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문제 정의
- 따라서, 본 연구는 다양한 한약재 추출물을 이용한 잔디 병원균의 항균활성 효과를 검증하여, 친환경적인 잔디 병해 방제를 위한 실용가능성을 평가하고자 수행하였다.
- solani AG2-2)이다. 본 연구에서는 이들 잔디 주요 병원균 6종에 대한 한약재 23종의 항진균 활성을 알아보았다. 디스크 확산법으로 항진균 활성이 있는 한약재를 선발하였고, 선발된 한약재를 대상으로 균사생육억제 효과를 실험하여 검정하였다.
제안 방법
- 메탄올이 완전히 휘발된 다음 PDA 평판배지 가장자리에 치상하였고, 공시 잔디 병원균은 중앙에 치상하였다. 25℃의 incubator에서 배양한 후 paper disk 주변의 균사 저지대를 조사하여, 항균활성을 나타내는 식물추출물을 선발하였다.
- 농축액은 건조시킨 후 4℃에서 냉장 보관하였다. 각각의 한약재 추출물은 소량의 메탄올 혹은 DMSO (dimethyl sulfoxide)에 녹인 후 적당한 농도로 희석하여 항균 활성 평가에 사용하였다.
- 균사생육 억제효과 검정에 사용된 배지의 제조는 PDA를 120℃에 20분간 고압멸균하여 약 50℃까지 냉각 시킨 뒤 DMSO (dimethyl sulfoxide) 10 µl에 추출물 1 mg 의 희석율로 stock solution을 만들어 식물체 추출물이 배지 10 ml당 10 mg(1000배), 5 mg(2000배), 2 mg(5000배)로 첨가되게 stock solution을 주입하여 혼합한 뒤 Petri dish (87×15 mm)에 분주하여 굳혔다. 굳은 시험 배지 중앙에 시험 균주를 치상하여 25℃ incubator에서 배양 후 시험 균총의 지름을 측정하여 균사생육 억제도(%)를 구하였다.
- 균사생육 억제효과 검정에 사용된 배지의 제조는 PDA를 120℃에 20분간 고압멸균하여 약 50℃까지 냉각 시킨 뒤 DMSO (dimethyl sulfoxide) 10 µl에 추출물 1 mg 의 희석율로 stock solution을 만들어 식물체 추출물이 배지 10 ml당 10 mg(1000배), 5 mg(2000배), 2 mg(5000배)로 첨가되게 stock solution을 주입하여 혼합한 뒤 Petri dish (87×15 mm)에 분주하여 굳혔다.
- 본 연구에서는 이들 잔디 주요 병원균 6종에 대한 한약재 23종의 항진균 활성을 알아보았다. 디스크 확산법으로 항진균 활성이 있는 한약재를 선발하였고, 선발된 한약재를 대상으로 균사생육억제 효과를 실험하여 검정하였다. 항진균 활성 시험 결과, 한약재 23종 중 고삼 외 11종의 시료에서 항진균 활성이 있었으며, 균사 생육 억제효과를 통한 검정에서는 10 mg/10 ml(1000배) 추출물 첨가 배지에서 잔디 병원균 6종 중 1종이라도 균사 억제율이 80% 이상인 추출물은 고삼, 울금, 대황, 황련, 족두리풀로 나타났다.
- 시험에 사용한 한약재 추출물에 대한 항진균활성 탐색을 위해 백 등(1998)의 방법을 응용하여 고압 멸균한 PDA 배지를 Petri dish (87×15 mm)에 분주하여 평판배지를 만들어 완전히 굳힌 다음 추출물은 1 mg당 메탄올 10 µl로 용해시켜 멸균한 paper disc(∅ 8 mm)에 20 µl씩 점적하였다. 메탄올이 완전히 휘발된 다음 PDA 평판배지 가장자리에 치상하였고, 공시 잔디 병원균은 중앙에 치상하였다. 25℃의 incubator에서 배양한 후 paper disk 주변의 균사 저지대를 조사하여, 항균활성을 나타내는 식물추출물을 선발하였다.
- 시험에 사용한 한약재 추출물에 대한 항진균활성 탐색을 위해 백 등(1998)의 방법을 응용하여 고압 멸균한 PDA 배지를 Petri dish (87×15 mm)에 분주하여 평판배지를 만들어 완전히 굳힌 다음 추출물은 1 mg당 메탄올 10 µl로 용해시켜 멸균한 paper disc(∅ 8 mm)에 20 µl씩 점적하였다.
- 실험에 사용한 한약재 23종(Table 1)은 2010년 4월과 6월, 두 차례에 걸쳐 삼홍건재약업사에서 건조된 상태로 밀봉된 것을 구입하여 사용하였다. 한약재로부터 항균성분의 추출을 위해 한약재 100 g에 500 ml의 메탄올을 가하여 80℃에서 4시간씩 3회 추출하였으며, 이후 추출액은 filter paper (Whatman No.2)로 거른 후 감압농축하였다. 농축액은 건조시킨 후 4℃에서 냉장 보관하였다.
- 항진균활성 탐색을 통해 선발된 12종의 한약재 추출물에 대하여 디스크 확산법으로 항진균 활성 검정을 실시하였다. 균사생육 억제효과 검정에 사용된 배지의 제조는 PDA를 120℃에 20분간 고압멸균하여 약 50℃까지 냉각 시킨 뒤 DMSO (dimethyl sulfoxide) 10 µl에 추출물 1 mg 의 희석율로 stock solution을 만들어 식물체 추출물이 배지 10 ml당 10 mg(1000배), 5 mg(2000배), 2 mg(5000배)로 첨가되게 stock solution을 주입하여 혼합한 뒤 Petri dish (87×15 mm)에 분주하여 굳혔다.
