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문제 정의
- 국내 다른 양식어종에 비해 낮은 생산량 때문에 이스라엘 잉어에서 감염성 질병의 보고는 거의 없는 실정이다. 그래서 이번 증례에서는 전라북도 한 이스라엘 잉어 양식장에서 심한 궤양성 피부염을 수반하는 높은 폐사의 주요 원인체로 A. veronii를 진단하였기에 이에 보고하고자 한다.
제안 방법
- 또한, 초대배양에서 유도된 세 가지 집락은 순수 배양을 위해 혈액배지 그리고 tryptic soy agar (TSA)에서 각각 한 번씩 더 배양하였다. 순수 배양된 세균의 DNA는 DNA extraction kit (Bioneer, Korea)를 이용하여 추출하였고 16S rRNA sequences를 분석하기 위해 Macrogen sequencing service center (Korea)에 보내졌다. 획득한 16S rRNA sequences은 BLAST searching에 의해 동정하였고 그 결과 우점종인 β용혈성 세균은 A.
- 양식장에서 급성 경과로 인해 신속한 처방의 요구로 부검 시 피부의 직접적인 탐침 및 내부장기의 분쇄액을 이용하여 항생제 감수성 시험을 수행하였다. 또한, 순수 배양된 A.
- 현미경을 사용한 검경에서 새변 및 새박판의 구조는 정상이었으며 부착된 기생충은 관찰할 수 없었다. 육안적 부검 소견으로는 모든 개체에서 황색을 띤 맑은 복수가 관찰되었고 내부 실질 장기에서는 간의 괴사, 담즙의 정체 그리고 비장 및 신장의 종대를 관찰하였다(Fig. 1).
- 다른 종 간에서는 3% 이상의 서열 변이성이 관찰되어 genus Aeromonas에서 종 수준 동정에 매우 유용한 marker인 것으로 보고되었다(Yáñez 등, 2003; Küpfer 등 2006). 이러한 측면에서, 이번 증례로부터 A. veronii 분리주는 gyrB gene을 이용한 phylogenetic analysis로 정확한 동정을 수행하였다. 한편, Vitek 2 system에서는 이번 증례의 A.
- 현 이스라엘 잉어 양식장에서 발생하고 있는 질병의 급속한 경과로 인해 신속한 처방의 필요성이 인정되었던바 부검 시간, 비장 그리고 신장의 분쇄액 그리고 피부병변은 직접 탐침에 의해 Muller-Hinton agar에 도말 후 다양한 항생제 disc를 이용한 agar diffusion test에 의해 항생제 감수성 시험을 수행하였다. 또한, 우점종인 A.
대상 데이터
- 2012년 5월 31일 전북 고창군 소재 한 이스라엘 잉어 양식장에서 체표 궤양 및 출혈을 동반한 폐사가 발생하여 병성감정이 의뢰되었다. 의뢰된 양식장은 지수식 사육형태로 체중 150∼200 g의 이스라엘 잉어가 한 호지당 약 5톤 정도 사육되고 있었다.
- 2012년 5월 전라북도 고창지역의 한 이스라엘 잉어 양식장에서 일일 폐사량이 호지당 20여 마리에 도달하는 질병이 발생하여 본 대학에 병성감정을 의뢰하였다. 병어의 주요 임상증상은 출혈성 패혈증과 연관된 피부 궤양 및 괴사 소견이 현저하게 관찰되었다.
이론/모형
- veronii는 주요 병원체임을 알 수 있었다. A. veronii의 정확한 동정은 gyrB gene sequences를 이용한 phylogenetic analysis에 의해 수행되었다.
- 양식장에서 급성 경과로 인해 신속한 처방의 요구로 부검 시 피부의 직접적인 탐침 및 내부장기의 분쇄액을 이용하여 항생제 감수성 시험을 수행하였다. 또한, 순수 배양된 A. veronii 분리주는 CLSI 방법(Miller 등, 2003)에 근거하여 항생제 감수성 시험을 하였다. A.
- 현 이스라엘 잉어 양식장에서 발생하고 있는 질병의 급속한 경과로 인해 신속한 처방의 필요성이 인정되었던바 부검 시간, 비장 그리고 신장의 분쇄액 그리고 피부병변은 직접 탐침에 의해 Muller-Hinton agar에 도말 후 다양한 항생제 disc를 이용한 agar diffusion test에 의해 항생제 감수성 시험을 수행하였다. 또한, 우점종인 A. veronii는 순수배양 후 CLSI 방법 (Miller 등, 2003)에 근거하여 항생제 감수성 시험을 하였다. 그 결과 모든 시험에서 amikacin, gentamicin, ceftiofur, cefotaxime 그리고 ciprofloxacin에 감수성을 보였으나 oxytetracycline, nalidixic acid, 그리고 ampicillin에는 저항성을 보였다.
