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문제 정의
- 이러한 탕제를 파우치에 넣어 환자에게 공급할 때, 보통 2~4주를 유통기간으로 정하여 서늘한 곳에 보관하도록 복약지도하고 있지만 탕액 파우치 제형의 보관 기간에 대한 과학적인 근거는 설정 되어 있지 않다. 따라서 본 연구는 식품의약품안전청이 의약품 유통기간 기준 평가 시에 요구되는 실험에 따라, 雙和 湯 탕액의 전탕팩에 대한 연구를 수행하였다.
- 이와 같이 주로 보약으로 처방되는 雙和湯에 대하여 식품 의약품안전청에서 제시하고 있는 장기보존시험을 근거로 雙和湯 전탕액의 성상, 확인시험, pH, 비중, 중금속, 미생물 및함량시험 등과 같은 물리·화학적 시험을 실시하고 이에 대한 전탕팩의 유통기한 설정에 대한 기초자료를 제공하고자 한다.
제안 방법
- (2) 당귀 및 천궁 − 당귀 가루 약 1.0 g과 천궁 가루 1.0 g에 각각 메탄올 100 mL를 넣고 1시간 환류 추출하였다.
- pH − 조제된 쌍화탕 전탕액을 이용하여 pH meter를 이용하여 장기보존시험에 대한 시료의 pH를 측정하였다.
- 쌍화탕액의 정량법은 작약과 감초의 주요 성분인 paeoniflorin 과 glycyrrhizin을 대상으로 하고 있다. 그러나 본 연구에서는 paeoniflorin과 glycyrrhizin과 더불어 쌍화탕 구성약재 중작약, 계피 및 감초의 주요성분인 albiflorin, cinnmaic acid 및 liquiritin을 추가로 선정하였다. 선정된 5가지 성분의 함량 변화를 바탕으로 의약품등의 안정성 시험 기준의15) 선형회귀분석을 이용하여 쌍화탕 전탕팩의 유통기한을 예측하였다.
- 5에서 당귀와 계피의 형광색 반점과 황색 반점을 확인하였다. 또한 Rf 값 0.4와 0.6에서 천궁과 황기의 형광색 반점, Rf 값 0.6에서 감초의 녹색 반점 및 Rf 값 0.7에서 대조와 생강의 청색 및 형광색 반점을 각각 확인하였다(Fig. 1). 이는 최초 0개월에서부터 3, 6, 9 및 12개월마다 TLC를 통한 확인시험을 실시한 결과 모두 동일한 Rf 값과 같은 색의 반점을 각각 확인할 수 있었다.
- 쌍화탕 전탕팩에 대하여 12개월 동안 장기보존시험을 통하여 성상, 확인시험, pH, 비중, 중금속 및 미생물 시험을 실시하였다. 또한 쌍화탕 구성 생약의 주요성분에 대한 함량의 변화를 분석함으로써 쌍화탕 전탕팩의 유통기한을 예측하였다. 그 결과 14-72개월의 유통기한이 예측되었다.
- 미생물 시험 − 이 약을 가지고 식약청고시 “의약품 등의 미생물한도기준 및 시험방법”에14) 따라 시험하였으며, 세균수, 진균 수, 대장균, 녹농균, 황색포도구균 및 살모넬라균에 대하여 미생물 시험을 실시하였다.
- 전탕팩은 3개의 lot로 나누어 전탕하였으며 60 ± 5%의 상대 습도에서 상온(25 ± 2°C) 및 차광하여 보관하였다. 보관기간별 전탕팩의 분석은 0, 3, 6, 9 및 12개월마다 측정항목을 분석하였다.
- 성상 − 조제된 쌍화탕 전탕액을 보관기간에 따라 육안으로 관찰하였다.
- 시험물질의 조제 및 보관 − 쌍화탕 전탕액은 쌍화탕 4제분량(3.0 kg)을 약재 무게의 10배수에 해당하는 약 30 L의 전탕수로 100°C에서 2시간 증기를 배출하지 않은 가압식 방법으로 전탕하였다.
