선택한 단어 수는 입니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
선택한 단어 수는 30입니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
문제 정의
- 또한 치료효과를 관찰하기 위해 각 처방 추출물의 활성산소 소거실험을 통한 항산화 효과, in vitro 에서 항염증 효과(IKK mRNA, iNOS mRNA, COX-2 mRNA) 등을 관찰하고, 생쥐에 indomethacin을 이용하여 위점막 손상을 유발시킨 후에 각 처방의 농축전탕액을 투여하여, 위점막의 일반적인 형태, 위점막내 항염증 효과(NF-κB, iNOS, COX-2) 등을 관찰하여 유의성 있는 결과를 얻었기에 보고하는 바이다.
- 이에 저자는 內傷氣實의 病證에 통용되며 理氣祛濕의 기본방인 平胃散과, 一切 痰飮으로 인한 病證에 통용되며 祛痰의 기본방인 二陳湯, 그리고 平胃散과 二陳湯의 合方으로 활용범위를 넓힌 平陳湯9-10)을 선택하여, 이들의 효능을 비교연구하고자 위점막 손상에 대한 보호효과와 치료효과로 나누어 관찰하였다.
- 이에 저자는 平胃散, 二陳湯, 平陳湯의 효능을 비교연구하고자 위점막 손상에 대한 보호효과와 치료효과로 나누어 관찰하였다. 먼저 위점막 손상에 대한 보호효과를 관찰하기 위해 생쥐에 각 처방의 농축전탕액을 각각 투여한 후 indomethacin을 이용하여 위점막 손상을 유발시킨 다음 위의 외부형태, 위점막의 일반적인 형태, 위점막 보호체계(중성점액장벽, COX-1, HSP70) 등의 변화를 관찰하였다.
가설 설정
- D. The HSP70 positive reactions (arrow) in mice pre-treated with Pyeongwi-san Ijin-tang Pyeongjin-tang more decreased than those of BGP (HSP70 immunohistochemstry, x400).
제안 방법
- 0.05% 3,3’-diaminobenzidine(Sigma, USA)과 0.01% HCl이 포함된 0.05M tris-HCl 완충용액(pH 7.4)에서 발색시킨 후, hematoxylin으로 대조 염색하였다.
- 3%였다. MTT assay 결과 한약제 추출물 10 ㎎/㎖까지는 세포생존률의 변화가 일어나지 않아 0.5 ㎎/㎖와 1.0 ㎎/㎖를 첨가량으로 결정하였다.
- RT-PCR kit(Premega, USA)를 이용하여 cDNA를 합성한 후 IKK, iNOS, COX-2 primer를 PCR machine으로 반응시켰다(Table 4). PCR 산물은 1-2% agarose gel상에서 전기영동하여 relative intensity로 측정하였다. 한편 RT-PCR의 정확성을 평가하기 위하여 internal standard인 beta-actin의 증폭을 동시에 실시하였다.
- RAW 264.7 macrophages - 5×105 cells/well을 6 well에 plating 하고 12시간 후에 1 ㎍/㎖ lipopolysaccharide(Sigma, USA)를 2시간 처리하여 NF-κB 활성을 유도한 후 平胃散, 二陳湯, 平陳湯 추출물 0.5와 1.0 ㎎/㎖를 농도별로 첨가하여 24시간 동안 배양하였다.
- 배양 후 수거한 RNA를 trizol reagent(Sigma, USA)를 사용하여 추출한 다음 fluorometer(introgen, USA)로 RNA를 정량하였다. RT-PCR kit(Premega, USA)를 이용하여 cDNA를 합성한 후 IKK, iNOS, COX-2 primer를 PCR machine으로 반응시켰다(Table 4). PCR 산물은 1-2% agarose gel상에서 전기영동하여 relative intensity로 측정하였다.
- mRNA 발현의 relative intensity, 출혈성 찰과의 분포 그리고 면역조직화학 결과의 수치화를 위해 Optimas 5.2(Omtima, USA)를 이용한 영상분석을 실시하였다. 본 실험의 결과는 SPSS 14.
- 한편 RT-PCR의 정확성을 평가하기 위하여 internal standard인 beta-actin의 증폭을 동시에 실시하였다. mRNA 발현의 relative intensity는 Optimas 5.2(Optima, USA)를 이용한 영상분석을 통해 비교하였다.
