[논문]대표적인 보음지제(補陰之劑)의 면역 활성화 비교 연구 - 육미지황탕, 자음강화탕, 쌍화탕 -

정다영; 하혜경; 이호영; 이진아; 이준경; 황대선; 신현규

대표적인 보음지제(補陰之劑)의 면역 활성화 비교 연구 - 육미지황탕, 자음강화탕, 쌍화탕 -
Stimulation of the Immune Response by Yin-Tonifying Formula 원문보기

大韓韓醫學會誌 = Journal of Korean Oriental Medicine, v.31 no.5, 2010년, pp.112 - 123

정다영 (한국한의학연구원 한약EBM연구센터) , 하혜경 (한국한의학연구원 한약EBM연구센터) , 이호영 (한국한의학연구원 한약EBM연구센터) , 이진아 (한국한의학연구원 한약EBM연구센터) , 이준경 (한국한의학연구원 한약EBM연구센터) , 황대선 (한국한의학연구원 한약EBM연구센터) , 신현규 (한국한의학연구원 한약EBM연구센터)

Abstract ▼ AI-Helper

Objectives: Three yin-tonifying formulae (Ssanghwa-tang, Yukmijihwang-tang and Jaeumganghwa-tang) were applied to investigate their immunological activities on antigen (Ag)-specific or Ag-non-specific immune responses in the murine macrophage cell line (RAW 264.7) and in ovalbumin (OVA)-immunized mice. Methods: This study was carried out in nitricoxide (NO) synthesis in RAW 264.7 cells and cellular proliferation in mouse splenocytes in association with three herbal formulas. C57BL/6 mice were immunized intraperitoneally with OVA/aluminum ($100\;{\mu}g/200\;{\mu}g$/mouse) on days 1, 8, and 15. Three herbal formulas were administrated to mice orally for 3 weeks from day 1. On day 22, OVA-, lipopolysaccharide (LPS)-, and concanavalin A (Con A)-stimulated splenocyte proliferation and antibodies (OVA-specific antibodies of the IgG, IgG1, and total IgM classes) in plasma were measured. Results: All three yin-tonifying formulas significantly enhanced cellular proliferation by LPS and Con A in splenocytes from OVA-immunized mice (p<0.001). Also, these herbal formulas all significantly enhanced plasma OVA-specific IgG, IgG1, and total IgM levels compared with the OVA/Alum group. Conclusion: These results suggested that the three yin-tonifying formulae could be used as stimulators of immune response.

주제어

AI 본문요약
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문제 정의

본 연구에서는 쌍화탕, 육미지황탕, 자음강화탕 등 3종의 대표적인 補陰之劑가 대식세포와 비장세포의 활성화 및 생체 내에서 항체 생성과 관련된 면역 활성 반응에 어떤 영향을 미치는지 비교 연구하였다.
자음강화탕은 염증성 세포활성물질들의 분비를 억제하는 효과, 해열, 진통, 항경련작용의 효과 등이 보고되었다^10,11). 본 연구에서는 이들 3종 처방들이 인체 방어에 가장 기본적인 면역 활성 검증을 위하여 대식세포 및 비장세포의 증식 효과, 면역글로불린의 생성량 변화를 검색하여, 대표적인 3종의 補陰之劑 3종 처방의 면역반응에 대한 차이를 비교하고자 하였다.
이 중 체내 陰分이 衰하여 陰虛가 발생하게 되면 肝腎의 陰分이 부족하여 血, 津液 등이 우리 몸을 충분히 滋養하지 못하게 되고, 이로 인하여 陽分을 제약하지 못하여 虛陽이 盛하게 된다. 이에 陰分의 근본이라고 할 수 있는 腎陰不足을 補할 수 있는 대표적인 처방인 육미지황탕과 陰虛로 인해 발생한 虛熱에 陰分을 滋養하여 熱을 내리는 자음강화탕, 陰血과 氣分이 소모된 증상에 사용할 수 있는 쌍화탕 등 補陰의 성격을 지닌 3가지 처방을 선정하여 이 처방들의 면역 활성을 확인해 보고자 하였다.

