선택한 단어 수는 입니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
선택한 단어 수는 30입니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
문제 정의
- 따라서 본 연구에서는 淸血地黃湯의 용혈성 빈혈유발 억제효과 및 빈혈 회복 효과를 살펴보기 위하여, 흰쥐에 PHZ를 이용한 용혈성 빈혈 모델을 적용하여, 혈액학적 소견과 체중, 비장의 변화를 살펴보았다.
제안 방법
- 10일째 되는 날, 동물을 희생시킨 후 비장 무게를 측정하였다.
- 5cc씩 채혈하였다. 10일째 되는 날은 동물을 희생하고, 심장천자를 통해 2cc씩 채혈하였다. 혈액은 EDTA 처리되어 있는 vacutainer에 채취하여 적혈구수(red blood cell, RBC), 혈색소(hemoglobin, Hb), 평균적혈구용적(mean corpuscular volume, MCV), 평균적혈구혈색소량(mean corpuscular hemoglobin, MCH), 평균적혈구혈색소농도(mean corpuscular hemoglobin concentration, MCHC) 망상적혈구(reticulocyte)를 automated hematology analyzers; Sysmex XE-2100(Sysmex Corporation, Kobe, Japan)을 사용하여 측정하였다.
- 淸血地黃湯 5첩 분량 305g을 Round flask에 넣고 1500ml의 3차 증류수를 더하여 관류냉각장치를 부착한 상태로 2시간 동안 가열 추출하여 얻은 추출액을 Watmann여과지로 여과한 후 감압증류장치 (Rotary evaporator, Buchi RE121, SWISS)로 감압 농축하여 농축액을 얻었다. 농축액을 동결건조기 (Freeze dryer, EYELA, Japan)로 건조하여, 34g(수율 11.
- 대조군은 10일 동안 증류수를 경구투여하면서, 1, 2, 3일째 날 PHZ을 복강주사 하였다. 淸血地黃湯군은 10일간 淸血地黃湯을 0.5 g/kg 용량으로 경구투여하면서, 1, 2, 3일째 날 PHZ를 복강주사 하였다.
- 淸血地黃湯의 용혈성 빈혈에 대한 효과를 알아보기 위해, PHZ으로 쥐에 용혈성 빈혈을 유발하고, 적혈구수(red blood cell, RBC), 혈색소(hemoglobin, Hb), 평균적혈구용적(mean corpuscular volume, MCV), 평균적혈구혈색소량(mean corpuscular hemoglobin, MCH), 평균적혈구혈색소농도(mean corpuscular hemoglobin concentration, MCHC), 망상적혈구(reticulocyte)를 측정하여 다음과 같은 결과를 얻었다.
- 실험은 총 10일 동안 이루어졌으며, 정상군은 10일 동안 지속적으로 증류수를 경구투여하면서, 1, 2, 3일째 날 식염수 복강주사를 시행하였다. 대조군은 10일 동안 증류수를 경구투여하면서, 1, 2, 3일째 날 PHZ을 복강주사 하였다. 淸血地黃湯군은 10일간 淸血地黃湯을 0.
- 본 실험에서는 기존 논문의 방법을 참고하여9,14) Phenylhydrazine(Sigma-Aldrich사, MO, USA)을 40 mg/kg 용량으로 3일간 복강 주사하는 방법을 활용하여 흰쥐에 용혈성 빈혈을 유발 하였다.
- 본 연구에서는 각종 출혈 증상에 통용되는 淸血地黃湯의 용혈성 빈혈에 대한 효과를 알아보기 위해, PHZ으로 쥐에 용혈성 빈혈을 유발하고, 적혈구수(red blood cell, RBC), 혈색소(hemoglobin, Hb), 평균적혈구용적(mean corpuscular volume, MCV), 평균적혈구혈색소량(mean corpuscular hemoglobin, MCH), 평균적혈구혈색소농도(mean corpuscular hemoglobin concentration, MCHC), 망상적혈구(reticulocyte), 체중, 비장의 무게를 관찰하였다.
