[논문]육계에서 조직과 혈액의 enrofloxacin 및 대사성 ciprofloxacin 잔류 상관관계 조사 및 검사방법간의 비교

성명숙; 김미숙; 서희진; 배동록; 황지영; 김순태; 조종숙; 박홍제; 홍성희; 김경동; 장성준; 윤문조

doi:10.7853/kjvs.2013.36.4.311

[국내논문] 육계에서 조직과 혈액의 enrofloxacin 및 대사성 ciprofloxacin 잔류 상관관계 조사 및 검사방법간의 비교
Comparison of detecting methods and the relationship between tissue and blood for enrofloxacin and metabolic ciprofloxacin residues in broiler chickens 원문보기

韓國家畜衛生學會誌 = Korean journal of veterinary service, v.36 no.4, 2013년, pp.311 - 320

성명숙 (경북가축위생시험소) , 김미숙 (경북가축위생시험소) , 서희진 (경북가축위생시험소) , 배동록 (경북가축위생시험소) , 황지영 (경북가축위생시험소) , 김순태 (경북가축위생시험소) , 조종숙 ((주)메덱스) , 박홍제 ((주)메덱스) , 홍성희 ((주)메덱스) , 김경동 ((주)메덱스) , 장성준 (경북가축위생시험소) , 윤문조 (경북가축위생시험소)

Abstract ▼ AI-Helper

The purpose of this study was to evaluate detecting methods and the relationship between tissues and blood for enrofloxacin and metabolic ciprofloxacin residues in broiler chickens. Two groups of broiler chickens were administrated via the drinking water with $50{\mu}g/mL$ and $100{\mu}g/mL$ of enrofloxacin for 5 days, respectively. The concentration of enrofloxacin and metabolic ciprofloxacin in tissues (muscle and kidney) and blood were measured during administration period (for 5 days) and withdrawal period (for 12 days) by high performance liquid chromatography (HPLC) method. Also, all samples were conducted for screening of residues by microbial method using E. coli for quinolone detection and immuno-chromatography method using Smart kit. The relationship between tissues (muscle and kidney) and blood for enrofloxacin and metabolic ciprofloxacin residues in broiler chickens was followed : The levels of enrofloxacin and metabolic ciprofloxacin residues in muscle and kidney were higher 2.9~3.2 folds, 3.6~3.8 folds more than the residues levels in blood, respectively. These results support we can predict the residues in muscle and kidney from the residues in blood. In comparison of detecting methods for antibiotic residues, microbial method using E. coli for quinolone detection and immuno-chromatography method using Smart kit could detect positive reaction at similar or lower concentration than violative concentration of enrofloxacin and metabolic ciprofloxacin in chicken tissues. These results support what two screening methods are useful for screening of quinolone detection in chickens.

주제어

AI 본문요약
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문제 정의

이러한 제도와 더불어 검사 분야에 있어서도 잔류에 대한 위해를 최소화하기 위해 보다 많은 도체에 대하여 검사를 할 수 있는 확대 방안이 필요하다. Reyes-Herrer 등(2011)은 현재 근육을 이용한 검사보다는 경제적 가치가 낮은 혈액을 이용하여 식육 잔류여부를 검사할 수 있는 가능성을 시사하였으며, 본 실험에서는 혈액으로 근육과 신장의 잔류량을 예측할 수 있는지를 살펴보기 위해 혈액과 조직에서의 잔류 상관관계를 조사하였다.
따라서, 본 연구에서는 육계의 근육, 신장, 혈액내 ENR과 대사성 ciprofloxacin (CIP) 잔류 상관관계를 조사하여 혈액내의 잔류량으로 근육과 신장내의 잔류량을 예측할 수 있는지를 살펴보고, 아울러 검사방법간의 잔류 검출 정도를 비교하고자 하였다.

