[논문]칡소 정액 동결을 위한 AndroMed와 Tris-egg Yolk 희석제의 동결성 비교

조상래; 김성재; 손준규; 최선호; 최창용; 고응규; 이풍연; 김현종

칡소 정액 동결을 위한 AndroMed와 Tris-egg Yolk 희석제의 동결성 비교
Comparison of AndroMed and Tris-egg Yolk Extender for Cryopreservation of Korean Native Bull Semen (Chick Cow) 원문보기

Journal of embryo transfer = 한국수정란이식학회지, v.26 no.1, 2011년, pp.65 - 70

초록
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희소 한우인 칡소의 정액 동결을 위해서 레시딘을 기본 희석제로 하는 AndroMed와 Tris-egg yolk extender를 사용하여 정자의 생존율과 활력 조사를 위해서 본 연구를 수행하였다. AndroMed 희석제를 사용하였을 때 생존율과 활력은 $73.4{\pm}11.2%$와 $67.9{\pm}14.6%$의 결과를 보였다. 그리고 Tris-egg yolk extender의 경우는 각각 $89.7{\pm}19.8%$와 $78.4{\pm}18.7%$ 결과를 보여 생존율에서는 Tris-egg yolk 희석제가 AndroMed 희석제를 사용하였을 때보다 유의적으로(p<0.05) 높은 결과를 보였다. 그러나 활력에서는 유의적인 차이를 보이지 않았으나 Tris-egg yolk 희석제에서 높은 경향을 보였다. 정액의 동결을 위해서 평형 시간에 따른 정자의 활력 조사를 위해서 육안적 방법과 CASA 프로그램 방법으로 조사를 실시한 결과, 처음 2시간부터 20시간까지 평형을 유도한 결과 육안적 방법보다는 CASA 프로그램 분석 방법의 결과 높은 수치를 확인할 수 있었다. AndroMed와 Tris-egg yolk extender 두 종류의 희석제로 사용된 동결 정액 사용으로 체외수정란을 생산 결과로서 분할율은 유의적인 차이를 보이지 않았으나(81.7% vs. 82.2), 배반포 발달율에서는 29.6% vs. 42.3%로서 Tris-egg yolk 희석제를 사용하였을 때 유의적으로(p<0.05) 높은 발달율을 보였다. 이러한 결과를 볼 때 희소 한우 품종인 침소 정액 동결을 위해서 Tris-egg yolk 희석제 사용이 동결된 정자의 생존율과 수정 능력 개선으로 실제적인 인공수정과 체외수정란 생산 및 가축유전자원 보존을 위해서도 효과적일 것으로 사료된다.

Abstract ▼ AI-Helper

This study was conducted to investigate the survival rate of AndroMed and Tris-egg yolk extender for cryopreservation of Korean Native Bull Semen (Chick Cow). Semen was collected from a Korean Native Bull Semen over 3 year's old. The semen was diluted 1:1 by AndroMed and Tris-egg yolk extender. The pellet was diluted to final sperm concentration of $5{\times}10^7$ cell/ml by doubling in every 10 minutes at $4^{\circ}C$ cold chamber. The semen was equilibrated for 1 hrs at cold chamber and packed to 0.5 ml straw. The semen straws were located above 5 cm of liquid nitrogen for 5 minutes. And then the frozen straw was plunged to LN2. The presented straws were examined the viability and motility after thawed at $37^{\circ}C$ water bath. The survival rates was significantly higher (p<0.05) in Tris-egg yolk extender than AndroMed extender ($89.7{\pm}19.8$ vs. $73.4{\pm}11.2$). However, motility was no significant differences ($78.4{\pm}18.7$ vs. $67.9{\pm}14.6$). Survival rate in time of equilibration between visual and CASA program had higher in 2 h ($86.33{\pm}9.4$ vs. $92.32{\pm}12.4$) than in 5 h ($78.20{\pm}7.8$ vs. $88.28{\pm}13.1$) 15 h ($65.24{\pm}6.6$ vs. $76.48{\pm}17.3$) 20 h ($56.26{\pm}4.6$ vs. $67.73{\pm}18.4$). The development rates to cleavage was higher in Tris-egg yolk extender than AndroMed extender (82.2% vs. 81.7%). Similarly, the development rates to blastocyst was significantly higher (p<0.05) in Tris-egg yolk extender than AndroMed extender (42.3% vs. 29.6%). In conclusion, the obvious impact of this study will be its practical application to improve viability and fertilizing ability of cryopreserved spermatozoa used for in vitro fertilization (IVF) and AI, Which in turn will be beneficial to animal genetic resources conservation.