- 실험 동물은 멸균한 polycarbonate cage에 방사선 멸균한 고형사료(대한실험동물센터)와 물을 충분히 공급하였으며, 1주일 동안 명암주기 12시간 간격, 실온 25±2℃, 습도 55%의 실험실 환경에 적응시킨 후 본 실험을 시작하였다.
- 실험은 총 10일 동안 이루어졌으며, 정상군은 10일 동안 지속적으로 증류수를 경구투여하면서, 1, 2, 3일째 날 식염수 복강주사를 시행하였다. 대조군은 10일 동안 증류수를 경구투여하면서, 1, 2, 3일째 날 PHZ을 복강주사 하였다.
- 채혈은 꼬리정맥과 심장천자를 통해 이루어졌으며, 용혈성 빈혈 유발하기 전날인 0일, PHZ으로 용혈성 빈혈을 3일간 유발한 다음날인 4일과 7일이 되는 날 꼬리정맥에서 각각 1.5cc씩 채혈하였다. 10일째 되는 날은 동물을 희생하고, 심장천자를 통해 2cc씩 채혈하였다.
- 혈액은 EDTA 처리되어 있는 vacutainer에 채취하여 적혈구수(red blood cell, RBC), 혈색소(hemoglobin, Hb), 평균적혈구용적(mean corpuscular volume, MCV), 평균적혈구혈색소량(mean corpuscular hemoglobin, MCH), 평균적혈구혈색소농도(mean corpuscular hemoglobin concentration, MCHC) 망상적혈구(reticulocyte)를 automated hematology analyzers; Sysmex XE-2100(Sysmex Corporation, Kobe, Japan)을 사용하여 측정하였다.
- 희생하는 10일째 날 비장을 적출하여 비장의 무게를 측정하였다. 정상군의 비장 무게는 0.
- 흰 쥐는 한 군에 5마리씩 균등하게 배치하였고, 정상군(Normal), PHZ 처치 대조군(이하 대조군, Control), PHZ 처치 淸血地黃湯 실험군(이하 淸血地黃湯군, CHJHT)의 3군으로 나누었다.
대상 데이터
- 본 실험에 사용한 淸血地黃湯(CHJHT)의 구성 약재는 경희대 부속 한방병원에서 구입하여 엄선한 것을 사용하였으며, 처방 1첩의 내용 및 용량은 Table 1과 같다(Table 1).
- 실험 동물은 체중 300g(9주) 전후의 Sprague-Dawley 수컷 흰쥐((주)샘타코)를 사용하였다. 실험 동물은 멸균한 polycarbonate cage에 방사선 멸균한 고형사료(대한실험동물센터)와 물을 충분히 공급하였으며, 1주일 동안 명암주기 12시간 간격, 실온 25±2℃, 습도 55%의 실험실 환경에 적응시킨 후 본 실험을 시작하였다.
데이터처리
- The level of RBC was higher in the CHJHT treated group and statistical significance was recognized in day 4(P<0.05, Duncan’s multiple range test).
- The level of hemoglobin was higher in the CHJHT treated group and statistical significance was recognized in day 4 and 7(P<0.05, Duncan’s multiple range test).
- The reticulocyte count was lower than that of the control group and statistical significance was noticed on day 10(P<0.05, Duncan’s multiple range test).
- 통계처리는 SPSS 12.0K for Windows를 이용하여 Student’s t-test로 군 간의 평균을 비교 분석하였으며 p<0.05에서 유의성을 인정하였다.
성능/효과
- 1. 淸血地黃湯은 PHZ에 의한 적혈구수와 혈색소 수치의 감소를 유의성 있게 억제하여, 용혈성 빈혈 억제 효과를 보였다.
- 10일에는 정상군의 수치는 10.08±0.98% 인데 비하여 대조군은 33.00±2.94%, 淸血地黃湯군은 25.36±5.25%로 정상군에 비해서 대조군, 淸血地黃湯군의 망상적혈구가 많았으나, 대조군에 비해 淸血地黃湯군에서 망상 적혈구가 유의하게 감소한 소견을 보였다.
- 10일의 대조군과 淸血地黃湯군의 혈색소는 각각 12.64±0.96g/㎗, 13.44±0.45g/㎗ 로서 淸血地黃湯군에서 유의한 차이는 없었으나 혈색소의 회복이 더욱 양호한 경향을 보였다(Fig. 2).
