본 연구에서는 fucoidan이 macrophage의 활성과 항암효과를 확인하기 위하여 수행되었다. Fucoidan을 Raw 264.7 세포에 처리한 후 MTT assay로 측정한 결과 고농도 $100{\mu}g/mL$까지 세포독성은 없었으며, NO 및 TNF-${\alpha}$의 분비를 농도 유의적으로 증가시켰다. 또한 AGS 위암 세포 성장저해효과를 확인하기 위하여 MTT assay를 하였고 그 결과 농도와 시간 의존적으로 암 세포 성장이 유의적으로 감소하였다. Apoptosis로 인해 암 세포 성장이 감소하였는지 확인하기 위하여 DAPI 염색을 한 결과 apoptotic body와 세포질 응축이 시간 의존적으로 증가하는 것을 확인하였다. 또한 fucoidan은 미토콘드리아의 투과율을 향상시키며 미토콘드리아에서 방출되는 cytochrome c의 발현을 증가시켰다. Western blotting의 결과 시간 의존적으로 anti-apoptotic 분자인 Bcl-2와 XIAP 발현 감소와 반대로 pro-apoptotic 분자인 Bax 발현이 증가하였다. Cleaved-caspase-9의 발현이 증가하였으며 Akt의 인산화는 시간 의존적으로 감소하였다. Caspase 억제제인 z-VAD-FMK 처리 시 Bax, caspase-9의 발현을 감소시켜 apoptosis 유도를 억제하였으며 이러한 결과는 caspase가 apoptosis 유도에 중요한 역할을 하는 것으로 나타낸다. 본 실험의 AGS 위암 세포주에서 대조군에 비하여 fucoidan 처리군에서 면역세포 활성 및 AGS 위암 세포주에서 caspase 활성을 통해 apoptosis를 유도하는 것으로 사료된다.
본 연구에서는 fucoidan이 macrophage의 활성과 항암효과를 확인하기 위하여 수행되었다. Fucoidan을 Raw 264.7 세포에 처리한 후 MTT assay로 측정한 결과 고농도 $100{\mu}g/mL$까지 세포독성은 없었으며, NO 및 TNF-${\alpha}$의 분비를 농도 유의적으로 증가시켰다. 또한 AGS 위암 세포 성장저해효과를 확인하기 위하여 MTT assay를 하였고 그 결과 농도와 시간 의존적으로 암 세포 성장이 유의적으로 감소하였다. Apoptosis로 인해 암 세포 성장이 감소하였는지 확인하기 위하여 DAPI 염색을 한 결과 apoptotic body와 세포질 응축이 시간 의존적으로 증가하는 것을 확인하였다. 또한 fucoidan은 미토콘드리아의 투과율을 향상시키며 미토콘드리아에서 방출되는 cytochrome c의 발현을 증가시켰다. Western blotting의 결과 시간 의존적으로 anti-apoptotic 분자인 Bcl-2와 XIAP 발현 감소와 반대로 pro-apoptotic 분자인 Bax 발현이 증가하였다. Cleaved-caspase-9의 발현이 증가하였으며 Akt의 인산화는 시간 의존적으로 감소하였다. Caspase 억제제인 z-VAD-FMK 처리 시 Bax, caspase-9의 발현을 감소시켜 apoptosis 유도를 억제하였으며 이러한 결과는 caspase가 apoptosis 유도에 중요한 역할을 하는 것으로 나타낸다. 본 실험의 AGS 위암 세포주에서 대조군에 비하여 fucoidan 처리군에서 면역세포 활성 및 AGS 위암 세포주에서 caspase 활성을 통해 apoptosis를 유도하는 것으로 사료된다.
This study was designed to investigate the effect of fucoidan on the activation of macrophage and on induction of apoptosis in AGS cell. To measure the activity of macrophages, NO and TNF-${\alpha}$ assays were performed in Raw 264.7 cell. Treatment with fucoidan significantly increased p...
