[논문]녹차추출물이 인체 피지선세포주에서 지질 생성에 미치는 효과

박시준; 전병국; 김대성; 이강태; 문연자; 이건국; 우원홍

녹차추출물이 인체 피지선세포주에서 지질 생성에 미치는 효과
Effect of Green Tea Extract on Lipid Synthesis in Human Sebocyte Cell Line 원문보기

동의생리병리학회지 = Journal of physiology & pathology in Korean Medicine, v.25 no.4, 2011년, pp.608 - 613

박시준 (코리아나화장품 송파기술연구소) , 전병국 (원광대학교 한의학전문대학원 한약자원개발학과) , 김대성 (원광대학교 한의학전문대학원 한약자원개발학과) , 이강태 (코리아나화장품 송파기술연구소) , 문연자 (원광대학교 한의과대학) , 이건국 (코리아나화장품 송파기술연구소) , 우원홍 (원광대학교 한의학전문대학원 한약자원개발학과)

Abstract ▼ AI-Helper

The aqueous Green tea comes to be used with the Oriental medicine plant, it has the numerous health benefits, including antioxidant, anti-inflammatory, and anti- carcinogenic properties. Epidermal progenitor cells give rise to multiple skin lineages: hair follicle, sebaceous gland and the overlying interfollicular epidermis. Sebocytes are the cells of the sebaceous gland, which synthesize and accumulate lipid dropolets. In order to determine the effect of Green tea on lipid production, several experiments were performed in SZ95 cells (sebocytes). We found that Green tea increased lipid droplets compared with control in a dose-dependent manner. Human sebaceous glands produce sebum, a lipid mixture of squalene, wax esters, triglycerides, cholesterol esters, and free fatty acids that is secreted onto the skin. Therefore, to investigate the effects of Green tea on intracellular lipid levels, we treated SZ95 cells with Green tea, and then examined cholesterol and triglyceride levels. After treatment of the cells with Green tea, the cholesterol and triglyceride levels of SZ95 cells were increased significantly in a dose-dependent manner.

주제어

AI 본문요약
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문제 정의

본 연구는 sebaceous lipid 분비에 관련된 피부질환을 개선 하기 위한 한방소재 탐색의 일환으로 인체 피지선세포주에서 녹차 추출물이 sebaceous lipid 생성 및 구성성분에 미치는 효과를 조사하였다.
본 연구에서는 sebaceous lipid 분비에 관련된 피부질환을 개선하기 위한 한방소재 탐색의 일환으로 인체 피부기름샘(human sebaceous gland)에서 sebaceous lipid를 조절하고 피지 생합성 및 분비를 조절하는 기전을 규명하기 위하여 녹차 추출물의 효과를 조사한 결과 SZ95 세포의 세포내 지방소적이 증가함을 관찰하였다.
본 연구에서는 sebaceous lipid 분비에 관련된 피부질환을 개선하기 위한 한방소재 탐색의 일환으로 인체 피지선 세포의 특징을 지닌 SZ95 세포를 이용하여 녹차 추출물이 sebaceous lipid 생성에 미치는 영향을 조사하였다.

