[논문]Filtration과 Integrated Cell Culture/Real-Time Reverse Transcription PCR 기법을 이용한 채소류에서 Human Rotavirus 신속 검출

현지연; 천정환; 송광영; 황인균; 곽효선; 이정수; 김무상; 이중복; 서건호

Filtration과 Integrated Cell Culture/Real-Time Reverse Transcription PCR 기법을 이용한 채소류에서 Human Rotavirus 신속 검출
Rapid Detection Method for Human Rotavirus from Vegetables by a Combination of Filtration and Integrated Cell Culture/Real-Time Reverse Transcription PCR 원문보기

Korean journal of microbiology = 미생물학회지, v.47 no.2, 2011년, pp.117 - 123

현지연 (건국대학교 수의과대학 공중보건학) , 천정환 (건국대학교 수의과대학 공중보건학) , 송광영 (건국대학교 수의과대학 공중보건학) , 황인균 (식품의약품안전청 식품의약품안전평가원 미생물과) , 곽효선 (식품의약품안전청 식품의약품안전평가원 미생물과) , 이정수 (식품의약품안전청 식품의약품안전평가원 미생물과) , 김무상 (서울시 보건환경연구원) , 이중복 (건국대학교 수의과대학 전염병학) , 서건호 (건국대학교 수의과대학 공중보건학)

초록
AI-Helper

본 연구는 human rotavirus (HRV)의 검출법을 최적화하기 위해 real-time RT-PCR과 세포 배양법을 이용하여 여러 가지 탈리 농축법을 비교 및 평가하는 것을 목적으로 하였다. 채소류 중 배추, 상추, 깻잎을 선정하여 바이러스 희석액을 접종하고 탈리액 비교를 위하여 buffer A (100 mM Tris-HCl, 50 mM glycine, 3% beef extract, pH 9.5)와 buffer B (250 mM Threonine, 300 mM NaCl, pH 9.5)를 이용하여 탈리하였고, 농축방법을 비교하기 위하여 PEG (polyethylene glycol) 침전법 또는 filtration [Nanoceram filter$^{(R)}$ (Argonide corporation)]을 이용하여 농축하였다. 또한 바이러스의 감염성 평가를 위하여 MA-104 cell을 배양하여 탈리, 농축 방법을 거쳐 회수된 HRV를 접종하고 1, 48, 72, 96, 120, 144, 168시간 후 세포를 수거하여 real-time RT-PCR을 시행하고 세포병변을 관찰하였다. 탈리 용액은 buffer A가 회수율 29.54%로 buffer B의 18.32%보다 더 뛰어난 탈리효과를 보였으며 농축방법을 비교했을 때 filtration 방법이 회수율 51.89%를 나타내며 PEG 침전법에 비해서 바이러스의 농축에 효과적이었으며 검출 소요시간이나 간단한 과정 면에서 효율적이었다. ICC/real-time RT-PCR을 시행하였을 때 세포병변 72시간 후부터 나타나기 시작했지만 Ct value는 48시간부터 감소하기 시작하여 더 빠른 시간 내에 감염성을 평가할 수 있었다. 따라서, filtration과 integrated/cell culture real-time RT-PCR을 이용하면 기존의 검출방법보다 빠른 시간 내에 바이러스 검출이 가능할 것으로 여겨진다.

Abstract ▼ AI-Helper

The purpose of this study was to evaluate and compare different elution and concentration methods for optimization of human rotavirus (HRV) detection method using real-time RT-PCR and cell culture techniques. The leafy vegetable samples (lettuce, Chinese cabbage) were artificially inoculated with HRV. Viruses were extracted from the vegetables by two different elution buffers, buffer A (100 mM Tris-HCl, 50 mM glycine, 3% beef extract, pH 9.5) and buffer B (250 mM Threonine, 300 mM NaCl, pH 9.5), and the extracted viruses were concentrated by filtration and PEG precipitation sequentially. To determine infectivity of the viruses, the viruses recovered from the samples were infected to the MA-104 cells, and integrated cell culture real-time RT-PCR was performed at 1, 48, 72, 96, 120, 144, 168 h post-infection (p.i.). The elution buffer A was more efficient in extracting the virus from the produce samples tested than the buffer B, 29.54% and 18.32% of recoveries, respectively. The sensitivity of real-time RT-PCR method was markedly improved when the virus was concentrated by the filtration method. When the viruses were eluted and concentrated by buffer A and filtration, respectively, the average recovery rate was approximately 51.89%. When the viruses recovered from samples were infected to MA-104 cell, infectious HRV was detected within 48 h p.i. by ICC/real-time RT-PCR, whereas cytopathic effects were not observed until 72 h p.i. The optimized detection method evaluated in this study could be useful for rapid and reliable detection of HRV in fresh produce products and applied for detection of other food-borne viruses.

