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문제 정의
- 본 연구자는 이미 사람유래 간세포암종 세포주인 HepG2를 저산소 조건에서 배양을 하면 배양액 내의 포도당이 감소하고 이에 따라 발생하는 허혈상태에서 세포사멸이 세포자살에 의해 발생하는 것을 확인하였으며4) 후속연구에서 이러한 조건에서 세포생존을 개선시키는 식물추출물들이 심근 경색 또는 뇌경색에 대해서 효능을 나타낸다는 것을 쥐를 이용한 동물실험을 통해 확인하였다5,6,7). 본 연구에서는 이와 동일한 허혈조건에서 HepG2 세포의 생존을 개선시키는 진피가 심근경색을 예방하고 치료하는 효과가 있는지를 조사하는 실험을 실시하였다. HepG2 세포가 허혈조건에서 세포자살에 의해 죽을 때 DNA 사다리를 형성하는 것이 확인되었으므로4,10), 이 방법을 적용한 결과 진피가 DNA 사다리의 형성을 억제하였으며 이로서 진피가 세포자살을 억제하여 세포사멸을 방지한다는 것을 확인하였다 (Fig.
- 본 연구에서는 허혈조건에서 세포생존을 개선시키는 진피의 에탄올추출물이 세포자살을 억제하여 세포생존을 개선시키고 아울러 쥐의 관상동맥을 묶어 발생시킨 허혈조건에서 심근 조직의 손상을 억제하는지를 조사하였다.
제안 방법
- 12 well-plate의 well당 사람유래 간세포암종 세포주인 HepG2 (ATCC HB 8065) 세포를 2x105세포수로 우태아 혈청 (fetal bovine serum, FBS)이 10% 첨가된 최소필수배지에서 37℃, 5% CO2 상태로 48시간 동안 배양기 (Forma Scientific, Inc., Marietta, OH) 내에서 부착되도록 두었다. 부착 후 각 well을 새 배지로 교체를 한 다음 공기 내의 산소 농도를 조절할 수 있는 저산소 배양기 (Vision Scientific Co.
- HepG2 세포가 저산소 조건에서 세포자살에 의해 죽는다는 것이 DNA 분절 분석 등을 활용하여 밝혀졌으므로10), HY5053이 저산소 조건에서 세포생존을 개선시키는 것이 세포자살을 억제하여 일어나는 것인지를 DNA 분절 분석을 이용하여 조사하였다 (Fig. 2). 이를 위해 저산소 조건에서 HY5053을 400 μg/mL를 첨가한 후 18, 24, 30 및 36시간이 지났을 때 세포생존을 개선시키는지를 조사한 결과 Fig.
- 진피의 에탄올추출물 (HY5053)이 심근경색에 미치는 영향을 조사하기 위해 흰쥐의 좌전하행관상동맥 (left anterior descending coronary artery)을 묶어 허혈조건을 1일 간 유발한 심장에 대해 HY5053으로 전처치하였을 때 심장의 손상이 줄어드는지를 조사하였다. 결과 2의 DNA 분절실험에서 HY5053을 400 ㎍/mL로 첨가한 경우에 세포자살을 억제하여 세포생존을 개선시키는 효과가 관찰되었으므로 이 농도에 근사하도록 하면서 독성이 나타날 가능성을 줄이기 위해 투여용량을 200 mg/kg로 하였으며, 투여는 좌관상동맥을 묶기 1시간 전에 복강으로 주사하였다. 좌관상동맥을 묶어 발생한 허혈 1일째 심장을 적출하여 절편을 만든 후 손상된 정도를 TTC (2,3,5-triphenyl tetrazolium chloride)로 염색하였다 (Fig.
- 세포를 포함하는 이 용액을 원심분리를 하여 세포를 모은 다음 새로운 배지를 더해 세포 혼탁액을 만들었다. 그리고 0.4% 트리판 블루 용액과 세포 혼탁액을 동량으로 섞어서 5분이 지난 뒤에 혈구계 (hemocytometer)를 사용하여 살아 있는 세포의 수를 측정하였다. 이러한 세포 수의 측정은 동일 배양 well로부터는 2회를 측정하여 평균을 구하고, 이러한 것을 3 개의 다른 배양 well에 대해 구한 다음 이 3 개의 배양배지에 대한 세포수의 평균과 표준편차를 구하였다.