제안 방법

3차 증류수로 2회 세척한 후 Harris hematoxylin 염색하였다. Glass slide를 glycerin jelly로 봉입하여 현미경으로 SZ95 세포의 지방소적을 관찰하였다.
SZ95 세포를 10 cm dish에 1×105개씩 분주하고 시료를 처리하여 5일간 배양하였다.
SZ95 세포를 10 cm 배양용기에 1×10⁵개씩 분주하고 녹차 25 ㎍/㎖와 50 ㎍/㎖의 농도로 처리한 다음 5일 배양 후 cholesterol를 정량 하였다.
녹차가 SZ95 세포의 lipid 합성에 미치는 영향을 조사하기위해 세포내 지방소적(lipid droplets)의 변화를 관찰하였다. SZ95세포는 피지를 생성하여 분비하는 피지선세포주로서 본 실험에서 Oil red 염색 결과 세포내에 많은 지방소적이 관찰되었고(Fig.
5～50 ㎍/㎖ 농도구간에서 SZ95 세포의 독성을 나타내지 않았으며, SZ95 세포내 지방소적(lipid droplets)의 생성을 촉진하였다. 또한 SZ95 세포의 cholesterol 및 triglyceride의 생성을 촉진하였다.
24well plate에 SZ95 세포 2×10⁴개를 분주하여 24시간동안 배양한 후 녹차 추출물을 농도별로 처리한 다음 3일 배양하였다. 배양완료 후 0.05% MTT용액을 놓어 2시간동안 37℃에서 배양한다음 상층액을 제거하고 formazan 침전물에 1 ml의 DMSO를 넣어 약 15분간 실온에서 방치한후 540 nm의 파장에서 ELISA reder로 흡광도를 측정하여 세포생존율을 계산하였다.·
시료의 지질에 ethanol 300 μl를 넣어 녹인 후 total cholesterol kit(AM 202-K)를 이용하여 측정하였다.
시료의 지질에 ethanol 300 μl를 넣어 녹인 후 triglycerides kit(GPO-PAP)를 이용하여 측정하였다.
지질의 구성성분에 미치는 녹차의 효과를 분석하기 위하여 cholesterol의 변화를 조사하였다. SZ95 세포를 10 cm 배양용기에 1×10⁵개씩 분주하고 녹차 25 ㎍/㎖와 50 ㎍/㎖의 농도로 처리한 다음 5일 배양 후 cholesterol를 정량 하였다.
지질의 구성성분에 미치는 녹차의 효과를 분석하기 위하여 중성지방의 변화를 조사하였다. 대조군의 triglyceride은 2.

대상 데이터

SZ95 세포를 10 cm dish에 1×105개씩 분주하여 5일간 배양하였다.
69%)의 건조된 추출물을 얻어 시료로 사용하였다. 녹차 에탄올추출물 시료는 DMSO에 녹여 사용하였으며, DMSO는 최종 0.01% 이하의 농도 범위에서 사용하였다.
2)를 사용하여 진공펌프로 여과하였다. 녹차 추출물을 rotary evaporator로 감압 농축하여 17.38 g(수득율 : 8.69%)의 건조된 추출물을 얻어 시료로 사용하였다. 녹차 에탄올추출물 시료는 DMSO에 녹여 사용하였으며, DMSO는 최종 0.
본 실험에 사용된 녹차는 전남 보성 회천면 영천리에서 재배된 것을 사용하였다. 녹차 200 g에 에탄올 3 L를 가하여 실온에서 초음파 분쇄시킨 후 3일간 추출한 것을 거즈로 여과하고 여과지(No.
사람의 피지선세포주인 SZ95 세포는 독일 베를린자유대학의 대학의학센타 벤자민 프랭크린(The Free University of Berlin, University Medical Center Benjamin Franklin)의 Dr. Zouboulis 로부터 분양받은 human immortalized sebocytes(SZ95) 세포를 10% fetal bovine serum(FBS)가 첨가된 Dulbecco's modified eagle medium(DMEM)/F12(1:1)을 사용하여 CO2 incubator(37℃, 5%CO2)에서 배양하였다.

데이터처리

D로 표시하였다. 각 군 간의 통계적 유의성에 대한 검증은 one-way ANOVA test를 이용하여 p-value를 구하여 유의성을 검증하였다. P값이 0.

이론/모형

세포생존율 측정은 Mosmann의 방법¹⁶⁾에 의하여 실시하였다. 24well plate에 SZ95 세포 2×10⁴개를 분주하여 24시간동안 배양한 후 녹차 추출물을 농도별로 처리한 다음 3일 배양하였다.