제안 방법

ENR과 대사산물인 CIP 잔류의 검사 방법 간 비교를 위해 HPLC를 실시한 동일한 시료를 대상으로 E. coli 를 이용한 퀴놀론계 항균물질 간이검사법과 Smart kit 를 이용한 잔류 스크리닝을 실시하였으며, 그 결과는 Table 4 및 Table 5와 같다.
육계에서 enrofloxacin을 농도별로(50 μg/mL 및 100μg/mL) 5일 동안 음수투여하여 투여기간(5일)과 휴약기간(12일) 동안 근육, 신장 및 혈액에서 erofloxacin과 대사성 ciprofloxacin 농도를 측정하여 조직과 혈액의 잔류 상관관계를 조사하였다. 또한 잔류 검사방법간의 비교를 위해 HPLC법과 E. coli를 이용한 퀴놀론계 항균물질 간이검사법, Smart kit를 이용한 간이검사법을 동시에 실시하였다. 두 계군에서 잔류상관관계는 혈액에서의 잔류량에 비해 근육과 신장에서의 잔류량은 각각 평균 2.
매 채취시기마다 약물을 투여한 2개 계군에서 각각 5수씩 무작위로 취하여 심장에서 혈액을 약 6∼7 mL 정도 채취하여 혈청을 분리하였고, 곧바로 경추탈구 후 가슴 근육과 신장을 채취하여 −80°C에서 보관하면서 실험에 사용하였다.
분석조건: 약물의 정량분석은 형광검출기가 장착된 고속액체크로마토그래피(HPLC, Waters Alliance 2695, USA)를 이용하였으며, 칼럼은 Waters Atlantis dC18 3μm, 4.6×150 mm (Waters, Ireland)을 사용하였다.
시료의 검사는 근육과 신장을 각각 50 mL 원심관에 옮겨 담아 100°C 항온수조에 중탕하여 육즙을 낸 후 디스크에 25 μL씩 점적하여 흡수시키고, 30°C 배양기에서 16시간 배양한 후 캘리퍼스를 사용하여 디스크 직경을 포함한 세균 발육 억제대를 측정하였으며, 그 측정값이 12 mm 이상일 경우 양성으로 판정하였다.
시료의 검사는 디스크(직경 10 mm, Advantec, Japan)를 시험용 평판위에 올려놓고 가볍게 부착시킨 후 혈청 25 μL씩 점적하여 흡수 시키고, 45°C 배양기에서 16∼18시간 배양한 후 캘리퍼스를 이용하여 디스크 직경을 포함한 세균 발육 억제대를 측정하였으며, 그 측정값이 12 mm 이상일 경우 양성으로 판정하였다.
시료채취는 약물투여 전과 약물투여 후 1, 3, 6, 12, 24, 48, 72, 120시간과, 휴약 후 12, 24, 36, 48, 60, 72, 96, 120, 144, 168, 192, 216, 240, 264, 288시간에 실시하였다. 매 채취시기마다 약물을 투여한 2개 계군에서 각각 5수씩 무작위로 취하여 심장에서 혈액을 약 6∼7 mL 정도 채취하여 혈청을 분리하였고, 곧바로 경추탈구 후 가슴 근육과 신장을 채취하여 −80°C에서 보관하면서 실험에 사용하였다.
시험용 평판은 Mueller hinton medium (Merck, Germany) 100 mL당 조제된 시험균액 1 mL를 가하여 충분히 희석한 후 petri dish (87×15 mm)에 8 mL씩 분주하여 응고시켜 사용하였고, 스트렙토마이신 감수성 디스크 (10 μg, BBL, USA)를 이용하여 발육 억제대 직경이 20 mm 이상인지 확인하여 시험용 평판 검출능의 적절 여부를 점검하였다.
시험용 평판은 Test agar pH 6.0±0.1 (Merck, Germany) 100 mL 당 시험균액 0.5 mL를 가하여 희석한 후 petri dish (87×15 mm)에 8 mL씩 분주하여 응고 시켜 사용하였다.
육계에 ENR을 권장량인 50 μg/mL와 권장량의 2배인 100 μg/mL를 5일간 연속 음수 투여하여 투약기간과 휴약 기간 시간대별로 조직(근육 및 신장)과 혈액의 잔류 상관관계를 조사하기 위해 HPLC를 이용하여 정밀정량검사 한 결과는 다음과 같다.
육계에서 enrofloxacin을 농도별로(50 μg/mL 및 100μg/mL) 5일 동안 음수투여하여 투여기간(5일)과 휴약기간(12일) 동안 근육, 신장 및 혈액에서 erofloxacin과 대사성 ciprofloxacin 농도를 측정하여 조직과 혈액의 잔류 상관관계를 조사하였다.
이것을 65°C 항온수조에서 30분간 가열 후, 15,000 r/min으로 20분간 원심 분리하여 상층액을 제거한 다음 다시 일정량의 멸균증류수를 가하여 원심분리하는 세척과정을 3회 반복한 후, 멸균증류수로 재 부유시켜 균수가 2×106 CFU/mL이 되도록 하여 시험균액으로 사용하였다.
즉, 시험균으로 Bacillus megaterium ATCC 9885를 사용하였고, agar를 0.5% 추가한 아포조제용 배지(AK ＃2 sporulating agar, BBL, USA) 에 시험균을 37°C에서 18∼24시간 배양 후, 실온에 6일간 방치하여 멸균증류수로 집균하였다.
표준곡선 작성: 퀴놀론계 혼합표준용액을(1 μg/mL) 을 0.4, 0.2, 0.1, 0.05, 0.025, 0.0125 μg/mL가 되도록 희석하여 농도별 표준곡선을 검량하여 각 농도별 면적비를 구한 후, 회귀분석하여 표준곡선을 작성하였다.

