[논문]Rd와 Rg1 인삼배당체의 B 임파구 증식 및 항체 유도 효과

주인경; 김하얀; 김정현; 쉐자드 오마; 김영식; 한용문

Rd와 Rg1 인삼배당체의 B 임파구 증식 및 항체 유도 효과
Effects of Ginsenosides Rd and Rg1 on Proliferation of B Cells and Antibody Induction 원문보기

약학회지 = Yakhak hoeji, v.57 no.1, 2013년, pp.1 - 7

주인경 (동덕여자대학교 약학대학 면역.미생물학교실) , 김하얀 (동덕여자대학교 약학대학 면역.미생물학교실) , 김정현 (동덕여자대학교 약학대학 면역.미생물학교실) , 쉐자드 오마 (서울대학교 약학대학 천연물연구소) , 김영식 (서울대학교 약학대학 천연물연구소) , 한용문 (동덕여자대학교 약학대학 면역.미생물학교실)

Abstract ▼ AI-Helper

Induction of effective and increased levels of antibody production may be major points in vaccine development. This is especially the case when the antigenic sources are carbohydrates. Thus, in our Lab various types of formulations such as liposomal and conjugate vaccines have been researched. However, the fastidious formulation process and high costs are a problem. For this reason, there is currently a focus on utilizing immunoadjuvants. In this present study, we tested whether ginsenosides Re (a panaxdiol) and Rg1 (a panaxtriol) from Panax ginseng have immunoadjuvant activity against the cell wall of Candida albicans (CACW). The resulting data showed that Rd and Rg1 caused LPS-treated B lymphocytes to be proliferative. Rd had greater proliferation activity than that of Rg1. In the murine model of antibody production, CACW combined with Rd [CACW/Rd/IFA] or Rg1 [CACW/Rg1/IFA] increased the production of antibodies specific to C. albicans when compared to the antibody production by [CACW/IFA]-induction, which was used as a negative control (P<0.05). In the case of [CFA/Rd/IFA], the antibody production was almost twice as that of the CFA. In addition, formulations containing either had a prolonged antibody inducing activity as compared to the CFA formula. In conclusion, Rd and Rg1 have an immunologic activity, and yet Rd can be a better candidate than Rg1 for a new immunoadjuvant.

주제어

AI 본문요약
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문제 정의

면역보조제의 기능은 백신제형 조성에 포함된 성분으로서 면역계 활성을 통해 백신에 함유된 항원에 대한 항체생성 유도성(immunogenicity)을 증진시키는 물질로, 항원의 용량 감소와 부작용을 경감하는 장점이 있다.⁷⁾ 이에 본 연구에서는 동양의학에서 가장 중요하게 여기는 약재 중의 일종인 인삼을 선정하여 면역보조효과를 조사하였다.
이러한 면역보조효과를 좀 더 확신하기 위해서 항원-항체 응집반응 정량방법을 사용하여 검색하였다. 아울러 항체유도성의 지속성 여부도 조사하였다.
이에 본 연구에서는 PD계열 인삼배당체 중에서는 Rd를 선택하고 PT계열 중에서는 Rg1을 선정하여 이 성분들의 면역보조 효과를 조사하였다. 두 인삼배당체는 동일한 핵(moiety)을 공유하지만, 핵의 측쇄에 당을 부착하는 탄소 위치가 다른 점이 큰 차이점 중의 하나이다(Fig.
본 연구실의 기 연구에서 개발한 백신제형들의 제조과정을 재평가 해보면 그 제조과정이 매우 까다로워서 많은 시간과 고가의 비용을 요구한다는 점이 큰 문제였다. 이에 본 연구에서는 이런 단점을 극복하기 위한 새로운 대안책으로 기존의 면역보조제보다 효율성이 높고 제조공정이 손쉬운 면역보조제를 발견하고자 하였다. 이런 연구목적 하에 대상물질을 선정한 바, 본 연구실의 기 연구에서 panaxtriol(PT)의 일종인 인삼배당체 Rg1은 면역조절효과를 통해서 캔디다증에 대해서 세포매개성 면역반응을 우세하게 발현하여 보호효과가 있음이 밝혀진 적이 있다.
현재 본 연구실에서는 본 연구의 결과를 근거로 하여, 두 종류의 인삼성분 중에서 특히 Rd의 항체 생성 보조제로서의 활용 가능성을 조사를 위해서 전신성 캔디다증(Disseminated candidiasis) 동물모델에서 [CACW/Rd/IFA] 백신제형으로 예방된 동물(생쥐)을 C. albicans로 감염시켜서 그 생존율을 조사하는 연구에 집중하고 있다. 현재까지의 실험결과는 매우 고무적이며, 임상에 적용 가능성을 좀 더 높이기 위해서 IFA대신에 인체에 사용이 허용된 Alum을 사용하여 그 효과를 검색할 예정이다.

