회 시행하였다.
- 실험 시작일부터 종료일까지 20일간 사료의 양을 체중 1㎏당 1일 12g으로 제한하여 유지하였다.
- 각 군의 실험 종료일에 채혈하였다. 실험동물을 ethyl ether로 마취한 다음 꼬리채혈법으로 1㎖의 혈액을 채취하여 6㎕를 EDTA 처리 후 사용하였다. 활성산소와 항산화력의 측정은 Callegari S.
- 3㎖/회와 차이를 두어 이전 신14) 등의 연구보다 정상군과의 차이가 분명한 氣虛, 血虛 병태 동물모델을 유발하고자 하였다. 이와 같이 氣虛, 血虛 병태 동물모델을 유발하여 활성산소 및 항산화력을 측정하였다.
- 실험동물을 ethyl ether로 마취한 다음 꼬리채혈법으로 1㎖의 혈액을 채취하여 6㎕를 EDTA 처리 후 사용하였다. 활성산소와 항산화력의 측정은 Callegari S.P.A.(Parma Italy)에서 만든 FORM OX로 측정 하였다.
대상 데이터
- 성숙한 체중 200g 내외의 Sprague-Dawley(SD) 계 Rat (생후 6주령, 암수 구분 없음) 9마리를 사료(삼양사, 서울)와 물을 충분히 공급하면서 1 cage 당 한 마리씩 분리하여 실험실 환경에 14일간 적응시킨 후, 무작위법으로 3개 군(正常群, 氣虛群, 血虛群)으로 구분하여 각각 3마리씩 총 9마리를 실험에 사용하였다. 실험동물은 온도(20-25℃)와 습도(40-45%)가 조절된 사육실에서 사육하였고, 사료는 氣虛群을 제외한 군에서는 자유롭게 공급하였으며, 물은 수돗물을 자유롭게 공급하였다.
- 성숙한 체중 200g 내외의 Sprague-Dawley(SD) 계 Rat (생후 6주령, 암수 구분 없음) 9마리를 사료(삼양사, 서울)와 물을 충분히 공급하면서 1 cage 당 한 마리씩 분리하여 실험실 환경에 14일간 적응시킨 후, 무작위법으로 3개 군(正常群, 氣虛群, 血虛群)으로 구분하여 각각 3마리씩 총 9마리를 실험에 사용하였다. 실험동물은 온도(20-25℃)와 습도(40-45%)가 조절된 사육실에서 사육하였고, 사료는 氣虛群을 제외한 군에서는 자유롭게 공급하였으며, 물은 수돗물을 자유롭게 공급하였다.
데이터처리
- 모든 측정값은 평균값±표준편차(Mean±S.D)로 나타내었으며 data 분석은 세 군 간의 비모수적 비교 방법인 Kruskal-Wallis 검정을 사용하였고 사후분석은 Mann-Whitney 검정을 사용하였다.
성능/효과
- 1. 활성산소 측정결과 正常群에 비해 氣虛群과 血虛群에서 활성산소가 유의하게 높게 나타났다. 氣虛群과 血虛群 사이에는 유의한 차이가 없었다.
- 2. 항산화력 측정결과 氣虛群과 血虛群에서 正常群보다 높은 항산화력을 보였으나 통계적으로는 유의하지 않았다.
- 正常群에 비해 氣虛群과 血虛群에서 활성산소가 유의하게 높게 나타났다. 氣虛群과 血虛群 사이에는 유의한 차이가 없었다(TableⅠ).
- 항산화물질인 Vit E, Vit C도 노인의 표피와 진피에서 모두 감소되어 있었다. 둘째, 활성산소는 세포 구성 성분을 산화시킨다. 피부노화의 주원인인 1O2(혹은․OH)는 피부세포막의 지질 또는 세포구성 성분들의 자동 산화반응을 개시시킨다.
- 단백질, DNA도 산화에 의한 손상을 받는데 DNA 손상은 피부노화의 기전을 이해하는데 매우 중요하다31). 셋째, 산소라디칼은 결합조직을 손상시킨다. 특히 광노화에서 결합조직을 파괴시킬 수 있는 MMPs(matrix metaloproteinases)의 생성에 활성산소종이 관여한다는 사실이 밝혀지면서32) 이에 대한 관심이 급증하게 되었다.
- 실험결과 활성산소는 正常群에 비해 氣虛群과血虛群에서 유의하게 높게 나타났고, 항산화력은氣虛群과 血虛群에서 正常群보다 높은 항산화력을 보였으나 통계적으로는 유의하지 않았다.
- 이상의 결과로 볼 때 한의학적 虛勞상태로 볼 수 있는 血虛群, 氣虛群에서 활성산소가 유의하게증가하였으나, 늘어난 활성산소를 처리할 만한 항산화력은 이를 따라가지 못한다고 볼 수 있다. 氣虛, 血虛의 상태가 해결되지 않고 지속이 된다면 축적된 활성산소로 인해 虛勞에서 老化의 과정으로 이어질 수 있다고 볼 수 있다.
후속연구
- 을 유발하여 활성산소 및 항산화력을 측정하였다. 이러한 음식섭취 부족 및 실혈로 인해 유발된 氣虛, 血虛 모델 외에도 다양한 stress, 疲勞 등 다양한 형식으로 유발 된 氣虛, 血虛 모델 및 氣虛와 血虛를 동반하는 경우나 瘀血과 같은 다른 病理를 동반하는 경우 등 보다 다양하고 세분화된 모델을 통한 활성산소 및 항산화력에 대한 연구가 필요할 것으로 사료된다.
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