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문제 정의
- 따라서 CCl4는 radicals를 생성하고 그것으로 인하여 간세포의 파괴로 이어지며 이것은 간 독성도와 비례하여 증가하는 것으로 파악된다. 이러한 기 전들로 인해 까마중 추출물이 간 보호 효과를 얼마만큼이나 나타낼 수 있는지 알아보기 위해 이 실험을 하였다.
- 본 연구에서는 LPS를 투여시켜 간염증을 유발한 흰쥐의 간에서 까마 중 부위별 추출물의 간 손상보호효과를알고자 하기 위한 것이며, superoxide dismutase(SOD), catalase(CAT), glutathione peroxidase(GPx)와 같은 항산화 효소의 측정을 통하여 이물질을 천연 한방차로 개발하기 위한 기초자료를 얻고자 하였다.
- 위의 결과로 보아 LPS의 독성은 간 독성 모델로 써 쓰여질 수 있을 것으로 판단된다. 본 논문에서는 LPS에 의한 간 손상에서 까마중의 효과를 관찰하였다. 앞으로 까마중으로 조직 실험과 세포실험을 통하여 까마중 추출물의 간 보호 효과 에 대해 더 연구할 것이다.
제안 방법
- 실험동물은 체중 160~ 170g 내외의 생후 7주된 암컷 흰쥐(Sprague-Dawley)를 (주)샘타코에서 제공받았고 7일 동안 환경에 적응시켰다. 실험동물은 난 괴 법 (randomized complete block design)에 의해 7마리씩 5군으로 나뉘어 분리시키고, 고형사료와 물을 자유롭게 섭취하도록 하였으며, Table 1과 같이 군으로 나누어 다음과 같이 물질을 투여하였다. Auto Control System기기인 SS-2000을 사용하여 22 ± FC의 온도와 60 ±5% 상대습도로 유지시켰다.
- 실험동물은 난 괴 법 (randomized complete block design)에 의해 7마리씩 5군으로 나뉘어 분리시키고, 고형사료와 물을 자유롭게 섭취하도록 하였으며, Table 1과 같이 군으로 나누어 다음과 같이 물질을 투여하였다. Auto Control System기기인 SS-2000을 사용하여 22 ± FC의 온도와 60 ±5% 상대습도로 유지시켰다. 정상군(NOR; normal group)은 21일 동안 0.
- Auto Control System기기인 SS-2000을 사용하여 22 ± FC의 온도와 60 ±5% 상대습도로 유지시켰다. 정상군(NOR; normal group)은 21일 동안 0.9% saline의 용량으로 1.5ml/kg을 투여하였다. 대조군(CON; LPS-treated group)의 경우 20일 동안 1.
- 5ml/kg의 용량으로 매일 투여하는데 이 농도를 선택한 이유는 실험실에서 여러 농도로 실험해 본 결과 저농도로 하였을 경우 효과가 제일 크기 때문이다. 21일째 되는 날 LPS를 5 ㎎/㎏의 농도로 만들어 1 ml/kg의 용량으로 복강 내로 투여하였다. 대조군과 시료군에서 실험동물의 지질대 사 이상, 산화적 스트레스, 간 손상을 유발시켰다.
- 21일째 되는 날 LPS를 5 ㎎/㎏의 농도로 만들어 1 ml/kg의 용량으로 복강 내로 투여하였다. 대조군과 시료군에서 실험동물의 지질대 사 이상, 산화적 스트레스, 간 손상을 유발시켰다. LPS를 투여하고 절식시킨 뒤 4시간 후에 ether로 마취하고 희생시켜서 혈액을 채취하고 간을 적출하여 실험하였다.
- 대조군과 시료군에서 실험동물의 지질대 사 이상, 산화적 스트레스, 간 손상을 유발시켰다. LPS를 투여하고 절식시킨 뒤 4시간 후에 ether로 마취하고 희생시켜서 혈액을 채취하고 간을 적출하여 실험하였다.
- 혈청중의 GOT, GPT의 levele FUJI DRI-CHEM CLINICAL CHEMISTRY CHEMSTRY ANALYZER (FUJI DRI-CHEM 3500, FUJIFILM)로 측정하였다.
- 0)를 첨가하고 균질화기기를 이용하여 간을 균질화하였다. 측정하기에 앞서 효소의 효율에 따라 결과가 달라지므로 희석 배율을 정하여 선측정 후 일정희석배율에서 가장 좋은 효과가 보이는 희석배율을 선택하여 측정하였다. 1.
- 까마중을 전체, 잎과 줄기로 나누어 각 50 g을 취하여 증류수 100 l 넣고 60℃에서 8시간 환류 냉각한 뒤 여과하여 추출액을 동결건조하여 실험시료로 사용하였다.
대상 데이터
- 본 실험에 사용한 까마중은 부산 구포시장 내 약재상으로부터 구입하였다.