- 平胃散, 二陳湯, 平陳湯 각 2첩을 증류수 500 ㎖에 넣고 2시간 동안 전탕한 후 여과하였다. 그 여액을 rotary evaporator를 이용하여 50 ㎖로 감압 ․ 농축하여 BPY군에는 平胃散 추출액을, BIJ군에는 二陳湯 추출액을, BPJ군에는 平陳湯 추출액을 각각 2.
- 平胃散, 二陳湯, 平陳湯의 위점막 손상에 대한 보호효과를 조사하기 위해 아무런 처치를 가하지 않은 대조군(Control군, CON), indomethacin 처리로 위점막 손상 유발군(BGP군, BGP), 平胃散 추출액 투여 후 indomethacin 처리군(BPY군, BPY), 二陳湯 추출액 투여 후 indomethacin 처리군(BIJ군, BIJ), 平陳湯 추출액 투여 후 indomethacin 처리군(BPJ군, BPJ)으로 나누었으며, 각 군마다 생쥐 7마리씩 배정하였다.
- 平胃散, 二陳湯, 平陳湯의 위점막 손상에 대한 치료효과를 조사하기 위해 아무런 처치를 가하지 않은 대조군(Control군, CON), indomethacin 처리로 위점막 손상 유발군(AGP군, AGP), indomethacin 처리로 위점막 손상 유발 후 平胃散 추출액 투여군(APY군, APY), indomethacin 처리로 위점막 손상 유발 후 二陳湯 추출액 투여군(AIJ군, AIJ), 그리고 indomethacin 처리로 위점막 손상 유발 후 平陳湯 추출액 투여군(APJ군, APJ)으로 나누었으며, 각 군마다 7마리씩 배정하였다.
- 이에 저자는 平胃散, 二陳湯, 平陳湯의 효능을 비교연구하고자 위점막 손상에 대한 보호효과와 치료효과로 나누어 관찰하였다. 먼저 위점막 손상에 대한 보호효과를 관찰하기 위해 생쥐에 각 처방의 농축전탕액을 각각 투여한 후 indomethacin을 이용하여 위점막 손상을 유발시킨 다음 위의 외부형태, 위점막의 일반적인 형태, 위점막 보호체계(중성점액장벽, COX-1, HSP70) 등의 변화를 관찰하였다.
- 위 몸통과 날문의 연결부위를 적출하여 실온에서 24시간 동안 10% NBF에 고정하였다. 고정된 조직은 통상적인 방법으로 paraffin에 포매한 후 5 ㎛ 두께의 연속절편을 제작하였다. 위점막의 일반적인 형태변화를 관찰하기 위해 연속절편을 hematoxylin과 eosin에 염색한 후 광학현미경(BX50.
- 그 여액을 rotary evaporator를 이용하여 50 ㎖로 감압 ․ 농축하여 BPY군에는 平胃散 추출액을, BIJ군에는 二陳湯 추출액을, BPJ군에는 平陳湯 추출액을 각각 2.5 ㎖/㎏ 량으로 위점막 손상 유발 전 5일 동안 경구 투여하였다.
- 또한 치료효과를 관찰하기 위해 각 처방 추출물의 활성산소 소거실험을 통한 항산화 효과, in vitro 에서 항염증 효과(IKK mRNA, iNOS mRNA, COX-2 mRNA) 등을 관찰하고, 생쥐에 indomethacin을 이용하여 위점막 손상을 유발시킨 후에 각 처방의 농축전탕액을 투여하여, 위점막의 일반적인 형태, 위점막내 항염증 효과(NF-κB, iNOS, COX-2) 등을 관찰하였다.
- 먼저 위점막 손상에 대한 보호효과를 관찰하기 위해 생쥐에 각 처방의 농축전탕액을 각각 투여한 후 indomethacin을 이용하여 위점막 손상을 유발시킨 다음 위의 외부형태, 위점막의 일반적인 형태, 위점막 보호체계(중성점액장벽, COX-1, HSP70) 등의 변화를 관찰하였다. 또한 치료효과를 관찰하기 위해 각 처방 추출물의 활성산소 소거실험을 통한 항산화 효과, in vitro 에서 항염증 효과(IKK mRNA, iNOS mRNA, COX-2 mRNA) 등을 관찰하고, 생쥐에 indomethacin을 이용하여 위점막 손상을 유발시킨 후에 각 처방의 농축전탕액을 투여하여, 위점막의 일반적인 형태, 위점막내 항염증 효과(NF-κB, iNOS, COX-2) 등을 관찰하여 유의성 있는 결과를 얻었기에 보고하는 바이다.