대상 데이터

1일령 육계(로스) 300수를 (주)올품 사벌부화장에서 구입하여 각각 150수씩 2개 실험동물사에 입식하였고, 사료(육계용 사료, 대구축협사료공장)와 물은 무제한 공급하면서 사육하였다.
공시약제로 사용한 ENR 제제는 바이엘사의 바이트릴 양계용(ENR 함량: 100 g/L, 음수용)이며, 투여용량은 제품 사용설명서에서 제시하는 권장농도 50 μg/mL와 권장 농도의 2배인 100 μg/mL으로 희석하여 2개의 계군에 각각 18일령부터 5일간 음수로 무제한 공급하였다.
이동상은 증류수(0.4% triethylamine, phosphoric acid 포함): 메탄올 비율이 77:33(v/v)으로 혼합한 용액을 0.45 μm 필터로 여과하여 사용하였다(식품의약품안전평가원, 2013).
이러한 검사가 실제로 적용되기 위해서는 현재 항균제에 대한 잔류기준이 설정되어 있는 근육, 신장 등 조직에서의 약제 잔류량과 혈액에서의 약제 잔류량 비교가 선행되어져야 한다. 이에 본 실험에서는 조직과 혈액의 잔류량 비교를 위한 항균제로 닭에서 질병 치료에 많이 사용되고 있는 enrofloxacin (ENR)을 선택하였다. ENR은 fluoroquinolone계 항균물질로 흡수가 잘되고 다양한 동물의 체액과 조직에 광범위하게 분포하는 약제이다(Posyniak et al, 2002).
즉, 시험균으로는 E. coli ATCC 11303을 사용하였고, 시험균액은 20 mL Nutrient broth (BBL, USA)에 계대 보존한 균주를 직경 1 mm 백금이로 1회 접종하여 30°C에서 16∼18시간 배양한 액을 시험균액으로 사용하였다.
표준품 및 시약: 표준품은 HPLC용 ENR (Fluka, Germany), CIP (Fluka, Germany)를 사용하였으며, 추출과 분석에 사용된 시약은 n-hexane (Merck, Germany), acetonitrile (Merck, Germany), methanol (Merck, Germany), water (Burdick & Jackson, USA), triethylamine (Sigma, USA) 및 phosphoric acid (Merck, Germany)였다.
형광 검출기의 파장은 여기파장 278 nm, 측정파장 455 nm이며, 측정파장분석온도는 35°C, 유속은 1.0 mL/min이었고, 주입량은 50 μL였다.

데이터처리

혈청은 dilution buffer와 1:1로 희석하여 동일한 방법으로 반응시켰다. 결과는 antibiotic detection kit reader 기로 판독하여 QNL test의 ratio를 측정하였으며, 그 측정값이 1 이상일 경우 양성으로 판정하였다.

이론/모형

BmDA 법: 혈청에 대한 간이검사로 축수산물 유해물질 분석법 편람의 방법에 따라 실시하였다(식품의약품안전평가원, 2013). 즉, 시험균으로 Bacillus megaterium ATCC 9885를 사용하였고, agar를 0.
Smart Kit: 면역크로마토그래피법을 이용한 잔류물질검사로 축수산물 유해물질 분석법 편람의 방법에 따라 실시하였다(식품의약품안전평가원, 2013). 근육, 신장 및 혈청 시료에 대하여 Beta-lactam (Bet), Quinolone (QNL), Sulfonamide (SFA), Tetracycline (Tet) 4계열의 항생제 잔류유무를 동시에 검사할 수 있는 Combo 1 kit (BioNet, Korea)를 사용하였으며, 검사법은 제조사의 사용방법에 준하였다.
Smart Kit: 면역크로마토그래피법을 이용한 잔류물질검사로 축수산물 유해물질 분석법 편람의 방법에 따라 실시하였다(식품의약품안전평가원, 2013). 근육, 신장 및 혈청 시료에 대하여 Beta-lactam (Bet), Quinolone (QNL), Sulfonamide (SFA), Tetracycline (Tet) 4계열의 항생제 잔류유무를 동시에 검사할 수 있는 Combo 1 kit (BioNet, Korea)를 사용하였으며, 검사법은 제조사의 사용방법에 준하였다. 즉, 근육과 신장은 퀴놀론계 항균물질 간이검사에서 채취한 각각의 육즙을 12,000 r/min에서 10분간 원심분리한 후 상층액과 dilution buffer를 1:1로 충분히 섞어 kit에 120 μL 점적하여 40°C heating block에서 10분간 반응시켰다.
2 μm nylon syringe filter로 여과하여 사용하였다. 근육과 신장은 축수산물 유해물질 분석법 편람(식품의약품안전평가원, 2013)에 따라 각각 1 g씩을 50 mL 원심튜브에 취하여 2.5% trichloroacetic acid (Lancaster, England) 1 mL를 가하여 10분간 균질화하고 8 mL acetonitrile을 가하여 10분간 혼합한 후, 5,000 r/min에서 20분간 원심 분리하였다. 15 mL 시험관에 상층액을 취하고, 남은 잔사에 다시 5 mL acetonitrile을 가하여 동일한 조건으로 혼합 후 원심 분리하여 상층액을 합하였다.
시료 전처리: 혈청은 Sim 등(2005)의 방법에 따라 700 μL를 취한 후, 동량의 이동상을 가한 다음 80°C에서 5분간 가열한 후 냉각시켜 10,000 r/min에서 10분간 원심 분리하여 상층액을 0.2 μm nylon syringe filter로 여과하여 사용하였다.
퀴놀론계 항균물질 간이검사법: 근육과 신장에 대한 간이검사로 축수산물 유해물질 분석법 편람의 방법에 따라 실시하였다(식품의약품안전평가원, 2013). 즉, 시험균으로는 E.

