선택한 단어 수는 입니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
선택한 단어 수는 30입니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
문제 정의
- 본 연구에서는 자외선 차단제가 아니라, 방사선에 대한 생체방어 기능성 식품으로 개발된 생약복합조성물(HemoHIM)이 자외선에 의해 억제된 세포성 면역반응을 경감 또는 회복시킬 수 있는지 그 효과를 검증하는 것을 목표로 하였다.
- 본 연구팀은 한의학에서 사용하는 다양한 생약재와 한약처방제의 방사선에 대한 방호효과를 보고한 바 있으며[5,9-13,16,19], 세 종류의 생약재(당귀, 천궁, 백작약)를 이용하여 새로운 생약복합물을 개발하여 면역세포 활성화 효과, 면역․조혈계 회복촉진 효과, 재생조직 및 면역·조혈계의 방어 효과, 항산화 효과에 대해 보고하였다[21].
- 림프절로 이동한 Langerhans 세포는 T 세포에 항원을 제시하여 T 세포를 활성화시켜 증식반응과 사이토카인 분비를 유도하여 세포성 면역반응(cell-mediated immune response)을 유발한다[22,26]. 이러한 T 세포에 의한 세포매개성 면역반응은 UVB조사에 의해 억제되는데[6,29], 본 실험에서는 UVB로 억제되는 세포성 면역반응을 방호하는 생약복합조성물(HemoHIM)의 효과를 살펴보았다.
- 이상의 실험 결과로, HemoHIM이 자외선 조사에 의해 억제된 수지상세포의 기능을 방호하는 효과가 있다는 것을 시험관내 실험(in vitro)으로 확인하였고, 이러한 결과가 생체내 실험(in vivo)에서도 적용되는지 알아보기 위하여 다음 실험을 진행하였다.
가설 설정
- 1)The shaved abdominal skin of C57BL/6 mice was exposed to a single UVB radiation (300 mJ/cm2) or sham-radiation. The irradiated skin was treated intraperitoneally 24 hours before and 30 min after irradiation with 1 mg of HemoHIM.
- 1)The shaved abdominal skin of C57BL/6 mice was exposed to different doses of a single UVB radiation or sham-radiation. Four days after DNCB (0.
제안 방법
- 5%, 1%, 3%, 7% DNCB를 100 μl씩 도포하였다. DNCB를 적정량 복부에 도포한 생쥐의 경부(목), 액와(겨드랑이), 서혜부(복부), 슬와(다리근육) 림프절을 자외선 조사 4일, 5일, 6일 후에 무균적으로 떼어낸 다음 핀셋을 이용하여 단일세포로 만들어 trypan blue로 염색하여 생세포 수를 혈구계산반으로 계산하여 사용하였다. 분리한 림프구 세포 5×105개와 항원으로 DNBS (2, 4-Dinitrobenzen-sulfonic acid dihydrate)를 농도별(10, 30, 100, 300 μg/ml)로 96 well microplate에 분주하고 3일간 37℃, 5% CO2 배양기에서 배양한 후 림프구 세포의 증식을 측정하였다.
- 추출물의 고형분을 제거하고 감압농축하여 생약복합물 HIM-I을 얻었다. HIM-I의 일부를 취하여 4배 부피의 100% 에탄올 주정을 첨가하고(최종 에탄올 농도 약 80%), 25℃ 이하에서 16시간 정치한 후, 원심분리하여 침전된 조다당 분획 (HIM-I-P)과 상층의 에탄올 분획(HIM-I-E)을 수거하였다. 수거한 조다당 분획의 일부를 이에 해당하는 HIM-I에 첨가하여 생약복합조성물 HemoHIM을 제조하였다.
- HemoHIM을 구강으로 투여를 하였을 때도 동일한 효과가 나타나는지를 알아보기 위하여 하루에 0.5∼1 mg씩 3주 동안 섭취하도록 한 후 자외선을 조사하고 T 세포의 반응을 비교하였다.
- UVB 조사 2시간 후 DNCB 피부 감작을 위하여 노출된 복부에 0.25%, 0.5%, 1%, 3%, 7% DNCB를 100 μl씩 도포하였다.
- 이러한 수지상세포의 항원제시 기능을 억제시키는 자외선 조사량을 결정하기 위해 0∼320 mJ/cm2의 자외선을 수지상세포에 직접 조사하고, OVA항원과 OVA항원에 특이적으로 반응하는 T 세포주 (HS-1)와 반응시켜 T 세포주의 증식반응과 사이토카인(IL-2와 IFN-γ) 생산량을 측정하였다. 골수에서 분리한 세포에 IL-4와 GM-CSF를 첨가하여 분화시킨 수지상세포에 자외선을 조사한 다음, OVA항원을 첨가하고 24시간 배양한 후, T 세포주와 함께 다시 3일간 배양하여 T 세포주의 증식반응을 측정하였다. 그 결과 자외선 조사량에 비례하여 증식반응이 점차 감소하였고, 200 mJ/cm2 이상의 조사량에서는 완전히 억제되는 것으로 나타났다(Table 1).