This study was designed to investigate the effect of fucoidan on the activation of macrophage and on induction of apoptosis in AGS cell. To measure the activity of macrophages, NO and TNF-${\alpha}$ assays were performed in Raw 264.7 cell. Treatment with fucoidan significantly increased production of NO and TNF-${\alpha}$, indicating activation of macrophages. The result of MTT assay shows that cell viability was significantly decreased in a dose and time-dependent manner. Fucoidan increased to enhance mitochondrial membrane permeability, as well as the cytochrome c release from the mitochondria. Fucoidan decreased Bcl-2 and XIAP expression, whereas the expression of Bax was increased in a time-dependent manner compared to the control. In addition, the active forms of caspase-9 were increased, and the inactivation of Akt was decreased in a time-dependent manner. Caspase inhibitor, z-VAD-FMK, canceled the apoptosis of fucoidan, expression of Bax and caspase-9 were decrease. These results indicate that fucoidan induces activation of macrophage and apoptosis through activation of caspase on AGS cell.
This study was designed to investigate the effect of fucoidan on the activation of macrophage and on induction of apoptosis in AGS cell. To measure the activity of macrophages, NO and TNF-${\alpha}$ assays were performed in Raw 264.7 cell. Treatment with fucoidan significantly increased production of NO and TNF-${\alpha}$, indicating activation of macrophages. The result of MTT assay shows that cell viability was significantly decreased in a dose and time-dependent manner. Fucoidan increased to enhance mitochondrial membrane permeability, as well as the cytochrome c release from the mitochondria. Fucoidan decreased Bcl-2 and XIAP expression, whereas the expression of Bax was increased in a time-dependent manner compared to the control. In addition, the active forms of caspase-9 were increased, and the inactivation of Akt was decreased in a time-dependent manner. Caspase inhibitor, z-VAD-FMK, canceled the apoptosis of fucoidan, expression of Bax and caspase-9 were decrease. These results indicate that fucoidan induces activation of macrophage and apoptosis through activation of caspase on AGS cell.
* AI 자동 식별 결과로 적합하지 않은 문장이 있을 수 있으니, 이용에 유의하시기 바랍니다.
문제 정의
Fucoidan에 의한 대식세포의 TNF-α의 분비에 어떠한 영향을 미치는지 확인해 보았다(Fig. 2B).
. Macrophage에 세포독성이 일어나지 않는 fucoidan 농도에서 NO의 분비의 발현이 어떻게 변화하는지 확인해 보았다. Hang 등34)에 의하면 fucoidan을 1, 5, 10, 50 µg/mL의 농도로 처리한 결과 농도 유의적인 증가를 확인하였다.
본 연구는 인간에서 유래한 위암 세포인 AGS를 사용하여 fucoidan이 면역세포의 활성화 및 위암 세포 성장억제와 세포 내 작용으로 apoptosis를 유도하는지 확인하였다.
제안 방법
AGS 세포주에 fucoidan을 처리하였을 때 caspase에 의하여 apoptosis를 유도를 확인하기 위하여 caspase inhibitor인 z-VAD-FMK을 처리하였다. Kim 등29)에 의하면 대장암 세포에 caspase inhibitor와 fucoidan을 병용 처리 하였을 때 대장암세포의 성장억제를 차단하였으며, 또한 fucoidan에 의해 증가된 cleaved caspase-9, -3와 t-Bid, cleaved PARP의 발현을 caspase inhibitor 선 처리에 의하여 감소되었다.
Apoptosis는 annexin V staining kit (Becton Dickinsin, Franklin Lakes, NJ, USA)를 이용해 측정하였다. AGS 위암 세포주를 75-cm2 flask에 배양하여 fucoidan을 0, 25, 100 µg/mL 처리한 후 24시간이 지난 뒤 trypsin-EDTA를 이용하여 세포를 부유상태로 만들어 세포를 원심 분리하여 pellet을 얻었다.
Caspase의 저해제인 z-VAD-FMK와 병행 처리시에는 z-VAD-FMK를 2시간 먼저 처리하고 fucoidan을 50 µg/mL 의 농도로 24시간 처리하였다.