성능/효과

100 μg/mL 투여 계군의 근육과 신장에서는 이보다 훨씬 빠른 투여 후 3시간 만에 각각 5.280±0.598 μg/g, 5.562±0.858 μg/g로 최고 농도에 도달하였고, 혈청에서는 50 μg/mL 투여계군과 같이 투여 후 48시간에 2.367±0.224 μg/mL로 가장 높게 나타났으며, 잔류농도는 2배 높게 나타났다.
ENR의 투여용량에 따른 잔류양상을 살펴보면 Fig. 1에서와 같이 50 μg/mL과 100 μg/mL을 음수 투여한 후 근육, 신장, 혈청에서의 잔류량은 100 μg/mL 투여 계군이 50 μg/mL 투여 계군보다 투여기간 및 휴약 후 각 시료별로 높게 검출되거나 오랜 기간 동안 잔류되는 경향을 보였다.
검사방법간 비교에서 근육과 신장의 잔류 스크리닝을 위한 E. coli를 이용한 퀴놀론계 항균물질 간이 검사법과 Smart kit를 이용한 간이검사법은 비슷한 잔류농도에서 양성으로 판정되었고, 이때의 잔류농도가 모두 잔류허용기준치보다 같거나 낮은 농도였다. 따라서 E.
검사방법간 비교에서 근육과 신장의 잔류 스크리닝을 위한 E. coli를 이용한 퀴놀론계 항균물질 간이 검사법과 Smart kit를 이용한 간이검사법은 투여 농도 별로 거의 비슷한 잔류농도에서 양성으로 판정되었다. 또한, 두 간이검사법을 이용한 검사결과, 근육과 신장에서 최종 양성으로 판정된 시간이 각각 휴약 후 36∼48시간과 48∼60시간이었으며, 이 시점의 잔류농도는 모두 잔류허용기준치보다 낮은 농도였다.
혈청에서는 현재 잔류허용기준이 설정되지 않은 실정으로 혈액에서의 잔류위반 시기는 비교할 수 없었다. 그러나, BmDA법으로 검사한 결과 두 계군 모두 투여기간에만 양성으로 판정되었고, 휴약 후는 모두 음성이었다. Smart kit에서는 50 μg/mL 투여 계군의 혈청이 휴약 후 36시간까지 양성 판정되었고, 이때의 HPLC 측정값은 0.
그러나, 잔류허용기준이하로 소실되는 기간은 근육에서 두 계군 모두 휴약 후 36시간이었고, 신장에서는 50 μg/mL 투여 계군이 휴약후 24시간이었으며 100 μg/mL 투여 계군이 휴약 후 36시간으로 거의 동일한 경향을 보였다.
동일한 시료에 대해 E. coli를 이용한 퀴놀론계 항균물질 간이검사법과 Smart kit 간이검사법에서의 양성은 계군별로 각각 휴약 후 48시간, 휴약 후 60시간까지 측정되었으며, 이 시점의 HPLC 측정값은 잔류허용기준치 이하로 각각 0.053±0.015 μg/g, 0.072±0.058 μg/g이었다.
두 계군에서 잔류상관관계는 혈액에서의 잔류량에 비해 근육과 신장에서의 잔류량은 각각 평균 2.9∼3.2배, 3.6∼3.8배 더 높은 것으로 나타났다.
coli를 이용한 퀴놀론계 항균물질 간이 검사법과 Smart kit를 이용한 간이검사법은 비슷한 잔류농도에서 양성으로 판정되었고, 이때의 잔류농도가 모두 잔류허용기준치보다 같거나 낮은 농도였다. 따라서 E. coli를 이용한 퀴놀론계 항균물질 간이검사법과 Smart kit를 이용한 간이검사법 모두 닭 조직에서 퀴놀론계 항균물질 잔류 여부를 스크리닝 하는데 유용한 검사법으로 나타났다.
또한, 두 간이검사법을 이용한 검사결과, 근육과 신장에서 최종 양성으로 판정된 시간이 각각 휴약 후 36∼48시간과 48∼60시간이었으며, 이 시점의 잔류농도는 모두 잔류허용기준치보다 낮은 농도였다. 따라서 이 두 가지 간이검사법이 닭의 근육과 신장에서 퀴놀론계물질 잔류 여부를 스크리닝하는데 유용한 검사법으로 나타났다. 이러한 결과는 Scheneider와 Donoghue (2004)가 닭 조직에서 fluoroquinolone의 잔류 여부 검출을 위해 간이검사와 정밀정량검사를 비교한 결과 미생물학적방법을 이용한 간이검사법이 잔류위반 여부를 스크리닝하는데 유용하다는 결과와 일치하였다.
8배 더 높은 것으로 나타났다. 따라서 혈액에서의 잔류량으로 근육과 신장의 잔류량을 예측할 수 있음을 알 수 있었다.
224 μg/mL로 가장 높게 나타났으며, 잔류농도는 2배 높게 나타났다. 또한 실험 기간 전반적으로 용량 의존적으로 투여농도가 높을수록 잔류농도가 높았으며, 잔류소실기간도 다소 길어지는 경향을 보였다.
또한 약물 투여 후 1시간째에 조직과 혈청에서의 잔류 농도는 각각 1.176±0.373∼4.155±0.601 μg/g, 0.420±0.060∼1.164±0.079 μg/mL로 검출되어 Anadón (2001)의 보고와 같이 ENR 경구투여 시 신속하게 체내에 흡수되어 혈액 및 조직에 분포하는 것을 알 수 있었다.
또한, 두 간이검사법을 이용한 검사결과, 근육과 신장에서 최종 양성으로 판정된 시간이 각각 휴약 후 36∼48시간과 48∼60시간이었으며, 이 시점의 잔류농도는 모두 잔류허용기준치보다 낮은 농도였다.
