산양유의 체세포수는 측정방법에 따라 많은 차이가 보고되고 있으나 국제적인 표준방법으로 pyronin Y-methyl green stain에 의한 직접현미경법이 사용되고 있다. 8개 목장 총 48개 시료를 pyronin Y-methyl green stain에 의한 직접검경법, 국립축산과학원에서 보유중인 ADAM-SCC, 충청북도 축산위생연구소에서 보유중인 Somacount 500으로 측정하여 결과를 비교하였다. Pyronin Y-methyl green stain 측정시 전체 평균은 $7.3{\times}10^5$ cells/mL인 반면 ADAMSCC와 Somacaount 500은 각각 $4.9{\times}10^5$과 $11.6{\times}10^5$ cells/mL로 나타나 과소 또는 과대평가되는 결과를 보였다. 직접현미경법과 ADAM-SCC또는 Somacaount 500과의 상관계수는 각각 0.0332 또는 0.2285로 매우 낮으며 장비간의 상관계수도 0.1552로 매우 낮게 나타났다. 산양유의 체세 포수 저감을 위해서는 측정장비의 개발이 필요하며 장비를 표준화하기 위한 표준측정법으로 pyronin Y-methyl green stain의 채택이 필요하다.
산양유의 체세포수는 측정방법에 따라 많은 차이가 보고되고 있으나 국제적인 표준방법으로 pyronin Y-methyl green stain에 의한 직접현미경법이 사용되고 있다. 8개 목장 총 48개 시료를 pyronin Y-methyl green stain에 의한 직접검경법, 국립축산과학원에서 보유중인 ADAM-SCC, 충청북도 축산위생연구소에서 보유중인 Somacount 500으로 측정하여 결과를 비교하였다. Pyronin Y-methyl green stain 측정시 전체 평균은 $7.3{\times}10^5$ cells/mL인 반면 ADAMSCC와 Somacaount 500은 각각 $4.9{\times}10^5$과 $11.6{\times}10^5$ cells/mL로 나타나 과소 또는 과대평가되는 결과를 보였다. 직접현미경법과 ADAM-SCC또는 Somacaount 500과의 상관계수는 각각 0.0332 또는 0.2285로 매우 낮으며 장비간의 상관계수도 0.1552로 매우 낮게 나타났다. 산양유의 체세 포수 저감을 위해서는 측정장비의 개발이 필요하며 장비를 표준화하기 위한 표준측정법으로 pyronin Y-methyl green stain의 채택이 필요하다.
The standard method for somatic cell counts in goat milk is the direct microscopic method after a pyronin Y-methyl stain. It has been reported, however, that are found to differ by measuring methods, but. A total of forty eight goat milk samples from eight farms were compared by pyronin Y-methyl sta...
The standard method for somatic cell counts in goat milk is the direct microscopic method after a pyronin Y-methyl stain. It has been reported, however, that are found to differ by measuring methods, but. A total of forty eight goat milk samples from eight farms were compared by pyronin Y-methyl stain, ADAM-SCC in National Institute of Animal Science, and Somacount 500 in Chungbuk Veterinary Service. The average SCC of the samples was $7.3{\times}10^5$ cells/mL by pyronin Y-methyl stain, $4.9{\times}10^5$ cells/mL by ADAM-SCC, and $11.6{\times}10^5$ cells/mL by Somacount 500. The correlations between the methods were not significant. SCC measuring equipment should be developed for reducing the SCC in goat milk, and pyronin Y-methyl green stain for estimating SCC in goat milk should be included in NVRQS Notice for livestock products processing and composition standards.
