[논문]Glutamate로 유도된 C6 glial 세포 자멸사에 대한 청심연자음(淸心蓮子飮)의 보호효과

고석재; 신용진; 장원석; 하예진; 이선아; 안민섭; 권오상; 신선호

Glutamate로 유도된 C6 glial 세포 자멸사에 대한 청심연자음(淸心蓮子飮)의 보호효과
Protective Effects of Chungsimyeonja-eum on Glutamate-induced Apoptosis in C6 Glial Cells 원문보기

대한한방내과학회지 = The journal of internal Korean medicine, v.31 no.1, 2010년, pp.54 - 65

고석재 (원광대학교 한의과대학 내과학교실) , 신용진 (원광대학교 한의과대학 내과학교실) , 장원석 (원광대학교 한의과대학 내과학교실) , 하예진 (원광대학교 한의과대학 내과학교실) , 이선아 (원광대학교 한의과대학 내과학교실) , 안민섭 (원광대학교 한의과대학 침구학교실) , 권오상 (원광대학교 한의과대학 경락경혈학교실) , 신선호 (원광대학교 한의과대학 내과학교실)

Abstract ▼ AI-Helper

Objective : The water extract of Chungsimyeonja-eum (CSYJE) has traditionally been used in treatments of heart diseases and brain diseases in Oriental medicine. However, little is known about the mechanism by which CSYJE protects neuronal cells from injury damages. Therefore, in this study we attempted to elucidate the mechanism of the cytoprotective effect of the CSYJE extract on glutamate-induced C6 glial cell death. Methods : Cultured cells were pretreated with CSYJE and exposed to glutamate, cell damage was assessed by using MTT assay and propidium iodide (PI), probe 2',7'-dichlorofluorescein diacetate (DCF-DA) staining. Western blotting was performed using anti-procaspase-3 and anti-PARP, respectively. Result : We determined the elevated cell viability by CSYJE extract on glutamate-induced C6 glial cell death. Glutamate induced DNA fragmentation on C6 glial cells but pre-treatment with CSYJE inhibited DNA fragmentation. One of the main mediators of glutamate-induced cytotoxicity was known to generation of reactive oxygen species (ROS). Pre-treatment with CSYJE inhibited this ROS generation from glutamate-stimulated C6 glial cells. Also, we identified that the ROS-induced DCF-DA green fluorescence was reduced by CSYJE pre-treatment. The critical markers of apoptotic cell death are the cleavages of procaspase-3 protease and PARP proteins, so we checked the expression level and cleavages of procaspase-3 protease and PARP proteins. Glutamate-treated C6 glial cells showed the cleavages of procaspase-3 protease and PARP proteins and followed the reduction of expression of these proteins. Conclusion : These findings indicate that CSYJE may prevent cell death from glutamate-induced C6 glial cell death by inhibiting the ROS generation and procaspase-3 and PARP expression.

주제어

AI 본문요약
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문제 정의

Glutamate에 의한 C6 glial 세포의 사멸에서 淸心蓮子飮의 보호효과에 대한 기전을 연구하기 위하여 세포 내 활성산소종 중 하나인 H₂O₂의 생성을 형광염색을 통해 조사하였다. DCF-DA는 활성산소종 중 세포 내 H₂O₂와 반응하여 녹색형광이 증가한다.
. 본 실험에서도 C6 glial 세포에서 glutamate에 의해 DNA의 분절과 Sub-G0 분획이 증가하는 세포자멸사의 특징을 보였으므로 신호전달계인 caspase family cysteine protease의 발현 변화를 조사하였다.
본 연구에서는 glutamate에 의한 C6 glial 세포의 자멸사에 대한 淸心蓮子飮의 보호효과를 알아보기 위하여 백서 C6 glial 세포에 淸心蓮子飮을 전처리한 후 glutamate를 처리하고 세포생존율을 관찰하였다. 또한 glutamate에 의해 유도되는 세포의 형태학적 및 생화학적 현상, DNA 분절이나 활성산소종의 생성 및 세포자멸사 관련 단백질의 변화 등을 관찰하여 다음과 같은 결과를 얻었다.
이에 본 연구에서는 신경세포 손상에 대한 淸心蓮子飮의 보호효과를 알아보기 위하여 glutamate로 유도된 C6 glial 세포에서 淸心蓮子飮을 전처리한 후 세포생존율의 변화, DNA 분절, caspase-3 protease 및 PARP 단백질, H₂O₂의 생성 등을 조사하였다.
이에 본 연구에서는 신경세포 손상에 대한 淸心蓮子飮의 보호효과를 알아보기 위하여 glutamate로 유도된 C6 glial 세포에서 淸心蓮子飮을 전처리한 후 세포생존율의 변화, DNA 분절, caspase-3 protease 및 PARP 단백질, 활성산소종 중 하나인 H₂O₂의 생성 등을 관찰하여 유의한 결과를 얻었기에 보고하는 바이다.