- 본 연구에서는 진피 (秦皮)의 에탄올추출물이 저산소조건 (산소분압 3%)에서 사람유래 간세포암종인 HepG2 세포의 세포생존을 개선시키는지를 조사하기 위해 진피의 에탄올추출물을 배양배지에 400 ㎍/mL 농도로 첨가하였다. 배양 1일 후 생존 세포수를 트리판 블루 염색법을 이용하여 조사한 결과 에탄올 추출물 투여군이 대조군에 비해 세포 생존수를 50%증가시켰다.
- . 본 연구자는 이미 사람유래 간세포암종 세포주인 HepG2를 저산소 조건에서 배양을 하면 배양액 내의 포도당이 감소하고 이에 따라 발생하는 허혈상태에서 세포사멸이 세포자살에 의해 발생하는 것을 확인하였으며4) 후속연구에서 이러한 조건에서 세포생존을 개선시키는 식물추출물들이 심근 경색 또는 뇌경색에 대해서 효능을 나타낸다는 것을 쥐를 이용한 동물실험을 통해 확인하였다5,6,7). 본 연구에서는 이와 동일한 허혈조건에서 HepG2 세포의 생존을 개선시키는 진피가 심근경색을 예방하고 치료하는 효과가 있는지를 조사하는 실험을 실시하였다.
- 본 연구팀은 선행연구에서 진피의 에탄올추출물을 유기 용매의 분획으로 얻은 부탄올층과 이 층으로부터 분리정제된 phenylpropanoid glucoside 계열의 syringinin이 알츠하이머병을 유발하는 베타아밀로이드 (Aβ)에 의한 세포독성을 세포자살을 억제함으로써 완화시킨다는 것을 DNA 분절분석 등을 이용하여 확인하였다18).
- , Marietta, OH) 내에서 부착되도록 두었다. 부착 후 각 well을 새 배지로 교체를 한 다음 공기 내의 산소 농도를 조절할 수 있는 저산소 배양기 (Vision Scientific Co. LTD., 서울, 대한민국)를 이용하여 온도와 이산화탄소의 농도는 일정하게 유지하면서 실험 목적에 따라 산소 분압을 3% (저산소 조건)로부터 21% (정상산소 조건)까지로 변화시키면서 48시간 동안 실험을 시행하였다. 이 배양조건에서 배양을 시작하기 직전에 진피의 에탄올추출물 (HY5053)을 50% 에탄올에 용해시켜 100 및 1,000 ㎍/mL 농도로 배양배지에 첨가한 실험군과 아무 것도 첨가하지 않은 음성대조군 (negative control)으로 나누어 배양하였다.
- 세포수로 방법 1)의 “세포배양”에서와 같이 저산소 상태에서 HY5053을 400 ㎍/mL로 첨가하거나 또는 전혀 첨가하지 않은 조건 (Control)에서 배양하였다. 세포의 염색체 DNA를 얻기 위해 배양 접시에 배양된 세포들로부터 배양액을 제거한 후 용해 완충액 [0.5% Triton buffer, 5 mM Tris buffer (pH 7.4), 20 mM EDTA]를 넣은 다음 생긴 용해질을 eppendorf tube에 모았다. 이것을 원심 분리하여 얻은 상등액을 protease K로 처리한 후 phenol-chloroform-isoamyl alcohol 용액을 이용하여 상등액을 얻었다.
- 심근경색모델은 이전에 발표된 방법9)에 기초하여 다음과 같이 실시하였다； 흰쥐 (Sprague-Dawley)에 케타민 (ketamine, 10 mg/kg)과 자이라진 (xylazine, 5 mg/kg)을 투여하여 마취를 유도하고 기도에 삽관한 후 전신마취를 시켰다. 이 쥐의 세 번째와 네 번째 늑골을 절제하여 흉부를 열고 심장을 늑간 내부로부터 도출시켰다.
- 22). 이 HY5053이 심근경색 치료제로 사용되기 위해서는 독성을 나타내지 않아야하므로 HY5053이 독성을 나타내는지 여부를 조사하기 위해 정상산소 조건에서도 세포의 생존율을 조사하였다 (Fig. 1B). 배양 2일 후 세포 수 (Ratio)는 HY5053을 첨가하지 않는 대조군 (1.