차가운 PBS로 두 번 세척 후 원심 분리하여 cell pellet을 얻은 후 1X binding buffer을 이용하여 AGS 세포를 1 × 106 cells/mL로 만들었다. Fluorescein isothiocyanate (FICT)-conjugated annexin V와 phycoerythrin (PE)-conjugated propidium iodide을 첨가하여 15분간 반응시킨 후 유세포 분석을 통해 측정하였다.
Fucoidan 12.5 µg/mL의 농도는 AGS 위암 세포의 성장억제 효과를 나타냈으며 본 연구에서는 50 µg/mL fucoidan의 농도를 사용하였다.
Fucoidan의 안전성을 평가하기 위하여 WB 정상 간 세포주에 fucoidan을 6.25, 12.5, 25, 50, 100 µg/mL의 농도로 24시간과 48시간 동안 처리하였다.
Fucoidan이 AGS 위암 세포주에 apoptosis를 유도하는지를 알아보기 위해 DAPI 염색을 통하여 확인하였다(Fig. 4A). AGS 위암 세포에 fucoidan을 50 µg/mL의 농도로 24시간과 48시간 동안 처리하였다.
Fucoidan이 AGS 위암 세포주의 성장에 영향을 주는지 확인하기 위해 MTT assay를 시행하였다. Fucoidan은 Aisa 등8), Hyun 등9), Nagamine 등10), Yamasaki-Miyamoto 등11)에서 암세포의 증식 억제가 입증되고 있다.
Membrane은 5% skim milk-TBST (20 mM Tris·HCl, pH 7.5, 150 mM NaCl, 0.1% Tween 20)에서 1시간 동안 blocking하고, antiBax(1:1000 희석), anti-Bcl-2(1:1000 희석), anti-caspase-9(1:1000 희석), anti-cytochrme c(1:1000 희석), anti-XIAP(1:1000 희석), anti-Akt(1:1000 희석), anti-p-Akt(1:1000 희석), anti-β-actin(1:1000 희석) 등 측정하고자 하는 antibody(Cell signaling Technology, Danvers, MA, USA)를 각각 첨가하여 4℃에서 overnight을 하였다.
Raw 264.7 macrophage 세포주, AGS 위암 세포주와 WB 정상 간 세포주를 96 well plate에 각각 5 × 104 , 2 × 104 , 1 × 105 cells/mL로 분주한 후, 24시간 동안 배양시킨 다음 세포주에 fucoidan을 6.25 µg/mL, 12.5 µg/mL, 25 µg/mL, 50µg/mL, 100 µg/mL 의 농도로 24시간과 48시간 처리하였다.
5% H3PO4)를 넣고 10분간 실온에서 방치한 후 ELISA-reader (Bio-Rad Laboratories Inc, USA)를 사용하여 540 nm에서 흡광도를 측정하였다. Sodium nitrite 검량선으로부터 세포가 분비하는 nitric oxide를 계산하였다.
각 well에 assay buffer 200 µL씩 세척한 후 JC1 stain을 20 µL 첨가하여 15분 동안 37℃에서 배양하고, 이후 상층액을 제거한 후 assay buffer 200 µL씩 세척한 후 암실에서 형광현미경으로 관찰하였다.
각 protein band는 SuperSignal West Dura Extended Duration Substrate (Pierce)을 사용하여 enhanced chemiluminescence 방법으로 가시화하였다29,30). 각 밴드는 imaging program인 Image J Launcher (provided by NCBI)를 이용하여 밀도를 측정하였다.
또한 fucoidan이 AGS 위암 세포의 미토콘드리아에 탈분극을 유발시키는지 확인하기 위해 50 µg/mL 로 24시간 처리 후 JC-1 stain으로 미토콘드리아의 막 전위를 확인하였다(Fig. 5B).
마우스 대식세포주인 Raw 264.7 세포에 fucoidan을 6.25µg/mL, 12.5 µg/mL, 25 µg/mL, 50 µg/mL, 100 µg/mL의 농도로 24시간 동안 처리하였다.