The standard method for somatic cell counts in goat milk is the direct microscopic method after a pyronin Y-methyl stain. It has been reported, however, that are found to differ by measuring methods, but. A total of forty eight goat milk samples from eight farms were compared by pyronin Y-methyl stain, ADAM-SCC in National Institute of Animal Science, and Somacount 500 in Chungbuk Veterinary Service. The average SCC of the samples was $7.3{\times}10^5$ cells/mL by pyronin Y-methyl stain, $4.9{\times}10^5$ cells/mL by ADAM-SCC, and $11.6{\times}10^5$ cells/mL by Somacount 500. The correlations between the methods were not significant. SCC measuring equipment should be developed for reducing the SCC in goat milk, and pyronin Y-methyl green stain for estimating SCC in goat milk should be included in NVRQS Notice for livestock products processing and composition standards.
* AI 자동 식별 결과로 적합하지 않은 문장이 있을 수 있으니, 이용에 유의하시기 바랍니다.
제안 방법
(주)엠젠에 납유하는 8개 목장의 집합유를 2009년 1월부터 8월까지 3회에 걸쳐 총 48시료를 수집하여 충청북도 축산위생연구소에 체세포수 분석을 의뢰(Somacount 500, Bentley Instruments, USA)하였으며 동일한 시료를 직접검경법과 ADAM-SCC로 체세포수를 측정하였다.
간략하게, Carnoy’s 고정액(60 mL 클로르포름, 20 mL 빙초산, 120 mL 에틸알콜 혼합)에 5분, 50% 에탄올 1분, 30% 에탄올 1분, 증류수 1분, pyronin Y-methyl 염색액(1.0 g pyronin Y, 0.56 g methyl green, 196 mL 증류수를 혼합하고 사용전 Whatman No.1으로 여과하고 갈색병에 보관) 6분, N-부틸알콜과 xylene으로 각각 신속히 세척후 건조하여 현미경(Zeiss, Germany)으로 관찰하였다.
본 연구에서는 국내산 산양유의 체세포수를 공식염색법인 pyronin Y-methyl green stain, 2008년 보고에 사용된 Somacount 500(Bentley Instruments, USA), 세포 핵 염색 방법인 PI(propidium iodide) stain method를 사용하는 ADAM-SCC(Digital Bio technology, Korea)로 측정하여 결과를 비교하였다.
산양유 0.1 mL을 전용 시약이 담긴 튜브(Digital Bio Technology, Korea)에 첨가하여 혼합한 후 전용 플라스틱 칩에 눈금 선까지 시료를 주입하고 ADAM-SCC에 장착하여 결과를 출력하였다.
시료당 10개의 화면에서 체세포수를 계수하여 화면의 면적×10으로 나누고 78.5(원의 면적)와 100(1 mL로 환산)을 곱하여 1 mL당 체세포수를 계산하였다.
데이터처리
측정된 산양유의 체세포수 자료는 SAS EG프로그램(SAS, EG 3.0, Cary, NC)의 일원분산분석으로 분석하였으며, 처리구간 평균은 Duncan의 다중검정을 이용하여 유의성을 검정하였다.
성능/효과
1×105과 유사한 수준이다. 따라서, Somacount 500에 의한 산양유의 체세포 측정시 pyronin Y-methyl green stain에 의한 직접검경법보다 약 1.6배 과대평가되는 것으로 생각된다. Somacount 500의 측정원리는 Laser-based flow cytometry(Bentlyinstrument)로써 Fossomatic cell counter와 유사하다.
반면, ADAM-SCC에 의한 분석 시산양유 시료의 평균 체세포수는 4.9×105 cells/mL이고 최대, 최소값은 각각 13.5와 0.7×105 cells/mL을 나타내어 직접검경법보다 2/3으로 과소평가되는 것으로 나타났다.
후속연구
따라서, 산양유의 체세포 측정에 사용할 수 있는 장비의 개발이 필요하며 이를 위해서는 “축산물의 가공기준 및 성분규격”의 염색액에 pyronin Ymethyl stain도 추가로 규정해야 할 것으로 생각된다.
질의응답
핵심어
질문
논문에서 추출한 답변
국내산 산양유의 체세포수를 확인하기 위해 사용된 국제 공인 공식염색법은 무엇인가?