- 먼저 위점막 손상에 대한 보호효과를 관찰하기 위해 생쥐에 각 처방의 농축전탕액을 각각 투여한 후 indomethacin을 이용하여 위점막 손상을 유발시킨 다음 위의 외부형태, 위점막의 일반적인 형태, 위점막 보호체계(중성점액장벽, COX-1, HSP70) 등의 변화를 관찰하였다.
- 염증유발유전자의 전사인자 NF-κB, 염증효소 iNOS와 COX-2의 변화를 조사하기 위해 mouse anti-NF-κB p65(1:500, Santa Cruz Biotec, USA), mouse anti-iNOS(1:100, Santa Cruz Biotec, USA), rabbit anti-mouse COX-2(1:250, Cayman, USA)를 이용한 면역조직화학적 염색을 실시하였다.
- 세포는 37℃, 5% CO2 incubator에서 10% Fetal Bovine Serum(FBS, Sigma, USA)가 함유된 Dulbecco’s modified Eagle’s medium(DMEM, Weljin, Korea)를 사용하여 배양하였다. 오염방지를 위해 항생제로 100 unit/㎖ penicillin(Sigma, USA), 100 ㎍/㎖ streptomycin(Gibco/BRL, USA)을 첨가하였다. 세포는 플라스크의 80% 정도 자랐을 때 PBS로 씻어주고, Trypsin-EDTA(Gibco/BRL, USA)를 처리하여 계대 배양하였다.
- 점막상피세포의 보호기전에 관여하는 cyclooxygenase-1(COX-1)의 점막고유층내에서 분포 변화를 관찰하기 위해 면역조직화학적 염색을 실시하였다. 우선 절편을 20 ㎍/㎖ proteinase K(DAKO, Denmark)에서 5분 동안 proteolysis 과정을 거친 후 blocking serum인 10% normal goat serum(Vector Lab, USA)에 2시간 동안 반응시켰다. 그리고 1차 항체인 mouse anti-mouse COX-1(1:250, Cayman, USA)에 4℃ humidified chamber에서 72시간 동안 반응시켰다.
- 위점막 손상 유발 6시간 후 sodium pentobarbital 용액으로 마취한 후 vascular rinse와 10% 중성포르말린 용액(neutral buffered formalin: NBF)으로 심장관류고정을 실시하였다. 위 몸통과 날문의 연결부위를 적출하여 실온에서 24시간 동안 10% NBF에 고정하였다. 고정된 조직은 통상적인 방법으로 paraffin에 포매한 후 5 ㎛ 두께의 연속절편을 제작하였다.
- 위점막 손상 유발 6시간 후 sodium pentobarbital 용액으로 마취한 후 vascular rinse와 10% 중성포르말린 용액(neutral buffered formalin: NBF)으로 심장관류고정을 실시하였다. 위 몸통과 날문의 연결부위를 적출하여 실온에서 24시간 동안 10% NBF에 고정하였다.
- 위점막 손상 유발 6시간 후 일어난 출혈성 찰과의 유발 정도를 측정하기 위해 Optimas 5.2(Optima, USA)를 이용한 영상분석을 실시하였다. 적출된 위의 날문과 몸통부위를 젖힌 후 ×4 배율로 촬영한 후 Binary Morphology에서 invert 기능을 선택하여, 출혈성 찰과지역을 intensity 180-200으로 전환시킨 다음, 영상분석을 통해 pixel의 분포 수를 측정하였다.
- 위점막 손상 유발 후 APY군에는 平胃散 추출액을, AIJ군에는 二陳湯 추출액을, APJ군에는 平陳湯 추출액을 각각 2.5 ㎖/㎏ 량으로 5일 동안 경구 투여 하였다. 한편 in vitro 실험에 사용된 平胃散, 二陳湯, 平陳湯 추출물은 감압 ․ 농축 후 동결 건조하여 사용하였으며 수득율은 平胃散 20.
- 위점막 손상 유발을 위해 indomethacin을 0.9% NaCl이 포함된 용액에 희석시킨 후 10 ㎎/㎏를 5일 동안 AGP군, AIJ군, APY군 그리고 APJ군에 경구 투여하였다.
- 위점막 손상 유발을 위해 실험약물의 투여 후 indomethacin(Sigma, USA)을 0.9% NaCl이 포함된 용액에 희석시킨 후 75 ㎎/㎏을 생쥐에 피하주사 하였다.
- 위점막 손상 치료 효과를 관찰하기 전에 실험약물의 항산화 효과를 측정하기위해 riboflavin을 이용한 활성산소 소거실험을 실시하였다. 우선 photocell에 40 mM buffer 2.
