[국내논문]백서의 경혈(해계, 곤륜, 양보) 침자가 Nitric Oxide Synthase 및 Nitric Oxide의 변화에 미치는 영향 Effects of Acupuncture at ST41, BL60, GB38 on Changes of Nitric Oxide and Nitric Oxide Synthase in Rats원문보기
Objectives : To observe the changes in the expression of nNOS, iNOS, eNOS and NO by the needle insertion on river points, one of the five transport points of three yang meridians of the foot. Methods : Based on rats, needle was inserted on both left and right sides of ST41, BL60 and GB38 and retaine...
Objectives : To observe the changes in the expression of nNOS, iNOS, eNOS and NO by the needle insertion on river points, one of the five transport points of three yang meridians of the foot. Methods : Based on rats, needle was inserted on both left and right sides of ST41, BL60 and GB38 and retained for five minutes. After the retention, blood was drawn via cardiac puncture and tissues from each point around meridian vessels were extracted to observe the changes in the expression of nNOS, iNOS, eNOS and NO. Results : In terms of the effect on expression of nNOS within tissues, ST41 showed significant decrease based on the results of immunohistochemistry. In terms of the effect on expression of iNOS within tissues, none of the experimental groups showed any significant change compared to the Normal group. Regarding expression of eNOS within tissues, GB38 showed significant increase based on the results of immunohistochemistry. In terms of the effect on NO creation in tissues, none of the experimental groups showed any significant change compared to the Normal group. Conclusions : The effect of needle insertion on the river points of three yang meridians of the foot on the function of nNOS, iNOS, eNOS and NO could be observed, and based on this study, it is considered that the effect of needle stimulation on the changes of nervous system could be found out through additional research.
Objectives : To observe the changes in the expression of nNOS, iNOS, eNOS and NO by the needle insertion on river points, one of the five transport points of three yang meridians of the foot. Methods : Based on rats, needle was inserted on both left and right sides of ST41, BL60 and GB38 and retained for five minutes. After the retention, blood was drawn via cardiac puncture and tissues from each point around meridian vessels were extracted to observe the changes in the expression of nNOS, iNOS, eNOS and NO. Results : In terms of the effect on expression of nNOS within tissues, ST41 showed significant decrease based on the results of immunohistochemistry. In terms of the effect on expression of iNOS within tissues, none of the experimental groups showed any significant change compared to the Normal group. Regarding expression of eNOS within tissues, GB38 showed significant increase based on the results of immunohistochemistry. In terms of the effect on NO creation in tissues, none of the experimental groups showed any significant change compared to the Normal group. Conclusions : The effect of needle insertion on the river points of three yang meridians of the foot on the function of nNOS, iNOS, eNOS and NO could be observed, and based on this study, it is considered that the effect of needle stimulation on the changes of nervous system could be found out through additional research.
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문제 정의
본 연구에서는 五輸穴의 經火穴 중에서 足三陽經의 특성을 관찰하고자 하여, 혈위의 작용을 신경전달과 관련된 지표를 통하여 해당 혈위 국소작용에 대하여 관찰하고자 한 바, 조직 내 NO에 있어서는 足三陽經은 증가의 경향을, 조직 내 NOS에 있어는 足三陽經에서 증가의 경향을 나타내어 NO의 결과와 부합하는 결과를 나타냄을 보아 NO를 생성하는 조절계인 NOS에 있어서는 발현을 촉진하는 동일한 경향성을 보인 것으로 사료된다. 이는 Kim 등26)이 보고한 足三陰經에 해당하는 혈위인 SP5, KI7, LR4에 자침을 시행한 침자군이 자침을 시행하지 않은 정상군보다 nNOS, iNOS, eNOS 에서 증가의 경향을 보인 결과와 부합하는 결과를 나타낸 것으로 보아 NOS의 발현 증가는 NO의 생성을 촉진하는 것으로 사료된다.
본 연구에서는 十二經脈의 五輸穴 중 經火穴에 해당하는 足三陽經의 足陽明經의 解谿, 足太陽經의 崑崙, 足少陽經의 陽輔를 선택하였으며, 이 혈위들이 체내 신경전달물질에 영향을 미칠 것으로 가정하고, Kim 등26)의 合穴에 관한 연구를 근거로하여, 해당 경혈의 鍼刺가 NO와 NO를 생성하는 nNOS, iNOS, eNOS에 대하여 六陽經의 足三陽經의 차이를 관찰하고자 하였다.
본 연구에서는 임상에서 치료혈로 다용되는 오수혈중 經火穴의 解谿(ST41), 崑崙(BL60), 陽輔(GB38)의 해당 경혈 국소부위에서 침자가 신경전달 물질과 관련이 있는 NO 및 nNOS, iNOS, eNOS 의 변화에 미치는 영향을 관찰하고자 하였다.