대상 데이터
- cerealis, Sclerotinia homoeocarpa, Pythium spp., 및 Colletotrichum graminicola 등 6종으로 이들은 한국잔디연구소에서 분양 받아 사용하였다. 잔디병원균의 배양, 보존 및 항균 활성 평가용 배지는 PDA (potato dextrose agar, Difco)를 사용하였다.
- 실험에 사용한 잔디 병원균은 Rhizoctonia solani AG1-1, R. solani AG2-2, R. cerealis, Sclerotinia homoeocarpa, Pythium spp., 및 Colletotrichum graminicola 등 6종으로 이들은 한국잔디연구소에서 분양 받아 사용하였다.
- 실험에 사용한 한약재 23종(Table 1)은 2010년 4월과 6월, 두 차례에 걸쳐 삼홍건재약업사에서 건조된 상태로 밀봉된 것을 구입하여 사용하였다. 한약재로부터 항균성분의 추출을 위해 한약재 100 g에 500 ml의 메탄올을 가하여 80℃에서 4시간씩 3회 추출하였으며, 이후 추출액은 filter paper (Whatman No.
- , 및 Colletotrichum graminicola 등 6종으로 이들은 한국잔디연구소에서 분양 받아 사용하였다. 잔디병원균의 배양, 보존 및 항균 활성 평가용 배지는 PDA (potato dextrose agar, Difco)를 사용하였다.
이론/모형
- Table 2. Antifungal activities of the medicinal plant extracts to six fungal turfgrass diseases pathogens by paper disk diffusion method.
성능/효과
- 23종의 한약재 추출물을 이용하여 연구를 진행한 결과 12종의 한약재 추출물에서 잔디류에 병을 일으키는 주요 병원성 진균에 대하여 항균활성을 나타냈고, 균사 생육 억제효과를 통한 검정실험에서는 10 mg/10 ml(1000배) 추출물 첨가 배지에서 잔디 병원균 6종 중 1종이라도 균사억제율이 80% 이상인 추출물은 고삼, 울금, 대황, 황련, 족두리풀로 나타났다.
- 1). S. homoeocarpa에 대한 항진균 활성을 나타내는 추출물은 황련, 세신, 천궁에서 중간 정도의 항진균 활성을 나타내었고, 고삼과 울금(C. longa)에서도 균사 생육 억제 효과가 있었다. R.
- homoeocarpa 가 100% 균사 생육 억제 효과를 나타내었다. 고삼 추출물은 실험 대상인 잔디 병원균 6종에 대해 모두 항진균 활성이 나타났고 10 mg/10 ml(1000배) 첨가 배지에서 R. solani AG1-1 에 대한 균사 생육 억제률이 64.3%로 가장 낮게 나타났고 R. solani AG2-2, R. cerealis, S. homoeocarpa, C. graminicola 에 대해서는 각각 78.9%, 80.5%, 85.6%, 86.0%로 나타났으며, Pythium spp. 에서는 100%로 가장 높게 나타났다.
- graminicola 잔디 병원균 6종에 대해 모두 항진균 활성을 나타냈었고, 울금 추출물은 Pythium spp. 을 제외한, 대황 추출물은 R. solani AG 1-1을 제외한, 세신 추출물은 R. solani AG 2-2를 제외한 5종의 잔디 병원균에서 항진균 활성을 나타내었다.
- 항진균 활성 시험 결과, 한약재 23종 중 고삼 외 11종의 시료에서 항진균 활성이 있었으며, 균사 생육 억제효과를 통한 검정에서는 10 mg/10 ml(1000배) 추출물 첨가 배지에서 잔디 병원균 6종 중 1종이라도 균사 억제율이 80% 이상인 추출물은 고삼, 울금, 대황, 황련, 족두리풀로 나타났다. 특히 고삼 추출물은 실험 대상인 잔디 병원균 6종에 대해 모두 항진균 활성이 나타났고, 울금 추출물 10 mg/10 ml(1000배), 5 mg/10 ml(2000배), 2 mg/10 ml(5000배) 첨가 배지에서 S. homoeocarpa 에 대해 100% 균사 생육 억제 효과를 나타내었다. 그리고 Pythium spp.
- 디스크 확산법으로 항진균 활성이 있는 한약재를 선발하였고, 선발된 한약재를 대상으로 균사생육억제 효과를 실험하여 검정하였다. 항진균 활성 시험 결과, 한약재 23종 중 고삼 외 11종의 시료에서 항진균 활성이 있었으며, 균사 생육 억제효과를 통한 검정에서는 10 mg/10 ml(1000배) 추출물 첨가 배지에서 잔디 병원균 6종 중 1종이라도 균사 억제율이 80% 이상인 추출물은 고삼, 울금, 대황, 황련, 족두리풀로 나타났다. 특히 고삼 추출물은 실험 대상인 잔디 병원균 6종에 대해 모두 항진균 활성이 나타났고, 울금 추출물 10 mg/10 ml(1000배), 5 mg/10 ml(2000배), 2 mg/10 ml(5000배) 첨가 배지에서 S.
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