제안 방법

각각의 배양세포에 배양액의 1/10로 MTT 용액 (5 ㎎/㎖ in PBS)을 첨가하였다. 4시간 후, 배양액을 제거하고 1 ㎖ DMSO를 첨가하여 세포를 용해시킨 다음, 분광광도계 (THERMO max, USA)를 이용하여 540 ㎚ 파장에서 흡광도를 측정하였다. 세포생존율은 정상 대조군과 비교하여 백분율(%)로 표시하였다.
淸心蓮子飮이 glutamate에 의한 C6 glial 세포독성에 대한 보호효과에서 세포사멸의 신호전달 기전에 관여하는 caspase-3 protease와 PARP 단백질의 발현을 Western blot 분석법을 통해 조사하였다. C6 glial 세포에서 淸心蓮子飮을 1시간 전처리한 후 20 mM 농도의 glutamate를 24시간 처리하여 각각의 세포를 포집, 파쇄한 후 세포 부유액으로부터 procaspase-3 protease와 PARP 단백질의 발현 변화를 조사하였다.
Glutamate에 의한 C6 glial 세포의 Sub-G0 분획 증가에 대한 淸心蓮子飮의 보호효과를 PI 염색 후 유세포분석기를 통해 조사하였다. 300 ㎍/㎖ 농도의 淸心蓮子飮을 C6 glial 세포에 1시간 전처리한 후 20 mM 농도의 glutamate를 처리하여 24시간 배양하였다.
Glutamate에 의한 C6 glial 세포의 사멸에서 PI 염색 후 유세포분석기를 통해 Sub-G0 분획의 변화를 조사하였다. 정상 세포핵의 DNA는 G1, S 및 G2/M기로 나타내며 세포자멸사 유도 시 분절된 DNA가 Sub-G0 분획으로 증가된다.
Glutamate에 의한 C6 glial 세포의 사멸에서 淸心蓮子飮의 효과를 조사하기 위하여 다양한 농도의 淸心蓮子飮을 1 시간 전처리한 후 20 mM의 glutamate를 처리하여 24 시간 배양한 다음, 세포 생존율을 MTT 방법으로 조사하였다. C6 glial 세포에 20 mM 농도의 glutamate 처리 시 50%의 세포생존율을 보였으나 25 ㎍/㎖ 농도의 淸心蓮子飮을 전처리하였을 경우 62%의 세포생존율을 나타내었으며, 50 ㎍/㎖ 농도의 淸心蓮子飮 전처리 시 72%, 100 ㎍/㎖ 농도의 淸心蓮子飮 전처리 시 89%, 200 ㎍/㎖ 농도의 淸心蓮子飮 전처리 시 97%의 세포생존율을 나타내었으며 300 ㎍/㎖ 농도 이상의 淸心蓮子飮 처리 시 대조군 수준의 세포생존율을 보여 glutamate에 의한 세포사멸을 뚜렷하게 보호하였다(Fig.
Glutamate에 의한 C6 glial 세포의 사멸이 세포 자멸사 기전에 의하여 매개됨을 형태학적으로 확인하고자 핵산의 DAPI 염색을 수행하였다. C6 glial 세포에 300 ㎍/㎖ 농도의 淸心蓮子飮을 1시간 전처리한 후 20 mM의 glutamate를 24시간 처리하였다.
Glutamate에 의한 C6 glial 세포의 세포독성을 조사하기 위하여 glutamate를 다양한 농도로 24시간 처리하여 세포생존율을 MTT 방법으로 조사하였다. C6 glial 세포에서 glutamate 처리 시, 10 mM 농도에서 세포생존율은 80%, 15 mM의 농도에서 63%, 20 mM 농도에서 48%, 25 mM 농도에서 29% 그리고 30 mM 농도에서 28%로 농도 의존적인 세포생존율의 감소를 나타내었다(Fig.
Procaspase-3 protease, PARP 및 β-actin에 대한 항체는 0.05% (v/v)의 tween-20이 함유된 trisbuffered saline (TBS-T)에 1:1,000으로 희석하여 nitrocellulose membrane과 상온에서 2시간 동안 반응시켰으며, 각 항체에 대한 이차항체 anti-rabbit IgG conjugated horse radish peroxidase (HRP)와 anti-mouse IgG conjugated HRP는 TBS-T로 희석 (1:3,000)하여 상온에서 1시간 동안 반응시킨 후, enhanced chemilluminescence kit (ECL kit, Amersham, England)를 이용하여 현상하였다.