- , 서울, 대한민국)를 이용하여 온도와 이산화탄소의 농도는 일정하게 유지하면서 실험 목적에 따라 산소 분압을 3% (저산소 조건)로부터 21% (정상산소 조건)까지로 변화시키면서 48시간 동안 실험을 시행하였다. 이 배양조건에서 배양을 시작하기 직전에 진피의 에탄올추출물 (HY5053)을 50% 에탄올에 용해시켜 100 및 1,000 ㎍/mL 농도로 배양배지에 첨가한 실험군과 아무 것도 첨가하지 않은 음성대조군 (negative control)으로 나누어 배양하였다.
- 이것을 원심 분리하여 얻은 상등액을 protease K로 처리한 후 phenol-chloroform-isoamyl alcohol 용액을 이용하여 상등액을 얻었다. 이 상등액에 들어 있는 DNA를 에탄올 침전법을 이용하여 얻은 후 1.5% 에가 로즈 젤 (agarose gel)에 전기영동을 실시하였다.
- 에 기초하여 다음과 같이 실시하였다； 흰쥐 (Sprague-Dawley)에 케타민 (ketamine, 10 mg/kg)과 자이라진 (xylazine, 5 mg/kg)을 투여하여 마취를 유도하고 기도에 삽관한 후 전신마취를 시켰다. 이 쥐의 세 번째와 네 번째 늑골을 절제하여 흉부를 열고 심장을 늑간 내부로부터 도출시켰다. 좌전하행관상동맥을 5-0 프로렌 (prolene) 봉합실로 묶은 다음 심장을 흉부 속으로 재배치하고 피하조직과 피부를 봉합하였다.
- 4% 트리판 블루 용액과 세포 혼탁액을 동량으로 섞어서 5분이 지난 뒤에 혈구계 (hemocytometer)를 사용하여 살아 있는 세포의 수를 측정하였다. 이러한 세포 수의 측정은 동일 배양 well로부터는 2회를 측정하여 평균을 구하고, 이러한 것을 3 개의 다른 배양 well에 대해 구한 다음 이 3 개의 배양배지에 대한 세포수의 평균과 표준편차를 구하였다.
- 0% 2,3,5-triphenyl tetrazolium chloride (TTC) 용액에 37 ℃에서 10분간 담구어 염색하였다. 이러한 조각들 모두에서 희게 나타나는 죽은 부분의 면적을 Image J software를 이용하여 측정한 후 이를 심장 전체 면적으로 나눈 허혈지수 (ischemic index)를 계산하여 심장의 손상정도를 결정하였다.
- 이러한 세포생존을 증가시키는 것이 세포자살을 억제하여 일어나는 것인지를 DNA 분절 분석을 이용하여 조사한 결과 세포자살이 마지막으로 관찰되는 시점도 배양 24시간에서 30시간으로 늦추어졌다. 이를 근거로 에탄올추출물이 심근경색을 억제하는 효능을 나타내는지를 흰쥐의 좌전하 행관상동맥을 묶어 발생시킨 심근경색모델을 이용하여 조사하였다. 그 결과 이 추출물을 200 mg/kg로 허혈유발 1시간 전에 복강주사를 시행한 결과 TTC 염색법을 이용하여 확인한 경색면적이 44% 감소하였다.
- 결과 2의 DNA 분절실험에서 HY5053을 400 ㎍/mL로 첨가한 경우에 세포자살을 억제하여 세포생존을 개선시키는 효과가 관찰되었으므로 이 농도에 근사하도록 하면서 독성이 나타날 가능성을 줄이기 위해 투여용량을 200 mg/kg로 하였으며, 투여는 좌관상동맥을 묶기 1시간 전에 복강으로 주사하였다. 좌관상동맥을 묶어 발생한 허혈 1일째 심장을 적출하여 절편을 만든 후 손상된 정도를 TTC (2,3,5-triphenyl tetrazolium chloride)로 염색하였다 (Fig. 3A). TTC 염색에서 죽은 조직은 희게 나타나고 살아있는 조직은 붉게 나타난다.
- 이 쥐의 세 번째와 네 번째 늑골을 절제하여 흉부를 열고 심장을 늑간 내부로부터 도출시켰다. 좌전하행관상동맥을 5-0 프로렌 (prolene) 봉합실로 묶은 다음 심장을 흉부 속으로 재배치하고 피하조직과 피부를 봉합하였다. HY5053은 좌관상동맥을 묶어 허혈을 유발하기 1시간 전에 200 mg/kg의 용량으로 1 mL 생리식염수에 섞어 복강에 주사하고, 음성대조군으로 동일 부피 (1 mL)의 생리식염수만을 복강에 주사한 후 1일 동안 허혈상태로 방치하였다.