- 쌍화탕 전탕팩에 대하여 12개월 동안 장기보존시험을 통하여 성상, 확인시험, pH, 비중, 중금속 및 미생물 시험을 실시하였다. 또한 쌍화탕 구성 생약의 주요성분에 대한 함량의 변화를 분석함으로써 쌍화탕 전탕팩의 유통기한을 예측하였다.
- 작약의 albiflorin과 감초의 liquiritin 및 glycyrrhizin 표준 품을 10.0 mg, 5.0 mg 및 10.0 mg을 각각 정밀하게 취하여 메탄올을 넣어 녹여 정확하게 100 mL로 한 액을 표준액으로 하였다. 작약의 paeoniflorin 표준품 약 3.
- 조제된 검액과 표준액을 각각 20 µL씩 실리카겔 GF254에점적하여 Table II의 조건으로 각각 10 cm 전개한 후 주요 반점의 Rf 값과 색상을 비교하였다.
- 처방 내 작약, 계피 및 감초의 주요성분인 albiflrolin, paeoniflorin, cinnamic acid, liquiritin 및 glycyrrhizin의 함량은 Table III의 조건에 따라 Agilent 1200 series HPLC (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA)를 사용하여 측정하였다.
- 함량시험은 Agilent 1200 series HPLC (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA)를 사용하여 측정하였으며, 전탕팩 보관을 위한 항온항습기는 SH-CTH288 (Samheung Instrument, Korea)을 사용하였다. 분광광도계와 초음파추출 기는 각각 X-ma 2000 (Human Co.
- 확인시험 − 쌍화탕의 구성 생약인 작약, 당귀, 천궁, 숙지황, 황기, 감초, 계피, 대조 및 생강과 쌍화탕 전탕액을 대상으로 박층크로마토그래피에 의한 확인시험을 실시하였다.
대상 데이터
- Baker (Phillipsburg, NJ, USA)로부터 구입하였다. Water는 MR-RU1690 (Mirae Science Co., Korea)을 이용하여 여과하여 사용하였으며, 그 외의 시약은 HPLC 또는 특급시약을 구입하여 사용하였다.
- 함량시험은 Agilent 1200 series HPLC (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA)를 사용하여 측정하였으며, 전탕팩 보관을 위한 항온항습기는 SH-CTH288 (Samheung Instrument, Korea)을 사용하였다. 분광광도계와 초음파추출 기는 각각 X-ma 2000 (Human Co., Korea)과 8510R-DTH (Branson, Danbury, CT, USA)를 사용하였으며, 건조기는 J-300M (JISICO, Korea), pH meter는 Orion 3 star (Thermo, San Jose, CA, USA)를 사용하였다. 쌍화탕의 전탕 및 포장은 초고속 진공 저온 농축 추출기(Cosmos 660, Kyungseo machine, Korea)와 자유조절 롤 포장기(MH 205 Tower, Kyungseo machine, Korea)를 사용하였다.
- 시약 및 기기 − 표준물질인 albiflorin, paeoniflorin, cinnamic acid, cinnamaldehyde, liquiritin 및 glycyrrhizin은 Wako Pure Chemical Industries, Ltd. (Osaka, Japan)로부터 구입하 였으며, 각 표준물질의 순도는 98% 이상이었다.
- 실험재료 − 본 실험에 사용된 쌍화탕의 구성 한약재인 작약(Paeoniae Radix, Hwasun, Korea), 숙지황(Rehmanniae Radix Preparata, Jangheung, Korea), 황기(Astragali Radix, Jeongseon, Korea), 당귀(Angelicae Gigantis Radix, Yeongcheon, Korea), 천궁(Cnidii Rhizoma, Yeongcheon, Korea), 생강(Zingiberis Rhizoma Crudus, Seosan, Korea) 및 대조(Zizyphi Fructus, Yeongcheon, Korea)는 (주)옴니허브(Yeongcheon, Korea)에서 구입하였으며, 계피(Cinnamomi Cortex, YenBai, Vietnam)와 감초(Glycyrrhizae Radix et Rhizoma, China)는 ㈜HMAX (Jecheon, Korea)에서 각각 구입하였다.