- 실험동물은 체중 160~ 170g 내외의 생후 7주된 암컷 흰쥐(Sprague-Dawley)를 (주)샘타코에서 제공받았고 7일 동안 환경에 적응시켰다. 실험동물은 난 괴 법 (randomized complete block design)에 의해 7마리씩 5군으로 나뉘어 분리시키고, 고형사료와 물을 자유롭게 섭취하도록 하였으며, Table 1과 같이 군으로 나누어 다음과 같이 물질을 투여하였다.
- 2 mM cytochrom C 150)11 를 혼합하여 준비한 후 mitochondria 분획 8μ1 넣고, xanthine oxidase (XOD)를 lOptl 투여하여 혼합한 후 Elisa를 이용하여 550 nm에서 의 흡광도 변화를 2분간 측정하였다. 효소의 활성도는 표준액으로 Sigma사의 superoxide dismutase standard 를 사용하여 측정하였다.
데이터처리
- 본 실험에 대한 실험 결과는 평균 차와 표준편차로 나타내었고, 통계적 분석은 SPSS를 이용한 one-way ANOVA 로 검정하였고, 유의성은 p<0.05 로 하였다.
이론/모형
- 단백질의 정량은 L* owry >등의 방법에 의해서 750 nm 에서 흡광도를 측정하고 표준단백 시료를 bovine serum albumin (BSA)로 정량하였다.
- SOD 효소 활성 측정eBeauchamp와 Fridovich법 '이의 변형 된 방법에 따라 0.2 M K- Potassium phosphate buffer (100 mM K2HPO4, 100 mM KH2PO4, 200 mM KCl, 10 mM EDTA, pH 7.4)를 672 μ1, 1 mM xanthine 100 μ 1, 1% deoxycholrate (DOC) 30 |il, 1.5 mM potassium cyanate (KCN) 30 |il, 0.2 mM cytochrom C 150)11 를 혼합하여 준비한 후 mitochondria 분획 8μ1 넣고, xanthine oxidase (XOD)를 lOptl 투여하여 혼합한 후 Elisa를 이용하여 550 nm에서 의 흡광도 변화를 2분간 측정하였다. 효소의 활성도는 표준액으로 Sigma사의 superoxide dismutase standard 를 사용하여 측정하였다.
- CAT 효소 활성 측정은 Aebi법으로 측정하였다20). 간 조직의 5배 되는 PBS (Phosphate Buffer 용액 0.
- GPX활성의 측정은 spectrometric 측정법을 이용한 Lawrenc긔)의 방법을 이용하여 시행하였다. 간 조직의 4배 되는 PBS (0.
성능/효과
- SOD는 활성산소(・O2)를 보다 반응성이 약한 H2O2 로 전환시키는 효소로 생체 내 해독체계중 하나이다 23). 간 조직에서의 SOD 활성 정도는 LPS를 투여한 대조군이 정상군에 비해서 약 1.5배 정도로 낮게 나타났고 대조군에 비해 SNT군 65%, SNL군 33.66%, SNR군 17.50%의 상승효과를 나타내어 정상군으로 회복됨을 보였다. SOD효소 활성에 대한 효과는 까마중의 전체 혼합물에서 가장 큰 효과를 나타내었다.
- SOD효소 활성에 대한 효과는 까마중의 전체 혼합물에서 가장 큰 효과를 나타내었다. 대조군에서 LPS의 투여로 간염증을 유발하여 SOD 활성 정도가 감소한 것으로 나타났고 대조군보다 시료군이 SOD 활성 정도가 증가한 것으로 보아 활성산소의 생성을 억제하여 손상된 간 조직의 기능을 회복시킨 것으로 사료된다.
- 2 Catalase는 세포 내에서 생성된 과산화수소를 소거하여 세포 내 peroxidesomes에 주로 분포되어 있고 HQz농도가 높을 때 주로 작용한다25). catalase 활성 정도는 LPS를 투여한 대조군이 정상군에 비해서 약 3.1배 정도로 낮게 나타났고 대조군에 비해 SNR군 61.58%, SNT군 42.09%, SNL군 14.88%의 상승효과를 나타내어 정상군으로 회복됨을 보였다. catalase효소활성에 대한 효과는 SOD 의 효과와는 달리 까마중의 뿌리에서 가장 큰 효과를 보였다.
- 88%의 상승효과를 나타내어 정상군으로 회복됨을 보였다. catalase효소활성에 대한 효과는 SOD 의 효과와는 달리 까마중의 뿌리에서 가장 큰 효과를 보였다. LPS가 간염증을 유발시켜 catalase함량이 감소된 것으로 사료되어지며 대조군보다 시료군이 catalase가 증가된 것은 활성산소를 제거함으로써 생체 내 대사과정에서 생성된 유독 한 과산화물로부터 생체조직을 보호하여 손상된 간 조직의 기능을 회복시킨 것으로 사료된다.