- 수립된 HS-1 T 세포주는 24 well plate에서 배양하면서, 37℃에서 25분간 MMC (50 μg/ml)로 처리하고 세포 배양액으로 1,200 rpm, 5분(4℃)간 3번 세척한 동종의 생쥐 비장세포 5×106개와 OVA (1 mg/ml) 항원으로 2주에 한 번씩 활성화시켜 세포수를 늘려서 사용하였다. 그리고 이틀에 한번씩 CAS (concanavalin A supernatant)가 10%가 되도록 첨가한 배지로 교환하면서 세포주를 유지하였다.
- 다시 24시간 배양한 후 OVA에 특이적으로 반응하는 T세포주(5×104개)를 첨가하여 3일간 배양한 후 T 세포주의 증식을 측정하였다.
- 다시 24시간 배양한 후 OVA에 특이적으로 반응하는 T세포주(5×104개)를 첨가하여 다시 3일간 배양한 후 T세포주의 증식을 측정하였다.
- 즉 자외선 조사량이 증가함에 따라 OVA항원을 포획하여 처리하는 수지상세포의 항원제시기능이 저하되어 T 세포주를 활성화시키지 못하는 것으로 생각된다. 따라서 T 세포 활성화를 억제하는 자외선 조사량을 160 mJ/cm2 이하로 결정하고 다음 실험을 수행하였다.
- 8배 정도 증가하였다. 따라서 이 후 실험은 최대 T 세포 증식반응과 IL-2생산량을 유도하는 DNCB 0.5% 농도를 사용하였다.
- 분리한 림프구 세포 5×105개와 항원으로 DNBS (2, 4-Dinitrobenzen-sulfonic acid dihydrate)를 농도별(10, 30, 100, 300 μg/ml)로 96 well microplate에 분주하고 3일간 37℃, 5% CO2 배양기에서 배양한 후 림프구 세포의 증식을 측정하였다.
- 생쥐 골수에서 GM-CSF와 IL-4로 유도 배양한 수지상 세포를 회수하여 PBS에 현탁한 후 동량의 세포 수(3×105)를 6 well plate에 넣고 1,200 rpm, 3 min (25℃), 원심 침전하여 배양접시의 바닥에 가라앉힌 다음에 UVB lamp (F20T10, Sankyo denki, Japan)를 이용하여 1초에 1 mJ/cm2의 에너지가 방출되도록 UVB를 조사하였다.
- 생쥐(C57BL/6)를 OVA로 2차 면역한 후 비장을 분리하여 OVA에 특이적으로 증식반응을 나타내는 T 세포주를 수립하였고, 수립된 세포주는 유세포분석기로 분석하여 CD4+,CD8- T세포이며 항원자극에 대해 IL-2와 IFN-γ를 생산하는 Type 1 helper T 세포인 것을 확인하였고 HS-1으로 명명하였다.
- 생쥐(C57BL/6)를 경추 탈골법으로 희생시킨 후 1 ml 주사기를 이용하여 대퇴골(femur)과 경골(tibia)안에 있는 골수를 분리하여 단일세포로 만들었다. 적혈구 용해 완충액 (Tris-buffered ammonium chloride; 90 ml of 0.
- Louis, MO, USA)제품을 사용하였다. 세포의 증식반응을 측정하는데 사용한 Cell titer 96Ⓡ Aqueous One Solution Cell proliferation Assay은 Promega (Madison, WI, USA) 제품을 사용하였고, recombinant mouse GM-CSF와 IL-4는 R＆D제품을 사용하였다.
- HIM-I의 일부를 취하여 4배 부피의 100% 에탄올 주정을 첨가하고(최종 에탄올 농도 약 80%), 25℃ 이하에서 16시간 정치한 후, 원심분리하여 침전된 조다당 분획 (HIM-I-P)과 상층의 에탄올 분획(HIM-I-E)을 수거하였다. 수거한 조다당 분획의 일부를 이에 해당하는 HIM-I에 첨가하여 생약복합조성물 HemoHIM을 제조하였다. 제조한 HemoHIM은 동결건조하여 냉동저장하였으며, 실험 직전에 증류수에 녹여 사용하였다.