제안 방법

대조군과 OVA/Alum군은 증류수를, 처방 투여군은 각 처방 추출물을 1g/kg/day 용량으로 OVA 감작과 동시에 21일간 투여 하였다. 22일에 엔토발 (pentobarbital, 한림제약, 용인, 150 ㎍/mouse)을 복강 투여한 후 마취하에 복강 절개하여 후대정맥에서 채혈한 후 비장을 적출하고 방혈치사하였다. 채혈된 혈액은 전혈구수 측정 후 원심분리하여 혈장을 분리하고 다음 실험시까지 -80°C에 보관하였다.
적출한 비장에서 앞에서와 같은 방법으로 비장세포를 분리하여 96-well plate에 분주한 다음 대조군, 항원으로 사용한 OVA (10 ㎍/mL), 또는 Con A (4 ㎍/mL) 및 LPS (2 ㎍/mL)를 각각 첨가하였다. 2일 간 배양한 후 CCK-8 kit를 사용하여 세포 증식능을 검색하는 방법으로 처방 투여에 대한 미토겐 효과(mitogen effect)를 검색하였다.
3,3’,5,5’-Tetramethyl-benzidine (TMB)용액을 100 ㎕/well로 가하여 빛을 차단하고 실온에서 5분간 반응시킨 후 2 M H2SO4를 100 ㎕/well로 가하여 반응을 종결시키고 450 nm에서 흡광도를 측정 하였다.
3종 처방이 생체내에서 면역 활성화에 미치는 영향을 검색하기 위하여 처방 추출물을 투여한 생쥐의 비장세포를 분리하여 항원으로 사용한 OVA, B cell mitogen인 LPS와 T cell mitogen인 Con A에 대한 미토겐 효과를 검색하였다. 각 투여군에서 mitogen을 처리하지 않은 무처리군을 대조군으로 하여 이에 대한 세포 증식효과를 Fig.
2일간 배양한 후 tetrazolium salt인 CCK-8 kit (Cell Counting Kit-8, Dojindo Laboratories, Tokyo, Japan) solution을 첨가하여 4시간 더 배양한 다음 Benchmark-Plus microplate spectrophotometer (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA) 를 이용하여 450 nm에서 흡광도를 측정하였다. Control well의 흡광도에 대한 약물첨가 well의 흡광도의 비를 %로 계산하였고 (대조군 100% 기준), 여러 well의 평균값을 사용하였다.
2일간 배양한 후 CCK-8 kit solution을 첨가하여 4시간 더 배양한 다음 450 nm에서 흡광도를 측정하였다. Control well의 흡광도에 대한 약물첨가 well의 흡광도의 비를 %로 계산하였고, 여러 well의 평균값을 사용하였다.
양성대조군으로 LPS를 농도별 (0, 1, 10, 1000 ng/mL)로 처리하였으며 18 시간 배양 후 상층액을 수집하여 NO 생성량을 측정하였다. NO 생성량은 Griess reagent (Promega, WI, U.S.A)를 이용하여 nitrite 양을 측정하여 계산하였다.
RAW 264.7 세포를 48-well plate에 2.5×105 cells /well로 분주한 후 12시간 배양하여 안정화 시키고 이들 처방의 추출물을 독성이 없는 범위 내에서 농도별 (2-200 ㎍/mL)로 처리하였다.
補陰之劑 처방들이 대식세포주의 증식에 미치는 효과를 검색하기 위하여 murine macrophage cell line인 RAW 264.7세포를 96-well plate에 3×103 cells/well로 분주하고 약재 추출물을 phosphate buffered saline (PBS, pH 7.4, Gibco BRL. NY, U.S.A.)에 용해하여 농도별로 첨가하였다.
補陰之劑 처방이 비장세포 증식에 미치는 효과를 검색하기 위하여 분리 배양한 비장 세포를 96-well plate에 5×105 cells/well로 분주하고 약재 추출물을 PBS에 용해하여 농도별로 첨가하였다.
6)에 1:100 으로 희석하여 100 ㎕/well씩 가한 후 4°C에서 24시간 반응시켜 Ab를 부착시켰다. 각각 wash buffer (50 mM Tris, 0.14 M NaCl, 0.05% Tween 20, pH 8.0)로 3번 세척한 후 blocking buffer (50 mM Tris, 0.14 M NaCl, 1% BSA, pH 8.0)를 200 ㎕/well씩 첨가하여 상온에서 30분간 방치하여 비특이적인 결합부위를 차단하였다. Wash buffer로 세척한 후 혈장을 1:1000 (OVA-specific IgG, OVA-specificIgG1), 1:5 (OVA-specific IgG2a) 또는 1:10,000 (total IgM)으로 희석한 후 100 ㎕/well씩 가하고 상온에서 1시간 방치하였다.
대식세포는 1차적인 면역 반응과 관련되므로 補陰之劑 처방이 대식세포주인 RAW 264.7의 증식에 미치는 영향을 검색한 결과 쌍화탕, 육미지황탕, 자음강화탕은 200 ㎍/mL이상의 농도에서 세포독성을 나타냈으므로 (data not shown) 이후의 RAW 264.7 세포를 이용한 효능 검색에서 200 ㎍/mL 이하의 농도를 사용하였다.
항원으로 OVA/Alum은 생쥐 당 100 ㎍/200 ㎍/100 μ L 용량을 1일, 8일, 15일에 복강투여하여 항체생성을 유도하였으며 대조군은 동일량의 주사용 생리식염수를 복강 투여하였다. 대조군과 OVA/Alum군은 증류수를, 처방 투여군은 각 처방 추출물을 1g/kg/day 용량으로 OVA 감작과 동시에 21일간 투여 하였다. 22일에 엔토발 (pentobarbital, 한림제약, 용인, 150 ㎍/mouse)을 복강 투여한 후 마취하에 복강 절개하여 후대정맥에서 채혈한 후 비장을 적출하고 방혈치사하였다.
채혈된 혈액은 전혈구수 측정 후 원심분리하여 혈장을 분리하고 다음 실험시까지 -80°C에 보관하였다. 동물실험은 쌍화탕과 육미지황탕, 자음강화탕으로 나누어 진행하였다.