제안 방법

3일 후 CCK 용액 10 μl씩을 각 well에 투여한 다음 3시간 후에 흡광도를 측정해서 B-임파구의 증식효과를 측정하였다.
Balb/c 생쥐에서 적출한 비장에서 비장세포를 수집하여 LPS로 처리해서 B-임파구를 선정한 후, 다양한 농도의 Rd 또는 Rg1가 B-임파구의 증식(proliferation)에 미치는 영향을 검색하였다. 그 결과, 인삼배당체 Rd의 경우에는 농도 의존적으로 B-임파구를 증식시켰다(Fig.
^3,4,27-30) 이 추출방법을 간략하게 기술하면 다음과 같다. C. albicans CA-1를 GYEP(glucose-yeast extract-peptone) 액체 배지에 분주하여 37^oC incubator에서 24시간 동안 배양한 후, 원심분리법을 이용해 인산염완충용액(DPBS, Sigma, St. Louis, MO, USA)으로 3회 이상 세척하고 DPBS에 다시 부유(suspension)시켰다. 이어서 0.
C. albicans의 세포벽 추출은 본 연구실에서 기 보고한 방법을 사용하였다.^3,4,27-30) 이 추출방법을 간략하게 기술하면 다음과 같다.
면역보조제 효과의 평가는 다음과 같다. CACW와 각 인삼배당체를 혼합한 백신제형[CACW/Rd 또는 Rd/IFA]을 면역 접종한 생쥐그룹의 항체(anti-candidal antibody) 역가를 CACW만 함유한 제형[CACW/IFA]을 접종한 생쥐에서 유도된 항체 역가와 비교하였다. 이 실험을 위해서 제조한 백신제형의 제조법은 다음과 같다.
Ginsenoside Rd와 Rg1은 기 연구에서 사용한 방법에 따라서 HSCCC-ELSD(high spped counter current chromatography coupled with evaporative light scattering detector)을 사용하여 인삼에서 추출 분리하였다.³¹⁾ 이 추출 방법을 요약하면 다음과 같다.
각 백신제형을 생쥐의 복강에 100 μl 용량으로 1차 접종하고(day 0), 21일 후에 2차 접종을 하였다.
³⁵⁾ 그러나 Rg1의 항체에 의한 보호 효과는 조사한 바가 없다. 그래서 본 연구에서 Rg1을 선정하였고, 상대적으로 아직 면역조절에 관한 보고가 전무하면서 panaxdiol(PD)에 속하는 Rd를 선정해서 두 인삼배당체의 면역보조제로서의 효능을 조사하였다.
동물실의 환경은 온도 20±2oC, 습도 50±10%가 유지되도록 하였으며 조명은 12시간 간격으로 주야를 자동으로 조절하였다.
2). 비록 Rd와 Rg1간에 B-임파구의 증식효과에 차이가 있더라도 양쪽 모두 증식효과가 있어서 이 결과를 근거로 하여 탄수화물성 항원인 C. albicans 세포벽(CACW)에 대한 이들 인삼배당체의 항체생성 유도성 증진여부에 따른 면역보조효과를 조사하였다.
상기 기술한 동일한 방법으로 처리한 각 군의 생쥐에서 항체의 생성정도를 검색하기 위해서 추가접종을 한 다음 7일 후(day 28)에 이들 생쥐의 꼬리동맥에서 1차 채혈하여 혈청을 수집하였다. 한편, Rd 또는 Rg1의 면역보조제로서의 항체유도성에 대한 지속성(maintenance) 정도를 조사하기 위해서, 1차 채혈 후 60일째에 이 생쥐들로부터 혈청을 수집해서 항체생성의 정도를 조사하였다.