- 포장지는 레토르트 포장지로 포장지 밖은 폴리에틸렌 재질, 중간막은 알루미늄 및 안은 폴리프로필렌 재질로 이루어져 있다. 추출 및 정량분석에 사용된 methanol과 acetonitrile은 HPLC grade 용으로 J. T. Baker (Phillipsburg, NJ, USA)로부터 구입하였다. Water는 MR-RU1690 (Mirae Science Co.
데이터처리
- 그러나 본 연구에서는 paeoniflorin과 glycyrrhizin과 더불어 쌍화탕 구성약재 중작약, 계피 및 감초의 주요성분인 albiflorin, cinnmaic acid 및 liquiritin을 추가로 선정하였다. 선정된 5가지 성분의 함량 변화를 바탕으로 의약품등의 안정성 시험 기준의15) 선형회귀분석을 이용하여 쌍화탕 전탕팩의 유통기한을 예측하였다. 최초 함량 실험 결과를 100%로 하여 진행하였으며 초기 농도 대비 90.
이론/모형
- 비중 − 조제된 쌍화탕 전탕액을 이용하여 대한약전 일반 시험법13) 의 비중 및 밀도측정법 제3법 부칭에 의한 시험법 에 따라 비중 시험을 하였다.
- 유통기한 설정 − 유통기한 산정을 위해 쌍화탕 전탕액 중 Albiflorin, paeoniflorin, cinnamic acid, liquiritin 및 glycyrrhizin의 함량 변화를 이용하여 의약품등의 안정성 시험 기준에15) 따라 유통기한을 예측하였다.
- 중금속 − 쌍화탕 전탕액 1.0 mL를 달아 대한약전 일반시험법13) 중금속시험법 중 제3법에 따라 조작하여 시험하였 으며, 비교액에는 납표준액 3.0 mL를 넣어 시험하였다.
성능/효과
- 19로 각각 나타났으며, 이 측정값을 토대로 ±1의 범위내로 시험 기준을 설정하였다. 0, 3, 6, 9 및 12개월 장기보존시험에 따른 pH를 측정한 결과 lot별로 4.72-5.12, 4.82-5.18 및 4.85-5.19로 각각 나타났다(Table IV). pH 측정 결과 보관기간이지남에 따라 다소 감소하는 경향을 보였으나 큰 변화는 관찰되지 않았다.
- 미생물 − 쌍화탕 전탕액 10 mL을 이용하여 세균수 및 진균수와 같은 총호기성세균과, 대장균, 녹농균, 황색포도상구균 및 살모넬라균과 같은 특정 세균에 대하여 미생물 실험 결과 세균과 진균은 모두 0 CFU/mL로 나타났으며, 특정세균에 대하여는 모두 검출되지 않음으로써 식약청고시 “의약품 등의 미생물한도기준 및 시험방법”10) 기준에 적합한 것으로 나타났으며, 그 결과를 Table VI에 나타내었다.
- 비중 − 조제된 쌍화탕 전탕액을 이용하여 대한약전 일반 시험법9) 의 비중 및 밀도측정법 제3법 부칭에 의한 시험법에 따라 비중 시험한 결과 1.010 g/mL로 나타났다(Table V).
- 성상 − 쌍화탕 전탕액의 최초 조제 시 성상은 투명한 파우치에 든 갈색의 액제였다. 이 후 3, 6, 9 및 12개월 후 전탕 팩의 성상을 확인한 결과 갈색의 액제로서 큰 변화가 없었다.
- 1). 이는 최초 0개월에서부터 3, 6, 9 및 12개월마다 TLC를 통한 확인시험을 실시한 결과 모두 동일한 Rf 값과 같은 색의 반점을 각각 확인할 수 있었다. 이러한 결과에서 보듯이 쌍화탕의 구성 생약과 쌍화탕 전탕액에서의 같은 Rf 값에서 같은색의 반점이 확인된 것으로 미루어 쌍화탕 전탕액은 작약, 당귀, 천궁, 숙지황, 황기, 감초, 계피, 대조 및 생강의 9종생약으로부터 유래된 것임을 알 수 있다.
