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제안 방법
- 5개 농도의 kirenol 표준액 20 µl를 injection하여 현 HPLC법에서 LOD(limit of detection)와 LOQ(limit of quantification)를 각각 구하였다.
- 00 µg/ml 범위에서 제조하였다. HPLC실험에서 얻은 피크 면적(y 축)과 각 농도(x 축) 사이에서 plotting하여 직선성을 평가하였다. 5개 농도의 kirenol 표준액 20 µl를 injection하여 현 HPLC법에서 LOD(limit of detection)와 LOQ(limit of quantification)를 각각 구하였다.
- 5개 농도의 kirenol 표준액 20 µl를 injection하여 현 HPLC법에서 LOD(limit of detection)와 LOQ(limit of quantification)를 각각 구하였다. LOD와 LOQ의 결정은 signal-to-noise를 각각 3반복 및 10반복에 의해 구하였다.
- Siegesbeckia속 식물에서 항염 활성물질로 알려진 siegeskaurolic acid를 이용하여 그 함량을 분석코자 하였다. 그러나 이 화합물은 본 실험법에 의한 kirenol의 검출조건에선 검출되지 않았다.
- O (70:30)을 사용하였다. TLC 전개한 후 이를 자외선(254 nm)에 의한 관찰 및 50%-H2SO4 분무 후 가열에 의한 발색으로 관찰하였다. 관찰된 반점 색상과 Rf치를 기록하였다.
- TLC 전개한 후 이를 자외선(254 nm)에 의한 관찰 및 50%-H2SO4 분무 후 가열에 의한 발색으로 관찰하였다. 관찰된 반점 색상과 Rf치를 기록하였다.
- 그러나 이 화합물은 본 실험법에 의한 kirenol의 검출조건에선 검출되지 않았다. 그러므로 세 식물재료에서 kirenol과 siegeskaurolic acid의 존재유무를 확인하기 위하여 역상의 정지상으로 된 TLC를 이용하여 전개하고 50%-H2SO4로 분무한 뒤 가열하여 발색시켰다. Kirenol은 세 식물재료에서 모두 나타났으나(갈색 반점, Rf 0.
- 그리고, 1H-NMR, 13C-NMR spectrum을 측정하여 문헌치와2) 비교하여 kirenol임을 확인한 후 이를 분석실험에 사용하였다. 1H-NMR, 13C-NMR spectral data의 assignment의 결과를 Table I에 나타내었다.
- 본 연구에서는 털진득찰에서 다량으로 얻은 kirenol(ent3α,7β,15,16 tetrahydroxypimar-8(14)-ene)과 이미 본 실험실에 보유중인 siegeskauroic acid(ent-16αH,17-hydroxy-kauran19-oic acid)를 표준품으로 하여 진득찰, 털진득찰 및 중국산 희첨의 함량분석을 위해 HPLC-UV 법으로 수행하였다.
- 2 g이 얻어졌다. 이를 분획깔때기를 이용하여 CHCl3와 H2O 사이에서 3회 반복하여 분획하였다. H2O 층에 BuOH을 가하여 역시 3회 반복하여 분획하였고, BuOH 층을 농축하여 BuOH 분획물 8.
- 화합물 1의 1H-NMR 및 13CNMR spectral data의 assignment 결과를 Table I에 나타내었다. 이를 지표 화합물로 이용하여 정량분석 조건을 검토하였다. 재료 및 방법 항에 나타낸 바와 같은 이동상 용매의 조건과 UV 검출기의 고정된 파장 205 nm에서 HPLC 분석을 수행하였을 때 Fig.
- 이상과 같은 조건을 마련하여 진득찰과 털진득찰의 메탄올 추출물로부터 kirenol의 성분함량을 결정하고자 HPLC chromatogram에서 피크면적으로부터 산출하였다. 그 결과 Table III에 나타내었듯이 메탄올 추출물 중 kirenol 함량은 진득찰이 141.