동량의 세포파쇄액 (200 ㎍)과 2× sample buffer를 혼합하여 100℃에서 3분간 가열하여 단백질의 변성을 유도한 후 12.5% 및 15% SDS-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE)를 시행하였다.
2). 따라서 glutamate에 의한 C6 glial 세포의 사멸에 대한 淸心蓮子飮의 보호효과는 300 ㎍/㎖ 농도에서 적절한 효과를 보인다고 판단하여 이후 기전 분석을 위한 실험에 적용하였다.
DCF-DA는 활성산소종 중 세포 내 H₂O₂와 반응하여 녹색형광이 증가한다. 따라서 세포 내 H₂O₂의 생성은 DCF-DA로 염색하여 유세포분석기를 통하여 관찰하고 변화량을 %로 표시하였다. C6 glial 세포에 20 mM 농도의 glutamate를 24 시간 처리 시 그래프(red)가 오른쪽으로 이동하여 형광이 증가하였으므로 세포 내 H₂O₂가 생성이 증가되었음을 알 수 있었다.
본 연구에서는 glutamate에 의한 C6 glial 세포의 자멸사에 대한 淸心蓮子飮의 보호효과를 알아보기 위하여 백서 C6 glial 세포에 淸心蓮子飮을 전처리한 후 glutamate를 처리하고 세포생존율을 관찰하였다. 또한 glutamate에 의해 유도되는 세포의 형태학적 및 생화학적 현상, DNA 분절이나 활성산소종의 생성 및 세포자멸사 관련 단백질의 변화 등을 관찰하여 다음과 같은 결과를 얻었다.
세포에 淸心蓮子飮 등을 처리한 후 세포를 수확하기 전에 5 μΜ DCF-DA를 처리하여 37℃에서 30분 동안 배양하였다. 배양한 세포는 PBS (pH 7.4)로 세척하고 1% trypsin-EDTA 용액을 처리하여 세포를 수확하고, 다시 PBS로 세척하여 유세포분석기로 형광을 측정하고, CellQuest software를 이용하여 분석하였다.
세포 배양판 (24-well plate)에 세포 (1×105 cells/㎖)를 1㎖씩 분주하여 12시간 이상 CO2 세포배양기 안에서 안정시킨 후 시료를 각각의 조건에 따라 처리하였다.
세포는 4% formaldehyde 용액에 고정한 후 PBS로 세척하고, 10 μΜ DAPI로 10분간 염색한 다음, 다시 PBS로 세척하여 형광현미경 (Leica MPS60, Germany)으로 핵의 형태학적 변화를 관찰하였다.
세포사멸에 미치는 영향을 알아보기 위하여 propidium iodide (PI)로 DNA를 염색한 후 유세포분석기 (flow cytometry, FACSCalibur, BD Biosciences)를 이용하여 형광의 세기를 측정하였다. 세포에 시약을 처리하여 시간별로 포집하여 PBS로 2회 세척하였다.
우선 glutamate가 C6 glial 세포에 나타내는 세포독성을 알아보기 위하여 glutamate 농도별로 C6 glial 세포에 24시간 동안 처리한 후 MTT 분석방법을 통하여 세포 생존율을 조사한 결과 glutamate 의 농도에 의존적으로 C6 glial 세포의 사멸이 유도되었다(Fig. 1). 이때 淸心蓮子飮의 세포 보호효과를 알아보기 위하여 淸心蓮子飮을 다양한 농도로 C6 glial 세포에 1시간 전처리한 후 20 mM 농도의 glutamate를 처리하여 24시간 동안 배양한 결과 淸心蓮子飮의 농도에 의존적으로 glutamate에 의한 세포생존율의 감소가 억제되었다(Fig.
한편, 세포자멸사의 전형적인 특성인 핵산의 분절현상은 PI 염색 후 유세포분석과 DAPI 염색 후 형광현미경 관찰을 통해 확인하였다. 그 결과 C6 glial 세포는 glutamate 농도에 의존적으로 DNA의 분절이 증가되는 전형적인 세포자멸사를 나타내었으나 淸心蓮子飮은 세포자멸사를 보호하였다(Fig.