- 진피의 에탄올추출물 (HY5053)이 사람의 간암세포주인 HepG2 세포에 대해 저산소 조건 (3% 산소농도)에서 세포생존을 개선시키는지를 조사하기 위해 0 (Control), 100 및 1,000 ㎍/mL의 HY5053을 첨가한 조건에서 세포의 생존율을 조사하였다 (Fig. 1A). 저산소 조건에 들어가기 직전의 세포수를 1로 두었을 때 배양을 시작한지 1일이 지났을 때 살아남은 세포수 (Ratio)는 HY5053을 첨가하지 않은 대조군 (0.
- 진피의 에탄올추출물 (HY5053)이 심근경색에 미치는 영향을 조사하기 위해 흰쥐의 좌전하행관상동맥 (left anterior descending coronary artery)을 묶어 허혈조건을 1일 간 유발한 심장에 대해 HY5053으로 전처치하였을 때 심장의 손상이 줄어드는지를 조사하였다. 결과 2의 DNA 분절실험에서 HY5053을 400 ㎍/mL로 첨가한 경우에 세포자살을 억제하여 세포생존을 개선시키는 효과가 관찰되었으므로 이 농도에 근사하도록 하면서 독성이 나타날 가능성을 줄이기 위해 투여용량을 200 mg/kg로 하였으며, 투여는 좌관상동맥을 묶기 1시간 전에 복강으로 주사하였다.
- 진피를 깨끗하게 씻은 후 진피 200 g에 물 2 L를 넣고 약 2시간 동안 전기 약탕기 (대웅약탕기 DWP-2000, 대웅, 서울, 대한민국)에서 2회 반복 추출하였다. 추출물을 여과한 후 감압농축기 (NP-1, EYELA, Tokyo, Japan)로 감압농축하여 진피 에탄올추출물 (HY5053) 54 g을 얻었다.
대상 데이터
- Louis, MO)로부터 각각 구입하였다. 그리고, Tris는 Boehringer Ingelheim GmbH (Ingelheim, Germany), 케타민 (ketamine)은 유한양행 (서울, 대한민국)로부터 각각 구입하였다.
- 대한민국이 원산지인 진피는 대흥약업사 (대구, 대한민국)를 통하여 구매하였다. 진피를 깨끗하게 씻은 후 진피 200 g에 물 2 L를 넣고 약 2시간 동안 전기 약탕기 (대웅약탕기 DWP-2000, 대웅, 서울, 대한민국)에서 2회 반복 추출하였다.
- HY5053은 좌관상동맥을 묶어 허혈을 유발하기 1시간 전에 200 mg/kg의 용량으로 1 mL 생리식염수에 섞어 복강에 주사하고, 음성대조군으로 동일 부피 (1 mL)의 생리식염수만을 복강에 주사한 후 1일 동안 허혈상태로 방치하였다. 음성대조군과 HY5053 투여군에 사용된 쥐의 수는 각각 6마리와 7마리였다.
- 체중 170-230 g인 수컷 흰쥐 (Sprague-Dawley)는 효창 사이언스사 (서울)로부터 구입하여, 대구가톨릭 의대 동물사육실에서 일정한 온도 (19-23 ℃)와 명암주기 (12시간) 하에서 물과 사료를 자유롭게 섭취할 수 있도록 하면서 적응시켰다. 실험은 대구가톨릭 의대 자체 (Institutional Animal Care and Research Advisory Committee)에서 허가된 실험지침에 따라 수행되었다.
- 최소필수배지 (Minimum Essential Medium, MEM), 트리판 블루 (trypan blue) 용액 및 protease K는 Gibco BRL (Gaithersburg, MD)로부터, Triton X-100, EDTA 및 자일라진 (xylazine)은 Sigma Co. (St. Louis, MO)로부터 각각 구입하였다. 그리고, Tris는 Boehringer Ingelheim GmbH (Ingelheim, Germany), 케타민 (ketamine)은 유한양행 (서울, 대한민국)로부터 각각 구입하였다.
데이터처리
- 측정치들은 means±SD로 표시하였으며, 통계분석은 SPSS 소프트웨어 (SPSS 12.0 KO for Windows)를 사용하여 이루어졌다.
- 평균치의 분석은 Student's t-test로 이루어졌으며, P < 0.05이면 통계학적으로 유의하다고 판단하였다.