성능/효과

SZ95 세포 증식에 미치는 녹차의 영향을 알아보기 위하여 세포생존율을 측정한 결과 50 ㎍/㎖에서 82.2 ± 6.6%로 약간 감소하였으나 25 ㎍/㎖에서는 93.1 ± 1.9%로 녹차는 SZ95 세포 증식에 거의 영향을 미치지 않는 것으로 나타났다(Fig. 1).
녹차가 SZ95 세포의 lipid 합성에 미치는 영향을 조사하기위해 세포내 지방소적(lipid droplets)의 변화를 관찰하였다. SZ95세포는 피지를 생성하여 분비하는 피지선세포주로서 본 실험에서 Oil red 염색 결과 세포내에 많은 지방소적이 관찰되었고(Fig. 2A), 녹차 25 ㎍/㎖와 50 ㎍/㎖처리군은 정상 SZ95 세포에 비해 농도에 비례하여 지방소적이 증가함을 관찰할 수 있었다(Fig. 2B와 C).
대조군의 cholesterol은 0.76 ± 0.02 ㎎/㎖이었으며, 녹차 25 ㎍/㎖와 50 ㎍/㎖ 농도에서는 각각 0.88 ± 0.02 ㎎/㎖, 1.14 ± 0.08 ㎎/㎖로 대조군에 비하여 cholesterol이 증가하였으며, 이는 지방소적의 증가와 같은 경향으로 나타났다(Fig. 3).
대조군의 triglyceride은 2.01 ±0.02 ㎎/㎖였으며, 녹차 25 ㎍/㎖와 50 ㎍/㎖ 농도에서 각각 2.37± 0.06 ㎎/㎖, 3.05 ± 0.06 ㎎/㎖로 대조군에 비하여 triglyceride 이 증가하였으며, 이는 지방소적 및 cholesterol의 증가와 같은 경향으로 나타났다(Fig. 4).
또한 피지의 성분분석에 대한 연구는 2004년 Thiboutot 등³¹⁾이 triglyceride, cholesterol 외에도 free fatty acid, wax esters, squalene등 많은 지질성분들이 인간의 피지를 구성한다고 하였다³²⁾. 따라서 본 실험에서 녹차가 피지선 세포의 지질합성에 미치는 영향을 조사한 결과 녹차 25와 50 ㎍/㎖ 농도에서 SZ95 세포의 cholesterol, triglyceride 합성을 촉진한 것으로 나타났다.
이상의 결과, sebaceous lipid 분비 조절은 장벽기능의 이상에 관련된 피부질환과 밀접한 관련이 있으며, 녹차 추출물은 세포독성이 없는 농도에서 SZ95 세포의 세포내 지질 합성을 촉진하였으며, cholesterol과 triglyceride의 합성을 촉진하였다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	피부장벽의 특징은?	피부장벽(skin barrier)은 몸의 표면으로부터 체액 증발에 의한 과다한 수분의 손실을 막고 외부로부터 유해물질(irritances, microorganism, allergens)의 침입을 방지하는 양방향으로 우리의 몸을 방어하고 있다. 피부의 적절한 수분 유지는 건강한 피부를 유지하기 위한 기본조건으로 피부 노화와도 밀접하게 관련되어 있으며, 피부의 보습은 천연보습인자(natural moisturizing factor), 각질세포간 지질과 피지의 세 가지 요소에 의해 유지되고 있다1).
	피부의 보습은 어떤 요소에 의해 유지되고 있는가?	피부장벽(skin barrier)은 몸의 표면으로부터 체액 증발에 의한 과다한 수분의 손실을 막고 외부로부터 유해물질(irritances, microorganism, allergens)의 침입을 방지하는 양방향으로 우리의 몸을 방어하고 있다. 피부의 적절한 수분 유지는 건강한 피부를 유지하기 위한 기본조건으로 피부 노화와도 밀접하게 관련되어 있으며, 피부의 보습은 천연보습인자(natural moisturizing factor), 각질세포간 지질과 피지의 세 가지 요소에 의해 유지되고 있다1).
	sebaceous lipid 분비에 관련된 피부질환을 개선하기 위한 한방소재 탐색의 일환으로 인체 피지선 세포의 특징을 지닌 SZ95 세포를 이용하여 녹차 추출물이 sebaceous lipid 생성에 미치는 영향을 조사한 결과 어떤 결론을 얻었는가?	녹차 추출물은 12.5～50 ㎍/㎖ 농도구간에서 SZ95 세포의 독성을 나타내지 않았으며, SZ95 세포내 지방소적(lipid droplets)의 생성을 촉진하였다. 또한 SZ95 세포의 cholesterol 및 triglyceride의 생성을 촉진하였다. 따라서 녹차 추출물은 피지선의 기능이 저하된 경우 이를 정상화시킬 수 있는 소재로 이용될 가능성이 높은 것으로 사료 된다.

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