쌍화탕과 자음강화탕은 유의적인 비장세포 증식 효과를 나타냈다. 비장세포 증식이 Th1 및 Th2 세포 중 어느 세포에 기인된 것인가를 확인^22,23)하기 위해 Th1 세포에서 분비되는 cytokine인 IL-2와 Th2 세포에서 분비되는 IL-4 level을 측정하였다^24,25). IL-2는 CD4 T cell에 의해 생산되며, natural killer (NK) cell, lymphokine activated killer (LAK) cell, B cell의 성장을 촉진시키는 것으로 알려져 있고, IL-4는 B cell 성장인자로서 T 림프구, 비만세포, 호염기성세포에서 생성되며 B cell 증식 및 분화, T cell 활성의 조절을 하는 것으로 알려져 있다²⁶⁾.
비장세포에서의 cytokine 분비량을 측정하기 위하여 48-well plate에 2×106 cells/well로 분주한 후 12시간 배양하여 안정화 시키고 3종 처방 추출물을 독성이 없는 범위 내에서 농도별 (100, 500 ㎍/mL)로 처리하였다.
생체내 항체 생성량을 측정하기 위하여 감작항원으로 사용한 OVA에 대한 특이적 (OVA-specific) 또는 비특이적 (total) 면역 글로불린의 양을 측정하였다. 생쥐 OVA-specific IgG, OVA-specific IgG1, OVA-specific IgG2a, total IgM level은 ELISA kit(Bethyl Laboratory, Inc., Texas, USA)를 사용하여 측정하였다. OVA-specific IgG, IgG1 및 IgG2a을 검색하기 위하여 microtiter plate에 OVA (10 ㎍/mL in carbonate buffer, pH 9.
생체 내에서 면역반응에 미치는 영향을 확인하고자 OVA를 외부 항원으로 사용하여 감작시킨 생쥐에 3종의 처방 추출물을 투여하였다. 각 처방의 1첩 용량은 쌍화탕 37.
생체내 항체 생성량을 측정하기 위하여 감작항원으로 사용한 OVA에 대한 특이적 (OVA-specific) 또는 비특이적 (total) 면역 글로불린의 양을 측정하였다. 생쥐 OVA-specific IgG, OVA-specific IgG1, OVA-specific IgG2a, total IgM level은 ELISA kit(Bethyl Laboratory, Inc.
Wash buffer로 세척한 후 혈장을 1:1000 (OVA-specific IgG, OVA-specificIgG1), 1:5 (OVA-specific IgG2a) 또는 1:10,000 (total IgM)으로 희석한 후 100 ㎕/well씩 가하고 상온에서 1시간 방치하였다. 세척 후 horseradish peroxidase (HRP)가 결합된 goat anti-mouse IgG, IgG1, IgG2a 또는 IgM을 1:100,000으로 희석하여 100 ㎕/well씩 가하고 상온에서 1시간 방치한 후 세척하였다. 3,3’,5,5’-Tetramethyl-benzidine (TMB)용액을 100 ㎕/well로 가하여 빛을 차단하고 실온에서 5분간 반응시킨 후 2 M H₂SO₄를 100 ㎕/well로 가하여 반응을 종결시키고 450 nm에서 흡광도를 측정 하였다.
양성대조군으로 Con A를 처리하였으며 24 시간 배양 후 상층액을 수집하여 IL-2, IL-4 level을 Duoset mIL-2 및 mIL-4 ELISA kit (R&D systems, MN, U.S.A.)를 이용하여 측정하였다.
양성대조군으로 LPS를 농도별 (0, 1, 10, 1000 ng/mL)로 처리하였으며 18 시간 배양 후 상층액을 수집하여 NO 생성량을 측정하였다.
PALS의 바깥쪽에 위치한 marginal zone은 primary lymphoid follicle로 형성되어 있으며 B 세포가 많이 분포되어 있어 면역력을 검색하는데 주로 사용된다^20,21). 이에 3종의 補陰之劑에 대한 비장세포 증식효과를 검색하였고 T 세포의 활성화를 비교하고자 T 세포 mitogen인 Con A를 양성 대조군으로 사용하여 활성을 비교하였다. 쌍화탕과 자음강화탕은 유의적인 비장세포 증식 효과를 나타냈다.
적출한 비장에서 앞에서와 같은 방법으로 비장세포를 분리하여 96-well plate에 분주한 다음 대조군, 항원으로 사용한 OVA (10 ㎍/mL), 또는 Con A (4 ㎍/mL) 및 LPS (2 ㎍/mL)를 각각 첨가하였다. 2일 간 배양한 후 CCK-8 kit를 사용하여 세포 증식능을 검색하는 방법으로 처방 투여에 대한 미토겐 효과(mitogen effect)를 검색하였다.
적출한 비장을 HBSS (Hank’s Balanced Salt Solution, Sigma-Aldrich Co, MO, U.S.A.)로 세척하고 주사기를 이용하여 비장세포를 분리한 후 RBC lysing buffer (Sigma Chemical Co, MO, U.S.A.)로 적혈구를 제거하였다.
2 mg/kg으로 계산 된다. 체표면적 (body surface area) 등을 고려한 인체와 실험동물의 용량 비교²⁷⁾에 따르면 생쥐의 경우 인체 적용 용량의 12.5 배가 동등한 용량 (dose equivalent)이 되므로 본 연구에서 생쥐에 적용한 처방 추출물의 투여량은 1 g/kg으로 결정하였다. 각 처방 추출물 투여 후 비장세포의 미토겐 효과를 검색한 결과, 감작 항원으로 사용한 OVA, 각각 T 세포와 B 세포의 mitogen인 Con A와 LPS에 대해서 쌍화탕, 육미지황탕, 자음강화탕의 처방 모두 미토겐 효과를 상승시켜 비장내 T 세포와 B 세포를 매개로 하는 면역반응인 세포성 면역과 체액성 면역을 증가시키는 것으로 사료된다.
추출액은 270 mesh의 sieve를 사용하여 거르고 동결건조기(일신 동결건조기 PVTFD100R)를 사용하여 처방 추출물 분말을 얻었으며 수득율은 Table 1과 같다.
항원으로 OVA/Alum은 생쥐 당 100 ㎍/200 ㎍/100 μ L 용량을 1일, 8일, 15일에 복강투여하여 항체생성을 유도하였으며 대조군은 동일량의 주사용 생리식염수를 복강 투여하였다.