- 수지상세포에 자외선을 조사한 후 HemoHIM을 처리하여도 수지상세포의 항원제시기능에 대한 방호효과가 나타나는 지를 확인하기 위해, 자외선 조사 후 HemoHIM을 농도별로 처리하여 24시간 배양하고, OVA항원과 T 세포주를 첨가하여 T 세포주 반응을 측정하였다. HemoHIM을 처리하지 않은 대조군에 비해 후처리하였을 때, T 세포주의 증식반응은 비슷하거나 오히려 약간 감소하는 것으로 나타나, 수지상세포에 자외선을 조사하고 HemoHIM을 후처리하였을 경우에 T 세포주의 증식반응을 유의하게 회복시키지는 못하는 것으로 나타났다(Table 3).
- 시료 전 처리의 경우에 5일간 배양한 수지상세포(3×104개)에 HemoHIM을 농도별(1, 10, 100 μg/ml)로 처리하고 24시간 후 자외선(0~160 mJ/cm2)을 조사하고 동시에 OVA(1 mg/ml) 항원을 처리하였다.
- 시료 후 처리의 경우에 6일간 배양한 수지상세포(3×104개)에 자외선(0-160 mJ/cm2)을 조사하고 HemoHIM을 농도별(1, 10, 100 μg/ml)로 처리하고 동시에 OVA(1 mg/ml)항원을 처리하였다.
- 이러한 수지상세포의 항원제시 기능을 억제시키는 자외선 조사량을 결정하기 위해 0∼320 mJ/cm2의 자외선을 수지상세포에 직접 조사하고, OVA항원과 OVA항원에 특이적으로 반응하는 T 세포주 (HS-1)와 반응시켜 T 세포주의 증식반응과 사이토카인(IL-2와 IFN-γ) 생산량을 측정하였다.
- 자외선 조사로 억제된 수지상세포의 T 세포주 활성화 기능을 HemoHIM 전처리로 방호할 수 있는지 확인하기 위하여, 수지상세포에 자외선을 조사하기 24시간동안 HemoHIM을 농도별로 처리하고, 자외선 조사 후에 OVA항원과 T 세포주를 첨가하여 배양하였다. 그 결과 HemoHIM을 24시간동안 전처리하였을 때, 처리하지 않은 대조군에 비해 T 세포주의 증식반응이 증가한 것으로 나타났다(Table 2).
- 자외선을 조사하기 24시간 전과 조사 후 30분 이내에 HemoHIM (1 mg)을 생쥐 복강에 투여하고 자외선을 조사한 실험군의 T 세포 반응을 비교하였다. 그 결과 자외선을 조사하지 않은 음성 대조군에 비해 자외선만을 조사한 양성 대조군 군에서 T 세포의 증식반응이 유의하게 감소하였다(Table 8).
- 생쥐(C57BL/6)를 경추 탈골법으로 희생시킨 후 1 ml 주사기를 이용하여 대퇴골(femur)과 경골(tibia)안에 있는 골수를 분리하여 단일세포로 만들었다. 적혈구 용해 완충액 (Tris-buffered ammonium chloride; 90 ml of 0.16 M NH4Cl, 10 ml of 0.17 M Tris, PH 7.2)을 처리하여 적혈구를 제거한 후, washing용액으로 1,200 rpm에서 5분간 3회 원심 분리하여 충분히 세척한 다음, 혈구계산반을 이용하여 세포수를 계산하였다. GM-CSF (1,000 U/ml)와 IL-4 (1,000 U/ml)가 포함된 배지(RPMI 1640, FCS 10%)에 부유된 골수세포(1×106개/5 ml/well)를 6 well culture plate에서 배양하였다.
- 즉 HemoHIM을 UVB을 조사하기 24시간 전과 조사 후 30분 이내에 복강으로 1 mg씩 투여하거나, 먹는 물에 첨가하여 3주 동안 경구투여(0.5∼1 mg/day)한 후 UVB를 조사하였다.
- 02)이 유도되었다(Table 4). 즉 분리한 림프구에 불용성인 DNCB 대신에 유사한 구조를 가지는 수용성 DNBS를 농도별로 첨가하고 3일간 배양하여 DNBS에 대해 증식하는 T 세포의 반응을 측정하였다. T 세포의 증식반응은 DNBS 농도에 의존적으로 증가하였고, 300 μg/m에서 최대 증식반응이 나타났다.