또한, 약물 투여 후 12시간에 근육과 신장에서 각각 3.250±0.696μg/g, 3.182±0.517 μg/g, 혈청에서는 48시간에 1.233±0.160 μg/mL으로 가장 높게 검출되었다.
또한, 혈액으로 Smart kit 간이검사를 실시하여 최종 양성으로 판정된 시간이 50 μg/mL을 투여한 계군에서 휴약 후 36시간이었으며, 이 시점의 근육과 신장 잔류농도는 모두 잔류허용기준치보다 낮았다.
본 연구에서 50 μg/mL을 투여한 계군과 100 μg/mL 을 투여한 계군의 투여 후 부터 휴약 기간 까지 실험전 기간 동안 혈액과 조직간의 잔류량 상관관계는 혈액에 비해 근육이 각각 3.2배, 2.9배, 신장이 각각 3.8배, 3.6배로 높았으며 투여농도에 따른 차이는 거의 없었다.
6배 높았다. 세부적으로 투약기간에는 혈청에 비해 근육과 신장에서의 잔류량이 각각 평균 2.7배, 2.9배 높았고, 휴약 기간에는 혈청에 비해 근육과 신장에서의 잔류량이 각각 평균 3.2배, 5.1배 높은 것으로 나타났다(Table 3).
8배 높은 것으로 나타났다. 세부적으로는 투약기간 중에는 혈청에 비해 근육과 신장에서 잔류량이 각각 평균 2.9배, 3.1배 높았고, 휴약기간에는 혈청에 비해 근육과 신장에서의 잔류량이 각각 평균 3.8배, 5.1배 높은 것으로 나타났다(Table 3).
004 μg/mL이었다. 시료별 잔류량을 비교해보면 일부 시간대를 제외한 대부분의 시료채취 시간에 신장, 근육, 혈청 순으로 높게 나타났으며, 시료간의 잔류량 상관관계를 보면 혈청에서의 잔류량에 비해 근육과 신장에서의 잔류량이 각각 평균 2.9배, 3.6배 높았다. 세부적으로 투약기간에는 혈청에 비해 근육과 신장에서의 잔류량이 각각 평균 2.
002 μg/mL이었다. 시료별 잔류량을 비교해보면 전반적으로 신장, 근육, 혈청 순으로 높았으며, 시료간의 잔류량 상관관계는 혈청에서의 잔류량에 비해 근육과 신장에서의 잔류량이 각각 평균 3.2배, 3.8배 높은 것으로 나타났다. 세부적으로는 투약기간 중에는 혈청에 비해 근육과 신장에서 잔류량이 각각 평균 2.
신장의 HPLC 측정결과 잔류 허용 기준치인 0.3μg/g를 초과 하는 것은 50 μg/mL, 100 μg/mL 투여 계군 각각 휴약 후 12시간, 24시간까지였으며, 이 때 잔류검출농도는 각각 0.453±0.140 μg/g, 0.334±0.051μg/g이었다.
약물 투여 중단 후 12시간에 측정한 잔류량은 근육, 신장, 혈청에서 각각 0.747±0.173 μg/g, 1.139±0.133 μg/g, 0.216±0.023μg/mL 이었으며, 이는 최종 약물 투여 120시간에 비해 신장, 근육, 혈액에서 잔류량이 각각 0.15배, 0.23배, 0.10배로 급격하게 감소하는 경향을 보였다(Table 2).
100 μg/mL을 투여한 계군에서는 휴약 후 24시간에 혈청에 대한 Smart kit 간이검사에서 양성이었 으며, 이 시점은 근육과 신장의 잔류위반 시점과 동일하였다. 이러한 결과로 혈액을 이용한 Smart kit 간이검사가 근육과 신장의 잔류위반을 스크리닝할 수 있는 가능성이 있음을 알 수 있었다.
투여 후 3시간에 신장과 근육에서 각각 5.280±0.598 μg/g, 5.562±0.858 μg/g로 가장 높게 나타났으며, 혈청에서는 48시간에 2.367±0.224μg/mL으로 가장 높게 나타났다.
투여기간의 잔류농도는 혈액에 비해 근육과 신장에서 각각 2.7∼2.9배, 2.9∼3.1배 더 높았고, 휴약기간에는 각각 3.2∼3.8배, 5.1배 더 높아 투여기간에 비해 휴약기간에 잔류량의 비율 차이가 큰 것으로 나타났다.
한편, 휴약 기간 중의 잔류량 추이를 조사한 결과는 Table 2에서와 같이 휴약 후 12시간에 근육, 신장, 혈액에서 잔류량이 각각 0.388±0.092 μg/g, 0.453±0.140 μg/g, 0.083±0.006 μg/mL으로 검출되었고, 이는 최종 약물 투여 120시간에 비해 근육, 신장, 혈청에서 잔류량이 각각 0.15배, 0.17배, 0.10배로 급격히 감소하는 것으로 나타났다.
10배로 급격하게 감소하는 경향을 보였다(Table 2). 휴약 후 36시간부터 근육과 신장에서 각각 잔류 허용기준 이하로 감소하였다. 휴약 후 최종적으로 120시간까지 미량으로 검출되었으며, 그 검출량은 근육과 신장에서 각각 0.
휴약 후 36시간부터 근육에서 잔류허용기준인 0.1 μg/g 이하로 감소하였고, 신장에서는 휴약 후 24시간부터 잔류허용기준인 0.3 μg/g 이하로 감소하였다.
휴약 후 최종적으로 120시간까지 미량으로 검출되었으며, 그 검출량은 근육과 신장에서 각각 0.008±0.007 μg/g, 0.037±0.022μg/g이었다.
휴약 후 최종적으로 96시간까지 미량으로 검출되었고, 그 검출량은 근육과 신장에서 각각 0.003±0.004μg/g, 0.001±0.000 μg/g이었다.