대상 데이터

10% FBS (Fetal Bovine Serum, Gibco BRL. NY, U.S.A.)와 100 U/mL penicillin 과 100 μg/mL streptomycin(Gibco BRL. NY, U.S.A.)을 함유하는 RPMI 1640 배지 (Gibco BRL. NY, U.S.A.)에 비장세포를 부유시켜 5% CO2, 37°C에서 배양하였다.
6주령의 수컷 ICR 생쥐 (오리엔트바이오, 성남)를 경추탈골하여 희생한 후 비장을 적출하였다. 적출한 비장을 HBSS (Hank’s Balanced Salt Solution, Sigma-Aldrich Co, MO, U.
7주령 (17∼21 g)의 수컷 C57BL/6 생쥐(오리엔트바이오, 성남)를 대조군, Ovalbumine (Thermo, IL, U.S.A.)/Aluminium (Sigma-Aldrich Co, MO, U.S.A.)/Saline (OVA/Alum군) 투여군, OVA/Alum 및 각 처방 추출물 투여군 (처방 투여군)으로 분리하여 1주일간 순화시킨 다음 실험에 사용하였다.
쌍화탕, 육미지황탕, 자음강화탕의 처방 구성 약재들은 (주)옴니허브 (Yeongcheon, Korea)와 (주)HMAX (Jecheon, Korea)에서 각각 구입하였다. 각각의 처방에 따른 구성비는 Table 1과 같다.
cells/well로 분주하고 약재 추출물을 PBS에 용해하여 농도별로 첨가하였다. 처방의 세포 증식 효과에 대한 비교물질로 T cell lymphocyte에 대한 mitogen인 Concanavalin A (Con A, 0.5 및 1㎍/mL)를 사용하였다. 2일간 배양한 후 CCK-8 kit solution을 첨가하여 4시간 더 배양한 다음 450 nm에서 흡광도를 측정하였다.

데이터처리

모든 측정 결과는 mean±SEM으로 나타냈으며 실험군 간의 차이는 Student’s t-test (Excel 2007 program)법으로 유의성을 검증하였다.

이론/모형

이들 처방 구성약재를 배합하고 10배의 물을 가한 후 100°C에서 2시간 동안 무압 환류 추출법 (추출기: 경서메디텍COSMOS660)을 이용하여 추출하였다.