주제어

AI 본문요약
AI-Helper

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문제 정의

따라서 본 연구의 목적은 채소류에서 HRV를 검출하기 위해 두 가지 탈리액을 선정하여 회수 능력을 비교하였고, 농축 방법으로 양전하를 띄는 필터(Nanoceram® matrix)를 이용한 filtration을 사용하여 농축 능력을 PEG 침전법과 비교하였다.
본 연구는 human rotavirus (HRV)의 검출법을 최적화하기 위해 real-time RT-PCR과 세포 배양법을 이용하여 여러 가지 탈리·농축법을 비교 및 평가하는 것을 목적으로 하였다.
본 연구에서는 세포배양법과 real-time RT-PCR을 복합적으로 사용하는 방법으로 ICC/real-time RT-PCR을 개발하여 바이러스의 감염성 평가에 사용하였는데, 이 방법은 세포 내에서 증식하는 바이러스를 real-time RT-PCR로 정량함으로써 현미경으로 세포병변이 확인되기 이전에 바이러스의 감염성을 평가할 수 있는 방법이다. 채소에서 filtration을 이용하여 회수한 HRV를 감염성 평가를 하기 위해 MA-104 cell에 접종하고 접종한 직후 1시간째에 세포를 수거하여 real-time RT-PCR을 시행하였다.

가설 설정

a, Statistically significant reduction of Ct value was evident. b, Cytopathic effects began to appear.