대상 데이터

3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyl, tetra zolium bromide (MTT), 4',6- diamidino-2-phenylindole (DAPI), bicinchoninic acid (BCA), dimethyl sulfoxide (DMSO)는 Sigma사 (St. Louis, Missouri, USA)에서 구입하였다.
Procaspase-3 protease, PARP 및 β-actin 등의 antibodies는 Santa Cruz사 (San Joes, CA, USA)에서 구입하였다.
백서 C6 glial 세포주는 ATCC (American Type Cell Culture)로부터 구입하여 계대배양하면서 실험을 실시하였다.
세포 내 H2O2의 생성을 측정하기 위하여 형광 probe 2',7'-dichlorofluorescein diacetate (DCF-DA, Sigma사)를 이용하였다.
세포는 37℃, 5% CO₂ 세포 배양기에서 열에 의해서 비활성된 10% FBS가 포함된 DMEM 배양액으로 배양하여 실험 목적에 따라 사용하였다.
실험에 사용된 약재는 물을 용매로 사용한 추출 방법을 이용하여 본 실험에 사용하였다. 물 추출물은 淸心蓮子飮 4첩 (136.
실험에 필요한 Dulbeccos modified Eagles medium (DMEM), 항생제, trypsin 및 우태아 혈청 (fetal bovine serum, FBS)은 GIBCO BRL사 (Grand Island, NY, USA)제품을 사용하였으며, 배양용기 (24 well plate와 10cm dish)는 Falcon사(Becton Dickinson, San Jose, CA, USA)에서 구입하여 사용하였다. 3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyl, tetra zolium bromide (MTT), 4',6- diamidino-2-phenylindole (DAPI), bicinchoninic acid (BCA), dimethyl sulfoxide (DMSO)는 Sigma사 (St.
에 의거하여 사용하였다. 약재는 원광대학교 전주 한방병원에서 구입한 후 정선하여 사용하였으며, 한 첩의 내용과 분량은 Table 1과 같다.
5 g의 시료를 얻었다. 얻어진 淸心蓮子飮 시료를 세포배양용 DMSO에 용해하여 50 ㎎/㎖의 저장용액을 조제하여 사용하였다.

데이터처리

모든 실험은 3회 이상 독립적으로 실시하였으며, 통계처리는 Student's t-test에 준하여 처리하였고, p-value가 최대치 0.05 미만의 경우 유의성이 있는 것으로 판정하였다.

이론/모형

Cells were treated at the indicated concentrations and incubated for 24 hrs. Cells were harvested and total protein was analyzed with western blot method.
C6 glial cells were incubated for 24 hrs with glutamate at indicated concentrations. The cell viability was assessed by MTT assay. Data represent the mean ± S.
淸心蓮子飮이 glutamate에 의한 C6 glial 세포독성에 대한 보호효과에서 세포사멸의 신호전달 기전에 관여하는 caspase-3 protease와 PARP 단백질의 발현을 Western blot 분석법을 통해 조사하였다. C6 glial 세포에서 淸心蓮子飮을 1시간 전처리한 후 20 mM 농도의 glutamate를 24시간 처리하여 각각의 세포를 포집, 파쇄한 후 세포 부유액으로부터 procaspase-3 protease와 PARP 단백질의 발현 변화를 조사하였다.
본 실험에 사용된 淸心蓮子飮의 처방은 《方藥合編》¹⁵에 의거하여 사용하였다. 약재는 원광대학교 전주 한방병원에서 구입한 후 정선하여 사용하였으며, 한 첩의 내용과 분량은 Table 1과 같다.
세포생존율은 MTT 분석방법을 이용하여 ELISA 분석기로 흡광도 570 ㎚에서 측정하였다. 세포 배양판 (24-well plate)에 세포 (1×10⁵ cells/㎖)를 1㎖씩 분주하여 12시간 이상 CO₂ 세포배양기 안에서 안정시킨 후 시료를 각각의 조건에 따라 처리하였다.
1% Triton X-100, 20 ㎍/㎖ PI, 200 ㎍/㎖ RNase) 600 ㎕로 20분 동안 반응시켰다. 유세포분석에서 얻은 정보의 분석은 CellQuest software (Becton Dickinson)를 이용하였다.