- 2. 淸血地黃湯은 PHZ 처치 후 적혈구수와 혈색소 수치를 대조군에 비해 유의하게 회복시키는 것으로 나타났다.
- 3. 淸血地黃湯은 MCV, MCH, MCHC에서 대조군과 거의 동일한 소견을 보였다.
- 4. 淸血地黃湯에서 망상적혈구가 대조군에 비해 더 빠른 시기에 정상화되는 것으로 나타났다.
- 4일에 PHZ을 처치하지 않은 정상군의 적혈구 수는 7.14±0.27×106/㎕ 였던데 비하여, PHZ 처치한 대조군은 3.25±0.18×106/㎕, 淸血地黃湯군은 3.71±0.36×106/㎕로, PHZ 처치를 시행한 군에서 정상군에 비하여 통계적으로 유의한(P<0.05) 차이로 용혈성 빈혈이 유발되었음을 알 수 있었고 대조군에 비해 淸血地黃湯군에서 유의하게 적혈구 수 감소가 억제되는 효과를 보였다.
- 5. 체중에서는 대조군과 거의 동일한 소견을 나타냈다.
- 6. 비장무게는 淸血地黃湯군에서 대조군보다 감소하는 경향이 있었다.
- 05) 차이로 용혈성 빈혈이 유발되었음을 알 수 있었고 대조군에 비해 淸血地黃湯군에서 유의하게 적혈구 수 감소가 억제되는 효과를 보였다. PHZ 40mg/kg을 3일간 투여한 후 정상군에 대한 대조군의 적혈구 수 감소 비율은 약 45.5% 였다. 7일의 대조군과 淸血地黃湯군의 수치는 각각 3.
- 05) 차이로 용혈성 빈혈이 유발 되었다. PHZ 40mg/kg을 3일간 투여한 후 정상군에 비한 대조군의 혈색소 감소 비율은 약 47.8%였다. 4일의 대조군과 淸血地黃湯군의 혈색소는 각각 6.
- 정상군의 MCV는 실험기간 내내 거의 비슷한 수치를 유지했으며, PHZ을 처치한 대조군과 淸血地黃湯군 에서는 두 군간의 유의한 차이는 보이지 않았다. PHZ 처치에 의해 날짜별로 MCV 수치가 조금씩 다른 양상을 보였는데, PHZ을 유발한 4일에는 MCV가 약간 증가하였으며, 7일에는 거의 2배에 가깝게 뚜렷하게 증가하였고, 10일에도 정상에 비하여 증가되었으나, 7일보다는 감소하였다. PHZ이 막 구조를 변형시켜 적혈구의 모양을 구상에 가깝도록 변형시킨다는 기존 논문을 참고하여 볼 때15), 적혈구의 모양 변화로 인하여 MCV가 증가했을 가능성이 있다.
- 하므로 빈혈의 접근에 있어서 적혈구수(RBC count)의 변화를 살펴볼 필요가 있다. 淸血地黃湯이 적혈구수에 미치는 영향을 살펴본 결과, PHZ을 3일간 유발한 다음날인 4일에 淸血地黃湯군에서 대조군에 비해 적혈구수의 감소가 유의하게 적었던 것으로 나타났다. 이는 淸血地黃湯을 투여하지 않은 대조군에 비하여 淸血地黃湯 투여군에서 PHZ에 의한 용혈유발이 억제되었을 가능성을 시사하는 결과이다.
- 따라서 헤모글로빈농도는 빈혈을 평가하는데 중요한 수치라고 볼 수 있다. 淸血地黃湯이 헤모글로빈(hemoglobin)에 미치는 영향을 살펴본 결과, 적혈구수의 변화에서 나타난 결과와 유사하게 4일에 淸血地黃湯군에서 대조군에 비하여 헤모글로빈 감소가 유의하게 적었던 것으로 나타났다. 이 또한 대조군보다 淸血地黃湯군에서 淸血地黃湯에 의해 용혈 유발이 억제되었을 가능성을 보여준다.