주제어

AI 본문요약
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문제 정의

정장은 정액의 활력을 떨어뜨려 정액을 사출할 때 BSA가 정자막을 코팅함으로써 정자의 활력 유지에 영향을 준다고 보고하였다(Yamashiro 등, 2006). 본 연구에서는 레시틴을 기본 희석제로 하는 AndroMed 와 Tris-egg yolk 희석제를 사용하여 칡소 정액의 동결성을 조사함으로써 유전자원으로서의 안전한 보존과 이용 효율성 제고를 위해서 본 연구를 수행하였다.
희소 한우인 칡소의 정액 동결을 위해서 레시딘을 기본 희석제로 하는 AndroMed와 Tris-egg yolk extender를 사용하여 정자의 생존율과 활력 조사를 위해서 본 연구를 수행하였다. Andro Med 희석제를 사용하였을 때 생존율과 활력은 73.

제안 방법

2 등급(IETS 기준) 만을 사용하였다. 체외성숙은 TCM199(Sigma, U.S.A)를 기본 배양액으로 5% FBS(Gibco, U.S.A), 10 "g/ml LH(Sigma, U.S.A) 및 35 Ag/ml FSH(Sigma, USA)를 첨가하여 5% CO₂ 인큐베이터 내에서 22시간 동안 실시하였다.
Table 1은 정액의 동결을 위해서 두 종류의 희석제제를 사용으로 동결 후의 생존율과 활력에 대한 조사를 실시하였다. 정액의 동결을 위한 정액의 희석제는 정액의 생존율에 중대한 영향을 미치는 요인으로 분석된다{Sansone 등, 2000) Table1은 칡소로 부터 인공질을 이용하여 채취한 정액을 상용화된AndroMed 희석제(Fukui 등, 2008)와 Tris-egg yolk 희석제 사용으로 정액을 동결한 다음 생존율과 활력 결과를 CASA(Com- puter-Aided Semen Analysis) 시스템으로 분석하였다.
혈구 계산판의 격자 2군데를 반복적으로 관찰하여 생존 정자 비율을 퍼센트로 나타내었다. 관찰되는 거의 모든 정자들이 소용돌이 치며 활발하게 움직이는 것을 90% 이상으로, 생존 정자들이 격자별로 100개 가량을 관찰하여 활발하게 움직이는 정자들이 80% 이상일 때 80%로, 70% 이상일 때 70% 등으로 보고, 50% 이하는 움직이는 정도가 전진 운동 혹은 느리게 전진 운동하는 수준이며, 20% 이하는 느리게 전진 운동하거나 진자 운동 혹은 미동하는 수준으로 평가하였다. 그리고 CASA(Computer-Aided Semen Analysis) 분석 장치를 이용한 정자의 생존성과 활력 평가를 위해 자동 분석 장치(SIAS, Medical Supply, 한국)를 이용하여 조사하였다.
관찰되는 거의 모든 정자들이 소용돌이 치며 활발하게 움직이는 것을 90% 이상으로, 생존 정자들이 격자별로 100개 가량을 관찰하여 활발하게 움직이는 정자들이 80% 이상일 때 80%로, 70% 이상일 때 70% 등으로 보고, 50% 이하는 움직이는 정도가 전진 운동 혹은 느리게 전진 운동하는 수준이며, 20% 이하는 느리게 전진 운동하거나 진자 운동 혹은 미동하는 수준으로 평가하였다. 그리고 CASA(Computer-Aided Semen Analysis) 분석 장치를 이용한 정자의 생존성과 활력 평가를 위해 자동 분석 장치(SIAS, Medical Supply, 한국)를 이용하여 조사하였다. 동결 정액의 발생능 확인을 위해서 일반적인 체외수정란 생산은 조등(2008)의 방법에 준하여 실시하였다.
Andro Med 희석제를 이용한 정액의 동결 과정(Aires 등, 2003)은 원정액과 희석제를 1:1의 비율로 희석한 다음, 2차 희석은 콜드 챔버 내에서 10분간 평형 후 7차까지 동일한 방법으로 평형을 유도한다. 마지막 7차 희석후 0.5 ml 스트로에 충진하기 전까지는 1시간 동안 평형을 실시한 다음, 0.5 ml 스트로에 최종 5 X 102 * * * * 7 celVml 농도가 되게 하여 스트로 내에 충진한 다음 1시간 동안 콜드 챔버 내에서 평형을 실시하였다. Tris-egg yolk extender는 1차 희석 시는 동량을 희석한 후 5°C 콜드 챔버 내에서 14% Glycreol을 첨가한 다음 동결을 실시하였다.