본 연구에서 AGS 위암 세포주를 seeding 후 24시간 동안 배양시킨 다음 fucoidan을 6.25, 12.5, 25, 50, 100 µg/mL의 농도로 24시간과 48시간 동안 처리하였다.
7, AGS, WB 세포주를 사용하였다. 이들 세포주의 세포배양액은 DMEM, RPMI (Hyclone Laboratoris Inc., Logan, UT, USA)에 10% fetal bovine serum, 1% streptomycin/penicillin (Gibco BRL, Grand Island, NY, USA)를 첨가하여 사용하였다. 이들 세포주는 37℃, 5% CO2 배양기에서 배양하였다.
cells/mL로 분주한 후, 24시간 동안 배양시킨 다음 세포주에 fucoidan을 0 µg/mL, 50 µg/mL의 농도로 24시간 처리하였다. 이후 미토콘드리아 전압을 측정하기 위해 JC-1 mitochondrial membrane potential assay kit (cayman, Denver, USA)를 사용하였다. 각 well에 assay buffer 200 µL씩 세척한 후 JC1 stain을 20 µL 첨가하여 15분 동안 37℃에서 배양하고, 이후 상층액을 제거한 후 assay buffer 200 µL씩 세척한 후 암실에서 형광현미경으로 관찰하였다.
PBS로 다시 세척 후 PBS로 10배 희석한 DAPI stain 용액을 500 µL/well 처리하였다. 처리 후 암실에서 형광현미경으로 관찰하였다.
해조류를 통해서도 이러한 암을 면역력을 증진시켜 예방하고 감소시키는 효과를 기대할 수 있는데 우리나라는 오랜 시간 해조류를 섭취해왔으며 항균 및 항암효과 등이 밝혀지면서, 근래에 들어서 항암 및 각종 건강 기능성 식품으로서 활용도가 증가하고 있다. 본 연구에 사용된 fucoidan은 대표적으로 다시마, 미역에 함유되어 있고 건물중량으로 3~4% 정도 존재한다. Fucoidan은 분자량이 20만 달톤을 넘는 고분자 물질로 황산기를 가진 산성의 수용성 다당류로서 끈적끈적한 점질 구조로 구성되어있다.
본 연구에서는 한국세포주은행(KCLB, Seoul, Korea)에서 분양받은 Raw 264.7, AGS, WB 세포주를 사용하였다. 이들 세포주의 세포배양액은 DMEM, RPMI (Hyclone Laboratoris Inc.
이들 세포주는 37℃, 5% CO2 배양기에서 배양하였다. 시험물질은 Sigma (St Louis, MO, USA)사로부터 구입한 fucoidan을 본 시험에 사용하였다. 본 연구에 사용한 일반적인 시약은 Sigma Chemical Co.
데이터처리
Data are mean standard deviation (SD) for three samples. The significance was determined by Student’s ttest (*P < 0.05 compared with untreated control). (B) Cell were pretreated with caspase inhibitors (40 µM) for 2h and treated with 50 µg/mL fucoidan or vehicle in RPMI-1640 medium containing 5% FBS for 24h.
Data are mean standard deviation (SD) for three samples. The significance was determined by Student’s ttest (*P < 0.05 compared with untreated control). (B) Cell were pretreated with caspase inhibitors (40 µM) for 2h and treated with 50 µg/mL fucoidan or vehicle in RPMI-1640 medium containing 5% FBS for 24h.
모든 실험결과는 평균치와 표준오차를 사용하여 나타내고 각 군간 비교는 one-way ANOVA에 이은 t-test 분석을 실시하였다. 대조군과 비교하여 P값이 0.
이론/모형
Whole cell lysate (30 µg), Cytosol cell lysate(60 µg)을 웨스턴 블로팅에 사용하였다. Cell lysate의 단백질 농도는 Bradford assay를 사용하여 측정하였다. Cell lysate를 12% sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE)로 분리한 후 nitrocellulose membranes (Bio-Rad Laboratories)에 이동시켰다.