상기의 면역 보조효과를 확인하기 위해서, 추가 접종 후 7일 째와 60일째 혈청을 수집하여 계대희석 한 다음에 항체의 역가를 항원-항체응집반응으로 측정하였다. 먼저, 상기 ELISA에 사용된 혈청 - 추가접종 7일 후 수집한 혈청 -을 사용하여 응집반응을 검색한 실험결과를 고찰하면, [CACW/Rd/IFA] 또는[CACW/Rg1/IFA]로 면역된 생쥐 군에서 수집한 항체의 역가는 16과 4로, 상호간에 4 배의 차이가 있으며 모두가 음성대조군[CACW/IFA]에서 검색된 항체역가보다 높았다(Table I-A).
05% TBS/Tween 20 용액과 TBS 용액을 이용하여 세척하였다. 여기에 OPD(o-phenylendiamine) 용액을 첨가하고 일정시간(30분)이 경과한 후에 황산을 첨가하여 반응을 정지시키고 microplate reader를 이용해 490 nm에서 흡광도를 측정하여 비교하였다.
또한, 이 응집반응을 이용한 항체역가 평가결과는 ELISA 방법으로 검색한 항체생성 순서와 일치하여 결과의 신빙성을 높여준다. 여기에 추가적으로 항체유도성의 지속성을 평가하기 위해서 추가 접종 후 7일째와 60일째에 수집한 혈청의 항체역가를 비교하였다. 그 결과 Rd와 Rg1의 경우는 동일한 항체유도성이 검색된 반면에 IFA와 CFA의 경우에는 항체생성이 50% 정도 감소하였다(Table I-A & B).
용출용매는 chloroform/methanol/water/isopranol 혼합 용매를 4 : 3 : 2 : 1 비율로 혼합하여 사용하였다. 이 방법으로 모두 8개의 분획물이 수집되었으며, 8개의 분획물 중 Rd와 Rg1은 표준 인삼배당체와 비교하여 검증을 하였고 순도는 HPLCELSD를 사용하여 검색하였다. 검색결과, Rd와 Rg1의 순도는 모두 98% 이상이었다.
^32,33) 생쥐에서 비장(spleen)을 적출한 후 적혈구 용해 완충용액(RBC lysis buffer)을 처리하여 적혈구를 제거한 다음에 비장세포를 수집하였다. 이 비장세포를 RPMI 용액으로 원심분리법을 이용해 2회 더 세척한 다음에 hemocytometer로 세포수효를 측정하였다. 그 후, RPMI complete 용액으로 1×10⁶ cells/well이 되도록 희석하여 96-well flat bottomed plate에 100 μl씩 분주하고, 이 plate를 37^oC-5% CO₂ incubator에서 2시간 방치한 뒤 해당 well에 LPS를 2 μg/well 농도가 되도록 투여하였다.
3M β-mercaptoethanol(2-ME)을 첨가한 후에 실온에서 30분간 방치한 다음에 상등액을 수집하였다. 이 상등액을 투석막(membrane cutoff=12,000 Da)에 넣고 멸균된 탈 이온수를 투석액으로 사용하여 6시간 마다 투석액을 갈아주면서 3일간 투석하였다. 투석이 완료된 다음에 투석막 내부물질을 수집하여 -50^oC 이하에서 동결건조(Eyela FD-1000, Tokyo, Japan)시켰다.
이 실험에서 인삼배당 체를 첨가하지 않은 제형 [CACW/IFA]을 음성대조군으로 사용하였으며, CACW를 CFA (Complete Freund's Adjuvant)와 혼합한 제형 [CACW/CFA]을 양성대조군으로 사용하였다.
인삼배당체 Rd와 Rg1의 면역보조제로서의 가능성을 조사하기위해서 기 연구에서 사용한 방법에 따라^,32-34) 백신을 제형화 하였다. 면역보조제 효과의 평가는 다음과 같다.