체 외배 양은 5% CO₂, 90% N₂ Incubator에서 체외발달을 유도하였으며, 배양 dish는 6-well(IFP, Japan) 50 “1 배양액에 15개의 수정란을 넣어 배양을 실시하였다. 수정 란의 발달율 조사는 체외수정 후 48 시간에 도립현미경(IX 70, Olimpus)하에서 분할율을 조사하였으며, 72(3일) 시간과 120(5일) 시간에 신선한 배 양액 약 25 를 각 well에 첨가하였으며, 배반포기까지의 발달율 조사는 수정 후 7일과 8일째 실시하였다.
Japan)하에서 융해 정액을 MARKER CHAMBER에 넣은후 정자를 평가하였다. 육안적 검사는 혈구 계산판에 5 “1의 정액을 놓고 커버글라스를 덮은 후 100배율에서 정자의 운동성을 평가하고 200배율에서 삼투압 충격이나'저온 충격으로 발생할 수 있는 정자 꼬리 꺾임 등의 기형 변화가 발생되었는지 확인하였다. 혈구 계산판의 격자 2군데를 반복적으로 관찰하여 생존 정자 비율을 퍼센트로 나타내었다.
정 액의 활력과 생존성의 평가는 MicroLux 현미경(X 70, Olyim- pus, Japan)하에서 융해 정액을 MARKER CHAMBER에 넣은후 정자를 평가하였다. 육안적 검사는 혈구 계산판에 5 “1의 정액을 놓고 커버글라스를 덮은 후 100배율에서 정자의 운동성을 평가하고 200배율에서 삼투압 충격이나'저온 충격으로 발생할 수 있는 정자 꼬리 꺾임 등의 기형 변화가 발생되었는지 확인하였다.
공간에서 자유 급식하여 사육하였으며, 정액 채취는 인공질(Model 66000-D, Nasco, FHK, 일본)을 사용하여 채정하였다. 정액 채취를 위해서 암컷을 시험장내 안전정액 채취실 보정 틀에 고정시킨 후, 수컷을 2~3회 암컷 주위를 맴돌게 하여 흥분을 유도하였다. 승가가 이루어지면 수컷의 penis를 인공 질에 삽입하여 정액 채취를 하였다.
9% 생리식염수의 온도를 25°C 이상의 조건으로 맞추어 보온병에 담아 실험실로 2시간 이내로 운반하였다. 직경이 2 〜6 mm의 난포로부터 난자를 난포액 과 함께 19 gauge 주사침이 부착된 10ml 주사기를 이용하여 흡입 방법으로 난자를 채취하였으며, 체외성숙을 위한 난자는 1.2 등급(IETS 기준) 만을 사용하였다. 체외성숙은 TCM199(Sigma, U.
가하여 체외배 양을 실시 하였다. 체 외배 양은 5% CO₂, 90% N₂ Incubator에서 체외발달을 유도하였으며, 배양 dish는 6-well(IFP, Japan) 50 “1 배양액에 15개의 수정란을 넣어 배양을 실시하였다. 수정 란의 발달율 조사는 체외수정 후 48 시간에 도립현미경(IX 70, Olimpus)하에서 분할율을 조사하였으며, 72(3일) 시간과 120(5일) 시간에 신선한 배 양액 약 25 를 각 well에 첨가하였으며, 배반포기까지의 발달율 조사는 수정 후 7일과 8일째 실시하였다.
수정후 난자의 배양액 교환은 수정 후 72시간째와 120시간째 신선한 배양액으로 교환하여 체외 발달을 유도하였다(조 등, 2008). 체 외수정 후 48시간째 난자가 이등분으로 균일하게 분할된 것을 수정이 된 것으로 평가하였다. 분할율 결과에서 AndroMed 희석제를 사용한 정액의 분할율은 81.
사용된 정액의 최종 농도는 2 X 106 /ml 이었다. 체외성숙된 난자의 난구세포 일부를 제거하기 위해서 0.3% BSA(Bovine Serum Albumin)가 첨 가된 D-PBS (Sigma) 배 양액 에 서 약 5초간 vortexing 후 방사관층이 붙어있는 난자를 선별하여 수정배 양액 인 IVF 100(IFP, Japan) 50 “1 미소적에 15개의 난자와정자를 6시간 동안 공동 배양으로 체외수정을 유도하였다.
6. 수정란의 체외배양