Fucoidan에 의한 면역세포 독성능이 미치지 않는 농도를 찾기 위하여 MTT assay를 사용하여 측정하였다(Fig. 1). 마우스 대식세포주인 Raw 264.
Fucoidan을 50 µg/mL 농도로 시간대 별로 처리했을 때 세포 내 신호경로를 알아보기 위해 western blotting을 실시하였다.
Fucoidan이 Akt의 인산화를 억제시키는 지 확인하기 위해 western blotting을 실시하였다. PI3K/Akt 신호경로는 세포의 증식이나 분화에 관여하는 것으로 알려져 있으며, 여러 암종에서 Akt가 과활성화 되는 것으로 밝혀져 있다44).
NO assay는 CAYMAN (Denver, CO, USA)의 NO kit를 사용하였다. Raw 264.
TNF-α assay는 Invitrogen (Carlsbad, CA, USA)의 TNFα kit를 사용하였다.
그 후 goat anti-mouse Ig G 또는 anti-rabbit Ig G를 첨가하여 1시간 반응시켰다. 각 protein band는 SuperSignal West Dura Extended Duration Substrate (Pierce)을 사용하여 enhanced chemiluminescence 방법으로 가시화하였다29,30). 각 밴드는 imaging program인 Image J Launcher (provided by NCBI)를 이용하여 밀도를 측정하였다.
4B). 따라서 fucoidan은 AGS 위암 세포에서 apoptosis를 유발시키는 것으로 사료되며, 이에 따라 apoptosis에 관련된 단백질을 western blotting을 통해서 알아보았다.
성능/효과
대조군 보다 50 µg/mL 농도로 처리하였을 때 높은 막 전위(intact mitochondria)를 유지하고 있는 붉은색 파장의 형광이 감소하고, 낮은 막전위(damaged mitochondria)를 가진 초록색 파장의 형광이 증가하였다. Fucoidan을 24시간 처리하였을 때 cytochrome c (cytosol)가 대조군 보다 발현이 증가 한 것을 확인하였다(Fig. 5C). 이 결과 fucoidan을 위암 세포에 처리하였을 때 일어나는 apoptosis가 미토콘드리아 내의 탈분극으로 cytochrome c가 세포질로 방출되고 결과적으로 cleaved caspase-9을 활성화시킨다고 사료된다.
Fucoidan이 macrophage인 Raw 264.7 세포를 활성화시켜 암세포 파괴 등을 매개할 수 있는 NO 및 TNF-α의 사이토카인 분비를 통해 면역 활성을 유도하여 암세포 성장 억제를 촉진하는 것으로 사료된다.
대조군 보다 50 µg/mL 농도로 처리하였을 때 높은 막 전위(intact mitochondria)를 유지하고 있는 붉은색 파장의 형광이 감소하고, 낮은 막전위(damaged mitochondria)를 가진 초록색 파장의 형광이 증가하였다.
5, 25, 50, 100 µg/mL의 농도로 24시간과 48시간 동안 처리하였다. 대조군에 비해 부유하는 세포나 세포의 형태가 변형된 세포는 보이지 않았으며 또한 농도, 시간 의존적으로 유의적인 감소를 보이지 않았다(Fig. 3B). MTT assay 결과 macrophage와 정상 간 세포에서 최대 100 µg/mL의 fucoidan에서 독성이 나타나지 않았다.
대조군은 지속적으로 세포성장이 일어나는데 비해 fucoidan 24시간과 48시간 처리군 에서는 12.5 µg/mL에서부터 농도, 시간 의존적으로 세포의 성장이 지연되며 부유하는 세포들이 증가하며 유의적으로 세포가 감소하였다(Fig. 3A).