본 연구에서는 침자시행시 해당 혈위의 국소적인 작용이 어떻게 발현되는지에 대하여, NOS 지표를 가지고 관찰하여 보고한 이전의 연구13)에 이어서 經火穴 중 足三陽經을 선택하고, 각 혈위에 침자를 시행하였을 때 국소적인 작용 변화에 대해 관찰하고자 하여, 足陽明經의 解谿, 足太陽經의 崑崙, 足少陽經의 陽輔 혈위에 침자를 시행하였고, nNOS, iNOS, eNOS 및 NO의 발현 변화에 대하여 다음과 같이 관찰하였기에 보고하는 바이다.
제안 방법
12개 경맥의 五輸穴에서 經穴에 해당하는 解谿(ST41), 崑崙(BL60), 陽輔(GB38)에 대하여 인체에 상응하게 취혈하였다.
解谿(ST41), 崑崙(BL60), 陽輔(GB38)에 대한 침자가 해당 혈위의 국소적인 조직 내 NO 및 nNOS, iNOS, eNOS 변화를 관찰하여 다음과 같은 결과를 얻었다.
각 경혈 부위의 조직 내 NO 생성량을 측정하고자 Griess 시약을 사용하여 안정된 마지막 산물인 NO2와 NO3에 대하여 분석하였다. 조직의 단백질 시료 40 μl와 MOPS buffer(50 mM MOPS/1 mM EDTA, pH 7.
각 군들의 해당하는 경혈 부위에서 깊이 2∼10 mm의 조직(1×1 cm)을 적출하였다.
각 실험군은 대조군에 비하여 α=0.05 수준(p＜0.05)에서 유의성을 검정하였다.
경혈 부위의 조직 절편을 2% BSA와 15%의 Goat Serum으로 3시간 동안 반응시킨 후 Rabbit anti-nNOS(Invitrogen, USA), anti-iNOS(Abcam, England), antieNOS(Abcam, England) andtibody를 0.05% Sodium azide와 2% BSA가 함유된 PBS로 희석시켜 조직을 48시간 동안 4℃에서 반응을 시킨 후 50 mM PBS에 세척하였고, biotinylated universal Secondary Antibody (Quick Kit: Vector Laboratories, Burlingame, USA)에 실온에서 10분 동안 반응시켰다. 그리고 50 mM PBS에 세척하고 Streptavidin peroxidase preformed complex(Quick Kit: Vector Laboratories, Burlingame, USA)에 10분 동안 반응시킨 후 다시 50 mM PBS에 세척하고, 조직을 3,3'-diaminobenzidine발색용액(Vector Laboratories, Burlingame, USA)으로 반응시킨 후, 반응이 끝난 후 조직을 PBS로 세척하여 hematoxyline으로 대조 염색 후 슬라이드를 dehydtration한 후에 200배의 광학현미경(Eclipse 80i, Nikon, Japan)으로 관찰하였다.
그리고 50 mM PBS에 세척하고 Streptavidin peroxidase preformed complex(Quick Kit: Vector Laboratories, Burlingame, USA)에 10분 동안 반응시킨 후 다시 50 mM PBS에 세척하고, 조직을 3,3'-diaminobenzidine발색용액(Vector Laboratories, Burlingame, USA)으로 반응시킨 후, 반응이 끝난 후 조직을 PBS로 세척하여 hematoxyline으로 대조 염색 후 슬라이드를 dehydtration한 후에 200배의 광학현미경(Eclipse 80i, Nikon, Japan)으로 관찰하였다.
사육되는 동물은 12 h light–dark cycle의 명암 조절이 되었고, 항온 항습(21±2℃, 40∼60%)이 유지되는 사육실에서 사육되면서 물과 사료는 자유롭게 섭취하도록 하였다.
실험군들은 足陽明胃經의 解谿(ST41, n=5), 足太陽膀胱經의 崑崙(BL60, n=5), 足少陽膽經의 陽輔(GB38, n=5)에 침자를 시행하지 않은 정상군과, 침자를 시행한 침자군으로 분리하였으며, 모든 군들은 사육단계부터 호흡마취과정까지 모두 동일하게 처치되었다.
침자 시술 전에 isoflurane(Choongwae, Korea)과 O2로 혼합된 가스 마취를 시행하였고, 가스 마취로는 3% isoflurane으로 호흡마취를 유도하고, 2% isoflurane으로 마취 상태를 계속 유지 시키고, 자침 깊이는 혈위 부위에 따라 0.2∼0.5 mm으로 하여, 각 경혈 좌우에 직자로 자침하고 5분간 유침하였다.