후속연구

이러한 문제점을 해결하기 위한 방편으로 도축 시 방혈단계에서 혈액을 채취하여 농가별로 약물 잔류 스크리닝에 활용한다면, 도체에 손실을 주지 않으면서 시료채취가 용이하여 근육이나 신장을 이용한 검사보다 더 많은 개체를 검사할 수 있게 됨으로 축산물 안전성 확보에 한층 더 기여할 수 있다(Reyes-Herrera et al, 2011). 또한, 농장에서 질병예방 및 치료 목적으로 투약한 약제의 잔류여부를 확인할 때에도 도축장에서 혈액을 이용하여 검사하는 방법을 동일하게 적용하면 잔류위반 농가의 발생을 사전에 예방할 수 있을 것이다.
아울러, 약물의 체내 흡수, 분포, 대사, 배설을 다루어 체내의 약물농도를 양적으로 나타내는 약동학적 측면에서 살펴보면, 본 연구에서 다루었던 fluoroquinolone의 경우 간질내와 혈청내 농도는 낮지만, 세포내 농도는 높은 반면, β-lactam 계 항생제의 경우 간질내와 혈청내 농도는 비슷하나, 세포내 농도에서는 낮은 것으로 보고되어 있어 혈액으로 조직내 잔류를 예측하기 위해서는 앞으로 다른 계열 항생제에 대한 기초 연구가 더 필요하다(Lee와 Shin, 2008; Andes and Crag, 2002).
1배 더 높아 투여기간에 비해 휴약기간에 잔류량의 비율 차이가 큰 것으로 나타났다. 이 결과로 볼 때 혈액으로 조직의 잔류량을 예측할 때에는 휴약기간과 투약기간에 따라 다르게 적용해야 할 것이다. 아울러, 약물의 체내 흡수, 분포, 대사, 배설을 다루어 체내의 약물농도를 양적으로 나타내는 약동학적 측면에서 살펴보면, 본 연구에서 다루었던 fluoroquinolone의 경우 간질내와 혈청내 농도는 낮지만, 세포내 농도는 높은 반면, β-lactam 계 항생제의 경우 간질내와 혈청내 농도는 비슷하나, 세포내 농도에서는 낮은 것으로 보고되어 있어 혈액으로 조직내 잔류를 예측하기 위해서는 앞으로 다른 계열 항생제에 대한 기초 연구가 더 필요하다(Lee와 Shin, 2008; Andes and Crag, 2002).

