정상 발정주기를 보이는 7주령부터 38주령의 생쥐를 대상으로 발정주기에 따른 자궁조직내 비만세포의 분포를 toluidine blue 염색법으로 조사하였다. 비만세포의 밀도는 생쥐의 연령 증가와 더불어 지속적으로 증가하다가, 30주령 이후 감소하는 경향을 보였다. 발정주기별 분포에서는 조사한 모든 연령의 생쥐에서 발정후기에 가장 높은 밀도를 나타내었고, 그 대부분은 자궁근층에서 발견되었다. 10주령의 생쥐를 대상으로 Alcian blue-safranin 이중염색법에 따라 비만세포의 유형별 상대분포를 조사한 실험에서는 발정주기의 전 시기에 걸쳐 점막형 비만세포의 비율이 결합조직형 및 혼합형 비만세포의 비율에 비해 상대적으로 현저히 높게 나타났으나, 발정기 이후 발정간기까지는 점막형비만세포의 상대 비율은 다소 감소하고, 다른 유형의 비만세포, 특히 혼합형 비만세포의 비율이 상대적으로 증가하는 경향을 보였다. Masson trichrome 염색법으로 조사한 교원섬유의 분포 양상은 비만세포의 분포 양상과 정확히 일치하게 발정후기에서 가장 높은 밀도를 나타내었다. 이상의 결과는 비만세포, 특히 점막형 비만세포가 교원섬유와 함께 발정주기에 따른 자궁의 점막 및 근육조직의 재구성에 중요한 역할을 하고 있음을 시사한다.
정상 발정주기를 보이는 7주령부터 38주령의 생쥐를 대상으로 발정주기에 따른 자궁조직내 비만세포의 분포를 toluidine blue 염색법으로 조사하였다. 비만세포의 밀도는 생쥐의 연령 증가와 더불어 지속적으로 증가하다가, 30주령 이후 감소하는 경향을 보였다. 발정주기별 분포에서는 조사한 모든 연령의 생쥐에서 발정후기에 가장 높은 밀도를 나타내었고, 그 대부분은 자궁근층에서 발견되었다. 10주령의 생쥐를 대상으로 Alcian blue-safranin 이중염색법에 따라 비만세포의 유형별 상대분포를 조사한 실험에서는 발정주기의 전 시기에 걸쳐 점막형 비만세포의 비율이 결합조직형 및 혼합형 비만세포의 비율에 비해 상대적으로 현저히 높게 나타났으나, 발정기 이후 발정간기까지는 점막형비만세포의 상대 비율은 다소 감소하고, 다른 유형의 비만세포, 특히 혼합형 비만세포의 비율이 상대적으로 증가하는 경향을 보였다. Masson trichrome 염색법으로 조사한 교원섬유의 분포 양상은 비만세포의 분포 양상과 정확히 일치하게 발정후기에서 가장 높은 밀도를 나타내었다. 이상의 결과는 비만세포, 특히 점막형 비만세포가 교원섬유와 함께 발정주기에 따른 자궁의 점막 및 근육조직의 재구성에 중요한 역할을 하고 있음을 시사한다.
We examined the distribution of uterine mast cells in cycling mice of different ages between 7 weeks and 38 weeks by toluidine blue staining. Mast cell density increased gradually depending on the age and culminated at 30 weeks after birth. Of the estrous stages, uteruses at metestrus showed markedl...
We examined the distribution of uterine mast cells in cycling mice of different ages between 7 weeks and 38 weeks by toluidine blue staining. Mast cell density increased gradually depending on the age and culminated at 30 weeks after birth. Of the estrous stages, uteruses at metestrus showed markedly higher density of mast cells than those at the other stages in cycling mice of all ages analysed in this study and the majority of the mast cells were found in myometrium. We also discriminated types of the uterine mast cells in cycling mice at 10 weeks old by Alcian blue-safranin double staining. Mucosal type was most abundant among three types, including connective-tissue types and mixed types, through the entire estrous cycles. The portion of mixed types increased slightly after estrous. The abundance of uterine collagen protein determined by Masson trichrome staining was exactly consistent with the density distribution of the uterine mast cells during estrous cycles. Taken together, these results may imply that uterine mucosal mast cells, together with collagen proteins, are heavily involved in tissue remodeling of cycling mouse uterus.