침자에 사용된 침은 호침(0.25×15 mm, Dongbang, Korea)이며, 실험기간 동안 숙련된 전문가 1인이 계속하여 시술하였다.
모든 측정값은 Excel statistic program(Microsoft, USA)을 이용하여 평균치와 표준오차(mean±standard error)로 표시하였고, 각 실험군 간의 통계학적 분석은 Window용 SPSS(SPSS, USA)를 사용하여 비모수적 방법으로 Mann-Whitney U test를 시행하였다.
성능/효과
1. nNOS의 발현 변화에서 침자를 시행하지 않은 각각의 군에 비해 침자군의 ST41군은 유의한 감소를 보였고, BL60군과 GB38군은 증가의 경향을 보였다.
2. iNOS의 발현 변화에서 침자를 시행하지 않은 각각의 군에 비해 침자군의 ST41군은 증가의 경향을 보였고, BL60군과 GB38군은 감소의 경향을 보였다.
3. eNOS의 발현 변화에서 침자를 시행하지 않은 각각의 군에 비해 침자군의 GB38군은 유의한 증가를 보였고, ST41군과 BL60군은 증가의 경향을 보였다.
4. 조직내 NO의 발현에서 침자를 시행하지 않은 각각의 군에 비해 침자군의 ST41군, BL60군과 GB38군은 증가의 경향을 보였다.
解谿(ST41), 崑崙(BL60), 陽輔(GB38)에 대한 침자가 경혈 조직 내 NO 생성 변화를 관찰한 결과, 침자를 시행하지 않은 정상군의 ST41군은 0.24±0.06 μM, BL60군은 0.21±0.05 μM, GB38군은 0.20±0.05 μM를 나타내었으며, 침자를 시행한 침자군의 ST 41군은 0.36±0.09 μM, BL60군은 0.61±0.30 μM, GB38군은 0.27±0.06 μM를 나타내었다.
解谿(ST41), 崑崙(BL60), 陽輔(GB38)에 대한 침자가 경혈 조직 내 eNOS 발현 변화를 immunohistochemistry로 관찰한 결과, 침자를 시행하지 않은 정상군의 ST41군은 98.4±9.35(number), BL 60군은 32.6±9.3, GB38군은 42.0±7.65를 나타내었으며, 침자를 시행한 침자군의 ST41군은 107.0±3.20, BL60군은 45.6±8.25, GB38군은 83.8± 6.32를 나타내었다.
解谿(ST41), 崑崙(BL60), 陽輔(GB38)에 대한 침자가 경혈 조직 내 iNOS 발현 변화를 immunohistochemistry로 관찰한 결과, 침자를 시행하지 않은 정상군의 ST41군은 94.6±8.61(number), BL60군은 37.6±5.5, GB38군은 45.2±6.7를 나타내었으며, 침자를 시행한 침자군의 ST41군은 97.4±8.45, BL60군은 29.6±6.05, GB38군은 38.4±3.40를 나타내었다.
解谿(ST41), 崑崙(BL60), 陽輔(GB38)에 대한 침자가 경혈 조직 내 nNOS 발현 변화를 immunohistochemistry로 관찰한 결과, 침자를 시행하지 않은 정상군의 ST41 군은 109.0±10.3(number), BL60군은 55.8±14.7, GB38군은 42.2±15.32를 나타내었으며, 침자를 시행한 침자군의 ST41군은 78.0±4.50, BL60군은 57.8±14.23, GB38군은 45.8±10.54를 나타내었다.
32를 나타내었다. 각 부위별로 침자를 시행하지 않은 정상군과 침자를 시행한 침자군을 비교해 보았을 때, 정상군의 GB38 부위는 유의한 증가를 보였으며, ST41군과 BL60군은 증가의 경향을 보였다(Fig. 5, 6).
06 μM를 나타내었다. 각 부위별로 침자를 시행하지 않은 정상군과 침자를 시행한 침자군을 비교해 보았을 때, 침자군의 ST41군, BL60군과 GB38군은 증가의 경향을 보였다(Fig. 7).
54를 나타내었다. 각 부위별로 침자를 시행하지 않은 정상군과 침자를 시행한 침자군을 비교해 보았을 때, 침자군의 ST41군은 유의한 감소를(p＜0.05) 보였으며, BL60군과 GB38군은 증가의 경향을 보였다(Fig. 1, 2).
40를 나타내었다. 각 부위별로 침자를 시행하지 않은 정상군과 침자를 시행한 침자군을 비교해 보았을 때, 침자군의 ST41군은 증가의 경향을, BL60군과 GB38군은 감소의 경향을 보였다(Fig. 3, 4).