성능/효과

1. 대식세포의 활성화 측면에서 쌍화탕과 자음강화탕은 대식세포 증식을 유발하였으나 3종의 처방 모두 NO 생성을 유발하지 않는 것으로 나타났다.
2. 비장세포의 직접적인 세포증식을 비교해보면 쌍화탕과 자음강화탕은 비장세포증식 효과를 나타냈다.
3. 비장세포의 IL-2 및 IL-4 분비 유발효과를 검색한 결과 3종 처방 모두 검출되지 않아 Th세포 관련 면역 반응은 비교할 수 없었다.
4. OVA로 감작된 생쥐의 비장세포 증식효과를 검색한 결과, B cell의 mitogen인 LPS와 T cell의 mitogen인 Con A에 대해 쌍화탕, 육미지황탕, 자음강화탕은 모두 유의성 있는 미토겐 효과를 나타냈다.
5. OVA로 감작된 생쥐의 혈청에서 혈중 OVAspecific IgG, OVAspecific IgG1 및 total IgM level을 측정한 결과 3종 처방 모두 항체 생성을 증가시키는 것으로 나타났다.
B cell mitogen인 LPS와 T cell mitogen인 Con A에 대해서 미토겐 효과를 검색한 결과, 3 종의 처방인 쌍화탕, 육미지황탕, 자음강화탕 투여군은 OVA/Alum군 보다 LPS 및 Con A에 대한 미토겐 효과를 증가시키는 것으로 나타났다 (각 p<0.001).
이런 과정을 개별형 전환(isotype switching)이라 한다. B 세포가 생산하는 항체 종류의 변화를 관찰하기 위해 혈장내 IgG subclass인 IgG1, IgG2a level을 검색한 결과, 3종의 처방 모두 일차적인 항체 반응에 관련된 IgM level을 상승시켰고, 그 후 항원에 대한 2차 항체 반응에서 중요한 부분을 차지하는 OVA-specific IgG 및 OVA-specific IgG1 level 또한 증가시키는 것으로 나타나 이들 대표적인 3종 의 補陰之劑는 모두 항원 특이적 면역 반응을 활성화 시키는 것으로 생각된다.
OVA 감작 생쥐에 처방 추출물을 투여한 결과 쌍화탕투여군은 OVA-specific IgG, IgG1 level이 각각 23.64±3.25 ㎍/mL (p<0.01), 144.18±19.92 ㎍/mL (p<0.01)로 나타났으며 OVA/Alum군과 비교하여 3.1배 및 3.2배 증가된 것으로 나타났다(Fig. 5-A).
육미지황탕은 대식세포의 증식과 NO 생성을 유발시키지 않았고, 또한 비장세포에 대한 직접적인 세포 증식 효과도 나타나지 않았다. OVA로 감작된 생쥐에 투여시 비장세포에서 Con A와 LPS에 대해 미토겐 효과를 상승시켰고 혈중 OVA-specific IgG, OVA-specific IgG1 및 total IgM level을 상승시키는 것으로 나타나 항원 비특이적 면역반응보다는 항원특이적 면역반응을 활성화시키는 것으로 판단된다. 자음강화탕은 대식세포의 증식을 유발 시켰으나 대식세포의 활성화 지표인 NO 생성을 유발하지 않았고, OVA로 감작된 생쥐에 투여하였을 때 비장세포에서 OVA, Con A 및 LPS에 대해 유의성 있는 미토겐 효과를 나타냈으며, 혈중 OVA-specific IgG, OVA-specific IgG1 및 total IgM level을 유의성 있게 증가시켰으므로 항원 비특이적 면역 반응보다는 항원 특이적 면역반응을 활성화 시키는 것으로 사료된다.
각 처방 추출물 투여 후 비장세포의 미토겐 효과를 검색한 결과, 감작 항원으로 사용한 OVA, 각각 T 세포와 B 세포의 mitogen인 Con A와 LPS에 대해서 쌍화탕, 육미지황탕, 자음강화탕의 처방 모두 미토겐 효과를 상승시켜 비장내 T 세포와 B 세포를 매개로 하는 면역반응인 세포성 면역과 체액성 면역을 증가시키는 것으로 사료된다.
대식세포의 활성화 지표인 NO 생성량을 측정한 결과, 무처리군 (대조군)의 배지 내 NO의 농도는 0.65±0.12 µM로 나타났고, 양성 대조군으로 사용한LPS (0.001-1 ㎍/mL)는 1 ㎍/mL에서 23.78±1.34 µM로 대조군의 36배 이상으로 NO 생성을 유발하는 것으로 나타났다 (p<0.001).