We examined the distribution of uterine mast cells in cycling mice of different ages between 7 weeks and 38 weeks by toluidine blue staining. Mast cell density increased gradually depending on the age and culminated at 30 weeks after birth. Of the estrous stages, uteruses at metestrus showed markedly higher density of mast cells than those at the other stages in cycling mice of all ages analysed in this study and the majority of the mast cells were found in myometrium. We also discriminated types of the uterine mast cells in cycling mice at 10 weeks old by Alcian blue-safranin double staining. Mucosal type was most abundant among three types, including connective-tissue types and mixed types, through the entire estrous cycles. The portion of mixed types increased slightly after estrous. The abundance of uterine collagen protein determined by Masson trichrome staining was exactly consistent with the density distribution of the uterine mast cells during estrous cycles. Taken together, these results may imply that uterine mucosal mast cells, together with collagen proteins, are heavily involved in tissue remodeling of cycling mouse uterus.
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문제 정의
, 2001). 본 연구자들은 먼저 비임신 생쥐에서 자궁조직내 비만세포의 분포와 역할을 규명함으로써, 장차 임신과 분만에서의 역할과 그 중요성을 이해할 수 있는 토대를 마련하고자 생쥐의 자궁조직에서 발정주기에 따른 비만세포의 밀도 및 유형별 분포를 조사하였다.
제안 방법
4에서와 같이 Alcian blue로 염색되는 점막형 비만세포와 safranin O에 염색되는 결합조직형 비만세포, 그리고 두 염색용액에 동시에 염색되는 혼합형 비만세포는 현미경하에서 명확히 구분할 수 있었다. 각 유형의 비만세포 밀도(세포수/mm2)를 화상분석을 통해 구하고, 전체 비만세포의 수에 대한 유형별 비만세포의 상대적 비율(%)로 나타내었다(Table 2, Fig. 4). 발정주기 전 시기에 걸쳐 점막형 세포는 결합조직형, 혼합형 비만세포에 비해 상대적 구성 비율이 현저히 높았으며, 특히 발정기에서는 점막형 비만세포가 전체 비만세포의 대부분(98.
3)를 함께 사용하여 염색하였다. 교원섬유의 분포는 Masson trichrome 염색법을 이용하여 Weigert iron hematohylin 용액에 10분간 핵을 염색시킨 후 Biebrich scaret-acid fuchsin 용액에 15 분간 세포질 및 근육을 염색시킨 다음, 2% Aniline blue 용액에 3분간 교원섬유를 염색시켜 현미경을 통해 관찰하였다. 자궁의 단면 구조 및 비만세포의 관찰은 광학현미경(Olympus BX 50, Olympus Optical Co.
규칙적인 발정주기를 보이는 생후 10주된 생쥐 자궁조직에서 비만세포의 유형별 분포를 조사하였다. Fig.
3). 발정주기별 자궁조직 내 비만세포의 밀도 변화를 생후 7주부터 38주에 걸쳐 조사하였다(Table 1, Fig. 2). 생후 7주된 생쥐 자궁조직 내 비만세포의 평균 밀도(세포수/mm2)는 발정후기가 96.
본 저자들이 이전에 발표한 논문(최 등, 2008)에서 자궁조직 내 생쥐 비만세포는 발정주기가 시작된 생후 7주부터 급격히 증가하여 32주에 이르기까지 지속적으로 증가하다가 이후 점차 감소하는 경향을 보인다고 보고한 바 있다. 본 실험에서는 연령 증가에 따른 비만세포의 밀도와 분포 변화를 발정주기별로, 또 비만세포의 유형별로 분석하였다. 본 실험에서도 전체 비만세포의 수는 생후 30주까지 증가한 이후 38주에서는 감소하는 경향을 보였고(Table 1, Fig.
비만세포의 밀도와 분포를 조사하기 위해 현미경 상(×200)에서 화상분석 프로그램인 Image-Pro Plus ver 3.01(Media Cyberbetis Inc. USA)을 활용하여 1 mm2 당 비만세포의 수를 측정하였다.