체외수정 후 체외 배양을 위해서 CRlaa 배양액에 5% FBS를첨 가하여 체외배 양을 실시 하였다. 체 외배 양은 5% CO₂, 90% N₂ Incubator에서 체외발달을 유도하였으며, 배양 dish는 6-well(IFP, Japan) 50 “1 배양액에 15개의 수정란을 넣어 배양을 실시하였다.
평형 시간을 4가지 시간대로 구분하여 평가하였다. 현재의 결과에서 알 수 있듯이 육안 검사와 CA.
육안적 검사는 혈구 계산판에 5 “1의 정액을 놓고 커버글라스를 덮은 후 100배율에서 정자의 운동성을 평가하고 200배율에서 삼투압 충격이나'저온 충격으로 발생할 수 있는 정자 꼬리 꺾임 등의 기형 변화가 발생되었는지 확인하였다. 혈구 계산판의 격자 2군데를 반복적으로 관찰하여 생존 정자 비율을 퍼센트로 나타내었다. 관찰되는 거의 모든 정자들이 소용돌이 치며 활발하게 움직이는 것을 90% 이상으로, 생존 정자들이 격자별로 100개 가량을 관찰하여 활발하게 움직이는 정자들이 80% 이상일 때 80%로, 70% 이상일 때 70% 등으로 보고, 50% 이하는 움직이는 정도가 전진 운동 혹은 느리게 전진 운동하는 수준이며, 20% 이하는 느리게 전진 운동하거나 진자 운동 혹은 미동하는 수준으로 평가하였다.

대상 데이터

정액 채취로 사용된 칡소는 3세의 수컷 1두를 선발하여 별도 공간에서 자유 급식하여 사육하였으며, 정액 채취는 인공질(Model 66000-D, Nasco, FHK, 일본)을 사용하여 채정하였다. 정액 채취를 위해서 암컷을 시험장내 안전정액 채취실 보정 틀에 고정시킨 후, 수컷을 2~3회 암컷 주위를 맴돌게 하여 흥분을 유도하였다.
실험실로 운반하였다. 정액의 동결을 위해서 사용된 희석제로는 AndroMed(Minitub, Tiefenbach, Germany; patent pen- ding)와 Tris-egg yolk extender를 사용하였다.
체외 수정에 사용된 정액은 가축유전자원시험장에서 생산된 흑우동결정액을 이용하였고, 정자분리는 BO 배양액을 이용하였으며 1, 800 rpm에서 5분 동안 2회 원심분리 후 체외수정용 배양액에서 1회 원심 분리하여 체외수정에 사용하였다. 사용된 정액의 최종 농도는 2 X 106 /ml 이었다.
한우 도축 암소로부터 적출된 난소를 회수하여 실험실로 운반하여 실험에 공시하였다. 본 실험의 조건에 맞춘 난소 수송온도는 0.

데이터처리

실험 결과의 통계학적 분석은 SAS pakage(version 6, 12) 이용과 GLM producer 를 사용하여 각처리구간 유의성을 검증하였다.