따라서 본 연구에 대한 결과로 3종의 대표적인 보음보제인 쌍화탕, 육미지황탕, 자음강화탕은 모두 면역 활성을 증가 시키는 효과가 있으나 세부적인 작용 시점은 처방별로 차이가 있는 것으로 판단된다.
본 실험결과를 처방별로 분류하면, 쌍화탕은 대식세포의 세포 증식을 시켰으나 NO 생성은 유발하지 않았고, OVA로 감작된 생쥐에 투여시 비장세포에서 Con A 및 LPS에 대해 미토겐 효과를 나타냈으며, 혈중 OVA-specific IgG, OVA-specific IgG1 및 total IgM level을 상승시키는 것으로 나타나 초기면역 반응인 항원 비특이적 면역반응 보다는 항원 특이적 면역반응을 활성화 시키는 것으로 판단된다. 육미지황탕은 대식세포의 증식과 NO 생성을 유발시키지 않았고, 또한 비장세포에 대한 직접적인 세포 증식 효과도 나타나지 않았다.
5-D). 본 연구에 사용한 3종의 補陰之劑처방은 모두 OVA-specific IgG, IgG1 및 total IgM level을 상승시켰다.
이와 같이 NO는 이중적 성질을 가지고 있어 대식세포의 면역반응 조절연구에 많이 이용되고 있다^17-19). 본 연구에서 선정된 처방 3종에 대해 NO 생성능을 검색한 결과 3종의 처방 모두 NO 생성을 유발하지 않는 것으로 보아 대식세포를 활성화로 인한 1차적인 면역기능 증진에는 영향을 미치지 않는 것으로 판단된다.
분리한 생쥐 비장세포에 처방 추출물을 처리하여 비장세포의 증식능을 검색한 결과, 양성대조군으로 사용한 Con A는 0.5 또는 1 ㎍/mL 처리시 각각 53.22±1.92, 44.7±3.07%로 40% 이상의 비장세포 증식효과를 나타냈다 (p<0.001).
쌍화탕은 2, 20, 200 ㎍/mL에서 대조군과 비교하여 53.08±1.37, 66.78±2.95, 35.97±1.84% (각 p<0.001)의 대식세포 증식효과를 나타냈고, 육미지황탕은 대조군과 차이가 없었으며, 자음강화탕은 2, 20, 200 ㎍/mL에서 대조군과 비교하여 12.03±0.70, 23.24±1.27, 18.01±2.56% (각 p<0.001)의 증식 효과를 나타냈다(Fig. 1).
쌍화탕은 62.5, 125, 250 ㎍/mL에서 11.14±4.79% (p<0.05), 14.33±3.00% (p<0.01), 13.62±4.12% (p<0.05)의 비장세포 증식능을 나타냈으나, 육미지황탕은 대조군과 차이가 없는 것으로 나타났다.
이상의 결과로 쌍화탕, 육미지황탕, 자음강화탕은 모두 대식세포 활성화 지표인 NO 생성을 유도하지 못하지만 항원특이적 면역반응을 활성화시키는 방향으로 면역반응을 활성화 시키는 것으로 판단된다.
이상의 결과를 종합하면 OVA/Alum군에서 OVA에 대한 비장세포 증식이 약 16% 증가되었고 3종 처방중 자음강화탕 투여군만 OVA/Alum군과 비교해서 유의적인 비장세포 증식 효과를 나태냈다(p<0.001).
자음강화탕은 대식세포의 증식을 유발 시켰으나 대식세포의 활성화 지표인 NO 생성을 유발하지 않았고, OVA로 감작된 생쥐에 투여하였을 때 비장세포에서 OVA, Con A 및 LPS에 대해 유의성 있는 미토겐 효과를 나타냈으며, 혈중 OVA-specific IgG, OVA-specific IgG1 및 total IgM level을 유의성 있게 증가시켰으므로 항원 비특이적 면역 반응보다는 항원 특이적 면역반응을 활성화 시키는 것으로 사료된다.
초기 면역반응에서 증가하는 혈중 total IgM을 정량한 결과 대조군과 OVA/Alum군에서 각각 228.02±24.33 ㎍/mL와 317.62±22.72 ㎍/mL으로 OVA 감작시 1.4배 증가되었고 쌍화탕투여군에서 496.60±76.78 ㎍/mL (p<0.05)로 OVA/Alum군과 비교하여 1.6배 상승한 것으로 나타났다(Fig. 5-C).