제안 방법

MA-104 cell은 바이러스 감염성 평가를 위해 배양하였으며 Dulbecco’s Modified Eagle Medium (DMEM, Gibco, USA)에 10% fetal bovine serum, 0.06% L-glutamine, 0.1% NaHCO3를 첨가하여 사용하였으며 유지배지로는 5% fetal bovine serum, 0.06% L-glutamine, and 0.25% NaHCO3를 첨가한 DMEM를 사용하였다.
kfda?mid=92&division=식품). Magnetic silica bead RNA Extractor를 이용하여 MagExtractor Viral RNA kit (TOYOBO, Japan)나, GM Autoprep kit (Green Mate, Korea) 등을 사용하거나 이와 동등 이상의 결과(재현성)를 얻을 수 있는 상업적 kit를 선택하여 사용할 수 있는데 이에 본 연구에서는 식품공전법을 참조하여 GM Autoprep kit를 사용하여 RNA를 추출하였다. 세포에 감염된 HRV의 RNA를 추출하는 방법은 Viral Genespin™ Viral DNA/RNA Extraction kit (iNtRON Biotechnology, Korea)을 사용하였다.
Real-time RT-PCR은 ABI 7500® real-time PCR System (Applied Biosystems)을 사용하였으며 반응 조건은 50°C에서 30분, 95°C에서 10분간 반응시킨 후 94°C에서 15초, 50°C에서 30초, 72°C에서 1분을 1회로 하여 40 cycle을 반응시켰다.
Real-time RT-PCR은 QuantiTect SYBR Green Onestep RT-PCR kit (QIAGEN, USA)를 이용하였으며 0.5 μl의 QuantiTect RT mix, 25 μl의 QuantiTect SYBR Green RT-PCR Master mix, 0.5 μM의 forward와 reverse primer, 5 μl의HRV RNA, RNase free water 를 섞어 총 50 μl으로 반응을 진행하였다.
바이러스가 접종된 샘플과 음성 대조군이 들어있는 지퍼백에 각각의 탈리용액을 각 샘플에 100 ml을 넣고 균질화를 30초간 실시한 후 실온에서 60분간 교반하였다. 교반을 마친 탈리용액은 아래에 기술된 바와 같이 PEG 침전법을 사용하여 농축되었으며 농축된 바이러스는 real-time RT-PCR로 정량하고 양성 대조군과 비교하여 회수율을 구하였다. 이 실험을 두 번 반복 실험하였고 각 실험에서 샘플은 4개씩 시행하였다.
교반을 마친 탈리 용액을 4°C에서 10,000×g 15분간 원심분리 한 후에 상층액을 수거하였다. 그 후 PEG 침전법 또는 filtration을 이용하여 농축된 바이러스를 real-time RT-PCR로 정량하고 회수율을 비교하였다. 이 실험을 두 번 반복 실험하였고 각 실험에서 샘플은 4개씩 시행하였다.
접종 후 1, 48, 72, 96, 120, 144, 168시간 후에 cell scraper (Gibco)를 이용하여 세포를 수거한 후 RNA를 추출하여 real-time RT-PCR을 시행하였다. 그리고 7일간 현미경으로 세포병변을 관찰 하였고 세포병변을 나타낸 세포는 감염을 확인하기 위해 real-time RT-PCR을 시행하였다.
바이러스가 접종된 샘플과 음성 대조군이 들어있는 지퍼백에 각각의 탈리용액을 각 샘플에 100 ml을 넣고 균질화를 30초간 실시한 후 실온에서 60분간 교반하였다. 교반을 마친 탈리용액은 아래에 기술된 바와 같이 PEG 침전법을 사용하여 농축되었으며 농축된 바이러스는 real-time RT-PCR로 정량하고 양성 대조군과 비교하여 회수율을 구하였다. 이 실험을 두 번 반복 실험하였고 각 실험에서 샘플은 4개씩 시행하였다.
5)를 이용하여 탈리하였고, 농축방법을 비교하기 위하여 PEG (polyethylene glycol) 침전법 또는 filtration [Nanoceram filter® (Argonide corporation)]을 이용하여 농축하였다. 또한 바이러스의 감염성 평가를 위하여 MA-104 cell을 배양하여 탈리, 농축 방법을 거쳐 회수된 HRV를 접종하고 1, 48, 72, 96, 120, 144, 168시간 후 세포를 수거하여 real-time RT-PCR을 시행하고 세포병변을 관찰하였다. 탈리 용액은 buffer A가 회수율 29.
따라서 본 연구의 목적은 채소류에서 HRV를 검출하기 위해 두 가지 탈리액을 선정하여 회수 능력을 비교하였고, 농축 방법으로 양전하를 띄는 필터(Nanoceram® matrix)를 이용한 filtration을 사용하여 농축 능력을 PEG 침전법과 비교하였다. 또한 세포배양을 통해 filtration으로 농축된 바이러스의 감염력을 평가하였는데 이때 신속한 감염성 평가를 위하여 integrated cell culture/real-time RT-PCR (ICC/real-time RT-PCR)를 통해서 시간대 별로 세포 내의 바이러스 증가를 정량하였다.