성능/효과

1. Glutamate는 C6 glial 세포에서 농도 의존적으로 세포생존율의 감소를 유도하였다.
2. 淸心蓮子飮은 glutamate에 의한 C6 glial 세포의 생존율 감소를 농도 의존적으로 억제하였다.
3. 淸心蓮子飮은 glutamate에 의한 C6 glial 세포의 Sub-G0 분획 증가와 DNA 응축을 억제하였다.
4. 淸心蓮子飮은 glutamate에 의한 C6 glial 세포의 procaspase-3 protease 분해 및 PARP 단백질의 분절을 억제하였다.
5. 淸心蓮子飮은 glutamate에 의한 C6 glial 세포의 활성산소종 생성을 억제하였다.
Glutamate에 의한 C6 glial 세포의 사멸에서 淸心蓮子飮의 효과를 조사하기 위하여 다양한 농도의 淸心蓮子飮을 1 시간 전처리한 후 20 mM의 glutamate를 처리하여 24 시간 배양한 다음, 세포 생존율을 MTT 방법으로 조사하였다. C6 glial 세포에 20 mM 농도의 glutamate 처리 시 50%의 세포생존율을 보였으나 25 ㎍/㎖ 농도의 淸心蓮子飮을 전처리하였을 경우 62%의 세포생존율을 나타내었으며, 50 ㎍/㎖ 농도의 淸心蓮子飮 전처리 시 72%, 100 ㎍/㎖ 농도의 淸心蓮子飮 전처리 시 89%, 200 ㎍/㎖ 농도의 淸心蓮子飮 전처리 시 97%의 세포생존율을 나타내었으며 300 ㎍/㎖ 농도 이상의 淸心蓮子飮 처리 시 대조군 수준의 세포생존율을 보여 glutamate에 의한 세포사멸을 뚜렷하게 보호하였다(Fig. 2). 따라서 glutamate에 의한 C6 glial 세포의 사멸에 대한 淸心蓮子飮의 보호효과는 300 ㎍/㎖ 농도에서 적절한 효과를 보인다고 판단하여 이후 기전 분석을 위한 실험에 적용하였다.
5와 같다. C6 glial 세포에 20 mM 농도의 glutamate 처리 시 세포생존율은 51.1%, 300 ㎍/㎖ 농도의 淸心蓮子飮 처리 시 세포생존율은 98.4%로 대조군 98.8% 수준으로 회복되었고, 이때 淸心蓮子飮 단독 처리 시 세포생존율은 99.1%로 淸心蓮子飮 자체의 C6 glial 세포독성은 없었다(Fig. 5).
정상 세포핵의 DNA는 G1, S 및 G2/M기로 나타내며 세포자멸사 유도 시 분절된 DNA가 Sub-G0 분획으로 증가된다. C6 glial 세포에 glutamate를 24시간 동안 다양한 농도로 처리한 결과, 대조군 세포의 Sub-G0는 1.5%이었으며, 15 mM 농도의 glutamate 처리 시 Sub-G0는 9.7%이었고, 15 mM 농도에서는 26.1%, 20 mM 농도에서는 50.0%, 25 mM 농도에서는 58.5% 그리고 30 mM 농도에서는 72.1%의 Sub-G0 분획을 나타내어 glutamate 처리 농도에 의존적으로 Sub-G0 분획의 분절된 DNA 양이 현저히 증가하였다(Fig. 3).
Glutamate에 의한 C6 glial 세포의 세포독성을 조사하기 위하여 glutamate를 다양한 농도로 24시간 처리하여 세포생존율을 MTT 방법으로 조사하였다. C6 glial 세포에서 glutamate 처리 시, 10 mM 농도에서 세포생존율은 80%, 15 mM의 농도에서 63%, 20 mM 농도에서 48%, 25 mM 농도에서 29% 그리고 30 mM 농도에서 28%로 농도 의존적인 세포생존율의 감소를 나타내었다(Fig. 1).
Glutamate를 C6 glial 세포에 처리한 결과 procaspase-3 protease는 감소하였고, PARP 단백질은 분절되었다. 淸心蓮子飮을 전처리한 실험군에서 procaspase-3 protease는 대조군 수준으로 발현이 증가되었고, PARP 단백질의 분절도 감소하였다.
300 ㎍/㎖ 농도의 淸心蓮子飮을 C6 glial 세포에 1시간 전처리한 후 20 mM 농도의 glutamate를 처리하여 24시간 배양하였다. Sub-G0 분획은 대조군 C6 glial 세포의 1.2%에 비해 glutamate 처리 시 48.9%로 증가하였으나 淸心蓮子飮을 전처리한 실험군에서는 1.6%의 Sub-G0 분획을 보여 대조군 수준으로 감소하였다. 이때 淸心蓮子飮 단독처리에 의한 Sub-G0 분획은 0.