³¹⁾ 이 추출 방법을 요약하면 다음과 같다. 즉, 인삼추출액을 HSCCC-ELSD 분리법으로 먼저 정제한 후, Diaion-HP20 컬럼을 사용하여 메탄올과 물의 다양한 비율에 따라 PD와 PT를 각각 분획하고 각 분획물을 HSCCC-ELSD로 정제하였다. 용출용매는 chloroform/methanol/water/isopranol 혼합 용매를 4 : 3 : 2 : 1 비율로 혼합하여 사용하였다.
산출된 결과를 순차적으로 고찰해보면, 우선적으로 두 성분 (Rd와 Rg1) 모두가 B-임파구의 증식을 촉진하였으므로 항체생성을 증진시킬 수 있는 가능성이 검색되었다. 하지만, 실제로 항원에 대한 항체유도성에 대한 보조효과는 알 수가 없기 때문에 시험용항원으로 C. albicans 세포벽(CACW)을 선정하여 이런 효과의 발현유무를 조사하였다. CACW은 거의 탄수화물 성상이어서 단백질성 항원보다 항원성이 떨어지는 점이 있으므로 만약 항체생성의 증진이 있다면 면역보조효과가 더욱 의미가 있을 것으로 사료 된다.
상기 기술한 동일한 방법으로 처리한 각 군의 생쥐에서 항체의 생성정도를 검색하기 위해서 추가접종을 한 다음 7일 후(day 28)에 이들 생쥐의 꼬리동맥에서 1차 채혈하여 혈청을 수집하였다. 한편, Rd 또는 Rg1의 면역보조제로서의 항체유도성에 대한 지속성(maintenance) 정도를 조사하기 위해서, 1차 채혈 후 60일째에 이 생쥐들로부터 혈청을 수집해서 항체생성의 정도를 조사하였다. 항체생성 여부에 대한 검색방법은 먼저¹⁾ ELISA 방법으로 검색하고²⁾ 항원-항체 응집반응(agglutination test) 방법을 사용하였다.
검색결과, Rd와 Rg1의 순도는 모두 98% 이상이었다. 한편, 생물학적 검증법의 일환으로, LAL(Limulus amebocyte lysate) test kit(Sigma)을 사용해서 분리한 Rd와 Rg1 인삼배당체에 내독소(endotoxin)의 혼재 여부를 조사하였다. 조사결과 이들 인삼배당체에는 endotoxin이 혼재 되어있지 않음을 확인하였다(data not shown).
항체를 유리하는 B-임파구의 수효증가는 간접적으로 항체생성의 증진으로 간주될 수 있으므로, B-임파구의 mitogen인 Lipopolysaccharide(LPS; Cat# L2630, Sigma)로 처리한 비장세포(splenocytes)에 각 인삼배당체를 첨가하여 B-임파구의 증식 여부를 검색하였다. 이 효과는 본 연구실의 기 연구에 사용한 방법을 사용하여 측정하였다.
CACW은 거의 탄수화물 성상이어서 단백질성 항원보다 항원성이 떨어지는 점이 있으므로 만약 항체생성의 증진이 있다면 면역보조효과가 더욱 의미가 있을 것으로 사료 된다. 항체생성 유도성을 조사하기 위해서, CACW와 인삼배당체를 혼합하고 여기에 기름(oil)으로만 구성된 IFA를 첨가하여 유화제 형태의 백신제형을 제조하여 생쥐 내에서의 항체생성정도를 측정하였다. 이 실험을 통해서 두 인삼배당체는 모두 면역보조효과가 있음이 확인되었고 그 효능은 Rd(PD 계열)가 Rg1(PT 계열)보다 거의 4배 정도 효능이 월등하였으며 양성대조군에 비해서는 2배가 더 높았다.
혈청원액을 1% BSA를 함유한 DPBS[BSA-DPBS] 로 계대희석한 후 각각의 혈청 10 μl을 지정된 Oring plate의 well에 놓고 여기에 동일한 양의 CACW으로 부착한 beads[이하 CACW-beads]를 첨가하여 고르게 섞은 후에 응집(agglutination) 정도를 검측하였다.