7A를 보면 fucoidan을 24시간 처리하였을 때 위암 세포의 성장이 감소하였고 caspase inhibitor와 병용 처리하였을 때는 caspase inhibitor에 의해 위암 세포의 성장억제를 차단하였다. 동일한 조건에서 caspase inhibitor가 caspase-9 발현에 어떠한 영향을 미치는지 알아보기 위하여 western blotting으로 측정해 본 결과, fucoidan에 의해 발현이 증가된 bax, cleaved caspase-9이 z-VAD-FMK를 병용 처리 하였을 때 발현이 감소하였다(Fig. 7B). 본 실험 결과 fucoidan에 의해 유발되는 apoptosis는 caspase가 중요한 역할을 하는 것으로 사료된다.
또한 annexin V/propodium iodide staining을 이용하여 fucoidan을 25, 50 µg/mL의 농도로 처리하고 24시간 뒤 apoptosis가 일어난 세포를 측정한 결과, fucoidan 처리 농도에서 각각 15.88%, 16.04%, 25.66%의 apoptotic cell이 관찰되었으며 농도 의존적으로 증가하였다(Fig. 4B).
7B). 본 실험 결과 fucoidan에 의해 유발되는 apoptosis는 caspase가 중요한 역할을 하는 것으로 사료된다.
AGS 위암 세포에 fucoidan을 50 µg/mL의 농도로 24시간과 48시간 동안 처리하였다. 시간 의존적으로 세포의 성장이 감소한 것과 동일하게 DAPI 염색에서도 시간 의존적으로 apoptotic body와 chromatin 응축이 유의적으로 증가되었다. 이는 nucleosome의 linker DNA 부분의 절단에 의한 DNA 단편화의 결과39)이므로 fucoidan 처리에 의한 암세포의 성장 억제는 apoptosis 유발과 밀접한 관련이 있음을 알 수 있다.
5C). 이 결과 fucoidan을 위암 세포에 처리하였을 때 일어나는 apoptosis가 미토콘드리아 내의 탈분극으로 cytochrome c가 세포질로 방출되고 결과적으로 cleaved caspase-9을 활성화시킨다고 사료된다.
질의응답
핵심어
질문
논문에서 추출한 답변
위암의 가장 중요한 발암 요인 중 하나로 지목된 것은 무엇인가?
위암은 한국인에게 발생빈도가 가장 높은 암이며 불규칙한 식습관 및 식이가 가장 중요한 발암 요인 중 하나라고 알려져 있다. 특히 식이로 인한 위궤양과 위암 발병도 관련 있음을 보고하고 있다1).
Caspase-8의 역할은 무엇인가?
세포 외 신호 Fas-associated death domain (FADD)이 결합함으로써 caspase-8을 활성화시켜 apoptosis 신호를 개시하는 것으로 알려져 있다20,21). Caspase-8은 caspase-3, -6, -7 등의 말단 효능 caspase들을 직접 활성화시키거나22) Bax를 활성화시켜 미토콘드리아로부터 cytochrome c를 분비시킴으로써 caspase들을 활성화시키기도 한다23). 세포 내 신호는 미토콘드리아에서 분비된 cytochrome c가 caspase-9를 활성화시키고 활성화된 caspase-9는 caspase-3를 활성화시켜 apoptosis를 일으킨다24).
Fucoidan의 주성분은 무엇인가?
Fucoidan은 분자량이 20만 달톤을 넘는 고분자 물질로 황산기를 가진 산성의 수용성 다당류로서 끈적끈적한 점질 구조로 구성되어있다. L-foucose에 에스테르화 황산을 주성분으로 하여 소량의 galactose, xylose, glucuronic acid 등을 함유하는 복합황산화 다당류이며, 점성이 낮고 용해성이 우수한 특징을 갖는다5). Fucoidan은 heparin의 대체물질로서 항혈액응고작용, 항트롬빈 작용을 가지며6,7), 사람 림프종암세포8), 대장암세포9), 간암세포10), 유방암세포11)에서 암세포의 증식을 억제하고 apoptosis를 유도하여 항암효과가 있다고 입증되고 있다.