본 연구에서는 국내산 산양유의 체세포수를 공식염색법인 pyronin Y-methyl green stain, 2008년 보고에 사용된 Somacount 500(Bentley Instruments, USA), 세포 핵 염색 방법인 PI(propidium iodide) stain method를 사용하는 ADAM-SCC(Digital Bio technology, Korea)로 측정하여 결과를 비교하였다.
축산물가공처리법의 원유의 위생등급기준상 등급별 기준이 되는 체세포수는?
축산물가공처리법 제2조 4항에서 “원유”라 함은 판매 또는 판매를 위한 처리·가공을 목적으로 하는 착유상태의 우유와 양유를 말하고, 제4조 2항의 규정에 의거 “원유의 위생등급기준”이 고시되어 있다(MIFAFF/NVRQS, 2002). “원유의 위생등급기준”에서 체세포수는 1급이 mL 당 20만 미만, 2급이 20-35만 미만, 3급이 35-50만 미만, 4급이 50-75만 미만, 5급이 75만 초과로 규정되어 있어 산양유도 이를 준용해야 하나 국내 산양유의 체세포수 평균이 1,559×103 cells/mL이므로 외국의 제도를 감안하여 1등급을 1,000×103 cells/mL 이하로 개정되어야 한다고 주장된 바 있다(Shin et al., 2008).
산양유의 체세포수를 측정할 때 DNA 특이적 세포 계수 방법만을 사용해야 하는 이유는?
92×105 cells/mL로 나타났음을 보고하였다. 산양유에는 세포질 입자가 많기 때문에 DNA 특이적 세포 계수 방법(fluoro-optical electronic cell counter, DNA 특이 염색법을 이용한 체세포수 측정)만이 사용되어야 하며 pyronin Y-methyl green 염색법이 미국(Packard et al., 1992)에서 뿐만 아니라 국제적인 공인 염색법으로 사용되고 있다(IDF, 1981; ISO, 1997).
참고문헌 (12)
Bently Instrumnets. Somacount 300 & 500: High volume instruments that deliver exceptional precision. Available from: http://www.bentleyinstruments.com/PDFs/Soma300500.pdf. Accessed Feb. 10. 2010.
Digital Bio. ADAM-SCC. Available from: http://www.digital- bio.com/product/product01_1.php. Accessed Feb. 10. 2010.
Dulin, A. M., Paape, M. J., and Wergin, W. P. (1982) Differentiation and enumeration of somatic cells in goat milk. J. Food Prot. 45, 435-439.
Food and Drug Administration. Direct microscopic somatic cell count. Available from: http://www.fda.gov/downloads/ AboutFDA/ReportsManualsForms/Forms/UCM071153.pdf. Accessed Feb. 10. 2010.
Haenlein, G. F. W. and Hinckley, L. S. (1995) Goat milk somatic cell count situation in USA. Int. J. Anim. Sci. 10,305-310.
IDF. (1981) Laboratory methos for use in mastitis work. Bulletin No. 132. International Dairy Federation, Brussels.
ISO. (1997) Milk ？ Enumeration of somatic cells-Part 1: Microscopic. ISO13366. International Standards Organization, Geneva.
Miller, R. H., Paape, M. J., and Action, J. C. (1986) Comparison of milk somatic cell counts by Coulter and Fossomatic Counters. J. Dairy Sci. 69, 1942-1946.
Packard Jr., V. S., Tatini, S., Fugua, R., Heady, J., and Gilman, C. (1992) Direct microscopic methods for bacteria or somatic cells. In: Methods for the examination of dairy products, R. T. Marshall, ed., 16th ed. Am. Public Health Assoc., Washington, DC. pp. 309-321.
Shin, J. H., Jeong, S. G, Han, G. S., Jang, A., Chae, H. S., Yoo, Y. M., Ahn, J. N., Woo, K. T., Choi, S. H., Lee, W. K., and Ham, J. S. (2008) Study on the somatic cell count grade of goat milk in Korea. Korean J. Food Sci. Ani. Resour. 28, 574-579.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.