대상 데이터

이 실험에서 인삼배당 체를 첨가하지 않은 제형 [CACW/IFA]을 음성대조군으로 사용하였으며, CACW를 CFA (Complete Freund's Adjuvant)와 혼합한 제형 [CACW/CFA]을 양성대조군으로 사용하였다. IFA와 CFA는 Becton, Dickinson Co., USA에서 구입하였다.
생쥐는 5~6주령의 BALB/c 암컷 생쥐로 중앙실험동물(Central Lab. Animal Inc., Korea)에서 구입한 후, 본 약학대학의 동물실험실 환경에서 1주일 간 적응시킨 후 실험하였다. 사육기간 동안 멸균된 fiter-top cage에 사육하며 멸균된 사료와 물을 자유롭게 먹도록 하였다.
즉, 인삼추출액을 HSCCC-ELSD 분리법으로 먼저 정제한 후, Diaion-HP20 컬럼을 사용하여 메탄올과 물의 다양한 비율에 따라 PD와 PT를 각각 분획하고 각 분획물을 HSCCC-ELSD로 정제하였다. 용출용매는 chloroform/methanol/water/isopranol 혼합 용매를 4 : 3 : 2 : 1 비율로 혼합하여 사용하였다. 이 방법으로 모두 8개의 분획물이 수집되었으며, 8개의 분획물 중 Rd와 Rg1은 표준 인삼배당체와 비교하여 검증을 하였고 순도는 HPLCELSD를 사용하여 검색하였다.
1). 이 인삼배당체 성분들의 면역보조 효과를 검색하기 위해 사용한 항원은 병원성 진균의 일종인 Candida albicans의 세포벽(CACW)을 사용하였다. CACW는 95% 이상이 탄수화물로 조성되어 있으며^,3,27,28) CACW를 C.
이렇게 분말화 된 CACW는 desiccator안에 저장·보관하며 실험에 사용하였다.

데이터처리

각 군간의 유의성 검증은 Student's t-test를 사용하였으며, 만약 평가치(value)가 5% 미만일 때에는 유의성이 있는 것으로 판정하였다.
실험 결과는 평균±표준오차(Mean±S.E.)로 계산하였다.

