The aim of this study was to evaluate the shelf-life of Bojungikgi-tang (Buzhongyiqi-tang in Chinese) by long-term storage test. Experiments were performed to evaluate the stability such as the selected physicochemical, pH, identification, heavy metal, microbiological experiment, and amount of marke...
The aim of this study was to evaluate the shelf-life of Bojungikgi-tang (Buzhongyiqi-tang in Chinese) by long-term storage test. Experiments were performed to evaluate the stability such as the selected physicochemical, pH, identification, heavy metal, microbiological experiment, and amount of marker compounds under a long-term storage test of Bojungikgi-tang decoction. The significant change was not showed in pH, heavy metal, microbiological, and identification test based on long-term storage test. Furthermore, the HPLC analysis was performed for the determinations of liquiritin, glycyrrhizin, nodakenin, and hesperidin in Bojungikgi-tang by long-term storage test. We were calculated shelf-life of Bojungikgi-tang decoction based on the amount change of four constituents. Consequently, Shelf-life by four compounds at room temperature was predicted 23 month. The suggested shelf-life would be helpful on the storage and distribution of herbal medicine.
The aim of this study was to evaluate the shelf-life of Bojungikgi-tang (Buzhongyiqi-tang in Chinese) by long-term storage test. Experiments were performed to evaluate the stability such as the selected physicochemical, pH, identification, heavy metal, microbiological experiment, and amount of marker compounds under a long-term storage test of Bojungikgi-tang decoction. The significant change was not showed in pH, heavy metal, microbiological, and identification test based on long-term storage test. Furthermore, the HPLC analysis was performed for the determinations of liquiritin, glycyrrhizin, nodakenin, and hesperidin in Bojungikgi-tang by long-term storage test. We were calculated shelf-life of Bojungikgi-tang decoction based on the amount change of four constituents. Consequently, Shelf-life by four compounds at room temperature was predicted 23 month. The suggested shelf-life would be helpful on the storage and distribution of herbal medicine.
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문제 정의
탕제는 서늘한 곳에 보관하도록 복약 지도하고 있는 실정이나 탕액 파우치의 보관 기간에 대한 과학적인 근거는 설정되어 있지 않다. 따라서 본 연구는 식품의약품안전처가 의약품 유통기간 기준 평가 시에 요구되는 장기보존시험에 따라 보중익기탕 탕액의 전탕팩에 대한 연구를 수행하였다.
이와 같이 한방의료기관에서 처방하는 다빈도 처방15) 중 하나인 보중익기탕에 대하여 식품의약품안전처에서 제시하고 있는 장기보존시험을 근거로 보중익기탕 내용 액제에 대하여 성상, 확인시험, pH, 비중, 중금속, 미생물 및 함량시험 등과 같은 물리 · 화학적 시험을 실시하여 품질 안정성에 미치는 영향을 평가하고 사용기간을 설정에 대한 기초자료를 제공하고자 한다.
제안 방법
(1) 감초 − 감초 대조생약 가루 약 1.0 g에 메탄올 100 mL를 넣고 1시간 환류 추출하였다.
(2) 당귀, 백출, 승마 및 인삼 − 4종 생약의 대조생약 가루약 1.0 g에 메탄올 100 mL를 넣고 1시간 환류 추출하였다.
(3) 시호 − 시호 대조생약 가루 1.0 g에 메탄올 50 mL를 넣고 1시간 환류 추출하였다.
전탕팩은 3개의 lot로 나누어 전탕하였으며 상대습도 60±5%, 보관 온도 25±2℃ 및 차광하여 보관하였다. 보관기간별 전탕팩의 분석은 0, 3, 6, 9 및 12개월마다 측정항목을 분석하였다.
보중익기탕 전탕팩의 성상, 확인시험, pH, 비중, 중금속및 미생물 시험 등에 대하여 12개월 동안 장기보존시험을 통한 안정성 시험을 실시하고, 보중익기탕의 구성 생약의 주요성분에 대한 함량의 변화를 분석함으로써 보중익기탕전탕팩의 유통기한을 예측하였다. 그 결과 90% 함량기준으로 23개월의 유통기한이 예측되었다.
보중익기탕의 구성 생약 중 감초의 주요성분인 liquiritin과 glycyrrhizin, 당귀의 nodakenin 및 진피의 hesperidin 함량을 Agilent 1200 series HPLC(Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA)를 사용하여 분석하였다.