1% Nuclear fast red 용액으로 5분간 대조염색을 하였다. 비만세포의 유형별 분포는 점막형 비만세포가 염색되는 1% alcian blue(pH 0.3)와 결합형 비만세포를 염색하는 0.5 % safranin O(pH 0.3)를 함께 사용하여 염색하였다. 교원섬유의 분포는 Masson trichrome 염색법을 이용하여 Weigert iron hematohylin 용액에 10분간 핵을 염색시킨 후 Biebrich scaret-acid fuchsin 용액에 15 분간 세포질 및 근육을 염색시킨 다음, 2% Aniline blue 용액에 3분간 교원섬유를 염색시켜 현미경을 통해 관찰하였다.
조직표본은 파라핀 침윤법으로 제작하였다. 생쥐의 자궁을 절취하여 중성포르말린(pH 7.4)에서 24～48시간 고정한 다음, 자동침투기를 이용하여 에탄올 70%부터 100%까지 단계별로 탈수시킨 다음 xylene 3단계의 투명과정을 거쳐, 유동파라핀(60℃)에서 침투 및 포매과정을 거쳐 파라핀 블록을 제작하였다. 회전형 박절기(Shandon, England)를 이용하여 조직블록을 4 μm 두께의 절편으로 만들어 60℃의 슬라이드 건조기에서 1시간 건조시킨 다음 xylene으로 파라핀을 제거하고, 알콜 단계를 거쳐 함수시켰다.
교원섬유의 분포는 Masson trichrome 염색법을 이용하여 Weigert iron hematohylin 용액에 10분간 핵을 염색시킨 후 Biebrich scaret-acid fuchsin 용액에 15 분간 세포질 및 근육을 염색시킨 다음, 2% Aniline blue 용액에 3분간 교원섬유를 염색시켜 현미경을 통해 관찰하였다. 자궁의 단면 구조 및 비만세포의 관찰은 광학현미경(Olympus BX 50, Olympus Optical Co., Ltd., Japan)을 이용하였다. 비만세포의 밀도와 분포를 조사하기 위해 현미경 상(×200)에서 화상분석 프로그램인 Image-Pro Plus ver 3.
조직의 전체적인 형태를 관찰하기 위하여 H&E(Hematoxylin & Eosin) 염색을 실시하였는데, Harris hematoxylin 염색용액으로 5분간 핵을 먼저 염색한 후 Eosin 용액으로 대조염색을 실시하였다. 전체 비만세포의 분포는 0.1% toluidine blue 용액(pH 0.5)으로 30분간 염색한 후 0.1% Nuclear fast red 용액으로 5분간 대조염색을 하였다. 비만세포의 유형별 분포는 점막형 비만세포가 염색되는 1% alcian blue(pH 0.
조직의 전체적인 형태를 관찰하기 위하여 H&E(Hematoxylin & Eosin) 염색을 실시하였는데, Harris hematoxylin 염색용액으로 5분간 핵을 먼저 염색한 후 Eosin 용액으로 대조염색을 실시하였다.
조직표본을 toluidine blue로 염색하여 연령별, 발정주기별 전체 비만세포의 밀도와 분포를 광학현미경하에서 화상 분석하였다(Table 1, Fig. 2). 비만세포의 밀도는 면적 1 mm2 당 비만세포의 개수로 표시하였으며, 평균 밀도는 5개체의 표본에서 얻은 밀도를 평균과 표준편차로 나타내었다.
대상 데이터
실험동물은 생후 7주 이상된 생쥐 암컷으로(다물사이언스), 매일 아침 질 도말법(Waynforth, 1980; Caligioni, 2009)을 실시하여 연속 2회 이상 규칙적인 발정주기를 보이는 개체만을 선별하여 실험에 공시하였다. 연령 및 발정주기별로 5마리를 한 실험군으로 설정하여 조직표본을 제작하였다.