이론/모형

그리고 CASA(Computer-Aided Semen Analysis) 분석 장치를 이용한 정자의 생존성과 활력 평가를 위해 자동 분석 장치(SIAS, Medical Supply, 한국)를 이용하여 조사하였다. 동결 정액의 발생능 확인을 위해서 일반적인 체외수정란 생산은 조등(2008)의 방법에 준하여 실시하였다.
실시하였다. 정액의 동결을 위한 정액의 희석제는 정액의 생존율에 중대한 영향을 미치는 요인으로 분석된다{Sansone 등, 2000) Table1은 칡소로 부터 인공질을 이용하여 채취한 정액을 상용화된AndroMed 희석제(Fukui 등, 2008)와 Tris-egg yolk 희석제 사용으로 정액을 동결한 다음 생존율과 활력 결과를 CASA(Com- puter-Aided Semen Analysis) 시스템으로 분석하였다. Andro- Med를 사용하였을 때 정자의 생존율은 73.

성능/효과

정액의 동결을 위한 정액의 희석제는 정액의 생존율에 중대한 영향을 미치는 요인으로 분석된다{Sansone 등, 2000) Table1은 칡소로 부터 인공질을 이용하여 채취한 정액을 상용화된AndroMed 희석제(Fukui 등, 2008)와 Tris-egg yolk 희석제 사용으로 정액을 동결한 다음 생존율과 활력 결과를 CASA(Com- puter-Aided Semen Analysis) 시스템으로 분석하였다. Andro- Med를 사용하였을 때 정자의 생존율은 73.4%, 활력은 67.9% 의 결과를 나타내었으나, Tris-egg yolk 희석제는 생존율과 활력이 89.7%와 78.4%의 결과를 각각 나타내었다. 생존율은 Tris egg yolk 희석제가 유의적으로 높은(p<0.
정액의 동결을 위해서 평형 시간에 따른 정자의 활력 조사를 위해서 육안적 방법과 CASA 프로그램 방법으로 조사를 실시한 결과, 처음 2시간부터 20시간까지 평형을 유도한 결과 육안적 방법보다는 CASA 프로그램분석 방법의 결과 높은 수치를 확인할 수 있었다. AndroMed 와 Tris-egg yolk extender 두 종류의 희석제로 사용된 동결 정 액사용으로 체외수정란을 생산 결과로서 분할율은 유의적인 차이를 보이지 않았으나(81.7% vs. 82.2), 배반포 발달율에서는 29.6% vs. 42.3%로서 Tris-egg yolk 희석제를 사용하였을 때 유의적으로(p<0.05) 높은 발달율을 보였다. 이러한 결과를 볼 때 희소 한우 품종인 칡소 정액 동결을 위해서 Tris-egg yolk 희석제 사용이 동결된 정자의 생존율과 수정 능력 개선으로 실제적인 인공수정과 체외수정란 생산 및 가축유전자원 보존을 위해서도 효과적일 것으로 사료된다.
원정액을 채취한 후 활력 평가는 90% 이상의 결과를 보였다. 그러나 5시간이 경과하였을 때는 약 80% 수준의 활력을 보였고, 15시간이 결과하였을 때는 65-75% 범위의 활력을 보였으며, 20시간이 경과하였을 때는 56~76%의 결과를 보여 2시간 경과 시와 비교하였을 때보다 약 30% 수준의 차이를 보였다. 이러한 결과를 볼 때 희석제를 첨가한 후 시간이 경과하였을 때 온도 충격으로 인한 정자의 활력이 감소하는 것으로 보여 정액 희석 처리는 2시간 이내에 완료해야 할 것으로 사료된다.
6%의 결과를 보였다. 그리고 Tris-egg yolk extender 의 경우는 각각 89.7H₉.8%와 78.4±18.7% 결과를 보여 생존율에서는 Tris-egg yolk 희석제가 AndroMed 희석제를 사용하였을 때보다 유의적으로(p<0.05) 높은 결과를 보였다. 그러나 활력에서는 유의적인 차이를 보이지 않았으나 Tris-egg yolk 희석제에서 높은 경향을 보였다.
James와 Graham(2001)는 유세포 분석기로 성 감별된 정액을 사용하여 육안적 검사와 CASA 프로그램을 이용한 정자의 활력 조사에서도 알 수 있듯이 수컷 4개체에서 제일 높은 활력을 가진 개체가 정자 첨체 반응 조사에서도 정상적인 첨체 반응을 지닌 정자가 67% 그리고 제일 낮은 활력을 지닌 개체에서는 28%의 첨체 반응을 보였다. 따라서 육안적 또는 CASA 프로그램에서 높은 성적을 보인 개체가 수정 능력도 향상이 될 것으로 예측되었으며, 본 연구에서도 Table 2에서 정액 희석제별 비교에서 Tris-egg yolk 희석제가 AndroMed보다 높은 활력의 결과를 보였고, Table 3에서도 Tris-egg yolk 희석제로동결된 정액을 이용하였을 때 높은 배반포 생산율을 보인 것과 일치하는 결과를 알 수 있었다. 체외수정 후 분할율에서는유의적인 차이를 보이지 않았으나, 배반포 생산에서는 Tris egg yolk 희석제가 유의적으로(p<0.