본 처방을 구성하는 생약 중 감초, 당귀 및 진피의 주요 성분인 liquiritin, glycyrrhizin, nodakenin 및 hesperidin 등 4종 성분의 함량 변화를 바탕으로 6개월 가속시험에 의한 주요 성분들의 유의적인 변화가 없다고 가정한 후 의약품등의 안정성 시험 기준18)의 선형회귀분석을 이용하여 전탕팩의 유통기한을 예측하였다. 최초 0개월째 함량 시험 결과를 100%로 하여 진행하였으며 초기 농도 대비 90.
유통기한 산정을 위해 보중익기탕 전탕액 중 liquiritin, glycyrrhizin, nodakenin 및 hesperidin의 함량 변화를 이용하여 의약품등의 안정성 시험 기준18)에 따라 유통기한을 예측하였다.
이 약을 가지고 식약청고시 “의약품 등의 미생물한도기준 및 시험방법”17)에 따라 시험하였으며, 세균수, 진균 수, 대장균, 녹농균, 황색포도구균 및 살모넬라균에 대하여 미생물 시험을 실시하였다.
장기보존시험 동안 보중익기탕의 구성 생약인감초, 당귀, 백출, 승마, 시호, 인삼, 진피 및 황기의 대조생약과 보중익기탕 전탕액을 대상으로 TLC에 의한 확인시험을 실시하였다. 확인시험 결과 Rf 값 0.
전탕팩은 3개의 lot로 나누어 전탕하였으며 상대습도 60±5%, 보관 온도 25±2℃ 및 차광하여 보관하였다.
조제된 대조생약과 검액을 각각 20 µL씩 실리카겔 GF254에 점적하여 Table II의 조건으로 각각 10 cm 전개한 후 주요 반점의 Rf 값과 색상을 비교하였다.
조제된 보중익기탕 전탕액에 대하여 pH meter를 이용하여 장기보존시험에 대한 시료의 pH를 측정하였다.
조제된 보중익기탕 전탕액에 대하여 보관기간에 따라 육안으로 관찰하였다.
진피의 주요 성분인 hesperidin의 함량을 분석하고자 Table III의 조건을 이용하여 기울기용리(0분, 5% B; 0-40분, 5-65% B; 40-41분, 65-100% B; 41-48분, 100% B; 48-49분, 100-5% B; 49-60분, 5% B)로 분석하였다.
의 선형회귀분석을 이용하여 전탕팩의 유통기한을 예측하였다. 최초 0개월째 함량 시험 결과를 100%로 하여 진행하였으며 초기 농도 대비 90.0%, 80.0% 및 70.0% 수준으로 함량 기준을 설정하여 유통기한을 예측하였다. 총 12개월의 장기보존시험 기간의 시험결과를 이용하여 선형회귀분석법에 의해 95% 신뢰한계로 하한의 단측검정을 수행하여 사용기간 등을 외삽하고, 3 lot 시험하여 외삽한 결과, 유통기한은 90.
함량시험은 Agilent 1200 series HPLC(Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA)를 사용하여 측정하였으며, 전탕팩 보관을 위한 항온항습기는 SH-CTH288(Samheung Instrument, Korea)을 사용하였다. 분광광도계와 초음파추출기는 각각 X-ma 2000(Human Co.
대상 데이터
(Osaka, Japan)와 Biopurify Phytochemicals Ltd.(Chengdu, China)로부터 각각 구입하였다. 이들 표준물질의 순도는 HPLC 분석에 의해 98%이상으로 확인되었다.
- 본 실험에 사용된 보중익기탕의 구성 한약재인 감초(Glycyrrhizae Radix et Rhizoma), 당귀(Angelicae Gigantis Radix, Yeongcheon, Korea), 백출(Atractylodis Rhizoma Alba), 승마(Cimicifugae Rhizoma), 시호(Bupleuri Radix), 인삼(Ginseng Radix Alba), 진피(Citri Unshii Pericarpium) 및 황기(Astragali Radix, Jeongseon, Korea)는 광명당제약(Ulsan, Korea)에서 구입하였다. 각각의 구성 한약재들의 표본(2012-KE12-1~2012-KE12-8)은 한국한의학연구원 한약방제연구그룹에 보관하였다.
Baker (Phillipsburg, NJ, USA)로부터 구입하였다. Water는 MR-RU1690(Mirae Science Co., Korea)을 이용하여 여과하여 사용하였으며, 그 외의 시약은 HPLC 또는 특급시약을 구입하여 사용하였다.