이론/모형
- 세포의 생존율 측정은 트리판 블루 염색법을 사용하였다. 이를 위해 배지를 제거한 후에 먼저 인산염 완충 식염수 (phosphate-buffered saline, PBS)로 한 번 씻어내고 트립신 (trypsin)으로 처리하였다.
- 체중 170-230 g인 수컷 흰쥐 (Sprague-Dawley)는 효창 사이언스사 (서울)로부터 구입하여, 대구가톨릭 의대 동물사육실에서 일정한 온도 (19-23 ℃)와 명암주기 (12시간) 하에서 물과 사료를 자유롭게 섭취할 수 있도록 하면서 적응시켰다. 실험은 대구가톨릭 의대 자체 (Institutional Animal Care and Research Advisory Committee)에서 허가된 실험지침에 따라 수행되었다.
성능/효과
- 본 연구에서는 이와 동일한 허혈조건에서 HepG2 세포의 생존을 개선시키는 진피가 심근경색을 예방하고 치료하는 효과가 있는지를 조사하는 실험을 실시하였다. HepG2 세포가 허혈조건에서 세포자살에 의해 죽을 때 DNA 사다리를 형성하는 것이 확인되었으므로4,10), 이 방법을 적용한 결과 진피가 DNA 사다리의 형성을 억제하였으며 이로서 진피가 세포자살을 억제하여 세포사멸을 방지한다는 것을 확인하였다 (Fig. 2). 이러한 세포실험을 근거로 허혈조건만 나타내는 심근경색모델을 이용하여 조사한 결과 진피가 경색부피를 감소시켜 효능을 나타내었다 (Fig.
- 이를 근거로 에탄올추출물이 심근경색을 억제하는 효능을 나타내는지를 흰쥐의 좌전하 행관상동맥을 묶어 발생시킨 심근경색모델을 이용하여 조사하였다. 그 결과 이 추출물을 200 mg/kg로 허혈유발 1시간 전에 복강주사를 시행한 결과 TTC 염색법을 이용하여 확인한 경색면적이 44% 감소하였다. 이러한 결과는 에탄올추출물이 관상동맥이 막힌 상태에서 심장의 손상을 줄이는 심장보호제로 개발될 수 있다는 것을 시사한다.
- 본 연구에서는 진피 (秦皮)의 에탄올추출물이 저산소조건 (산소분압 3%)에서 사람유래 간세포암종인 HepG2 세포의 세포생존을 개선시키는지를 조사하기 위해 진피의 에탄올추출물을 배양배지에 400 ㎍/mL 농도로 첨가하였다. 배양 1일 후 생존 세포수를 트리판 블루 염색법을 이용하여 조사한 결과 에탄올 추출물 투여군이 대조군에 비해 세포 생존수를 50%증가시켰다. 이러한 세포생존을 증가시키는 것이 세포자살을 억제하여 일어나는 것인지를 DNA 분절 분석을 이용하여 조사한 결과 세포자살이 마지막으로 관찰되는 시점도 배양 24시간에서 30시간으로 늦추어졌다.
- 따라서, 관상동맥이 막혀 발생하는 허혈상태에서 심근세포의 생존을 개선시키는 심근보호제 (cardioprotectant)를 개발하여 재관류 치료법의 효능을 더욱 높일 필요성이 있다3). 본 저자는 사람 간세포암종 (hepatocellular carcinoma) 세포주인 HepG2 세포를 활용하여 세포자살을 억제함으로써 허혈조건에서 세포생존을 개선시키는 식물추출물을 탐색하는 탐색법을 개발하고4), 이를 활용하여 작약 (Peonia lactiflora)5), 차풀 (Cassia mimosoides var. nomame)6) 및 눈개승마 (Aruncus dioicus)7)가 심근경색뿐만 아니라 뇌경색을 예방하고 치료하는데 효능을 나타내는 것을 발견하였다. 이러한 탐색방법을 적용한 결과 또 다른 세포생존 보호제 후보로 진피 (秦皮) (Cortex fraxini)가 탐색되었다.
- 23으로 적었다. 이러한 결과는 저산소 조건에서는 세포생존 개선 효과를 나타내면서 정상산소 조건에서는 세포독성을 나타내지 않기 위해서는 첨가되는 HY5053의 농도가 100에서 1,000㎍/mL 사이에서 이루어져야 하는 것을 알 수 있다. 이러한 연구결과를 근거로 DNA 분절 분석실험에서 HY5053의 농도는 400 ㎍/mL 조건에서 실시하였다.