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	fluoroquinolone은 어떤 성질을 가지고 있으며 무엇으로 사용되어 왔는가?	ENR은 fluoroquinolone계 항균물질로 흡수가 잘되고 다양한 동물의 체액과 조직에 광범위 하게 분포하는 약제이다(Posyniak et al, 2002). 이 fluoroquinolone은 그람음성균, 그람양성균 및 mycoplasma에 강한 항균력을 지니고 있어 사람과 가축의 치료 및 예방에 널리 사용되어 왔다(Seo 등, 2002; Gigosos et al, 2000; Wright et al, 1998). 그러나, 미국에서 식용동물에 fluoroquinolone을 사용하는 것이 사람에서 식중독을 일으키는 Campylobacter의 내성과 관련이 있다는 가능성이 제기되었고(Gupta et al, 2004; Iovine and Blaser, 2004), Collignon (2005)은 가금에 fluoroquinolone 사용이 사람에 사용되는 항균제의 작용에 영향을 줄 수 있는 것으로 보고하였다.
	ENR이란 무엇인가?	이에 본 실험에서는 조직과 혈액의 잔류량 비교를 위한 항균제로 닭에서 질병 치료에 많이 사용되고 있는 enrofloxacin (ENR) 을 선택하였다. ENR은 fluoroquinolone계 항균물질로 흡수가 잘되고 다양한 동물의 체액과 조직에 광범위 하게 분포하는 약제이다(Posyniak et al, 2002). 이 fluoroquinolone은 그람음성균, 그람양성균 및 mycoplasma에 강한 항균력을 지니고 있어 사람과 가축의 치료 및 예방에 널리 사용되어 왔다(Seo 등, 2002; Gigosos et al, 2000; Wright et al, 1998).
	국내 잔류물질검사 방법 중 간이검사법으로는 무엇이 사용되는가?	한편, 우리나라 잔류물질검사 방법은 도축 전 혈액과 뇨에 대해 각각 BmDA법과 TLC법으로 검사하고 있으며, 신장과 근육에 대해서는 미생물학적 검사법으로 간이정성검사를 실시하여 양성인 경우 고속액체크로마토그래피(HPLC) 및 질량분석기(LC/MS/MS) 를 이용하여 정밀정량검사를 실시하고 있다. 이 외에도 간이검사법으로 면역크로마토그래피법을 이용한 Smart kit 등 신속검사킷트를 사용할 수 있도록 규정 되어 있다(식품의약품안전평가원, 2013). 국내 여러 연구자들이 HPLC, LC/MS/MS 등을 이용하여 닭고기나 식용란에 잔류되어 있는 fluoroquinolone에 대해 조사를 하였으나(Koh 등, 2005; Park 등, 2004; Sim 등, 2005; Choi 등, 2007), 정밀정량검사법과 미생물학적 간이검사법 및 면역크로마토그래피법을 동시에 비교한 연구는 거의 없는 실정이다.

참고문헌 (35)

농림수산부. 1989. 수육중잔류물질시험방법 및 허용기준. 고시 89-33호.
농림수산식품부. 2013. 동물용 의약품등 취급규칙. 농림수산식품부령 제332호.
농림축산검역본부. 2013. 2012년도 축산 항생제내성균 감시체계 구축 보고서. pp. 5-30.
서계원. 2000. 계란중 Fluoroquinolne계 합성항균제의 잔류에 관한 연구. 전남대학교 박사학위논문. pp. 65-87.
손성완. 2003. 잔류예방과 수의사의 역할. 대한수의사회지 39: 147-154.

원문보기 상세보기
식품의약품안전처. 2013a. 식육중 잔류물질검사요령. 고시 제2013-135호.
식품의약품안전처. 2013b. 식품의 기준 및 규격. 고시 2013-204호.
식품의약품안전평가원. 2013. 축수산물 유해물질 분석법 편람. pp. 17-50.
Anadon A, Martinez-Larranaga MR, Iturbe J, Martinez MA, Diaz MJ, Frejo MT, Martinez M. 2001. Pharmacokinetics and residues of ciprofloxacin and its metabolites in broiler chickens. Res Vet Sci 71: 101-109.

상세보기
Anderson AD, Nelson JM, Rossiter S, Angulo FJ. 2003. Public health consequences of use of antimicrobial agents in food animals in the United States. Microb Drug Resist 9: 373-379.

상세보기
Andes D, Craig WA. 2002. Animal model pharmacokinetics and pharmacodynamics: a critical review. Int J Antimicrob Agents 19: 261-268.

상세보기
Choi YJ, Yun IR, Nam SY, Park YH, Kim BH, Son SG. 2007. Study on analytical method of fluoroquinolone residues in eggs by LC/MS/MS. Korea J Vet Serv 30: 13-21.
Collignon P. 2005. Fluoroquinolone use in food animals. Emerg Infect Dis 11: 1789-1790.

상세보기
Cox LA Jr. 2006. Enrofloxacin in poultry and human health. Emerg infect Dis 12: 872-873.

상세보기
Craig WA. 2007. Phamacodynamics of antimicrobials: general concepts and applications. pp. 1-19. In: Nightingale CH, Anbrose PG, Drusano GL, Murakawa T(ed.). Antimicrobial pharmacodynamic in theory and clinical practice. 2nd ed. Informa healthcare, New York.
FDA. 2005. Commissioner of Food and Drugs, Docket No. 2000N-1571, Enrofloxacin for Poultry; Final Decision on Withdrawal of New Animal Drug Application Following Formal Evidentiary Public Hearing; Availability. Federal Register Volume 70 Number 146. http://edocket.acess. gpo.gov/2005/05-15224.htm.
Gigosos PG, Revesado PR, Cadahia O, Fenta CA, Vazquez BI, Franco CM, Cepeda A. 2000. Determination of quinolones in animal tissues and eggs by high-performance liqid chromatography with photodiode-array detection. J Chromatogr A 871: 31-36.