채소류 중 엽채류인 배추, 상추, 깻잎을 선정하여 25 g씩 지퍼백에 넣은 후 4 log RNA copies로 희석된 1 ml의 바이러스액을 샘플의 10개의 spot에 골고루 접종하였다. 바이러스를 접종하지 않은 샘플은 음성 대조군으로 사용하며, 야채를 넣지 않은 탈리용액에 바이러스만을 첨가하여 양성 대조군으로 사용하였다. 양성 대조군에서 회수된 바이러스 농도는 각 방법의 회수율을 계산 하는데 사용되었다.
세포에 감염된 HRV의 RNA를 추출하는 방법은 Viral Genespin™ Viral DNA/RNA Extraction kit (iNtRON Biotechnology, Korea)을 사용하였다. 바이러스의 정량은 HRV의 RNA를 10배 연속 희석하여 real-time RT-PCR을 시행하여 standard curve를 완성한 후 마지막으로 검출된 희석농도를 1 RT-PCR unit (PCRU)으로 결정하고 그 후 본래의 농도를 계산했다. 그리고 GeneAmp® RNA PCR Control kit (Applied Biosystems, USA)를 이용하였는데 이 시약에는 일정한 양의 internal RNA copies (6 log RNA copies/ml)가 들어있어 HRV RNA의 비교 정량이 가능하였다.
본 실험에서는 탈리용액 100 mM Tris-HCl, 50 mM glycine, 3% beef extract pH 9.5과 250 mM Threonine, 300 mM NaCl pH 9.5의 바이러스의 탈리효과를 비교하였고 alumina strand로 이루어진 electropositive filter를 이용한 filtration과 PEG 침전법의 농축효과를 비교하였다. 100 mM Tris-HCl, 50 mM glycine, 3% beef extract, pH 9.
교반을 마친 탈리용액은 아래에 기술된 바와 같이 PEG 침전법을 사용하여 농축되었으며 농축된 바이러스는 real-time RT-PCR로 정량하고 양성 대조군과 비교하여 회수율을 구하였다. 이 실험을 두 번 반복 실험하였고 각 실험에서 샘플은 4개씩 시행하였다.
접종 후 한 시간 동안 20분마다 흔들어 주어 바이러스가 세포에 골고루 감염될 수 있게 하고 유지 배지를 넣고 배양했다. 접종 후 1, 48, 72, 96, 120, 144, 168시간 후에 cell scraper (Gibco)를 이용하여 세포를 수거한 후 RNA를 추출하여 real-time RT-PCR을 시행하였다. 그리고 7일간 현미경으로 세포병변을 관찰 하였고 세포병변을 나타낸 세포는 감염을 확인하기 위해 real-time RT-PCR을 시행하였다.
채소류 중 배추, 상추, 깻잎을 선정하여 바이러스 희석액을 접종하고 탈리액 비교를 위하여 buffer A (100 mM Tris-HCl, 50 mM glycine, 3% beef extract, pH 9.5)와 buffer B (250 mM Threonine, 300 mM NaCl, pH 9.5)를 이용하여 탈리하였고, 농축방법을 비교하기 위하여 PEG (polyethylene glycol) 침전법 또는 filtration [Nanoceram filter® (Argonide corporation)]을 이용하여 농축하였다.
채소류 중 엽채류인 배추, 상추, 깻잎을 선정하여 25 g씩 지퍼백에 넣은 후 4 log RNA copies로 희석된 1 ml의 바이러스액을 샘플의 10개의 spot에 골고루 접종하였다. 바이러스를 접종하지 않은 샘플은 음성 대조군으로 사용하며, 야채를 넣지 않은 탈리용액에 바이러스만을 첨가하여 양성 대조군으로 사용하였다.
본 연구에서는 세포배양법과 real-time RT-PCR을 복합적으로 사용하는 방법으로 ICC/real-time RT-PCR을 개발하여 바이러스의 감염성 평가에 사용하였는데, 이 방법은 세포 내에서 증식하는 바이러스를 real-time RT-PCR로 정량함으로써 현미경으로 세포병변이 확인되기 이전에 바이러스의 감염성을 평가할 수 있는 방법이다. 채소에서 filtration을 이용하여 회수한 HRV를 감염성 평가를 하기 위해 MA-104 cell에 접종하고 접종한 직후 1시간째에 세포를 수거하여 real-time RT-PCR을 시행하였다. 이 때의 Ct value는 37.
탈리액은 기존의 연구에서 탈리효과가 뛰어나다고 평가된 두 가지를 선정하여 비교하였다(7, 17). 100 mM Tris-HCl, 50 mM glycine, 3% beef extract (pH 9.