함량시험은 Agilent 1200 series HPLC(Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA)를 사용하여 측정하였으며, 전탕팩 보관을 위한 항온항습기는 SH-CTH288(Samheung Instrument, Korea)을 사용하였다. 분광광도계와 초음파추출기는 각각 X-ma 2000(Human Co., Korea)과 8510R-DTH(Branson, Danbury, CT, USA)를 사용하였으며, 건조기는 J-300M(JISICO, Korea), pH meter는 Orion 3 star(Thermo, San Jose, CA, USA)를 사용하였다. 보중익기탕의 전탕 및 포장은 초고속 진공 저온 농축 추출기(Cosmos 660, Kyungseo machine, Korea)와 자유조절 롤 포장기(MH 205 Tower, Kyungseo machine, Korea)를 사용하였다.
포장지는 레토르트 포장지로 포장지 밖은 폴리에틸렌 재질, 중간막은 알루미늄 및 안은 폴리프로필렌 재질로 이루어져 있다. 추출 및 정량분석에 사용된 methanol과 acetonitrile은 HPLC grade용으로 J. T. Baker (Phillipsburg, NJ, USA)로부터 구입하였다. Water는 MR-RU1690(Mirae Science Co.
이론/모형
보중익기탕 전탕액 1.0 mL를 달아 대한약전 일반시험법16) 중금속시험법 중 제 3 법에 따라 조작하여 시험하였으며, 비교액에는 납표준액 3.0 mL를 넣어 시험하였다.
조제된 보중익기탕 전탕액을 이용하여 대한약전 일반시험법16)의 비중 및 밀도측정법 제 3 법 부칭에 의한 시험법에 따라 비중 시험을 하였다.
성능/효과
HPLC를 이용한 12개월간 실온보관에 따른 장기보존시험에서 한약처방 중 liquiritin, glycyrrhizin, nodakenin 및 hesperidin의 함량을 분석한 결과 67.6–71.1 µg/mL, 93.9–97.1 µg/mL, 51.6–54.1 µg/mL 및 49.9–51.8 µg/mL로 각각 나타났다(Fig. 3 및 Table VII).
보중익기탕 전탕팩의 성상, 확인시험, pH, 비중, 중금속및 미생물 시험 등에 대하여 12개월 동안 장기보존시험을 통한 안정성 시험을 실시하고, 보중익기탕의 구성 생약의 주요성분에 대한 함량의 변화를 분석함으로써 보중익기탕전탕팩의 유통기한을 예측하였다. 그 결과 90% 함량기준으로 23개월의 유통기한이 예측되었다. 이러한 결과는 보중익기탕 전탕팩의 유통기한 설정을 위한 기초 자료로 이용될 수 있을 것으로 사료된다.
보중익기탕 전탕액을 대한약전 일반시험법16)의 중금속시험법 중 제 3법에 따라 장기보존시험 한 결과 모든 측정 기간에서 총중금속이 대한약전 기준치인 30 mg/kg 이하에 적합하였다.
본 처방의 장기보존시험에 따른 pH를 측정한 결과 lot별로 5.71–5.72, 5.54–5.55 및 5.40–5.41로 각각 나타났으며(Table IV), 보관기간이 지남에 따라 pH 변화는 관찰되지 않았다.
식약청고시 “의약품 등의 미생물한도기준 및 시험방법”17) 기준에 따라 최초 0개월 시점의 보중익기탕 전탕액 시료 10 mL을 이용하여 세균수 및 진균수와 같은 총호기성세균과 대장균, 살모넬라, 녹농균 및 황색포도상구균과 같은 특정 세균에 대하여 미생물 실험 결과 세균과 진균은 모두 0 CFU/mL로 나타났으며, 특정세균에 대하여는 모두 검출되지 않았다.
보중익기탕 전탕액의 최초 조제시 성상은 투명한 파우치에 든 황갈색의 액제였다. 이 후 장기보존시험 분석에 따라 3, 6, 9 및 12개월 시점의 전탕액 성상을 확인한 결과 황갈색의 액제로서 별다른 변화 없이 유지되었다.
이러한 TLC에 의한 확인시험은 최초 0개월에서부터 3, 6, 9 및 12개월 시점에서 각각 확인한 결과 모두 동일한 Rf 값과 같은 색의 반점을 확인하였다. 이상의 TLC 결과로 보중익기탕을 구성하는 8종의 생약은 감초, 당귀, 백출, 승마, 시호, 인삼, 진피 및 황기로부터 유래된 것임을 알 수 있다.
기준에 따라 최초 0개월 시점의 보중익기탕 전탕액 시료 10 mL을 이용하여 세균수 및 진균수와 같은 총호기성세균과 대장균, 살모넬라, 녹농균 및 황색포도상구균과 같은 특정 세균에 대하여 미생물 실험 결과 세균과 진균은 모두 0 CFU/mL로 나타났으며, 특정세균에 대하여는 모두 검출되지 않았다. 이후 3, 6, 9 및 12개월 시점에서도 미생물 시험 결과 모두 적합하였다(Table VI).