- 먼저 위점막 손상에 대한 보호효과를 관찰하기 위해 생쥐에 각 처방의 농축전탕액을 각각 투여한 후 indomethacin을 이용하여 위점막 손상을 유발시킨 다음 위의 외부형태, 위점막의 일반적인 형태, 위점막 보호체계(중성점액장벽, COX-1, HSP70) 등의 변화를 관찰하였다. 또한 치료효과를 관찰하기 위해 각 처방 추출물의 활성산소 소거실험을 통한 항산화 효과, in vitro 에서 항염증 효과(IKK mRNA, iNOS mRNA, COX-2 mRNA) 등을 관찰하고, 생쥐에 indomethacin을 이용하여 위점막 손상을 유발시킨 후에 각 처방의 농축전탕액을 투여하여, 위점막의 일반적인 형태, 위점막내 항염증 효과(NF-κB, iNOS, COX-2) 등을 관찰하여 유의성 있는 결과를 얻었기에 보고하는 바이다.
- 고정된 조직은 통상적인 방법으로 paraffin에 포매한 후 5 ㎛ 두께의 연속절편을 제작하였다. 위점막의 일반적인 형태변화를 관찰하기 위해 연속절편을 hematoxylin과 eosin에 염색한 후 광학현미경(BX50. Olympus, Japan)으로 관찰하였다.
- 적출된 위의 날문과 몸통부위를 젖힌 후 ×4 배율로 촬영한 후 Binary Morphology에서 invert 기능을 선택하여, 출혈성 찰과지역을 intensity 180-200으로 전환시킨 다음, 영상분석을 통해 pixel의 분포 수를 측정하였다.
- 점막 손상 스트레스를 조사하기 위해 스트레스에 대한 완충적 물질인 열 충격 단백질(heat shock protein, HSP)의 하나인 HSP70의 분포 변화를 rabbit anti mouse HSP70(1:100, Santa Cruz Biotec, USA)을 이용한 면역조직화학적 염색 후 관찰하였다.
- 점막상피세포의 보호기전에 관여하는 cyclooxygenase-1(COX-1)의 점막고유층내에서 분포 변화를 관찰하기 위해 면역조직화학적 염색을 실시하였다. 우선 절편을 20 ㎍/㎖ proteinase K(DAKO, Denmark)에서 5분 동안 proteolysis 과정을 거친 후 blocking serum인 10% normal goat serum(Vector Lab, USA)에 2시간 동안 반응시켰다.
- 조직표본제작은 위점막 손상 보호효과를 관찰할 때와 동일한 방법으로 실험약물 투여 후 실시하였다.
- 중성점액질(neutral mucin)을 분비하여 위산에 의한 자가분해(autolysis) 방벽작용을 하는 표면점액세포의 변화를 관찰하기 위해서 periodic acid-Schiff reaction(PAS) stain을 실시하였는데, 우선 periodic acid에서 5분간 반응시킨 후 Schiff reagent에서 15분 동안 처리하였다. 그런 다음 sulfurous rinse에서 각 2분씩 3회 세척한 후 Hematoxylin에서 1분 동안 대조 염색하여 관찰하였다.
- PCR 산물은 1-2% agarose gel상에서 전기영동하여 relative intensity로 측정하였다. 한편 RT-PCR의 정확성을 평가하기 위하여 internal standard인 beta-actin의 증폭을 동시에 실시하였다. mRNA 발현의 relative intensity는 Optimas 5.
- 한편 위점막 치료효과를 관찰하기 위해 먼저 平胃散, 二陳湯, 平陳湯 추출물의 활성산소 소거실험을 통한 항산화 효능과 in vitro 실험을 통한 항염증 효과(IKK mRNA, iNOS mRNA, COX-2 mRNA)를 확인하였으며, 특히 平陳湯 추출물이 높은 항산화 효능 및 항염증 효과를 나타내었다.
대상 데이터
- In vitro 실험에 사용할 마우스의 대식세포인 RAW 264.7 macrophages는 Korean Cell Line Bank(KCLB, Korea)에서 구입하였다. 세포는 37℃, 5% CO2 incubator에서 10% Fetal Bovine Serum(FBS, Sigma, USA)가 함유된 Dulbecco’s modified Eagle’s medium(DMEM, Weljin, Korea)를 사용하여 배양하였다.
- 대한실험동물센터에서 분양 받은 태령 4주된 ICR계 수컷 생쥐를 무균사육장치내에서 2주일 동안 적응시킨 후 체중 30g된 생쥐를 선별하여 사용하였다. 전 실험기간 동안 물과 사료를 자유섭취하게 하였다.