본 연구에서 조직 내 NO의 변화에 있어서는 유의한 변화가 관찰되지는 않았으나 ST41군, BL60군, GB38군이 증가의 경향을 보였는데, 이는 足三陽經 자극이 기능 발현을 촉진하는 작용이 나타난 것으로 사료된다. 이를 바탕으로 NO를 생성하는 nNOS, iNOS, eNOS를 관찰하여, 足三陽經에서 NO의 양이 모두 증가의 경향을 보였는데, ST41군에서는 iNOS, eNOS가 유의한 증가를, BL60군에서는 iNOS가 유의한 증가를, GB38군에서는 nNOS, eNOS가 유의한 증가를 나타난 것으로 보아 nNOS, iNOS, eNOS의 변화가 NO의 생성에 영향을 미치는 것으로 사료된다.
본 연구에서 조직 내 NO의 변화에 있어서는 유의한 변화가 관찰되지는 않았으나 ST41군, BL60군, GB38군이 증가의 경향을 보였는데, 이는 足三陽經 자극이 기능 발현을 촉진하는 작용이 나타난 것으로 사료된다. 이를 바탕으로 NO를 생성하는 nNOS, iNOS, eNOS를 관찰하여, 足三陽經에서 NO의 양이 모두 증가의 경향을 보였는데, ST41군에서는 iNOS, eNOS가 유의한 증가를, BL60군에서는 iNOS가 유의한 증가를, GB38군에서는 nNOS, eNOS가 유의한 증가를 나타난 것으로 보아 nNOS, iNOS, eNOS의 변화가 NO의 생성에 영향을 미치는 것으로 사료된다.
후속연구
이상의 결과로 보아 五輸穴의 특성을 관찰하기 위한 시도로서 五輸穴 중 經火穴 鍼刺의 작용을 국소 부위 NO, nNOS, iNOS, eNOS 통하여 관찰한 바, 신경전달계에 미치는 국소적인 작용 발현이 발휘됨을 보여주었으나 추후 좀 더 구체적인 연구가 필요하리라고 사료된다.
질의응답
핵심어
질문
논문에서 추출한 답변
解谿(ST41), 崑崙(BL60), 陽輔(GB38)에 대한 침자가 해당 혈위의 국소적인 조직 내 NO 및 nNOS, iNOS, eNOS 변화를 관찰하여 얻은 결과는?
1. nNOS의 발현 변화에서 침자를 시행하지 않은 각각의 군에 비해 침자군의 ST41군은 유의한 감소를 보였고, BL60군과 GB38군은 증가의 경향을 보였다.
2. iNOS의 발현 변화에서 침자를 시행하지 않은 각각의 군에 비해 침자군의 ST41군은 증가의 경향을 보였고, BL60군과 GB38군은 감소의 경향을 보였다.
3. eNOS의 발현 변화에서 침자를 시행하지 않은 각각의 군에 비해 침자군의 GB38군은 유의한 증가를 보였고, ST41군과 BL60군은 증가의 경향을 보였다.
4. 조직내 NO의 발현에서 침자를 시행하지 않은 각각의 군에 비해 침자군의 ST41군, BL60군과 GB38군은 증가의 경향을 보였다.
經絡이란?
經絡은 인체 내부에서는 五臟六腑를 외부에서는 皮膚와 肢節을 연결하는 氣血運行의 통로가 되며, 인체의 생리활동 및 병리변화에 대하여 연구하는 한의학 기본 이론 중의 하나이다1,2).
五輸穴은 어떤 특성을 보이는가?
五輸穴은 十二經의 肘膝關節 아래에 분포하는 특정 穴位인 井ㆍ滎ㆍ兪ㆍ經ㆍ合으로, 五行의 相生相克의 원리를 바탕으로 虛實을 補瀉하여 각각에 해당하는 소속 臟腑 또는 연계 臟腑의 기능 조절에 영향을 미치게 되는데2), 五輸穴 중 經穴은 손목과 발목의 관절 부위 및 팔뚝과 정강이 부위에 주로 분포하고 있다2). 『難經ㆍ六十八難』에서 “井主心下滿, 滎主身熱, 兪主體重切痛, 經主喘咳寒熱, 合主逆氣而泄”3)이라 표현하였듯이 經穴은 임상에서 咳嗽, 喘息, 感冒, 寒熱 및 咽喉部 등의 病證에 많이 활용 되는데2), 經穴 중 足三陽經의 主治는 足陽明經은 胃와 腸 疾患 頭面 및 咽喉 疾患 등에, 足太陽經은 膀胱과 腎 및 泌尿․生殖系, 神經精神 疾患, 寒熱不調 등에, 足少陽經은 膽, 肝 및 胸部脇 疾患, 熱性 疾患 등이 있다4).
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