조제된 보중익기탕 전탕액을 이용하여 대한약전 일반시험법16)의 비중 및 밀도측정법 제 3 법 부칭에 의한 시험법에 따라 비중 시험한 결과 1.010–1.013 g/mL로 나타났다(Table V).
0% 수준으로 함량 기준을 설정하여 유통기한을 예측하였다. 총 12개월의 장기보존시험 기간의 시험결과를 이용하여 선형회귀분석법에 의해 95% 신뢰한계로 하한의 단측검정을 수행하여 사용기간 등을 외삽하고, 3 lot 시험하여 외삽한 결과, 유통기한은 90.0%, 80.0% 및 70.0% 함량 기준시 23개월, 45개월 및 67개월로 나타났다(Fig. 4 및 Table VIII). 이상의 유통기한 설정 결과는 단순히 이화학적 결과 즉, 보중익기탕 전탕액의 주요 성분인 liquiritin, glycyrrhizin, nodakenin 및 hesperidin의 함량 변화에 따라 유통기한이 계산된 것으로 보다 정확한 유통기한 설정을 위해서는 다른 약리학적 효능 비교가 병행되어야 할 것이다.
장기보존시험 동안 보중익기탕의 구성 생약인감초, 당귀, 백출, 승마, 시호, 인삼, 진피 및 황기의 대조생약과 보중익기탕 전탕액을 대상으로 TLC에 의한 확인시험을 실시하였다. 확인시험 결과 Rf 값 0.3에서 감초의 대조생약에서 나타나는 황색의 반점을 확인하였으며, Rf 값 0.6과 0.4에서 당귀와 황기의 적색과 자색의 반점을 각각 확인하였다. 또한 Rf 값 0.
후속연구
그 결과 90% 함량기준으로 23개월의 유통기한이 예측되었다. 이러한 결과는 보중익기탕 전탕팩의 유통기한 설정을 위한 기초 자료로 이용될 수 있을 것으로 사료된다.
4 및 Table VIII). 이상의 유통기한 설정 결과는 단순히 이화학적 결과 즉, 보중익기탕 전탕액의 주요 성분인 liquiritin, glycyrrhizin, nodakenin 및 hesperidin의 함량 변화에 따라 유통기한이 계산된 것으로 보다 정확한 유통기한 설정을 위해서는 다른 약리학적 효능 비교가 병행되어야 할 것이다.
질의응답
핵심어
질문
논문에서 추출한 답변
보중익기탕은 어디에 수록된 처방인가?
보중익기탕은 金元代 李 의 「脾胃論·飮食勞倦所傷始爲熱中論」에 수록된 처방으로 脾를 보양하고 아래로 쳐진 脾氣를 일으키는 補中益氣와 양기를 끌어올리는 升陽擧陷하는 효능이 있다.1) 또한 脾胃의 氣가 虛하고 中氣가 下陷되어 나타나는 諸證을 치료하는 처방으로 황기, 감초, 인삼, 당귀, 진피, 승마, 시호 및 백출 등 8가지 약재로 구성되어 있다.
보중익기탕의 효능은?
보중익기탕은 金元代 李 의 「脾胃論·飮食勞倦所傷始爲熱中論」에 수록된 처방으로 脾를 보양하고 아래로 쳐진 脾氣를 일으키는 補中益氣와 양기를 끌어올리는 升陽擧陷하는 효능이 있다.1) 또한 脾胃의 氣가 虛하고 中氣가 下陷되어 나타나는 諸證을 치료하는 처방으로 황기, 감초, 인삼, 당귀, 진피, 승마, 시호 및 백출 등 8가지 약재로 구성되어 있다.
보중익기탕의 약재는?
보중익기탕은 金元代 李 의 「脾胃論·飮食勞倦所傷始爲熱中論」에 수록된 처방으로 脾를 보양하고 아래로 쳐진 脾氣를 일으키는 補中益氣와 양기를 끌어올리는 升陽擧陷하는 효능이 있다.1) 또한 脾胃의 氣가 虛하고 中氣가 下陷되어 나타나는 諸證을 치료하는 처방으로 황기, 감초, 인삼, 당귀, 진피, 승마, 시호 및 백출 등 8가지 약재로 구성되어 있다.2,3) 보중익기탕의 생리활성 효능 연구는 면역증강,4,5) 항알레르기,6,7) 항염증,8,9) 항암10) 및 항산화11) 효과와 단회 투여 독성에 따른 안전성 연구12,13) 등이 보고되었다.
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