이론/모형

한편, Rd 또는 Rg1의 면역보조제로서의 항체유도성에 대한 지속성(maintenance) 정도를 조사하기 위해서, 1차 채혈 후 60일째에 이 생쥐들로부터 혈청을 수집해서 항체생성의 정도를 조사하였다. 항체생성 여부에 대한 검색방법은 먼저¹⁾ ELISA 방법으로 검색하고²⁾ 항원-항체 응집반응(agglutination test) 방법을 사용하였다.
혈청원액을 1% BSA를 함유한 DPBS[BSA-DPBS] 로 계대희석한 후 각각의 혈청 10 μl을 지정된 Oring plate의 well에 놓고 여기에 동일한 양의 CACW으로 부착한 beads[이하 CACW-beads]를 첨가하여 고르게 섞은 후에 응집(agglutination) 정도를 검측하였다. CACW-beads는 기 연구에서 사용한 방법에 따라 제조하여 사용하였다.^3,4)
상기 기술한 각종의 백신제형으로 접종한 생쥐에서 수집한 혈청 내의 항 C. albicans 항체(항 캔디다 항체) 정도를 ELISA 방법으로 조사하였다. 조사 결과, 보조제가 없이 생성된 항체를 나타내는 음성대조군- [CACW/IFA] 제형으로 처리된 생쥐군 -의 흡광도 값(value)은 대략 0.
항체를 유리하는 B-임파구의 수효증가는 간접적으로 항체생성의 증진으로 간주될 수 있으므로, B-임파구의 mitogen인 Lipopolysaccharide(LPS; Cat# L2630, Sigma)로 처리한 비장세포(splenocytes)에 각 인삼배당체를 첨가하여 B-임파구의 증식 여부를 검색하였다. 이 효과는 본 연구실의 기 연구에 사용한 방법을 사용하여 측정하였다.^32,33) 생쥐에서 비장(spleen)을 적출한 후 적혈구 용해 완충용액(RBC lysis buffer)을 처리하여 적혈구를 제거한 다음에 비장세포를 수집하였다.
3). 이러한 면역보조효과를 좀 더 확신하기 위해서 항원-항체 응집반응 정량방법을 사용하여 검색하였다. 아울러 항체유도성의 지속성 여부도 조사하였다.
항체생성 여부를 확인하기 위해 본 연구실의 기 연구에서 사용한 ELISA titration 방법을 사용하였다.²⁹⁾ 간략히 기술하면, 96 well-plate의 각 well에 CACW를 5 μg/well의 농도로 코팅한 후, BSA(1%)-DPBS 용액으로 blocking 하여 4^oC에서 하루 동안 방치한 다음에 1/100으로 희석한 혈청을 50 μl/well씩 해당 well에 가한 뒤(1^o antibody)에 37^oC-5% CO₂ incubator에서 1시간 배양 후 0.