- 2B(b)]. 이러한 결과는 진피의 에탄올추출물이 세포자살을 억제하는 효능을 가지고 있다는 것을 나타낸다.
- 이러한 결과를 정량적으로 나타내기 위해 대조군 (6마리)과 HY5053 투여군 (7마리)에 대해 죽은 부위의 정도를 나타내는 허혈지수 (Ischemic Index) (%)로 표시한 결과 아무 것도 투여하지 않은 대조군에 비해 HY5053을 200 mg/kg을 투여한 경우에 허혈지수가 44% 감소하였다(4.87±0.16 vs. 2.74±0.20, P < 0.05) (Fig. 3B).
- 배양 1일 후 생존 세포수를 트리판 블루 염색법을 이용하여 조사한 결과 에탄올 추출물 투여군이 대조군에 비해 세포 생존수를 50%증가시켰다. 이러한 세포생존을 증가시키는 것이 세포자살을 억제하여 일어나는 것인지를 DNA 분절 분석을 이용하여 조사한 결과 세포자살이 마지막으로 관찰되는 시점도 배양 24시간에서 30시간으로 늦추어졌다. 이를 근거로 에탄올추출물이 심근경색을 억제하는 효능을 나타내는지를 흰쥐의 좌전하 행관상동맥을 묶어 발생시킨 심근경색모델을 이용하여 조사하였다.
- 2). 이러한 세포실험을 근거로 허혈조건만 나타내는 심근경색모델을 이용하여 조사한 결과 진피가 경색부피를 감소시켜 효능을 나타내었다 (Fig. 3). 강황 등 한약재들 중에서 세포자살을 억제하여 심근경색 모델에서 효능을 나타내는 후보들이 다수 발견되었으므로16), 추가연구를 통해 진피도 이러한 효능을 나타내는 한약재 중의 하나로 인정될 수 있을 것으로 사료된다.
- 15로 높았다. 이러한 조건에서 세포로부터 DNA를 추출하여 에가로즈 젤 전기영동을 실시한 결과 HY5053을 투여하지 않은 대조군인 경우에는 배양 18시간에 최대의 진하기로 DNA가 관찰되며 세포가 조금이라도 살아있는 배양 24시간에도 DNA 사다리 (ladder)가 여전히 관찰되는 반면에 세포가 완전하게 죽은 배양 30 및 36시간인 경우에는 DNA 사다리 자체가 관찰되지 않았다 [Fig. 2B(a)].
- 이를 위해 저산소 조건에서 HY5053을 400 μg/mL를 첨가한 후 18, 24, 30 및 36시간이 지났을 때 세포생존을 개선시키는지를 조사한 결과 Fig. 1에서와 마찬가지로 세포생존 개선효과가 뚜렷하게 관찰되었다 (Fig. 2A).
- 저산소 조건에 들어가기 직전의 세포수를 1로 두었을 때 배양을 시작한지 1일이 지났을 때 살아남은 세포수 (Ratio)는 HY5053을 첨가하지 않은 대조군 (0.17±0.02)에 비해 HY5053을 100 및 1,000 ㎍/mL을 첨가한 경우에 첨가된 HY5053의 농도가 높을수록 더 높게 나타났다 (각각 0.38±0.07 및 0.79±0.22).
후속연구
- 3). 강황 등 한약재들 중에서 세포자살을 억제하여 심근경색 모델에서 효능을 나타내는 후보들이 다수 발견되었으므로16), 추가연구를 통해 진피도 이러한 효능을 나타내는 한약재 중의 하나로 인정될 수 있을 것으로 사료된다.
- 본 연구는 진피가 심근경색을 억제하는 효능을 가지는 것을 최초로 밝힘으로써 진피의 적응증을 넓힌 것에 의미가 있으며, 향후 진피추출물을 심근경색 예방 및 치료제로 개발하기 위해 경구투여시 효능을 나타내는지 여부와 활성을 나타내는 성분을 밝히는 연구가 추가로 필요할 것으로 사료된다.
- 그 결과 이 추출물을 200 mg/kg로 허혈유발 1시간 전에 복강주사를 시행한 결과 TTC 염색법을 이용하여 확인한 경색면적이 44% 감소하였다. 이러한 결과는 에탄올추출물이 관상동맥이 막힌 상태에서 심장의 손상을 줄이는 심장보호제로 개발될 수 있다는 것을 시사한다.
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