실험동물은 생후 7주 이상된 생쥐 암컷으로(다물사이언스), 매일 아침 질 도말법(Waynforth, 1980; Caligioni, 2009)을 실시하여 연속 2회 이상 규칙적인 발정주기를 보이는 개체만을 선별하여 실험에 공시하였다. 연령 및 발정주기별로 5마리를 한 실험군으로 설정하여 조직표본을 제작하였다.
데이터처리
2). 비만세포의 밀도는 면적 1 mm2 당 비만세포의 개수로 표시하였으며, 평균 밀도는 5개체의 표본에서 얻은 밀도를 평균과 표준편차로 나타내었다. 비만세포는 대부분 자궁근층에 분포하고 있었으며, 세포의 크기는 6～12 μm, 모양은 타원형, 원형, 방추형, 부정형 등으로, 세포의 크기와 모양이 매우 다양하였다(Fig.
연령별, 발정주기별 자궁조직 내 비만세포의 밀도 변화와 유형별 분포는 SPSS Win(Ver 10.0) 통계분석 프로그램을 활용하여, 일원분산분석법(one-way analysis of variance)으로 동일성을 판단한 후, Turkey 다중비교법으로 사후 검정을 실시하였으며, p<0.05에서 유의성을 판단하였다.
이론/모형
생후 10주된 생쥐 자궁조직 내 교원세포의 분포를 Masson trichrome 염색법에 따라 발정주기별로 조사하였다. Masson trichrome에 의해 청색으로 염색되는 교원섬유는 발정전기, 발정기를 거치면서 자궁근층을 중심으로 점차 진하게 염색되다가 발정후기에 이르러 조직 전반에 걸쳐 강하게 염색되 었다.
조직표본은 파라핀 침윤법으로 제작하였다. 생쥐의 자궁을 절취하여 중성포르말린(pH 7.
성능/효과
10주령의 생쥐 자궁에서 발정주기 동안 비만세포의 유형별 상대 분포 비율을 조사한 실험에서는(Table 2, Fig. 4) 전시기에 걸쳐 점막형 비만세포의 비율이 결합조직형 및 혼합형의 비율에 비해 상대적으로 현저히 높게 나타났다. 발정전기에서 발정기로 진행하면서 점막형 비만세포의 상대적 비율은 증가하여 전체 비만세포의 대부분(98.
4) 전시기에 걸쳐 점막형 비만세포의 비율이 결합조직형 및 혼합형의 비율에 비해 상대적으로 현저히 높게 나타났다. 발정전기에서 발정기로 진행하면서 점막형 비만세포의 상대적 비율은 증가하여 전체 비만세포의 대부분(98.9%)을 차지하였으며, 이후 발정후기로 진행하면서 약간 감소하다가 발정간기에서는 비율이 69.5%로 뚜렷한 감소를 보였다. 이에 따라 결합조직형 및 혼합형 비만세포의 비율은 상대적으로 증가하는데, 이런 증가는 결합조직형보다 혼합형 비만세포에서 더욱 뚜렷하였다.
4). 발정주기 전 시기에 걸쳐 점막형 세포는 결합조직형, 혼합형 비만세포에 비해 상대적 구성 비율이 현저히 높았으며, 특히 발정기에서는 점막형 비만세포가 전체 비만세포의 대부분(98.9%)을 차지하였고, 이후 발정후기에 94.4%, 발정간기에 69.5%로 상대적 비율이 감소하였다가 발정전기에 다시 88.0%로 증가하는 경향을 보였다. 이에 반하여 결합조직형과 혼합형 비만세포는 발정기에서는 상대적 비율이 매우 낮았으나 (1% 미만), 발정후기, 발정간기로 진행하면서 상대적 비율이 증가하는데, 특히 발정간기에서 혼합형 비만세포는 22.
본 실험에서는 연령 증가에 따른 비만세포의 밀도와 분포 변화를 발정주기별로, 또 비만세포의 유형별로 분석하였다. 본 실험에서도 전체 비만세포의 수는 생후 30주까지 증가한 이후 38주에서는 감소하는 경향을 보였고(Table 1, Fig. 2), 이러한 경향은 발정주기에 관계없이 비슷하였다. 하지만 발정주기별로 비만세포의 밀도를 비교하였을 때는 흥미롭게도 모든 주령에서 발정후기가 발정주기의 다른 시기에 비해 유의하게 높은 비만세포 밀도를 나타내었으며, 발정후기 이외의 다른 시기들 사이에서는 서로 비슷한 수준의 밀도를 보였다.