성능/효과

^8,9) 여러 종류의 인삼성분 중에서 특히 인삼배당체(ginsenoside)는 다양한 효능이 있는데^,10) 인삼배당체는 화학구조에 따라 크게 protopanaxadiol(PD)와 protopanaxatriol(PT)으로 구분한다.¹¹⁾ 인삼배당체의 주요 약리작용으로는 중추신경계에 대한 작용으로 인지 수행능력의 향상과¹²⁾ 알츠하이머와 파킨슨병과 같은 중추신경 퇴화를 예방하는 경우에도 효과가 있으며^,13) 심혈관계에도 작용하여 부정맥과 고혈압 조절작용과¹⁴⁾ 항산화 작용을 하여 허혈성 심질환에 효과가 있다.¹⁵⁾ 또한, 인삼배당체는 혈소판 응집 억제 작용과 항 혈액응고 효과^,16) 혈당 강하작용^,17,18) 항암 효과^,19,20) 항 피로효과^,21) 항 우울효과²²⁾ 그리고 스트레스 완화 효과^,23,24) 등이 보고된 바 있다.
그 결과 Rd와 Rg1의 경우는 동일한 항체유도성이 검색된 반면에 IFA와 CFA의 경우에는 항체생성이 50% 정도 감소하였다(Table I-A & B).
이 결과를 고찰하면 인삼배당체 Rd는 우수한 면역 보조효과가 있음을 알 수가 있다. 또한, 이 응집반응을 이용한 항체역가 평가결과는 ELISA 방법으로 검색한 항체생성 순서와 일치하여 결과의 신빙성을 높여준다. 여기에 추가적으로 항체유도성의 지속성을 평가하기 위해서 추가 접종 후 7일째와 60일째에 수집한 혈청의 항체역가를 비교하였다.
상기의 면역 보조효과를 확인하기 위해서, 추가 접종 후 7일 째와 60일째 혈청을 수집하여 계대희석 한 다음에 항체의 역가를 항원-항체응집반응으로 측정하였다. 먼저, 상기 ELISA에 사용된 혈청 - 추가접종 7일 후 수집한 혈청 -을 사용하여 응집반응을 검색한 실험결과를 고찰하면, [CACW/Rd/IFA] 또는[CACW/Rg1/IFA]로 면역된 생쥐 군에서 수집한 항체의 역가는 16과 4로, 상호간에 4 배의 차이가 있으며 모두가 음성대조군[CACW/IFA]에서 검색된 항체역가보다 높았다(Table I-A). 실험군과 음성대조군간의 차이는 통계학적으로 유의성이 있는 것으로 판정되었다(P<0.
산출된 결과를 순차적으로 고찰해보면, 우선적으로 두 성분 (Rd와 Rg1) 모두가 B-임파구의 증식을 촉진하였으므로 항체생성을 증진시킬 수 있는 가능성이 검색되었다. 하지만, 실제로 항원에 대한 항체유도성에 대한 보조효과는 알 수가 없기 때문에 시험용항원으로 C.
실험군과 음성대조군간의 차이는 통계학적으로 유의성이 있는 것으로 판정되었다(P<0.05).
그 결과 Rd와 Rg1의 경우는 동일한 항체유도성이 검색된 반면에 IFA와 CFA의 경우에는 항체생성이 50% 정도 감소하였다(Table I-A & B). 이 결과로 항체의 유도성은 적어도 2 개월 이상은 지속성이 있음을 알 수가 있다.
05)(Table I-A). 이 결과를 고찰하면 인삼배당체 Rd는 우수한 면역 보조효과가 있음을 알 수가 있다. 또한, 이 응집반응을 이용한 항체역가 평가결과는 ELISA 방법으로 검색한 항체생성 순서와 일치하여 결과의 신빙성을 높여준다.
항체생성 유도성을 조사하기 위해서, CACW와 인삼배당체를 혼합하고 여기에 기름(oil)으로만 구성된 IFA를 첨가하여 유화제 형태의 백신제형을 제조하여 생쥐 내에서의 항체생성정도를 측정하였다. 이 실험을 통해서 두 인삼배당체는 모두 면역보조효과가 있음이 확인되었고 그 효능은 Rd(PD 계열)가 Rg1(PT 계열)보다 거의 4배 정도 효능이 월등하였으며 양성대조군에 비해서는 2배가 더 높았다. 하지만 Rg1은 비록 항체생성의 유도성이 있다고 할 수 있지만 효능 면에서는 기존의 CFA보조제에 비교해서 큰 의미는 없는 것으로 여겨진다.
albicans 항체(항 캔디다 항체) 정도를 ELISA 방법으로 조사하였다. 조사 결과, 보조제가 없이 생성된 항체를 나타내는 음성대조군- [CACW/IFA] 제형으로 처리된 생쥐군 -의 흡광도 값(value)은 대략 0.016 정도인 반면에 기존의 보조제인 CFA를 사용하여 제형화된 백신[CACW/CFA]으로 면역된 양성대조군에서 수집한 흡광도 값은 거의 0.04에 근접하여, 면역보조제의 유무에 따라 항 캔디다 항체 생성에 차이가 있음을 알 수 있다(Fig. 3). 한편, Rd 또는 Rg1를 함유한 백신제형([CACW/Rd/IFA]와 [CACW/Rg1/IFA])의 경우도 모두 음성대조군의 값보다 높고(P<0.
한편, 생물학적 검증법의 일환으로, LAL(Limulus amebocyte lysate) test kit(Sigma)을 사용해서 분리한 Rd와 Rg1 인삼배당체에 내독소(endotoxin)의 혼재 여부를 조사하였다. 조사결과 이들 인삼배당체에는 endotoxin이 혼재 되어있지 않음을 확인하였다(data not shown).
물론, 이러한 결과만으로 PD가 PT보다 면역보조제로서의 효과가 항상 우위라고 단정할 수는 없다. 하지만 PD 대 PT의 효능비교에서 일반적으로 상반되는 성향을 고려해 볼 때, 본 연구결과를 통해서 적어도 항체 생성의 관점에서 면역보조효과 측면에서는 PD가 PT보다는 더 효율적이라는 추론된다. 향후 더 많은 종류의 인삼배당체를 사용하여 비교 평가하는 연구의 필요성이 있으나, 본 연구의 주된 목적(research scope)은 두 계열 인삼배당체 간의 상호 효능비교가 아니기 때문에 더 이상의 추가연구는 수행하지 않았다.
하지만 [CACW/Rg1/IFA] 제형은 양성대조군에 비해서 항체 유도성이 약한데, 이 결과를 종합해보면, Rd와 Rg1 모두는 면역보조 효과가 있지만, PD 계열의 인삼 배당체인 Rd가 PT 계열의 Rg1 보다 효과가 월등함을 알 수가 있다(P<0.05)(Fig. 3).