상세보기
Gupta A, Nelson JM, Barrett TJ, Tauxe RV, Rossiter SP, Friedman CR, Joyce KW, Smith KE, Jones TF, Hawkins MA, Shiferaw B, Beebe JL, Vugia DJ, Rabatsky-Ehr T, Benson JA, Root TP, Angulo FJ; NARMS Working Group. 2004. Antimcrobial resistance among Campylobacter strains, United States, 1997-2001. Emerg Infect Dis 10: 1102-1109.

상세보기
Granneman GR, Guay DR. 1991. The influence of age on the pharmacokinetics of temafloxacin. Am J Med 91: 71S-75.
Iovine NM, Blaser MJ. 2004. Antibiotics in animal feed and spread of resistant Campyolobacter from poultry to humans. Emerg infect Dis 10: 1158-1159.

상세보기
Kim JM, Jean NS, Kim JW, Jean YH, Lee HS, Kweon CH, Woo SR, Lee HC, Park JM, Kim JH, Rhee JC. 1997. Antimicrobial drug susceptibility and treatment efficacy in mice against Escherichia coli and Salmonella spp isolated from feces of diarrheal animals. Korea J Vet Res 37:389-403.
Knoll U, Glunder G, Kietzmann M. 1999. Comparative study of the plasma pharmacokinetics and tissue concentrations of danofloxacin and enrofloxacin in broiler chickens. J Vet Pharmacol Ther 22: 239-246.

상세보기
Koh BRD, Park SD, Jang MS, Na HM, Kim YH. 2005. Surveys on the residual level of fluoroquinolones in eggs. Korea J Vet Serv 28: 235-243.
Lee DG, Shin HH. 2008. Pharmacokinetics and pharmacodynamics of antibiotics: General concepts and Recent Advances. Infection and Chemotheraphy 40: 140-147.

상세보기
Lee YJ, Cho JK, Kim KS, Tak RB, Kim AR, Kim JW, Im SK, Kim BH. 2005. Fluoroquinolone resistance and gyr A and par C mutations of Escherichia coli isolated from chicken. J Micobiol 43: 391-397.
Lee YJ, Kim YR, Jung SC, Song SW, Kim JH. 2005. Antibiotic resistance pattern of E. coli and Salmonella spp. isolated from chicken feces. Korea J Vet Res 45: 75-83.
Lolo M, Pedreira S, Miranda JM, Vazquez BI, Franco CM, Cepeda A, Fente C. 2006. Effect of cooking in enrofloxacin residues in chicken tissue. Food Addit Contam 23: 988-993.

상세보기
Park EJ, Lim JH, Lee SM. 2004. Determination and Survey of Fluoroquinolones Residue in Chicken Muscle by HPLC with Fluorescence Detector. J Fd Hyg Safety 19: 12-18.
Posyniak A, Zmudzki J, Niedzielska J. 2002. Liquid chromatography analysis of enrofloxacin and ciprofloxacin in chicken blood spotted on filter-paper disks. J Chromatogr B 780: 309-314.

상세보기
Reyes-Herrera I, Schneider MJ, Blore PJ, Donoghue DJ. 2011. The relationship between blood and muscle samples to monitor for residues of the antibiotic enrofloxacin in chickens. Poultry Science 90: 481-485.

상세보기
Schneider MJ, Donoghue DJ. 2004, Comparison of a bioassay and a liquid chromatography-fluorescence-mass spectrometry (n) method for the detection of incurred enrofloxacin residues in chicken tissues. Poult Sci 83: 830-834.

상세보기
Seo KW, Lee JI, Lee CY, Kim ES, Lee JC. 2002. Matrix Solid-Phase Dispersion (MSPD) for the Isolation and Liquid Chromatographic Determination of Fluoroquinolones in Eggs. Korean J Publ Hlth 26: 269-281.

상세보기
Sim ER, Kim MH, Yoo EA, Lee YJ, Chun SY, Moon SP, Hahm YS. 2005. A study on trend of residual in blood and eggs of laying hens after oral administration of quinolones. Korean J Vet Serv 28: 245-251.
Sung MS, Kim JH, Cho JK, Seol SY, Kim KS. 2008. Antimicrobial resistance and transfer of R plasmid of pathogenic Eseherichia coli isolated from poultry in Korea. Korean J Vet Res 48: 275-285.
Wright DH, Herman VK, Konstantinides FN, Rotschafer JC. 1998. Determination of quinolone antibiotics in growth media by reversed-phase high-performance liquid chromotography. J Chromotogr B Biomed Sci Appl 709: 97-104.

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표제어: PCR

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용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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