참고문헌 (45)
Risch, H.A., Jain, M., Choi, N.W., Fodor, J.G., Pfeiffer, C.J., Howe, G.R., Harrison, L.W., Craib, K.J. and Miller, A.B. : Dietary factors and the incidence of cancer of the stomach. Am. J. Epidemiol, 122, 947-959 (1985).
Lee, K.H., Kown, H.J., Chun, S.S., Kim, J.H., Cho, Y.J. and Cha, W.S. : Biological activities of extracts from phellinus linteus. J. Korean. Soc. Appl. Biol. Chem, 49, 298-303 (2006).
Kim, S.W. and Kim, E.S. : Studies on the immunomodulating effect of polysaccharide extracted from Ganoderma lucidum on machrophage. J. Korean. Soc. Food. Sci. Nutr, 26, 148-153 (1997).
Lee, M.K., Choi, G.P., Ryu, L.H., Lee, G.Y., Yu, C.Y. and Lee, H.Y. : Enhanced immune activity and cytotoxicity of Artemisia capillaris Thub. extracts against human cell lines. Korean. J. Med. Crop. Sci, 12, 36-42 (2004).
Schaeffer, D.J. and Krylov, V.S. : Anti-HIV activity of extracts and compounds from algae and cyanobacteria, Ecotoxicol. Environ. Saf, 45, 208-227 (2000).
Dobashi, K., Nishino, T., Fujihara, M., and Nagumo, T. : Isolation and preliminary characterization of fucose-containing sulfated polysaccharides with blood -anticoagulant activity from the brown seaweed Hizikia fusiforme. Carbohydr. Res, 194, 315-320 (1989).
Nishino, T., Nishioka, C., Ura, H. and Nagumo, T. : Isolation and partial characterization of a novel amino sugar-containing fucan vesiculosus fucoidan. Carbohydr. Res, 255, 213-214 (1994).
Aisa, Y., Miyakawa, Y., Nakazato, T., Shibata, H., Saito, K., Ikeda, Y. and Kizaki, M. : Fucoidan induces apoptosis of human HS-sultan cells accompanied by activation of caspase-3 and down-regulation of ERK pathways. Am. J. Hematol, 78, 7-14 (2005).
Nagamine, T., Hayakawa, K., Kusakabe, T., Takada, H., Nakazato, K., Hisanaga, E. and Iha, M. : Inhibitory effect of fucoidan on Huh 7 hepatoma cells through down-regulation of CXCL12. Nutr. Cancer, 61, 340-347 (2009).
Yamasaki-Miyamoto, Y., Yamasaki, M., Tachibana, Ha. and Yamada, K. : Fucoidan induces apoptosis through activation of caspase-8 on human breast cancer MCF-7 cells. J. Agric. Food. Chem, 57, 8677-8682 (2009).
Maruyama, H., Tamauchi, H., Iizuka, Ma. and Nakano, T. : The role of NK cells in antitumor activity of dietary fucoidan from Undaria pinnatifida sporophylls. Planta. Med, 72, 1415-1417 (2006).
Hamsa, T.P. and Kuttan, G. : Evalution of the anti-inflammatory and anti-tumor effect of ipomoea obscura(L) and its mode of action through the inhibition of proinflammatory cytokines, nitric oxide and COX-2. Inflammation, 34, 171-183 (2011).
Kang, N.S. and Sohn, E.H. : Immunomodulatory effects of fructus and semen from Rosa rugosa on macrophages. J. Korean. Plant. Res, 23, 399-405 (2010).
Zhang, L., Zhu, Y., Lun, D., Yu, B. and Zhu, X. : Proteomic analysis of macrophages: a potential way to identify novel proteins associated with activation of macrophages for tumor cell killing. Cell. Mol. Immunol, 4, 359-367 (2007).
Bodmer, J.L., Holler, N., Reynard, S., Vinciguerra, P., Schneider, P., Juo, P., Blenis, J. and Tschopp, J. : TRAIL receptor-2 signals apoptosis through FADD and caspase-8. Nat. Cell. Biol, 2, 241-243 (2000).