Glutamate를 C6 glial 세포에 처리한 결과 procaspase-3 protease는 감소하였고, PARP 단백질은 분절되었다. 淸心蓮子飮을 전처리한 실험군에서 procaspase-3 protease는 대조군 수준으로 발현이 증가되었고, PARP 단백질의 분절도 감소하였다. 淸心蓮子飮 단독처리군에서 procaspase-3 protease나 PARP의 분절은 거의 변화가 없었다.
한편, 세포자멸사의 전형적인 특성인 핵산의 분절현상은 PI 염색 후 유세포분석과 DAPI 염색 후 형광현미경 관찰을 통해 확인하였다. 그 결과 C6 glial 세포는 glutamate 농도에 의존적으로 DNA의 분절이 증가되는 전형적인 세포자멸사를 나타내었으나 淸心蓮子飮은 세포자멸사를 보호하였다(Fig. 3, 4, 5).
8). 또한 세포 내 생성된 H₂O₂를 형광현미경으로 관찰한 결과, C6 glial 세포에 glutamate 처리 시 H₂O₂의 생성을 녹색 형광으로 관찰할 수 있었으나 淸心蓮子飮 전처리 시 녹색 형광이 관찰되지 않았다(Fig. 9). 이상의 결과를 정량화하여 대조군에 비해 증가된 H₂O₂의 양을 히스토그램으로 표현하였다(Fig.
본 연구에서 caspase-3 protease의 활성은 procaspase-3 protease의 분해와 하방단백질인 PARP의 분절을 통해 확인할 수 있었으며, 淸心蓮子飮을 전처리하였을 경우 procaspase-3의 분해와 PARP 단백질의 분절은 나타나지 않았다(Fig. 7). 하지만 상방 신호전달계인 caspase-8과 caspase-9의 발현은 조사하지 않아 이에 대한 보다 정확한 기전 알아보기 위해서 추가적인 연구가 필요할 것으로 사료된다.
산소가 불안정하게 산화되어 생성되는 활성산소종은 사립체 호흡 사슬의 효소반응이나 해독반응, 유리 방사선, 가시광선 및 자외선 조사 등에 의한 세포병리반응에도 연관이 있는 것으로 알려져 있으며, 생체에는 free radical에 의한 세포손상을 방지하는 superoxide dismutase (SOD), catalase 및 glutathione peroxidase (GPX) 등과 같은 항산화 효소계와 요산, glutathione, sulphydryl groups 및 melanine 등과 같은 항산화물질이 있다⁴⁷. 본 연구에서도 glutamate 처리 시 C6 glial 세포에서 농도 의존적으로 H₂O₂의 생성이 증가하였고, 이때 淸心蓮子飮은 H₂O₂의 생성을 억제하였다(Fig. 8). 그러나 세포 내 활성산소를 제거하는 SOD나 GPX 단백질 등의 발현 변화는 측정하기가 어려웠다.
1). 이때 淸心蓮子飮의 세포 보호효과를 알아보기 위하여 淸心蓮子飮을 다양한 농도로 C6 glial 세포에 1시간 전처리한 후 20 mM 농도의 glutamate를 처리하여 24시간 동안 배양한 결과 淸心蓮子飮의 농도에 의존적으로 glutamate에 의한 세포생존율의 감소가 억제되었다(Fig. 2).
이상의 결과를 요약하면 淸心蓮子飮의 glutamate 유도성 C6 glial 세포사멸에 대한 보호효과는 H₂O₂의 생성 억제, procaspase-3 protease의 분해 및 PARP 단백질의 분절 억제를 통한 세포자멸사 경로의 비활성화를 통해 C6 glial 세포에 보호효과를 나타내었다.
9). 이상의 결과를 정량화하여 대조군에 비해 증가된 H₂O₂의 양을 히스토그램으로 표현하였다(Fig. 10).
이상의 결과에서 淸心蓮子飮은 glutamate에 의한 C6 glial 세포의 자멸사에서 세포 내 활성산소종 생성 및 세포자멸사 관련 procaspase-3 단백질의 발현 조절을 통해 보호효과를 나타내었다. 따라서 임상에서 퇴행성 신경계질환의 예방 및 치료에 효과적으로 활용될 수 있을 것으로 사료된다.