- 본 실험에 사용된 平胃散(Pyeongwi-san), 二陳湯(Ijin-tang), 平陳湯(Pyeongjin-tang)은 <方藥合編>16)에 수록된 처방에 따른 구성약물로서, 시중에서 엄선된 약재만을 구입하여 실험에 사용하였으며 처방의 내용과 1첩의 분량은 다음과 같다(Table 1,2,3).
데이터처리
- 2(Omtima, USA)를 이용한 영상분석을 실시하였다. 본 실험의 결과는 SPSS 14.0(SPSS INC, USA)을 통한 ANOVA test로 유의성을 검증하였으며 사후검증은 Scheffe 검증을 사용하였다.
- Abs 560 nm에서 autozero를 잡고 light box에서 1분 동안 조사한 후 흡광도를 측정하였다. 이 작업을 7번 반복하여 평균값을 계산하였다.
이론/모형
- 平胃散, 二陳湯, 平陳湯 추출물이 nuclear factor-κB(NF-κB) 활성에 관여하는 IκB kinase(IKK), 염증효소인 inducible nitric oxide synthase(iNOS), cyclooxygenase(COX-2)의 mRNA 발현 양상에 미치는 영향을 조사하기 위해 역전사중합효소연쇄반응법(RT-PCR)을 실시하였다.
성능/효과
- 1. 위점막 손상유발 전 각 처방의 농축전탕액 투여군 모두에서 투여되지 않은 군에 비하여 출혈성 찰과, 점액분비세포의 배열 유실 등의 위점막 손상 소견이 감소된 것으로 나타났으며, 平胃散 투여군, 平陳湯 투여군, 二陳湯 투여군 순으로 위점막 손상이 유의성 있게 감소한 것으로 관찰되었다.
- 2. 위점막 보호 효과는, 각 처방의 농축전탕액 투여군 모두에서 투여되지 않은 군에 비하여 중성점액세포 손상완화, COX-1 분포증가, HSP의 분포감소 등의 위점막 보호 효과가 유의성 있게 나타났으며, 그 중 平胃散 투여군이 가장 우수한 것으로 관찰되었다. 단, COX-1에서는 二陳湯투여군 보다 平陳湯투여군에서 더 증가했으나 유의성 있는 차이는 보이지 않았으며, HSP에서는 平陳湯투여군보다 平胃散투여군 에서 더 감소하였으나 유의성 있는 차이는 보이지 않았다.
- 3. 활성산소 소거실험을 통한 항산화 효과 측정에서 平胃散, 二陳湯, 平陳湯 모두 항산화 효과가 있었으며, 그 중 平陳湯의 항산화 효과가 우수한 것으로 관찰되었다.
- 4. In vitro 에서 항염증 효과는 平胃散 추출물, 二陳湯 추출물, 平陳湯 추출물에서 모두 효과가 있는 것으로 나타났으며, 그 중 平陳湯이 가장 우수한 것으로 관찰되었다. 또한 in vivo에서 위점막내 항염증 효과는, 각 처방의 농축전탕액 투여군 모두에서 투여하지 않은 군에 비하여 점액분비세포 배열유실의 감소 및 NF-κB, iNOS, COX-2 양성반응세포의 유의성 있는 감소를 보였는데, 平陳湯 투여군, 平胃散 투여군, 二陳湯 투여군 순으로 항염증효과가 유의성 있게 더 우수한 것으로 관찰되었다.
- A. The damage of mucose secreting celll (arrow) in mice treated with Pyeongwi-san, Ijin-tang and Pyeongjin-tang noticeably decreased (H&E, x200).
- A. The mucosal damages in mice pre-treated with Pyeongwi-san Ijin-tang Pyeongjin-tang more decreased than those of BGP (asterisk, hemorrhagic erosion; H&E, x200).
- B. The NF-κB p65 positive reaction (arrow) in mice treated with Pyeongwi-san, Ijin-tang and Pyeongjin-tang noticeably decreased (NF-kB p65 immunohistochemstry, x400).
- BGP군의 출혈성 침식 주변의 점막 상피에서는 PAS 양성반응을 보이는 표면점액세포와 목점액세포가 대조군에 비해 감소하였는데, 이에 반해 BPY군, BIJ군 그리고 BPJ군에서는 BGP군에 비해 PAS 양성반응이 증가된 양상으로 관찰되었다. BPY군에서는 중성점액을 분비하는 PAS 양성반응 표면점액세포의 분포가 점막 상층 표면(apical surface)에서 위오목(gastric pit)까지 확장된 것으로 관찰되었다(Fig.