- 그러므로 GSH와 GSSG는 체내에 얼마만큼의 산화적 손상이 있었는지 의 척도가 될 수 있다26). GPx활성정도는 LPS 투여로 대조군이 정상군에 비해서 약 2배 정도로 낮게 나타났고, 대조군에 비해 SNR군 93.75%, SNT군 72.29%, SNL군 38.10%의 상승효과를 나타내어 정상군으로 회복됨을 보였다. GPx또한 catalase와 같이 뿌리에서 가장 큰 효과를 나타내었다.
- GPx또한 catalase와 같이 뿌리에서 가장 큰 효과를 나타내었다. LPS가 간염증을 유발하여 GPx함량이 감소된 것으로 나 다났고, 대조군보다 시료군이 GPx 활성 정도가 높게 나타난 것으로 보아 활성산소에 대한 보호 효과를 나타내어는 것으로 사료된다.
- 28). GOT level에 있어서 LPS를 투여한 대조군이 정상군에 비해 약 0.4배 정도 증가하였으며 대조군에 비해 SNT 57.25%, SNL 19.50%, SNR 65.56%의 상승 효과를 보였다. GPT 역시 정상군에 비해 대 조군에서 level 이 약 0.
- 56%의 상승 효과를 보였다. GPT 역시 정상군에 비해 대 조군에서 level 이 약 0.2배 증가하고 대조군에 비해 SNR군 93.18%, SNT 군 90%, SNL군 80%의 상승효과를 나타내어 정상군으로 회복됨을 보였다. GOT의 효소 활성은 까마중의 뿌리에서 효과가 더 높았고, GPT는 까마중의 전체 추출물에서 더 좋은 효과를 보였다.
- 18%, SNT 군 90%, SNL군 80%의 상승효과를 나타내어 정상군으로 회복됨을 보였다. GOT의 효소 활성은 까마중의 뿌리에서 효과가 더 높았고, GPT는 까마중의 전체 추출물에서 더 좋은 효과를 보였다. LPS로 대조군의 혈청 중 GOT, GPT level이 증가한 것으로 보아 LPS로 간에 염증을 유발하여 간세포의 변성과 괴성을 유발한 것이라고 사료된다.
- GOT의 효소 활성은 까마중의 뿌리에서 효과가 더 높았고, GPT는 까마중의 전체 추출물에서 더 좋은 효과를 보였다. LPS로 대조군의 혈청 중 GOT, GPT level이 증가한 것으로 보아 LPS로 간에 염증을 유발하여 간세포의 변성과 괴성을 유발한 것이라고 사료된다. LPS 로 대조군의 혈청 중 GOT, GPT level이 증가한 것으로 보아 LPS로 간에 염증을 유발하여 간세포의 변성과 괴성을 유발한 것이라고 사료된다.
- GOT의 효소 활성은 까마중의 뿌리에서 효과가 더 높았고, GPT는 까마중의 전체 추출물에서 더 좋은 효과를 보였다. LPS로 대조군의 혈청 중 GOT, GPT level이 증가한 것으로 보아 LPS로 간에 염증을 유발하여 간세포의 변성과 괴성을 유발한 것이라고 사료된다. LPS 로 대조군의 혈청 중 GOT, GPT level이 증가한 것으로 보아 LPS로 간에 염증을 유발하여 간세포의 변성과 괴성을 유발한 것이라고 사료된다.
- 본 연구에서 LPS로 유도된 간독성에서 까마중 추출물이 보호효과를 가진다고 사료되어진다. ccl에 의한 간 손 상 모델에서 까마중의 보효효과가 알려져 있으며, CC14에 의한 간손상기전은 앞서서론부분에서 설명한 바 있다.
- ccl에 의한 간 손 상 모델에서 까마중의 보효효과가 알려져 있으며, CC14에 의한 간손상기전은 앞서서론부분에서 설명한 바 있다. CCL로 간 독성이 유발되는 것과 같이 LPS로 인한 염증으로 간 독성이 일어나는 것을 본 연구에서 확인할 수 있었다. 이것은 Lin 연구에 29)서도 독성기전이 ROS에 의한 것이기 때문으로 생각되어진다고 하였다.
후속연구
- 이것은 Lin 연구에 29)서도 독성기전이 ROS에 의한 것이기 때문으로 생각되어진다고 하였다. 위의 결과로 보아 LPS의 독성은 간 독성 모델로 써 쓰여질 수 있을 것으로 판단된다. 본 논문에서는 LPS에 의한 간 손상에서 까마중의 효과를 관찰하였다.
- 본 논문에서는 LPS에 의한 간 손상에서 까마중의 효과를 관찰하였다. 앞으로 까마중으로 조직 실험과 세포실험을 통하여 까마중 추출물의 간 보호 효과 에 대해 더 연구할 것이다.
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