- 이를 지표 화합물로 이용하여 정량분석 조건을 검토하였다. 재료 및 방법 항에 나타낸 바와 같은 이동상 용매의 조건과 UV 검출기의 고정된 파장 205 nm에서 HPLC 분석을 수행하였을 때 Fig. 2의 HPLC chromatogram이 얻어졌다. Table II에 나타낸 것처럼, Kirenol 피크는 29.
- 이동상의 용리 조건은 다음과 같이 프로그램된 방법에 따라 수행하였다[(A)/(B) = 85/15 (0 min) → 35/65 (35 min, hold for 5 min) → 0/100 (42 min; hold for 4) → 85/15(49 min; hold for 6 min)]. 컬럼 온도는 40oC였으며, 흐름속도는 1.00 ml/min이었고, 검출파장은 205 nm를 사용하여 40분간 모니터링하였다.
- 표준 화합물을 MeOH에 녹여서 제조한 표준액을 이용하여 직선성에 관한 연구를 수행하였다. 희석법에 따라 제조한 5개 표준액 농도로서 7.
대상 데이터
- HPLC 이동상은 A용액과 B 용액 두 용액계를 사용하였다. A용액은 0.05% trifluoroacetic acid(TFA) 수용액이었으며 B 용액은 0.05% TFA-MeOH-CH3CN (60:40) 용액을 사용하여 gradient elution하였다. 이동상은 다음과 같은 프로그램에 따라 용리하였다.
- HPLC 기기는 Prostar 210 solvent delivery module, Prostar 325 UV-Vis detector와 20 µL sample loop(Rheodyne, Ronert Park, CA, USA)로 구성된Varian사의 HPLC 시스템(Walnut Creek, CA, USA)를 사용하였다.
- 이를 5 µm syringe filter를 이용하여 여과한 후 HPLC에 주사하였다. HPLC 이동상은 A용액과 B 용액 두 용액계를 사용하였다. A용액은 0.
- 뭐 식물재료에 kirenol와 siegeskaurolic acid 화합물이 존재하는지를 TLC로 간단히알아보기 위하여 역상의 TLC plate에서 전개용매로 MeOH-H2O (70:30)을 사용하였다. TLC 전개한 후 이를 자외선(254 nm)에 의한 관찰 및 50%-H2SO4 분무 후 가열에 의한 발색으로 관찰하였다.
- )를 사용하였으며, injection syringe는 Hamilton(Reno Nevada, USA)에서 구입한 것을 사용하였다. 분석에 사용된 용매는 HPLC급 용매이었다. 화합물 분리에 사용된 역상 컬럼 고정상으로 ODS (octadecylsilane)는 YMC사(Kyoto, Japan)의 YMC*GEL ODS-A(150 µm)이었으며, TLC plate는 Merck사의 Kieselgel 60 RP-18 F254s glass plate를 사용하였다.
- pubescens)을 채집하여 상지대학교 원예조경학과 임상철 교수님에 의뢰하여 감정을 받은 후 사용하였다. 중국산 희첨은 천일약업사에서 중국산이라고 명기된 희첨을 사용하였다. 채집한 식물은 그늘에서 건조하고 이를 파쇄하여 실험에 사용하였다.
- 중국산 희첨은 천일약업사에서 중국산이라고 명기된 희첨을 사용하였다. 채집한 식물은 그늘에서 건조하고 이를 파쇄하여 실험에 사용하였다. 그 표본은 현재 상지대학교 제약공학과 천연물화학실에 보관 중이다.
- 컬럼은 Shiseido(Chuoku, Tokyo, Japan) Capcell Pak C18 column(5 µm, 250 mm × 4.6 mm, i.d.)를 사용하였으며, injection syringe는 Hamilton(Reno Nevada, USA)에서 구입한 것을 사용하였다.
- 화합물 분리에 사용된 역상 컬럼 고정상으로 ODS (octadecylsilane)는 YMC사(Kyoto, Japan)의 YMC*GEL ODS-A(150 µm)이었으며, TLC plate는 Merck사의 Kieselgel 60 RP-18 F254s glass plate를 사용하였다.
- 희석법에 따라 제조한 5개 표준액 농도로서 7.81-250.00 µg/ml 범위에서 제조하였다.
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