- 72fL) 보다는 평균적혈구 용적이 작아진 양상을 보였다. 각 검사일에서 淸血地黃湯 투여는 대조군에 비하여 MCV의 상승을 억제하는 경향은 관찰되었으나 두 군 간의 유의한 차이는 인정되지 않았다(Fig. 3).
- 25%로 정상군에 비해서 대조군, 淸血地黃湯군의 망상적혈구가 많았으나, 대조군에 비해 淸血地黃湯군에서 망상 적혈구가 유의하게 감소한 소견을 보였다. 대조군에서는 10일에 망상적혈구 수가 가장 많이 증가하였으며, 淸血地黃湯군에서는 7일에 망상적혈구가 가장 높은 수치를 보였고 그에 비해 10일에는 감소되는 양상을 보였다(Fig. 6).
- 이상의 연구를 통하여 淸血地黃湯이 용혈성 빈혈을 억제하는 효과가 있음을 확인할 수 있었다. 또한 빈혈의 회복에 있어서도 淸血地黃湯을 투여하지 않은 대조군에 비하여 적혈구수와 헤모글로빈 수치를 증가시켰으며, 망상적혈구 수치도 대조군에 비하여 더욱 일찍 회복되었다. 빈혈 회복 효과에 있어서는 淸血地黃湯이 용혈성 빈혈 유발을 억제하여 기본적으로 높은 수치에서 회복이 이루어지기 시작했기 때문에 더욱 양호하게 회복되는 경향이 보였을 가능성을 배제할 수 없으므로 淸血地黃湯의 빈혈회복효과, 즉 조혈효과에 있어서는 추가적인 검토가 필요할 것으로 보인다.
- PHZ이 막 구조를 변형시켜 적혈구의 모양을 구상에 가깝도록 변형시킨다는 기존 논문을 참고하여 볼 때15), 적혈구의 모양 변화로 인하여 MCV가 증가했을 가능성이 있다. 또한 일반 적혈구보다 크기가 큰 망상적혈구가 증가 했다는 점에서, 망상적혈구가 MCV 수치에 영향을 미쳤을 가능성도 있을 것으로 보인다.
- 망상적혈구는 정상군에 비하여 PHZ 처치를 한 대조군과 淸血地黃湯군에서 4일, 7일, 10일 유의한 증가를 보였다. 4일에는 정상군은 6.
- 이상에서 淸血地黃湯은 용혈성 빈혈을 억제하는 효과가 있는 것으로 나타났으며, 또한 망상적혈구가 대조군에 비해 더 조기에 정상화되면서 빈혈 회복효과도 대조군에 비해 양호한 경향을 보였다. 향후 淸血地黃湯의 빈혈 회복 효과와 실험구상의 보완을 위한 추가적인 연구가 필요할 것으로 사료된다.
- 이상의 결과로 미루어 볼 때, 빈혈의 회복양상은 회복 초기에 대적혈구 형태로 적혈구수의 증가보다는 혈색소양이 증가하고 후기에 이르면 적혈구 크기가 정상화되면서 적혈구 수가 증가되어 혈색소 양이 정상적으로 회복되는 경과를 나타냄을 알 수 있다.
- 이상의 연구를 통하여 淸血地黃湯이 용혈성 빈혈을 억제하는 효과가 있음을 확인할 수 있었다. 또한 빈혈의 회복에 있어서도 淸血地黃湯을 투여하지 않은 대조군에 비하여 적혈구수와 헤모글로빈 수치를 증가시켰으며, 망상적혈구 수치도 대조군에 비하여 더욱 일찍 회복되었다.
- 정상군에서는 흰쥐의 체중은 실험기간 내내 서서히 증가하는 양상을 보였으며, 4일에 PHZ을 처치한 대조군(286.2±18.97g)과 淸血地黃湯군(286.0±5.73g)에서는 정상군(323.2±5.07)에 비해 유의한 차이로 체중이 감소하고, 이후부터는 다시 증가하는 양상을 보였다.
- 평균 적혈구 용적은 PHZ 처치한 대조군과, 淸血地黃湯군에서 PHZ 처치한 후인 4일, 7일, 10일에 정상군에 비해 유의하게 증가한 것을 확인할 수 있었다. 7일에 대조군과, 淸血地黃湯군의 평균 적혈구 용적은 각각 114.