Kischkel, F.C., Lawrence, D.A., Chuntharapai, A., Schow, P., Kim, K.J. and Ashkenazi, A. : Apo2L/TRAIL-dependent recruitment of endogenous FADD and caspase-8 to death receptors 4 and 5. Immunity, 12, 611-620 (2000).
Li, H., Zhu, H., Xu, C.J. and Yuan, J. : Cleavage of BID by caspase 8 mediates the mitochondrial damage in the Fas pathway of apoptosis. Cell, 94, 491-501 (1998).
Hockenbery, D., Nunez, G., Milliman, C., Schreiber, R.D. and Korsmeyer, S.J. : Bcl-2 is an inner mitochondrial membrane protein that blocks programmed cell death. Nature, 348, 334-336 (1990)
Kim, E.J., Park, S.Y., Lee, J.Y. and Park, J.H. : Fucoidan present in brown algae induces apoptosis of human colon cancer cells. BMC. Gastroenterol, 10, 96-107 (2010)
Jung, J.I., Lim, S.S., Choi, H.J., Cho, H.J., Shin, H.K., Kim, E.J., Chung, W.Y., Park, K.K. and Park, J.H. : Iosliquiritigenin induces apoptosis by depolarizing mitochondrial membranes in prostate cancer cells. J. Nutr. Biochem, 17, 689-696 (2006).
Palmer, R.M., Ferrige, A.G. and Moncada, S. : Nitric oxide release accounts for the biological activity of endotheliumderived relaxing factor. Nature, 327, 524-526 (1987)
Yang, W.W. and Krukoff, T.L. : Nitric oxide regulates body temperature, neuronal activation and interleukin-1 ${\beta}$ gene expression in the hypothalamic paraventricular nucleus in response to immune stress. Neuropharmacology, 39, 2075-2089 (2000).
Hang, D., Choi, H.S., Kang, S.C., Kim, K.R., Sohn, E.S., Kim, M.H., Pyo, S. and Son, E. : Effects of fucoidan on NO production and phagocytosis of macrophages and the proliferation of neuron cells. J. Food. Sci. Nutr, 10, 344-348 (2005).
Vishvakarma, N.K. and Slingh, S.M. : Immunopotentiating effect of proton pump inhibitor pantoprazole in a lymphoma-bearing murine host: Implication in antitumor activation of tumorassociated macrophages. Immunol. Lett, 134, 823-92 (2010).
Donovan, M. and Cotter, T.G. : Control of mitochondrial integrity by Bcl-2 family members and caspase-independent cell death. Biochim. Biophys. Acta, 1644, 133-147 (2004).
Rosse, T., Olivier, R., Monney, L., Rager, M., Conus, S., Fellay, I., Jansen, B. and Bomer, C. : Bcl-2 prolongs cell survival after Bax-induced release of cytochrome c. Nature, 391, 496-499 (1998).
Li, P., Nijhawan, D., Budihardjo, I., Srinivasula, S.M., Ahmad, M., Alnemri, E.S. and Wang, X. : Cytochrome c and ATPdependent formation of Apaf-1/caspase-9 complex initiates an apoptotic protease cascade. Cell, 91, 479-489 (1997).
Du, C., Fang, M., Li, Y., Li, L. and Wang, X. : Smac, a mitochondrial protein that promotes cytochrom c-dependent caspase activation by eliminating IAP inhibition. Cell, 102, 33-42 (2002).
Yoeli-Lemer, M., Yiu, G.K., Rabinovitz, I., Erhardt, P., Jauliac, S. and Toker, A. : Akt blocks breast cancer cell motility and invasion through the transcription factor NFAT. Mol. Cell, 20, 539-550 (2005).
Okoshi, R.T., Ozaki, H., Yamamoto, K., Ando, N., Koida, S., Ono, T., Koda, T., Kamijo, A., Nakagawara, A. and Kizaki, H.: Activation of AMP-activated protein kinase induces p53-dependent apoptotic cell death in response to energetic stress. J. Biol. Chem, 283, 3979-3987 (2008).
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.