후속연구

하지만 PD 대 PT의 효능비교에서 일반적으로 상반되는 성향을 고려해 볼 때, 본 연구결과를 통해서 적어도 항체 생성의 관점에서 면역보조효과 측면에서는 PD가 PT보다는 더 효율적이라는 추론된다. 향후 더 많은 종류의 인삼배당체를 사용하여 비교 평가하는 연구의 필요성이 있으나, 본 연구의 주된 목적(research scope)은 두 계열 인삼배당체 간의 상호 효능비교가 아니기 때문에 더 이상의 추가연구는 수행하지 않았다. 한편, [CACW/Rd/IFA]와 [CACW/Rg1/IFA] 백신제형의 항체생성의 지속성을 비교한 실험결과에서 추가접종 후 60일에도 항체의 역가가 감소하지 않고 지속적으로 유지가 된다는 점은 매우 주목할 만하다.
albicans로 감염시켜서 그 생존율을 조사하는 연구에 집중하고 있다. 현재까지의 실험결과는 매우 고무적이며, 임상에 적용 가능성을 좀 더 높이기 위해서 IFA대신에 인체에 사용이 허용된 Alum을 사용하여 그 효과를 검색할 예정이다.

질의응답

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	탄수화물 항원에 대한 항체생성을 유도 증진하기 위해 사용한 방법은?	그 이유 중의 하나는 대부분의 병원균 표면이 단백질에 비해서 항원성(antigenicity)이 현저히 떨어지는 탄수화물로 구성되어 있기 때문이다.1,2) 본 연구실의 기 연구에서도 탄수화물 항원에 대한 항체생성을 유도 증진하기 위해서 리포솜 백신제형(liposomal vaccine formulae)이나 접합백신제형(conjugate vaccine formulae) 등의 방법을 사용한 바가 있다.3,4) 하지만 이러한 방법은 고 경비를 요하고 제형화 방법이 까다로운 단점이 있다.
	감염성 질환에 대처하기 위한 최선의 방법은 백신을 적용하는 것인데 이에 관한 단점은 무엇인가?	임상에서 감염성 환자들의 치료에는 최우선적으로 항생제가 적용되지만 약물내성과 부작용 때문에 문제가 되고 있다. 이런 관점에서 감염성 질환에 대처하기 위한 최선의 방법은 백신을 적용하는 것이지만, 그 단점은 모든 병원균에 대해서 항체가 항상 유도되는 것은 아니라는 것이다. 그 이유 중의 하나는 대부분의 병원균 표면이 단백질에 비해서 항원성(antigenicity)이 현저히 떨어지는 탄수화물로 구성되어 있기 때문이다.
	백신을 적용할 때, 모든 병원균이 항체가 항상 유도되는 것이 아닌 이유는?	이런 관점에서 감염성 질환에 대처하기 위한 최선의 방법은 백신을 적용하는 것이지만, 그 단점은 모든 병원균에 대해서 항체가 항상 유도되는 것은 아니라는 것이다. 그 이유 중의 하나는 대부분의 병원균 표면이 단백질에 비해서 항원성(antigenicity)이 현저히 떨어지는 탄수화물로 구성되어 있기 때문이다.1,2) 본 연구실의 기 연구에서도 탄수화물 항원에 대한 항체생성을 유도 증진하기 위해서 리포솜 백신제형(liposomal vaccine formulae)이나 접합백신제형(conjugate vaccine formulae) 등의 방법을 사용한 바가 있다.

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저자의 다른 논문 :

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표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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