- 이러한 분포 증가는 대조군에 비해 BGP군에서 1381% 증가하였다. BIJ군은 BGP군에 비해 HSP70 양성반응이 유의성 있게 감소되었으며 특히 BPY군 및 BPJ군에서는 BIJ군 보다 유의성 있게 감소하였다(Table 5, Fig. 2-D).
- C. The distribution of iNOS positive cell (arrow) in mice treated with Pyeongwi-san, Ijin-tang and Pyeongjin-tang noticeably decreased (iNOS immunohistochemstry, x400).
- D. The distribution of COX-2 positive cell (arrow) in mice treated with Pyeongwi-san, Ijin-tang and Pyeongjin-tang noticeably decreased (COX-2 immunohistochemstry, x400).
- NF-κB p65 양성반응의 영상분석 결과 AGP군은 대조군에 비해 1858% 증가하였지만, APY군은 AGP군에 비해 69%, AIJ군은 AGP군에 비해 23% 그리고 APJ군에서는 AGP군에 비해 83% 감소하였다(Table 6, Fig. 5-B).
- RAW 264.7 macrophages에서 LPS 자극에 의한 COX-2 mRNA 발현은 증가하였는데, 平胃散, 二陳湯, 平陳湯 추출물 처리 후 농도-의존적으로 발현이 감소되었다. 平胃散 추출물 처리 후 COX-2 mRNA 발현량은 0.
- 염증효소 iNOS 양성반응세포의 분포는 AGP군에서는 증가하였는데 APY군 AIJ군 그리고 APJ군에서는 모두 유의성 있게 감소하였으며 특히 APJ군은 APY군 AIJ군 보다 특히 유의성 있게 감소하였다. iNOS 양성반응세포는 AGP군에서는 증가하였는데 APY군 AIJ군 그리고 APJ군에서는 모두 유의성 있게 감소하였으며 특히 APJ군은 APY군 AIJ군 보다 특히 유의성 있게 감소하였다(Table 6, Fig. 5-C).
- 7 macrophages에서 LPS 자극에 의한 COX-2 mRNA 발현은 증가하였는데, 平胃散, 二陳湯, 平陳湯 추출물 처리 후 농도-의존적으로 발현이 감소되었다. 平胃散 추출물 처리 후 COX-2 mRNA 발현량은 0.5 ㎎/㎖에서 18%, 1.0 ㎎/㎖에서 58%가, 二陳湯 추출물 처리 후 0.5 ㎎/㎖에서 16%, 1.0 ㎎/㎖에서 51%가, 平陳湯 추출물 처리 후 0.5 ㎎/㎖에서 67%, 1.0 ㎎/㎖에서 86%가 감소하였다(Fig. 4).
- 7 macrophages에서 LPS 자극에 의한 IKK mRNA 발현은 증가하였는데, 平胃散, 二陳湯, 平陳湯 추출물 처리 후 농도-의존적으로 발현이 감소되었다. 平胃散 추출물 처리 후 IKK mRNA 발현량은 0.5 ㎎/㎖에서 42%, 1.0 ㎎/㎖에서 74%가, 二陳湯 추출물 처리 후 0.5 ㎎/㎖에서 48%, 1.0 ㎎/㎖에서 62%가, 平陳湯 추출물 처리 후 0.5 ㎎/㎖에서 59%, 1.0 ㎎/㎖에서 76%가 감소하였다(Fig. 4).
- 7 macrophages에서 LPS 자극에 의한 iNOS mRNA 발현은 증가하였는데, 平胃散, 二陳湯, 平陳湯 추출물 처리 후 농도-의존적으로 발현이 감소되었다. 平胃散 추출물 처리 후 iNOS mRNA 발현량은 0.5 ㎎/㎖에서 17%, 1.0 ㎎/㎖에서 37%가, 二陳湯 추출물 처리 후 0.5 ㎎/㎖에서 10%, 1.0 ㎎/㎖에서 30%가, 平陳湯 추출물 처리 후 0.5 ㎎/㎖에서 52%, 1.0 ㎎/㎖에서 67%가 감소하였다(Fig. 4).