대상 데이터

Human rotavirus Wa (TC adapted) strain을 American Type Culture Collection (ATCC)에서 구입하였으며 건국대학교 수의과대학 전염병학 실험실에서 분양 받은 MA-104 cell를 이용하여 실험을 수행 하였다. MA-104 cell은 바이러스 감염성 평가를 위해 배양하였으며 Dulbecco’s Modified Eagle Medium (DMEM, Gibco, USA)에 10% fetal bovine serum, 0.

데이터처리

05 이하일 때 통계학적 유의차가 있는 것으로 판단하였다. HRV의 감염성 평가를 위하여 1시간 후의 Ct value와 각 시간별 Ct value의 통계학적 유의차를 비교하였다.
05; GraphPad, USA)을 이용하여 분석되었다. 각 trial별 회수율의 평균값을 구하여 두 가지 방법 간의 통계학적 유의차(p value)를 분석하였다. 이 때 p value가 0.
바이러스의 탈리 방법과 농축방법에 대한 회수율은 InStat Software (Version 3.05; GraphPad, USA)을 이용하여 분석되었다. 각 trial별 회수율의 평균값을 구하여 두 가지 방법 간의 통계학적 유의차(p value)를 분석하였다.

이론/모형

탈리액은 기존의 연구에서 탈리효과가 뛰어나다고 평가된 두 가지를 선정하여 비교하였다(7, 17). 100 mM Tris-HCl, 50 mM glycine, 3% beef extract (pH 9.5)와 250 mM Threonine-300 mM NaCl (pH 9.5)(Sigma-Aldrich, Korea)를 비교하였으며 농축방법은 PEG 침전법을 사용하였다. 바이러스가 접종된 샘플과 음성 대조군이 들어있는 지퍼백에 각각의 탈리용액을 각 샘플에 100 ml을 넣고 균질화를 30초간 실시한 후 실온에서 60분간 교반하였다.
PEG 침전법의 과정은 기존 발표된 연구를 참고하였다(7). 탈리 후 원심 분리된 상층액을 5 N HCl을 이용하여 pH 7.
RNA를 추출하는 방법은 식품공전방법에 있는 노로 바이러스 검출법을 참고로 하였다(http://www.kfda.go.kr/index.kfda?mid=92&division=식품).
세포에 감염된 HRV의 RNA를 추출하는 방법은 Viral Genespin™ Viral DNA/RNA Extraction kit (iNtRON Biotechnology, Korea)을 사용하였다.