- 서울 경동 한약재 시장에서 구입한 생약재 3종, 즉 당귀(Danggui, Angelica gigas Nakai)의 뿌리, 천궁(Chuanxiong, Cnidium officinale Makino)의 근경, 백작약(Baishaoyao, Paeonia japonica Miyabe)의 뿌리를 동일한 무게비율로 혼합한 후, 혼합 생약재 100 g당 증류수 1,000 ml을 가하고 4시간 열탕 추출하였다. 추출물의 고형분을 제거하고 감압농축하여 생약복합물 HIM-I을 얻었다. HIM-I의 일부를 취하여 4배 부피의 100% 에탄올 주정을 첨가하고(최종 에탄올 농도 약 80%), 25℃ 이하에서 16시간 정치한 후, 원심분리하여 침전된 조다당 분획 (HIM-I-P)과 상층의 에탄올 분획(HIM-I-E)을 수거하였다.
- 피하에 있는 항원전달세포인 Langerhans 세포가 DNCB를 인지하고 포획하여 림프절로 이동한 후에, DNCB를 T 세포에 전달하여 활성화시키는데 걸리는 시간을 측정하기 위해, 피부 도말 후 각각 4일, 5일, 6일에 림프구를 분리하여 T 세포의 반응을 측정하였다. 그 결과 0.
- 항원으로 사용하는 DNCB의 적정량을 결정하기 위하여, 농도별로 생쥐 복부에 바르고 5일 후에 림프절을 분리하여 림프구를 회수하고, 항원에 대한 T 세포의 반응을 측정하였다. DNCB에 대한 T 세포의 증식반응을 측정한 결과, 0.
- 항원전달세포인 Langerhans 세포가 T 세포의 반응을 최대로 유도하는 조건에서, 100, 300, 1,000 mJ/cm2의 자외선을 조사하고 T 세포의 반응을 측정하였다. 그 결과 자외선 조사량이 증가함에 따라 DNBS에 대한 T 세포의 증식반응이 억제되었다(Table 7).
- 회수한 세포를 washing용액으로 1,200 rpm에서 5분간 원심 분리하여 충분히 세척한 다음, 세포 (2.5×106개/5 ml/well) 배양액에 HemoHIM을 농도별(1, 10, 100 μg/ml)로 첨가한 다음에 24시간 배양하고 회수하여 실험에 사용하였다.
대상 데이터
- UVB (280~320 nm)는 진피 상부층까지 도달하고, 급속한 화상이나 홍반을 일으키며 만성 노출시 피부암을 유발하는데 피부암의 약 90%가 UVB에 의해 유발된다[30]. 따라서 본 연구에서는 자외선 중에서 화상과 암을 유발하는 UVB를 대상으로 하였다.
- 생약복합조성물(HemoHIM)은 아래와 같은 방법으로 제조한 시료를 (주)선바이오텍에서 제공받아 사용하였다. 서울 경동 한약재 시장에서 구입한 생약재 3종, 즉 당귀(Danggui, Angelica gigas Nakai)의 뿌리, 천궁(Chuanxiong, Cnidium officinale Makino)의 근경, 백작약(Baishaoyao, Paeonia japonica Miyabe)의 뿌리를 동일한 무게비율로 혼합한 후, 혼합 생약재 100 g당 증류수 1,000 ml을 가하고 4시간 열탕 추출하였다.
- 생쥐는 일정한 온도(24±1℃)에서 물과 사료를 충분히 공급하고, 낮과 밤의 주기를 12시간씩 조절하면서 가능한 스트레스를 받지 않도록 사육하면서, 생후 8∼12주 사이의 생쥐를 실험에 사용하였다.
- 생약복합조성물(HemoHIM)은 아래와 같은 방법으로 제조한 시료를 (주)선바이오텍에서 제공받아 사용하였다. 서울 경동 한약재 시장에서 구입한 생약재 3종, 즉 당귀(Danggui, Angelica gigas Nakai)의 뿌리, 천궁(Chuanxiong, Cnidium officinale Makino)의 근경, 백작약(Baishaoyao, Paeonia japonica Miyabe)의 뿌리를 동일한 무게비율로 혼합한 후, 혼합 생약재 100 g당 증류수 1,000 ml을 가하고 4시간 열탕 추출하였다. 추출물의 고형분을 제거하고 감압농축하여 생약복합물 HIM-I을 얻었다.
- 세포 배양에 필요한 RPMI-1640, FBS (Fetal Bovine Serum), 항생제(antibiotic-antimycotic)는 Gibco BRL (Grand Island, NY, USA)제품을 사용하였으며, 접촉성과민반응의 유도에 필요한 DNCB (1-Chloro-2, 4-Dinitrobenzene), DNBS (2, 4-Dinitrobenzen-sulfonic acid dihydrate)와 olive oil, 그리고 2ME (2-mecaptoethanol), OVA (ovalbumin), MMC (Mitomycin C), sodium bicarbonate (NaHCO3), acetone은 Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, USA)제품을 사용하였다. 세포의 증식반응을 측정하는데 사용한 Cell titer 96Ⓡ Aqueous One Solution Cell proliferation Assay은 Promega (Madison, WI, USA) 제품을 사용하였고, recombinant mouse GM-CSF와 IL-4는 R＆D제품을 사용하였다.