- 이는 최초 0개월에서부터 3, 6, 9 및 12개월마다 TLC를 통한 확인시험을 실시한 결과 모두 동일한 Rf 값과 같은 색의 반점을 각각 확인할 수 있었다. 이러한 결과에서 보듯이 쌍화탕의 구성 생약과 쌍화탕 전탕액에서의 같은 Rf 값에서 같은색의 반점이 확인된 것으로 미루어 쌍화탕 전탕액은 작약, 당귀, 천궁, 숙지황, 황기, 감초, 계피, 대조 및 생강의 9종생약으로부터 유래된 것임을 알 수 있다.
- 0% 수준으로 함량 기준을 설정하여 유통기한을 예측하였다. 총 12개월의 장기보존 시험기간의 시험결과를 이용하여 선형회귀분석법에 의해 95% 신뢰한계로 하한의 단측검정을 수행하여 사용기간 등을 외삽한 결과, Lot별로 유통기한은 21-37개월, 14-21개월 및 16-72개월로 나타났다(Table VIII). 이러한 결과는 단순히 쌍화탕 전탕액의 주요 성분인 albiflorin, paeoniflorin, cinnmaic acid, liquiritin 및 glycyrrhizin의 함량 변화에 따라 유통기한을 설정한 것으로 보다 정확한 유통기한 설정을 위해서는 다른 약리학적 효능 비교가 병행되어야 할 것이다.
- 선정된 5가지 성분의 함량 변화를 바탕으로 의약품등의 안정성 시험 기준의15) 선형회귀분석을 이용하여 쌍화탕 전탕팩의 유통기한을 예측하였다. 최초 함량 실험 결과를 100%로 하여 진행하였으며 초기 농도 대비 90.0% 수준으로 함량 기준을 설정하여 유통기한을 예측하였다. 총 12개월의 장기보존 시험기간의 시험결과를 이용하여 선형회귀분석법에 의해 95% 신뢰한계로 하한의 단측검정을 수행하여 사용기간 등을 외삽한 결과, Lot별로 유통기한은 21-37개월, 14-21개월 및 16-72개월로 나타났다(Table VIII).
- 확인시험 − 쌍화탕의 구성 생약인 작약, 당귀, 천궁, 숙지황, 황기, 감초, 계피, 대조 및 생강과 쌍화탕 전탕액을 대상으로 박층크로마토그래피에 의한 확인시험을 실시하였다. 확인시험 결과 작약과 숙지황의 주요성분인 paeoniflorin과 5-hydroxymethyl-2-furfural에 대해서 동일한 Rf 값인 0.5 및 0.8에서 적색과 진녹색의 반점을 각각 확인하였으며, Rf 값 0.5에서 당귀와 계피의 형광색 반점과 황색 반점을 확인하였다. 또한 Rf 값 0.
후속연구
- 총 12개월의 장기보존 시험기간의 시험결과를 이용하여 선형회귀분석법에 의해 95% 신뢰한계로 하한의 단측검정을 수행하여 사용기간 등을 외삽한 결과, Lot별로 유통기한은 21-37개월, 14-21개월 및 16-72개월로 나타났다(Table VIII). 이러한 결과는 단순히 쌍화탕 전탕액의 주요 성분인 albiflorin, paeoniflorin, cinnmaic acid, liquiritin 및 glycyrrhizin의 함량 변화에 따라 유통기한을 설정한 것으로 보다 정확한 유통기한 설정을 위해서는 다른 약리학적 효능 비교가 병행되어야 할 것이다.
- 그 결과 14-72개월의 유통기한이 예측되었다. 이러한 결과는 쌍화탕 전탕팩의 유통기한 설정을 위한 기초 자료로 이용될 수 있을 것으로 사료된다.
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