- 위점막 보호 효과는, 각 처방의 농축전탕액 투여군 모두에서 투여되지 않은 군에 비하여 중성점액세포 손상완화, COX-1 분포증가, HSP의 분포감소 등의 위점막 보호 효과가 유의성 있게 나타났으며, 그 중 平胃散 투여군이 가장 우수한 것으로 관찰되었다. 단, COX-1에서는 二陳湯투여군 보다 平陳湯투여군에서 더 증가했으나 유의성 있는 차이는 보이지 않았으며, HSP에서는 平陳湯투여군보다 平胃散투여군 에서 더 감소하였으나 유의성 있는 차이는 보이지 않았다.
- 대조군의 점막고유층내 COX-1 양성반응은 세포질에서 강하게 나타났으며, 양성반응세포는 주로 점막 상단부에서 다수 관찰되었다. 이러한 COX-1 양성반응은 BGP군에서 91% 감소하였다.
- 또한 in vivo에서 위점막내 항염증 효과는, 각 처방의 농축전탕액 투여군 모두에서 투여하지 않은 군에 비하여 점액분비세포 배열유실의 감소 및 NF-κB, iNOS, COX-2 양성반응세포의 유의성 있는 감소를 보였는데, 平陳湯 투여군, 平胃散 투여군, 二陳湯 투여군 순으로 항염증효과가 유의성 있게 더 우수한 것으로 관찰되었다.
- 본 실험에서 二陳湯, 平胃散, 平陳湯이 사전 투여된 생쥐에서는 위 점막 손상 감소 효과(출혈성 찰과 감소, 스트레스 완화), 점액방어장벽의 보호 효과(COX-1 증가, 점액분비세포 증가)가 관찰되었으며, 二陳湯보다는 平陳湯이, 平陳湯보다는 平胃散에서 높은 효과를 보였다. 또한 본 실험에서 항산화 효과와 염증관련효소(IKK, iNOS, COX-2)의 mRNA 발현의 억제 효과가 확인된 二陳湯, 平胃散, 平陳湯이 투여된 위 점막 손상 생쥐에서 위점막내 항염증 효과(NF-kB p65 활성억제, iNOS와 COX-2 생성 감소)가 관찰되었으며, 二陳湯 보다는 平胃散이, 平胃散 보다는 平陳湯이 더 나은 결과를 보였다. 이러한 실험 결과로 보면 理氣祛濕의 대표방인 平胃散이 위점막 보호에 보다 효과적이며, 祛濕과 祛痰을 겸한 平陳湯이 위점막 손상의 치료에 효과가 더 있는 것으로 사료된다.
- 본 실험에서 二陳湯, 平胃散, 平陳湯이 사전 투여된 생쥐에서는 위 점막 손상 감소 효과(출혈성 찰과 감소, 스트레스 완화), 점액방어장벽의 보호 효과(COX-1 증가, 점액분비세포 증가)가 관찰되었으며, 二陳湯보다는 平陳湯이, 平陳湯보다는 平胃散에서 높은 효과를 보였다. 또한 본 실험에서 항산화 효과와 염증관련효소(IKK, iNOS, COX-2)의 mRNA 발현의 억제 효과가 확인된 二陳湯, 平胃散, 平陳湯이 투여된 위 점막 손상 생쥐에서 위점막내 항염증 효과(NF-kB p65 활성억제, iNOS와 COX-2 생성 감소)가 관찰되었으며, 二陳湯 보다는 平胃散이, 平胃散 보다는 平陳湯이 더 나은 결과를 보였다.
- 본 실험에서는 NF-κB, iNOS, COX-2의 변화를 각 항체를 이용하여 면역조직화학으로 조사하였는데, 점막상피 손상지역에서 NF-κB p65, iNOS, COX-2의 증가를 확인할 수 있었다.
- 이와 같이 HSP70은 세포상해에 저항이 있는 지역에서 주로 발견되어, HSP70의 방어기전으로써의 역할을 하는 것으로 사료된다. 본 실험에서도 출혈성 찰과 유발 점막내에서 HSP70 양성반응이 증가하였으며, 이러한 HSP70의 양성반응은 핵내에서 강하게 나타났다.
- 염증효소 COX-2 양성반응세포의 분포는 APY군 AIJ군 그리고 APJ군에서는 모두 유의성 있게 감소하였으며 특히 APJ군은 APY군 AIJ군 보다 특히 유의성 있게 감소하였다(Table 6, Fig. 5-D).
- 염증효소 iNOS 양성반응세포의 분포는 AGP군에서는 증가하였는데 APY군 AIJ군 그리고 APJ군에서는 모두 유의성 있게 감소하였으며 특히 APJ군은 APY군 AIJ군 보다 특히 유의성 있게 감소하였다. iNOS 양성반응세포는 AGP군에서는 증가하였는데 APY군 AIJ군 그리고 APJ군에서는 모두 유의성 있게 감소하였으며 특히 APJ군은 APY군 AIJ군 보다 특히 유의성 있게 감소하였다(Table 6, Fig.