- 실험동물은 (주)대한바이오링크(충청북도 음성군, 대한민국)에서 특정병원체부재(specific pathogen free) C57BL/6를 공급받아 실험동물 사육실에서 사육상자당 5개체의 밀도를 유지하며 사육하였다. 생쥐는 일정한 온도(24±1℃)에서 물과 사료를 충분히 공급하고, 낮과 밤의 주기를 12시간씩 조절하면서 가능한 스트레스를 받지 않도록 사육하면서, 생후 8∼12주 사이의 생쥐를 실험에 사용하였다.
이론/모형
- 다시 24시간 배양한 후 OVA에 특이적으로 반응하는 T세포주(5×104개)를 첨가하여 다시 3일간 배양한 후 T세포주의 증식을 측정하였다. T세포주 증식은 Cell titer 96Ⓡ Aqueous One Solution Cell proliferation Assay를 사용하여 측정하였다. 즉 배양액 100 μl에 cell titer 시약을 15 μl씩 첨가하여 4~8시간 동안 배양한 다음 Microplate reader (OPTImax, Molecular Devices, USA)를 이용하여 490 nm에서 흡광도를 측정하였다.
- 의 에너지가 방출되도록 UVB를 조사하였다. UVB 방출량 측정은 UVB Solarmeter (Mat SCIENCE TECH)를 이용하였다.
- 자외선을 수지상세포에 조사하기 전과 후에 HemoHIM을 농도별(1, 10, 100 μg/ml)로 처리하고 OVA항원과 T세포주를 첨가하여 24시간 배양 한 후, 배양 상층액을 수거하여 상층액에 포함된 IL-2, IFN-γ의 양을 효소 항체법(enzyme-linked immunsorbent assay : ELISA)를 이용하여 측정하였다.
성능/효과
- 2)Day 7 DC cocultured with HS-1 for 24 hr, and IL-2 and IFN-γ levels in the supernatants were determined by ELISA.
- DNCB 0.5%일 때 DNBS(100 μg/ml)에 대한 IL-2 생산량(187.7±1.8 pg/ml)이 대조군(18.7±1.2 pg/ml)에 비해 약 10배정도 증가하였고, 0.25% DNCB에 대해서는 약 5.4배로 증가하였다(Table 5).
- DNCB에 대한 T 세포의 증식반응을 측정한 결과, 0.5% DNCB를 피부에 발랐을 때 가장 큰 증식반응(0.866±0.02)이 유도되었다(Table 4).
- 수지상세포에 자외선을 조사한 후 HemoHIM을 처리하여도 수지상세포의 항원제시기능에 대한 방호효과가 나타나는 지를 확인하기 위해, 자외선 조사 후 HemoHIM을 농도별로 처리하여 24시간 배양하고, OVA항원과 T 세포주를 첨가하여 T 세포주 반응을 측정하였다. HemoHIM을 처리하지 않은 대조군에 비해 후처리하였을 때, T 세포주의 증식반응은 비슷하거나 오히려 약간 감소하는 것으로 나타나, 수지상세포에 자외선을 조사하고 HemoHIM을 후처리하였을 경우에 T 세포주의 증식반응을 유의하게 회복시키지는 못하는 것으로 나타났다(Table 3). 그러나 T 세포주의 IL-2와 IFN-γ 생산량은 HemoHIM 후처리 농도에 따라 약간 증가하였다.
- IFN-r 생산량도 DNCB 농도가 증가할수록 증가하였고, 7% DNCB일 때 DNBS (100 μg/ml)에 대해서 실험군(248.7±16.5 pg/ml)은 대조군(32.0±16.5 pg/ml)에 비해 약 7.8배 정도 증가하였다.
- IL-2 생산은 200 mJ/cm2 이상의 조사량에서는 완전히 억제되는 것으로 나타났고, IFN-γ 생산량도 자외선 조사량이 증가할수록 급격히 감소하였으며, 160 mJ/cm2 이상의 조사량에서는 자외선을 조사하지 않은 대조군에 비해 매우 적은 것으로 나타났다.