, 1985). 본 연구의 결과에서 교원섬유는 발정주기에 따라 그 분포와 농도가 뚜렷이 변하고 있으며, 이런 변화는 비만세포의 밀도 변화와 거의 일치하고 있다. 이는 비만세포가 발정주기에 따른 자궁조직의 재구성에 깊이 관여하고 있음을 시시하는 것이다.
생후 7주된 생쥐 자궁조직 내 비만세포의 평균 밀도(세포수/mm2)는 발정후기가 96.4±4.8로 가장 높았으며, 발정기(72.7±17.5)와는 유의한 차이가 없었으나, 발정전기(39.4±9.5)와 발정간기(63.2±7.8)와는 유의한 차이가 있었다.
0%로 증가하는 경향을 보였다. 이에 반하여 결합조직형과 혼합형 비만세포는 발정기에서는 상대적 비율이 매우 낮았으나 (1% 미만), 발정후기, 발정간기로 진행하면서 상대적 비율이 증가하는데, 특히 발정간기에서 혼합형 비만세포는 22.6%로서, 결합조직형의 8.0%에 비해 증가 폭이 두드러졌다.
2), 이러한 경향은 발정주기에 관계없이 비슷하였다. 하지만 발정주기별로 비만세포의 밀도를 비교하였을 때는 흥미롭게도 모든 주령에서 발정후기가 발정주기의 다른 시기에 비해 유의하게 높은 비만세포 밀도를 나타내었으며, 발정후기 이외의 다른 시기들 사이에서는 서로 비슷한 수준의 밀도를 보였다.
후속연구
이는 결국 자궁근층 비만세포의 부적절한 활성화는 평활근의 비정사적 수축을 통한 조산 등의 문제를 야기할 수 있는 가능성이 있음을 시사하는 것이다. 따라서 자궁근층 비만세포의 분포 및 활성화 기작에 대한 지속적인 연구는 이를 해결하는 중요한 기회를 제공할 것이다.
질의응답
핵심어
질문
논문에서 추출한 답변
비만세포의 전구세포는 무엇에 따라 증식 및 분화 양상이 달라지는가?
비만세포의 전구세포는 골수의 조혈모세포로부터 발생하며, 혈류를 통해 조직으로 이동한 후, 각 조직에서 cytokine의 종류와 농도에 따라 증식 및 분화 양상이 달라진다. 따라서 비만세포의 표현형과 분포 양상은 조직에 따라 서로 다른 heterogeneity를 보이게 된다.
결합조직형 비만세포의 특징은 무엇인가?
단백질 분해효소인 tryptase를 주로 발현하는 MCT 비만세포는 조직의 점막층에서 주로 관찰되고, 알레르기성 및 기생체 감염성 환자의 점막에서 그 수가 증가하는 것이 관찰된다. 이에 반해 MCTC 비만세포는 tryptase, chymase, carboxypeptidase, cathepsin G를 발현하고 있으며, 피부, synovium, 피하조직, 그리고 특히 위장관에서 주로 발견되고, 섬유질성 질환(fibrotic diseases)에서 그 수가 증가하는 것이 관찰된다(Menzies et al., 2011; Rudolph et al.
활성화된 비만세포는 분비과립으로부터 무엇을 합성 및 분비하는가?
알레르기성 항원, superoxides, 보체단백질, 신경펩타이드, 지질단백질 등 다양한 자극에 의해 활성화된 비만세포는 분비과립으로부터 히스타민, proteoglycans, serotonin, 여러 종류의 단백질 분해효소, 지질성 신호물질(prostaglandin-D2, leucotrienes), thromboxanes, nitrogen/oxygen radicals 몇 종의 cytokines 및 chemokines을 합성, 분비한다. 이를 통해 비만세포는 여러 조직에서 염증반응을 포함하는 자기방어적 내재면역 (Krishnaswamy et al.
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