성능/효과

5의 바이러스의 탈리효과를 비교하였고 alumina strand로 이루어진 electropositive filter를 이용한 filtration과 PEG 침전법의 농축효과를 비교하였다. 100 mM Tris-HCl, 50 mM glycine, 3% beef extract, pH 9.5과 250 mM Threonine, 300 mM NaCl pH 9.5을 이용하여 탈리 하였을 때 각각의 회수율은 29.54%와 18.32%로 100 mM Tris-HCl, 50 mM glycine, 3% beef extract, pH 9.5이 더 뛰어난 탈리효과를 보였다(Table 1). 각 실험의 회수율을 통계학적으로 비교해본 결과 p value는 0.
89%를 나타내며 PEG 침전법에 비해서 바이러스의 농축에 효과적이었으며 검출 소요시간이나 간단한 과정 면에서 효율적이었다. ICC/real-time RT-PCR을 시행하였을 때 세포병변 72시간 후부터 나타나기 시작했지만 Ct value는 48시간부터 감소하기 시작하여 더 빠른 시간 내에 감염성을 평가할 수 있었다. 따라서, filtration과 integrated/cell culture real-time RT-PCR을 이용하면 기존의 검출방법보다 빠른 시간 내에 바이러스 검출이 가능할 것으로 여겨진다.
농축방법을 비교했을 때 PEG 침전법과 filtration의 각각의 회수율은 양성 컨트롤과 비교했을 때 19.05%와 51.89%로 filtration이 농축에 더 효과적인 것으로 나타났다(Table 2). 통계학적으로 비교해 본 결과 p value는 0.
ICC/real-time RT-PCR을 시행하였을 때 세포병변 72시간 후부터 나타나기 시작했지만 Ct value는 48시간부터 감소하기 시작하여 더 빠른 시간 내에 감염성을 평가할 수 있었다. 따라서, filtration과 integrated/cell culture real-time RT-PCR을 이용하면 기존의 검출방법보다 빠른 시간 내에 바이러스 검출이 가능할 것으로 여겨진다.
5)이 채소류에서 HRV를 탈리하는데 적합하였으며 또한 filtration을 이용한 농축법이 기존의 PEG 침전법에 비해 검출 시간을 줄일 수 있고 효율 또한 우수한 방법인 것을 확인하였다. 또한 ICC/real-time RT-PCR을 이용하여 세포배양법 보다 빠른 시간 내에 HRV의 감염성 평가가 가능하였다.
0049로 큰 유의차를 보였다. 또한 filtration 시행 시 필터를 1회 시행했을 때 보다 2회 시행했을 때 바이러스의 손실이 현저히 줄어들었으며(자료 미제시) filtration이 기존의 PEG 침전법에 비해서 시간이 적게 소요되었고 절차가 간단하여 효율적이었다(4). 본 연구와 유사한 연구로서 딸기와 양배추에서 hepatitis A virus (HAV)를 검출하기 위해 electropositive virosorb filters (Cuno Inc.
본 연구 결과 100 mM Tris-HCl, 50 mM glycine, 3% beef extract (pH 9.5)이 채소류에서 HRV를 탈리하는데 적합하였으며 또한 filtration을 이용한 농축법이 기존의 PEG 침전법에 비해 검출 시간을 줄일 수 있고 효율 또한 우수한 방법인 것을 확인하였다. 또한 ICC/real-time RT-PCR을 이용하여 세포배양법 보다 빠른 시간 내에 HRV의 감염성 평가가 가능하였다.
또한 filtration 시행 시 필터를 1회 시행했을 때 보다 2회 시행했을 때 바이러스의 손실이 현저히 줄어들었으며(자료 미제시) filtration이 기존의 PEG 침전법에 비해서 시간이 적게 소요되었고 절차가 간단하여 효율적이었다(4). 본 연구와 유사한 연구로서 딸기와 양배추에서 hepatitis A virus (HAV)를 검출하기 위해 electropositive virosorb filters (Cuno Inc., USA)와 immunomagnetic beads로 농축한 연구에서는 62%의 filter-captured HAV 중 34.8%가 탈리된다는 결과가 나타났다. 그리고 filer와 magnetic bead를 모두 사용했을 때에는 10 PFU 이하의 HAV가 검출되는 효과를 보였다(2).
두 번째로 식품의 다양성과 복잡성 때문에 직접 검출 및 동정하기 어려우며 식품 내에 바이러스가 균질하지 않게 분포되어 있다. 세 번째로 식품의 구성 성분이 바이러스 검출법을 방해하는 물질로 작용 가능하다. 이러한 문제점 외에도 바이러스는 저농도로도 질병을 유발 할 수 있기 때문에 민감하고 정확한 신속 검출법 개발이 필요한 상황이다(13).
바이러스성 식중독 사고를 예방하기 위해서는 식품에서의 바이러스 검출 및 모니터링이 중요하지만 다음과 같은 이유로 검출에 어려움을 겪고 있다. 첫 번째로 환자의 분변과는 달리 식품 내 존재하는 바이러스의 수가 매우 적어서 많은 양의 음식을 샘플로 채취해야 한다(3). 두 번째로 식품의 다양성과 복잡성 때문에 직접 검출 및 동정하기 어려우며 식품 내에 바이러스가 균질하지 않게 분포되어 있다.
또한 바이러스의 감염성 평가를 위하여 MA-104 cell을 배양하여 탈리, 농축 방법을 거쳐 회수된 HRV를 접종하고 1, 48, 72, 96, 120, 144, 168시간 후 세포를 수거하여 real-time RT-PCR을 시행하고 세포병변을 관찰하였다. 탈리 용액은 buffer A가 회수율 29.54%로 buffer B의 18.32%보다 더 뛰어난 탈리효과를 보였으며 농축방법을 비교했을 때 filtration 방법이 회수율 51.89%를 나타내며 PEG 침전법에 비해서 바이러스의 농축에 효과적이었으며 검출 소요시간이나 간단한 과정 면에서 효율적이었다. ICC/real-time RT-PCR을 시행하였을 때 세포병변 72시간 후부터 나타나기 시작했지만 Ct value는 48시간부터 감소하기 시작하여 더 빠른 시간 내에 감염성을 평가할 수 있었다.
이는 본 연구의 filtration의 회수율과 비교하였을 때 낮은 회수율이었지만 각 농축법에서 사용한 샘플, 탈리용액, 농축법의 final volume, RNA 추출방법 및 real-time PCR법이 다르기 때문에 추가적인 비교연구가 필요할 것으로 보인다. 하지만 농축에 필요한 시간을 비교하였을 경우, filtration은 탈리 시간을 제외하고 한 샘플당 약 20분 정도 소요되었으나 ultrafiltration은 30-60분 정도 소요되어 시간적인 면으로 효율적일 것으로 보이며 각 농축법에 필요한 기구의 경우 본 연구에서 사용한 filter는 syringe filter 형식으로 비용이 저렴하여 ultrafiltration에 사용된 Centricon Plus-70 centrifugal filter device (100K NMWL; Millipore, France) 보다 경제적일 것으로 여겨진다.