- 그러나 자외선 조사로 감소한 T 세포의 증식반응이 HemoHIM을 복강 투여한 실험군에서는 완전히 회복되었으며, 자외선을 조사하지 않은 음성 대조군에 비해 오히려 증가한 것으로 나타났다. IL-2와 IFN-r 생산량도 양성 대조군에서 유의하게 감소하였으나, 실험군에서 유의하게 회복하였다. 이상의 실험 결과, 자외선 조사에 의해 저하된 피부 항원전달세포인 Langerhans 세포의 기능이 HemoHIM을 복강으로 투여 하였을 때 완전히 회복되는 것으로 나타났다.
- T 세포의 증식반응은 DNBS 농도에 의존적으로 증가하였고, 300 μg/m에서 최대 증식반응이 나타났다.
- 그 결과 0.5% DNCB를 피부에 바르고 4일 후에 림프절를 분리하였을 때, DNBS항원에 대해 가장 높은 T 세포의 증식반응(0.520±0.02)이 나타났다(Table 6).
- 자외선 조사로 억제된 수지상세포의 T 세포주 활성화 기능을 HemoHIM 전처리로 방호할 수 있는지 확인하기 위하여, 수지상세포에 자외선을 조사하기 24시간동안 HemoHIM을 농도별로 처리하고, 자외선 조사 후에 OVA항원과 T 세포주를 첨가하여 배양하였다. 그 결과 HemoHIM을 24시간동안 전처리하였을 때, 처리하지 않은 대조군에 비해 T 세포주의 증식반응이 증가한 것으로 나타났다(Table 2). 즉 120 또는 160 mJ/cm2을 조사한 T 세포주 증식반응 0.
- 골수에서 분리한 세포에 IL-4와 GM-CSF를 첨가하여 분화시킨 수지상세포에 자외선을 조사한 다음, OVA항원을 첨가하고 24시간 배양한 후, T 세포주와 함께 다시 3일간 배양하여 T 세포주의 증식반응을 측정하였다. 그 결과 자외선 조사량에 비례하여 증식반응이 점차 감소하였고, 200 mJ/cm2 이상의 조사량에서는 완전히 억제되는 것으로 나타났다(Table 1). 그리고 수지상세포에 대한 자외선 조사량이 증가함에 따라 IL-2와 IFN-γ 생산량이 감소하는 것으로 나타났다.
- 의 자외선을 조사하고 T 세포의 반응을 측정하였다. 그 결과 자외선 조사량이 증가함에 따라 DNBS에 대한 T 세포의 증식반응이 억제되었다(Table 7). 특히 1,000 mJ/cm2 자외선을 조사하였을 때는 T 세포의 증식반응이 거의 측정되지 않았고, 300 mJ/cm2 자외선을 조사한 경우에는 대조군에 비해 약 40%정도 억제되는 것으로 나타났다.
- 자외선을 조사하기 24시간 전과 조사 후 30분 이내에 HemoHIM (1 mg)을 생쥐 복강에 투여하고 자외선을 조사한 실험군의 T 세포 반응을 비교하였다. 그 결과 자외선을 조사하지 않은 음성 대조군에 비해 자외선만을 조사한 양성 대조군 군에서 T 세포의 증식반응이 유의하게 감소하였다(Table 8). 그러나 자외선 조사로 감소한 T 세포의 증식반응이 HemoHIM을 복강 투여한 실험군에서는 완전히 회복되었으며, 자외선을 조사하지 않은 음성 대조군에 비해 오히려 증가한 것으로 나타났다.
- 그 결과 자외선을 조사하지 않은 음성 대조군에 비해 자외선만을 조사한 양성 대조군 군에서 T 세포의 증식반응이 유의하게 감소하였다(Table 8). 그러나 자외선 조사로 감소한 T 세포의 증식반응이 HemoHIM을 복강 투여한 실험군에서는 완전히 회복되었으며, 자외선을 조사하지 않은 음성 대조군에 비해 오히려 증가한 것으로 나타났다. IL-2와 IFN-r 생산량도 양성 대조군에서 유의하게 감소하였으나, 실험군에서 유의하게 회복하였다.
- 그리고 수지상세포에 대한 자외선 조사량이 증가함에 따라 IL-2와 IFN-γ 생산량이 감소하는 것으로 나타났다.
- 5% DNCB를 피부에 바르고, 4일 후에 림프절을 분리하여 DNBS에 대한 T 세포의 반응을 관찰하였을 때, T 세포의 증식반응과 IL-2, IFN-r의 생산량이 유의하게 감소하는 것으로 나타났다. 따라서 동일한 조건에서 자외선에 의해 억제된 피부 Langerhans 세포의 항원 전달기능을 방호하는 HemoHIM의 효과를 확인하였다.