체 외수정 후 48시간째 난자가 이등분으로 균일하게 분할된 것을 수정이 된 것으로 평가하였다. 분할율 결과에서 AndroMed 희석제를 사용한 정액의 분할율은 81.7%, Tris-egg yolk를 이용한 동결정액은 82.2%의 결과를 보였고, 배반포 발달은 이등분으로 분할된 수정란 중에서 초기 배반포 이상 발달한 수정란으로 평가하였다. 배반포 발달율의 결과에서도 비슷한 경향을 보였다.
4%의 결과를 각각 나타내었다. 생존율은 Tris egg yolk 희석제가 유의적으로 높은(p<0.05) 결과를 보인 것과는 대조적으로 활력에서는 유의적인 차이를 보이지 않았다. 사출된 신선 정액에 있어서 활력은 90% 이상의 상태를 유지하고 있었다.
32%로 나타났다. 원정액을 채취한 후 활력 평가는 90% 이상의 결과를 보였다. 그러나 5시간이 경과하였을 때는 약 80% 수준의 활력을 보였고, 15시간이 결과하였을 때는 65-75% 범위의 활력을 보였으며, 20시간이 경과하였을 때는 56~76%의 결과를 보여 2시간 경과 시와 비교하였을 때보다 약 30% 수준의 차이를 보였다.
이와는 반대로 James와 Graham(2001)은 각기 다른 4마리의 수컷의 성감별 동결정액을 융해하였을 때 육안적 평가와 CASA 프로그램의 활력 평가 결과로서 제일 높은 개체에서는 40%와 49%, 제일 낮은 개체는 15%와 28%로 보고하여 본 연구의 결과와 비교했을 때 상당한 차이가 있음을 알 수 있으나,이러한 차이는 정자의 성 감별 시 유세포 분석기에 의한 손상으로 보여진다. 이 결과에서도 육안적 평가와 CASA 프로그램을 이용한 결과의 차이는 약 10% 내외로서, 본 연구 결과와 유사함을 알 수 있었다. 한편, Yamashiro 등(2006)은 염소의 정액 동결을 위해서 희석제 종류에 BSA(bovine serum albumin)을첨가하였을 때 동결성이 강화되었다고 보고하였다.
05) 높은 결과를 보였다. 이러한 결과를 미루어 볼 때 Tris-egg yolk 희석제가 정액의 동결 시 정자의 첨체 손상을 줄일 수 있을 것으로 사료된다.
그러나 5시간이 경과하였을 때는 약 80% 수준의 활력을 보였고, 15시간이 결과하였을 때는 65-75% 범위의 활력을 보였으며, 20시간이 경과하였을 때는 56~76%의 결과를 보여 2시간 경과 시와 비교하였을 때보다 약 30% 수준의 차이를 보였다. 이러한 결과를 볼 때 희석제를 첨가한 후 시간이 경과하였을 때 온도 충격으로 인한 정자의 활력이 감소하는 것으로 보여 정액 희석 처리는 2시간 이내에 완료해야 할 것으로 사료된다. De Pauw 등(2003)은 소의 정액을 Triladyl® 희석액에 20% 난황과 6.
그러나 활력에서는 유의적인 차이를 보이지 않았으나 Tris-egg yolk 희석제에서 높은 경향을 보였다. 정액의 동결을 위해서 평형 시간에 따른 정자의 활력 조사를 위해서 육안적 방법과 CASA 프로그램 방법으로 조사를 실시한 결과, 처음 2시간부터 20시간까지 평형을 유도한 결과 육안적 방법보다는 CASA 프로그램분석 방법의 결과 높은 수치를 확인할 수 있었다. AndroMed 와 Tris-egg yolk extender 두 종류의 희석제로 사용된 동결 정 액사용으로 체외수정란을 생산 결과로서 분할율은 유의적인 차이를 보이지 않았으나(81.
따라서 육안적 또는 CASA 프로그램에서 높은 성적을 보인 개체가 수정 능력도 향상이 될 것으로 예측되었으며, 본 연구에서도 Table 2에서 정액 희석제별 비교에서 Tris-egg yolk 희석제가 AndroMed보다 높은 활력의 결과를 보였고, Table 3에서도 Tris-egg yolk 희석제로동결된 정액을 이용하였을 때 높은 배반포 생산율을 보인 것과 일치하는 결과를 알 수 있었다. 체외수정 후 분할율에서는유의적인 차이를 보이지 않았으나, 배반포 생산에서는 Tris egg yolk 희석제가 유의적으로(p<0.05) 높은 결과를 보였다. 이러한 결과를 미루어 볼 때 Tris-egg yolk 희석제가 정액의 동결 시 정자의 첨체 손상을 줄일 수 있을 것으로 사료된다.
인공수정 이나 수정 란이식을 위해서 정액을 사용하였을 때 수태율과 수정란 생산성 저하를 가져오는 원인이 되기도 한다. 현재의 결과를 보았을 때 희소 한우 즉 칡소와 흑우의 정액 동결 보존 시 AndroMed보다는 Tris-egg yolk 희석제를 사용하는 것이 더 효과적인 방법일 것으로 사료된다. 하지만 흑우를 비롯한 개체의 수를 증가시켜 비교 실험을 수행해야 할 것으로 보인다.
평형 시간을 4가지 시간대로 구분하여 평가하였다. 현재의 결과에서 알 수 있듯이 육안 검사와 CA.SA 방법에 대한 분석에서 시간이 경과될수록 화력이 감소하는 경향을 보이고 있다. 그러나 육안적 평가와 CASA 평가에 대한 결과에서 두 방법 간에는 유의적인 차이를 보이지 않았다.