후속연구

2). 따라서 ICC/real-time RT-PCR을 이용하였을 경우 빠른 시간 내에 바이러스의 감염성을 평가 할 수 있을 것으로 보이며 이 방법은 세포병변이 잘 나타나지 않고 천천히 증식하는 HRV외 여러 바이러스의 감염성 평가에도 응용 가능 할 것으로 보인다.
Butot 등의 연구(4)에서는 농축방법으로 ultrafiltration과 PEG 침전법을 비교하였는데 ultrafiltration은 라즈베리에서 3%, 딸기에서 15%의 회수율을 보이면서 PEG 침전법 보다 높은 회수율을 나타냈다. 이는 본 연구의 filtration의 회수율과 비교하였을 때 낮은 회수율이었지만 각 농축법에서 사용한 샘플, 탈리용액, 농축법의 final volume, RNA 추출방법 및 real-time PCR법이 다르기 때문에 추가적인 비교연구가 필요할 것으로 보인다. 하지만 농축에 필요한 시간을 비교하였을 경우, filtration은 탈리 시간을 제외하고 한 샘플당 약 20분 정도 소요되었으나 ultrafiltration은 30-60분 정도 소요되어 시간적인 면으로 효율적일 것으로 보이며 각 농축법에 필요한 기구의 경우 본 연구에서 사용한 filter는 syringe filter 형식으로 비용이 저렴하여 ultrafiltration에 사용된 Centricon Plus-70 centrifugal filter device (100K NMWL; Millipore, France) 보다 경제적일 것으로 여겨진다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	Human rotavirus란 무엇인가?	Human rotavirus (HRV)는 개발도상국뿐 아니라 선진국에서도 영유아 급성 설사증의 가장 중요한 원인체로 인식되는 바이러스로서 전 세계적으로 영유아 급성 장관염의 30-50% 가량이 HRV에 의한 것이라고 보고되고 있다(21). 잠복기는 1-4일이며 주요 증상은 설사, 구토, 고열을 나타내고 특히 구토의 경우는 평균 2.
	전 세계적으로 영유아 급성 장관염의 30-50%가량이 무엇 때문에 발생하는가?	Human rotavirus (HRV)는 개발도상국뿐 아니라 선진국에서도 영유아 급성 설사증의 가장 중요한 원인체로 인식되는 바이러스로서 전 세계적으로 영유아 급성 장관염의 30-50% 가량이 HRV에 의한 것이라고 보고되고 있다(21). 잠복기는 1-4일이며 주요 증상은 설사, 구토, 고열을 나타내고 특히 구토의 경우는 평균 2.
	Human rotavirus에 감염되면 어떤 증상을 보이는가?	Human rotavirus (HRV)는 개발도상국뿐 아니라 선진국에서도 영유아 급성 설사증의 가장 중요한 원인체로 인식되는 바이러스로서 전 세계적으로 영유아 급성 장관염의 30-50% 가량이 HRV에 의한 것이라고 보고되고 있다(21). 잠복기는 1-4일이며 주요 증상은 설사, 구토, 고열을 나타내고 특히 구토의 경우는 평균 2.6일간 지속되어 다른 원인체에 비해 장시간 유지된다(13). 미국에서는 HRV로 인해 연간 7만명까지 입원하고 있으며 해마다 전세계적으로 5세 미만의 아이 중 약 44만명의 아이가 사망한다고 알려져 있다(16).

참고문헌 (22)

Bhattacharya, S.S., M. Kulka, K.A. Lampel, T.A. Cebula, and B.B. Goswami. 2004. Use of reverse transcription and PCR to discriminate between infectious and non-infectious hepatitis A virus. J. Virol. Methods 116, 181-187.

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Bidawid, S., J.M. Farber, and S.A. Sattar. 2000. Rapid concentration and detection of hepatitis A virus from lettuce and strawberries. J. Virol. Methods 88, 175-185.

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저자의 다른 논문 :

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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