후속연구

이상의 결과에서 淸心蓮子飮은 glutamate에 의한 C6 glial 세포의 자멸사에서 세포 내 활성산소종 생성 및 세포자멸사 관련 procaspase-3 단백질의 발현 조절을 통해 보호효과를 나타내었다. 따라서 임상에서 퇴행성 신경계질환의 예방 및 치료에 효과적으로 활용될 수 있을 것으로 사료된다.
그러나 세포 내 활성산소를 제거하는 SOD나 GPX 단백질 등의 발현 변화는 측정하기가 어려웠다. 따라서 추가 연구를 통해 항산화 단백질의 발현 변화에 대한 연구가 요구된다.
7). 하지만 상방 신호전달계인 caspase-8과 caspase-9의 발현은 조사하지 않아 이에 대한 보다 정확한 기전 알아보기 위해서 추가적인 연구가 필요할 것으로 사료된다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	퇴행성 신경계질환의 치료는 현재 어떤 실정인가?	현대사회의 발달과 더불어 노령 인구가 증가하면서 노화에 따른 여러 퇴행성 신경계질환이 사회적 문제로 대두되고 있으며, 허혈성 뇌졸중, 알츠하이머병, 파킨슨병과 같은 퇴행성 신경계질환이 꾸준히 증가하고 있다1,2. 퇴행성 신경계질환의 치료를 위하여 여러 다양한 치료법이 진행 혹은 제시되고 있지만 아직 획기적인 치료법은 없는 실정이다. 따라서 신경세포를 보호할 수 있는 적절한 치료법을 개발하는 것이 요구되고 있다3,4.
	Glutamate의 특징은?	퇴행성 신경계질환에서 중추신경세포 손상에 관여하는 물질은 여러 가지가 있으나 그 중 대표적인 것은 아미노산계의 흥분성 신경전달물질인 glutamate이다. Glutamate는 척추동물의 중추신경계에서 중요한 신경전달물질로서 뇌에 분포되어 있는 수용체에 작용하여 여러 다양한 생리작용에 관여하며 뇌의 원활한 기능 유지에 필수적이지만 손상이 진행될 경우 다량의 glutamate가 유리되어 여러 병리적 작용의 원인이 된다9-11.
	신경세포를 보호할 수 있는 적절한 치료법 개발이 요구되는 이유는?	현대사회의 발달과 더불어 노령 인구가 증가하면서 노화에 따른 여러 퇴행성 신경계질환이 사회적 문제로 대두되고 있으며, 허혈성 뇌졸중, 알츠하이머병, 파킨슨병과 같은 퇴행성 신경계질환이 꾸준히 증가하고 있다1,2. 퇴행성 신경계질환의 치료를 위하여 여러 다양한 치료법이 진행 혹은 제시되고 있지만 아직 획기적인 치료법은 없는 실정이다. 따라서 신경세포를 보호할 수 있는 적절한 치료법을 개발하는 것이 요구되고 있다3,4.

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저자의 다른 논문 :

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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