- 4배로 증가하였다. 따라서 자외선 조사 후에 HemoHIM을 처리하였을 경우에도 자외선 조사에 의해 억제되는 수지상세포의 T 세포주 활성화 기능을 방호하는 효과가 있다는 것을 알 수 있었다.
- 6 ng/ml)만큼은 증가하지 않았다. 따라서 자외선 조사전에 HemoHIM을 처리하였을 경우에 자외선 조사에 의해 억제되는 수지상세포의 T 세포주 활성화 기능을 방호하는 효과가 있다는 것을 알 수 있었다.
- 수지상세포가 T 세포를 활성화시키는 것은, 포획한 항원을 분해하여 MHC 분자에 항원 을 결합시켜 T세포 항원 수용체를 자극하는 신호와 수지상세포가 가진 세포 표면 단백질 분자로 T세포 표면 단백질 분자를 자극하는 신호를 전달하는 것이다[1]. 따라서 자외선을 조사하기 전 후에 HemoHIM을 처리하였을 때, 수지상세포의 T 세포 활성화 기능이 회복된 것은 우선적으로 수지상세포 표면분자의 발현이 증가된 결과로 해석할 수 있다. 즉 본 연구자들의 이전 실험에서 HemoHIM을 첨가하여 수지상세포를 배양하였을 때, T세포의 세포표면 분자인 CD28, CD152, CD154와 결합하여 T세포를 활성화 시킬 수 있는 CD40, CD86 (B7-2) 분자의 발현이 유의하게 증가한 것을 확인하였고[25], 그 외 Agaricus blazei의 물추출 성분[8]과 Aloe vera의 추출 성분[15], Candida β-D-glucan [7] 등이 세포표면 분자의 발현을 증가시키다는 보고도 있었다.
- 특히 1,000 mJ/cm2 자외선을 조사하였을 때는 T 세포의 증식반응이 거의 측정되지 않았고, 300 mJ/cm2 자외선을 조사한 경우에는 대조군에 비해 약 40%정도 억제되는 것으로 나타났다. 또한 IL-2와 IFN-r 생산량도 자외선을 조사하지 않은 대조군과 비교하였을 때 자외선 조사량이 증가함에 따라 감소하는 것으로 나타났다. 이상의 실험 결과, 300 mJ/cm2의 자외선을 조사한 2시간 후에 0.
- 이 때 증식반응은 DNBS 농도에 의존적으로 증가하였고, IL-2 생산량 (252.75±5.30)은 DNBS 300 μg/ml일 때 6일 후에 가장 많았지만, IFN-r 생산량(690.00±21.21)은 4일 후에 가장 많게 나타났다.
- 또한 IL-2와 IFN-r 생산량도 자외선을 조사하지 않은 대조군과 비교하였을 때 자외선 조사량이 증가함에 따라 감소하는 것으로 나타났다. 이상의 실험 결과, 300 mJ/cm2의 자외선을 조사한 2시간 후에 0.5% DNCB를 피부에 바르고, 4일 후에 림프절을 분리하여 DNBS에 대한 T 세포의 반응을 관찰하였을 때, T 세포의 증식반응과 IL-2, IFN-r의 생산량이 유의하게 감소하는 것으로 나타났다. 따라서 동일한 조건에서 자외선에 의해 억제된 피부 Langerhans 세포의 항원 전달기능을 방호하는 HemoHIM의 효과를 확인하였다.
- 그리고 IL-2와 IFN-r 생산량도 증식반응과 동일한 결과가 나타났다. 이상의 실험 결과, 자외선 조사에 의해 저하된 피부 항원전달세포인 Langerhans 세포의 기능이 HemoHIM을 구강으로 투여하였을 때 완전히 회복되는 것으로 나타났다.
- IL-2와 IFN-r 생산량도 양성 대조군에서 유의하게 감소하였으나, 실험군에서 유의하게 회복하였다. 이상의 실험 결과, 자외선 조사에 의해 저하된 피부 항원전달세포인 Langerhans 세포의 기능이 HemoHIM을 복강으로 투여 하였을 때 완전히 회복되는 것으로 나타났다.
- 03과 비슷하게 나타났다. 자외선 조사량이 40에서 160 mJ/cm2로 증가함에 따라 T 세포주의 IL-2 생산량이 급격히 감소하였지만, HemoHIM을 전처리하였을 때 IL-2 생산량이 오히려 더 증가 하였다(Table 2). 즉 120 mJ/cm2을 조사한 대조군(164±5 pg/ml)에 비해 HemoHIM (100 μg/ml)을 전처리한 실험군 (904±27 pg/ml)에서 IL-2 생산량이 약 5.