후속연구

05) 높은 발달율을 보였다. 이러한 결과를 볼 때 희소 한우 품종인 칡소 정액 동결을 위해서 Tris-egg yolk 희석제 사용이 동결된 정자의 생존율과 수정 능력 개선으로 실제적인 인공수정과 체외수정란 생산 및 가축유전자원 보존을 위해서도 효과적일 것으로 사료된다.
상업적으로 판매되는 제품의 특성상 희석제의 조성은 정확하게 알려져 있지 않으나, 동해 방지를 위해 비침투성 동해 방지제로 lactose가 들어 있으며, 침투성동해 방지제로 이ycerol이 첨가되어 있다. 칡소와 흑우의 정액동결을 위해서 희석제에 대한 검토는 더 많은 연구를 수행할 필요가 있을 것으로 사료된다.
현재의 결과를 보았을 때 희소 한우 즉 칡소와 흑우의 정액 동결 보존 시 AndroMed보다는 Tris-egg yolk 희석제를 사용하는 것이 더 효과적인 방법일 것으로 사료된다. 하지만 흑우를 비롯한 개체의 수를 증가시켜 비교 실험을 수행해야 할 것으로 보인다. 정액의 성공적인 동결 보존은 수정율과 태아의 생산에 중요한 영향을 미칠 것이다.

참고문헌 (29)

Aires VA, Hinsch KD, Schloesser M, Bongner K, Schlosser SM and Hinsch E. 2003. In vitro and in vivo comparison of egg yolk-based and soybean lecithin-based extenders for cryopreservation of bovine semen. Theriogenology 60:269-279.

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조상래, 최창용, 김현종, 최선호, 손동수. 2008. 한우 수정란의 동결 보존 후 발달 효율 비교. 한국수정란이식학회지 23:223-227.

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표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

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용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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