- 염증효소생성에 관여하는 전사인자 NF-κB p65의 양성반응세포의 분포는 AGP군에서는 증가하는 반면 APY군, AIJ군 그리고 APJ군에서는 감소하였다.
- 위점막 손상 유발 후 스트레스에 대한 완충적 물질인 HSP70 분포는 점막고유층에 증가하였으며, 핵과 주변세포질에서 강한 양성반응을 보이는 것으로 관찰되었다. 이러한 분포 증가는 대조군에 비해 BGP군에서 1381% 증가하였다.
- 또한 본 실험에서 항산화 효과와 염증관련효소(IKK, iNOS, COX-2)의 mRNA 발현의 억제 효과가 확인된 二陳湯, 平胃散, 平陳湯이 투여된 위 점막 손상 생쥐에서 위점막내 항염증 효과(NF-kB p65 활성억제, iNOS와 COX-2 생성 감소)가 관찰되었으며, 二陳湯 보다는 平胃散이, 平胃散 보다는 平陳湯이 더 나은 결과를 보였다. 이러한 실험 결과로 보면 理氣祛濕의 대표방인 平胃散이 위점막 보호에 보다 효과적이며, 祛濕과 祛痰을 겸한 平陳湯이 위점막 손상의 치료에 효과가 더 있는 것으로 사료된다.
- BPY군, BIJ군, BPJ군에서는 COX-1 발현 증가를 통한 prostaglandin의 정상적인 분비는 점액과 중성점액장벽을 유지시킴으로써 indomethacin으로 유발된 위점막 손상을 방어할 수 있었다. 이러한 위점막 손상에 대한 방어효과는 BPY군이 가장 우수하였으며, BPJ군, BIJ군 순으로 우수하였으나 BPJ군과 BIJ군은 유의한 차이는 보이지 않았다.
- 특히 IKK mRNA 발현 억제를 통해 NF-κB의 활성이 억제됨을 확인할 수 있었으며, 또한 iNOS mRNA 발현 억제를 통해 NO(Nitric oxide)에 의한 혈관투과성 감소 및 COX-2 mRNA 발현 억제를 통한 항염증 작용이 원인인 것으로 사료된다. 이러한 치료효과는 APY군, AIJ군, APJ군 모두 AGP군에 비해 유의성이 있었으며, APJ군, APY군, AIJ군 순으로 유의성 있게 더 우수한 것으로 관찰되었다.
- 이상의 결과로 平胃散, 二陳湯, 平陳湯 처방 모두 위점막 손상에 대한 보호효과와 치료효과가 있었으며, 보호효과는 理氣祛濕하는 平胃散이 가장 우수하였으며, 치료효과는 祛濕과 祛痰을 겸한 平陳湯이 가장 우수한 것으로 사료된다.
- 이에 반해 BPY군, BIJ군 및 BPJ군에서는 BGP군에 비해 COX-1 양성반응이 유의성 있게 증가된 되었는데, 특히 BPY군은 BIJ군과 BPJ군에 비해서도 유의성 있는 증가가 관찰되었다(Table 5, Fig. 2-C).
- 이에 비해 BPY군은 BGP군에 비해 89% 감소한 7503±110/200,000 pixel로, BIJ군은 BGP군에 비해 72% 감소한 18575±1074/200,000 pixel로, 그리고 BPJ군은 BGP군에 비해 78% 감소한 14623±538/200,000 pixel로 측정되었다(Fig. 1).
- 특히 IKK mRNA 발현 억제를 통해 NF-κB의 활성이 억제됨을 확인할 수 있었으며, 또한 iNOS mRNA 발현 억제를 통해 NO(Nitric oxide)에 의한 혈관투과성 감소 및 COX-2 mRNA 발현 억제를 통한 항염증 작용이 원인인 것으로 사료된다.
- 허혈 후 재관류시 점막손상 변화에 있어서 APY군, AIJ군, APJ군에서는 oxidative stress를 억제함으로써 재관류시 발생하는 NF-κB의 활성화에 의한 염증성 점막손상이 억제된 것으로 보인다.
후속연구
- 본 실험결과를 토대로 향후 脾胃病과 관련된 소화기 질환에 祛濕祛痰의 치법에 해당되는 다양한 처방들 간의 비교연구가 지속적으로 이루어지기를 기대하는 바이다.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.