- 5∼1 mg씩 3주 동안 섭취하도록 한 후 자외선을 조사하고 T 세포의 반응을 비교하였다. 자외선만을 조사한 양성 실험군에 비하여 HemoHIM을 구강 투여한 다음 자외선을 조사한 실험군에서 항원에 대한 T 세포의 증식반응이 유의하게 증가하였고 음성 대조군보다 더 큰 증식반응이 나타났다(Table 9). 그리고 IL-2와 IFN-r 생산량도 증식반응과 동일한 결과가 나타났다.
- 21)은 4일 후에 가장 많게 나타났다. 즉 0.5% DNCB를 피부에 바르고 4일 후에 DNBS에 대한 T 세포의 반응이 가장 높게 나타났다.
- 즉 120 mJ/cm2을 조사한 대조군(164±5 pg/ml)에 비해 HemoHIM (100 μg/ml)을 전처리한 실험군 (904±27 pg/ml)에서 IL-2 생산량이 약 5.5배로 증가하는 것을 확인할 수 있었다.
- 즉 120 또는 160 mJ/cm2을 조사한 T 세포주 증식반응 0.60±0.0, 0.60±0.01에 비해, HemoHIM (100 μg/ml)을 전처리하였을 때 0.69±0.01, 0.69±0.02로 유의하게 증가하였고, 40 또는 80 mJ/cm2을 조사한 T 세포주 증식반응 0.65±0.0, 0.64±0.01에 비해, HemoHIM (10 μg/ml)을 전처리하였을 때 0.75±0.02, 0.70±0.0 로 자외선을 조사하지 않은 대조군의 증식반응 0.76±0.03과 비슷하게 나타났다.
- 즉 자외선 120 mJ/cm2을 조사한 대조군(4.3±0.2 ng/ml)에 비해 HemoHIM (100 μg/ml)을 전처리한 실험군 (18.6±1.2 ng/ml)에서 IFN-γ 생산량이 약 4.3배로 증가하였다.
- 그 결과 자외선 조사량이 증가함에 따라 DNBS에 대한 T 세포의 증식반응이 억제되었다(Table 7). 특히 1,000 mJ/cm2 자외선을 조사하였을 때는 T 세포의 증식반응이 거의 측정되지 않았고, 300 mJ/cm2 자외선을 조사한 경우에는 대조군에 비해 약 40%정도 억제되는 것으로 나타났다. 또한 IL-2와 IFN-r 생산량도 자외선을 조사하지 않은 대조군과 비교하였을 때 자외선 조사량이 증가함에 따라 감소하는 것으로 나타났다.
- 특히 자외선 40 mJ/cm2을 조사한 대조군(4,660±5 pg/ml)에 비해 HemoHIM(100 μg/ml)으로 후처리한 실험군(6,526±12 pg/ml)에서 T 세포의 IL-2 생산량이 약 1.4배로 증가하였다.
후속연구
- 본 연구는 방사선 취급자 또는 암치료 과정에서 방사선에 노출된 환자를 위한 기능성식품 개발을 위한 원료로 개발한 HemoHIM을 이용하여 자외선으로 인하여 저하된 피부 면역기능을 방호 또는 개선을 위한 새로운 가능성을 제시한 결과로 생각되며, 특히 수지상세포를 이용한 시험관 내 실험과 동물실험에서 자외선에 의한 피부 면역세포의 저하된 각종 기능을 보호하는 탁월한 효과를 가지는 것으로 나타나, 사람을 대상으로 하는 임상실험에 적용하여 그 효과를 증명할 수 있는 가능성이 높다고 생각한다. 그리고 기존의 자외선 차단제나 화장품에 첨가함으로써 새로운 기능성 화장품으로의 개발 가능성도 충분하다고 생각한다.
- 본 연구는 방사선 취급자 또는 암치료 과정에서 방사선에 노출된 환자를 위한 기능성식품 개발을 위한 원료로 개발한 HemoHIM을 이용하여 자외선으로 인하여 저하된 피부 면역기능을 방호 또는 개선을 위한 새로운 가능성을 제시한 결과로 생각되며, 특히 수지상세포를 이용한 시험관 내 실험과 동물실험에서 자외선에 의한 피부 면역세포의 저하된 각종 기능을 보호하는 탁월한 효과를 가지는 것으로 나타나, 사람을 대상으로 하는 임상실험에 적용하여 그 효과를 증명할 수 있는 가능성이 높다고 생각한다. 그리고 기존의 자외선 차단제나 화장품에 첨가함으로써 새로운 기능성 화장품으로의 개발 가능성도 충분하다고 생각한다.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.