- 평균 적혈구 혈색소 농도(MCHC)는 정상군에서는 실험기간 내내 거의 변화가 없었으며, PHZ 처치를 시행한 후 대조군과 淸血地黃湯군에서 정상군에 비하여 수치가 유의하게 감소되는 결과를 보였다. 적혈구 한 개당 헤모글로빈 양을 의미하는 MCH가 증가하였음에도, 망상적혈구나 구형으로 변한 적혈구로 인하여 적혈구 용적이 증가하여 혈색소가 차지하는 비율은 오히려 감소된 것으로 보인다.
- 평균 적혈구 혈색소 농도는 4일, 7일, 10일 정상군에 비해 대조군과 淸血地黃湯군에서 수치가 유의성 있게 감소되었다. 대조군과 淸血地黃湯군에서 4일(26.
- 평균 적혈구 혈색소량은 4일까지는 뚜렷한 변화는 보이지 않았으나 7일에는 정상군(19.78±0.41pg)에 비해 대조군(27.66±2.40pg)과 淸血地黃湯군(27.40±1.48pg)에서 유의하게 증가하는 소견을 보였으며, 10일에는 7일보다 감소하였으나 역시 정상군(19.80±0.32pg)에 비해 대조군(25.12±2.13pg)과 淸血地黃湯군(24.92±1.29)에서 유의한 증가가 보였다.
후속연구
- 또한 빈혈의 회복에 있어서도 淸血地黃湯을 투여하지 않은 대조군에 비하여 적혈구수와 헤모글로빈 수치를 증가시켰으며, 망상적혈구 수치도 대조군에 비하여 더욱 일찍 회복되었다. 빈혈 회복 효과에 있어서는 淸血地黃湯이 용혈성 빈혈 유발을 억제하여 기본적으로 높은 수치에서 회복이 이루어지기 시작했기 때문에 더욱 양호하게 회복되는 경향이 보였을 가능성을 배제할 수 없으므로 淸血地黃湯의 빈혈회복효과, 즉 조혈효과에 있어서는 추가적인 검토가 필요할 것으로 보인다. 이번 연구는 PHZ을 투여하여 용혈성 빈혈을 유발하는 실험이었지만, 중간 중간 혈액학적 검사를 위한 채혈(출혈)이 불가피하여 출혈에 의한 미미한 빈혈이 실험에 영향을 끼쳤을 가능성도 있다.
- 출혈을 빈혈모델로 활용하기도 한다는 점19)을 감안하면 향후 채혈의 효과를 최소화할 수 있는 ocular puncture방법20) 등을 활용하는 것도 더욱 정확한 결과를 얻는 데 도움이 될 것으로 보인다. 추후 淸血地黃湯의 빈혈 회복 효과와 실험구상의 보완을 위한 추가적인 연구가 필요할 것으로 사료된다.
- 이번 연구는 PHZ을 투여하여 용혈성 빈혈을 유발하는 실험이었지만, 중간 중간 혈액학적 검사를 위한 채혈(출혈)이 불가피하여 출혈에 의한 미미한 빈혈이 실험에 영향을 끼쳤을 가능성도 있다. 출혈을 빈혈모델로 활용하기도 한다는 점19)을 감안하면 향후 채혈의 효과를 최소화할 수 있는 ocular puncture방법20) 등을 활용하는 것도 더욱 정확한 결과를 얻는 데 도움이 될 것으로 보인다. 추후 淸血地黃湯의 빈혈 회복 효과와 실험구상의 보완을 위한 추가적인 연구가 필요할 것으로 사료된다.
- 이상에서 淸血地黃湯은 용혈성 빈혈을 억제하는 효과가 있는 것으로 나타났으며, 또한 망상적혈구가 대조군에 비해 더 조기에 정상화되면서 빈혈 회복효과도 대조군에 비해 양호한 경향을 보였다. 향후 淸血地黃湯의 빈혈 회복 효과와 실험구상의 보완을 위한 추가적인 연구가 필요할 것으로 사료된다.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.