성능/효과
- β용혈성인 우점종 집락은 Vitek-2 system (BioMérieux, France)으로 우선적으로 동정하였고 그 결과 A. sobria로 동정되었다.
- veronii 분리주는 CLSI 방법(Miller 등, 2003)에 근거하여 항생제 감수성 시험을 하였다. A. veronii의 분리주는 ampicillin, nalidixic acid, oxytetracycline에 대한 고등도의 내성과 erythromycin에 대한 중등도의 내성을 보였지만 나머지 항생제들에는 감수성을 보였다. 그러나 이러한 결과는 crude한 시료로부터 항생제 감수성 시험과는 차이를 보였다.
- veronii는 순수배양 후 CLSI 방법 (Miller 등, 2003)에 근거하여 항생제 감수성 시험을 하였다. 그 결과 모든 시험에서 amikacin, gentamicin, ceftiofur, cefotaxime 그리고 ciprofloxacin에 감수성을 보였으나 oxytetracycline, nalidixic acid, 그리고 ampicillin에는 저항성을 보였다. 조직 분쇄액의 항생제 감수성 시험에서는 amoxicillin/clavulanic acid, cefazolin, cephalothin, 그리고 flumequine에 저항성을 보였지만, A.
- 2). 따라서 현 병성감정을 의뢰한 이스라엘 잉어 양식장에서 발생하고 있는 질병의 주요 원인체는 A. veronii인 것을 알 수 있었다.
- 본 연구실에서 수행한 항생제 감수성 시험 결과를 근거로 하여 병성감정 의뢰 후 다음날 임상 수의사는 gentamicin을 사료에 첨가하여 1주일간 투여를 처방하였고 투여 기간에 폐사는 감소하여 투여 1주일 후에는 호지 당 2∼3마리로 감소하였다.
- 병어의 주요 임상증상은 출혈성 패혈증과 연관된 피부 궤양 및 괴사 소견이 현저하게 관찰되었다. 세균학적 동정 결과 A. veronii, Plesiomonas shigelloides, Shewanella putrefacins이 동정되었고 이 중 A. veronii는 주요 병원체임을 알 수 있었다. A.
- 외관상 병리학적 주요 소견으로는 병어의 체색 흑화, 안구 돌출, 복부 팽만, 지느러미 부식 및 피부의 점상출혈, 궤양 및 출혈이 관찰되었다. 심한 궤양의 경우 최대 5 cm에 이르며 중심부위는 괴사 그리고 그 주변은 붉은색의 울혈 증상이 보였다.
- 의뢰된 양식장은 지수식 사육형태로 체중 150∼200 g의 이스라엘 잉어가 한 호지당 약 5톤 정도 사육되고 있었다.
- salmonicida와는 달리 중온성 세균으로 수온 상승 및 고수온기에 주로 질병을 발생시키고 또한, 어류의 잘못된 사양관리로 인한 스트레스로 임상증상을 발휘하는 기회성 병원체이다(Robert, 2001). 이번 증례에서는 수온이 상승하는 5월에 발생한 점과 발병 이전에 선별작업을 수행한 점으로 미루어 보아 어류에 심한 스트레스 발생으로 인해 장내에 상주하는 A. veronii가 다른 조직으로 이행 함으로써 심한 감염증이 유발된 것으로 고려된다. 이러한 추정은 이번 증례에서 Plesiomonas shigelloides와 Shewanella putrefacins가 드물지만, 내부장기에서 분리된 점으로 증명될 수 있다.
- 그 결과 모든 시험에서 amikacin, gentamicin, ceftiofur, cefotaxime 그리고 ciprofloxacin에 감수성을 보였으나 oxytetracycline, nalidixic acid, 그리고 ampicillin에는 저항성을 보였다. 조직 분쇄액의 항생제 감수성 시험에서는 amoxicillin/clavulanic acid, cefazolin, cephalothin, 그리고 flumequine에 저항성을 보였지만, A. veronii의 순수 분리주에서는 이 항생제들에 대하여 감수성을 보였다(Table 1).
- 초대배양에서 부검된 모든 개체 및 내부 실질장기에서 우점종은 β용 혈성 집락이었다.
- 한편, 한 개체에서 γ용혈성의 우점종인 세균은 Plesiomonas shigelloides으로 동정되었고 다른 한 개체의 γ용혈성의 적은 집락은 Shewanella putrefacins이었다.
- 한편, 한 개체에서는 β용혈성 집락과 유사한 수를 가진 γ용혈성 집락을 관찰할 수 있었고 다른 한 개체의 간에서는 적은 수의 γ용혈성이면서 주황색의 집락이 관찰되었다.
- 획득한 16S rRNA sequences은 BLAST searching에 의해 동정하였고 그 결과 우점종인 β용혈성 세균은 A. veronii였다.
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