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	면역세포들에는 무엇이 있는가?	면역반응은 면역계가 이물질에 대하여 반응하는 현상으로 크게 체액성 면역반응과 세포성 면역반응으로 나눌 수 있으며, 혈액, 임파절, 비장 및 위장관 등 생체 여러 조직 및 기관에 면역기능을 수행하기 위해 많은 면역세포들이 존재한다. 면역에 관여하는 세포로는 T 세포, B 세포, 대식세포 및 NK 세포 등이 알려져 있다2,3). 대표적인 면역반응으로 대식세포에서의 nitric oxide(NO) 생성은 대식세포 활성화의 지표로 NO는 침입 한 병원체를 제거하고 기본적인 숙주 방어체계를 작동시키는 역할을 하며 특히 Th 세포의 분화단계 중 ThO 세포가 Thl 세포와 Th2 세포로 분화될 때, Thl 세포로의 분화를 돕는 작용을 하는 것으로 알려져 있다4,5).
	한의학에서 면역의 개념은 무엇인가?	한의학에서 면역의 개념은 邪氣는 인체의 내외 환경 중에서 질병을 일으키는 여러 종류의 인자를 총칭하고 眞氣 혹은 正氣는 생체의 정상적인 기능을 말한다1). 邪氣와 正氣가 충돌하게 되면 이로 인하여 扶正祛邪의 원칙에 따라 자체내의 正氣나 韓藥, 鍼, 灸등의 치료 수단을 통하여 正氣를 북돋아 건강을 유지하고 질병을 치료한다.
	邪氣와 正氣가 충돌하게 되면 어떤 치료 수단을 통하여 건강을 유지하고 질병을 치료하는가?	한의학에서 면역의 개념은 邪氣는 인체의 내외 환경 중에서 질병을 일으키는 여러 종류의 인자를 총칭하고 眞氣 혹은 正氣는 생체의 정상적인 기능을 말한다1). 邪氣와 正氣가 충돌하게 되면 이로 인하여 扶正祛邪의 원칙에 따라 자체내의 正氣나 韓藥, 鍼, 灸등의 치료 수단을 통하여 正氣를 북돋아 건강을 유지하고 질병을 치료한다. 이런 관점은 생체의 방어기능에 관계된 현대의학의 면역학적 개념과 많은 유사성을 가지고 있다고 할 수 있다.

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표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

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용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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