[논문]아토피 피부염 유발 NC/Nga mouse에서 도고 온천수 유황 성분의 효과

장문희; 고가연; 안요찬; 안택원

doi:10.6114/jkood.2013.26.3.036

아토피 피부염 유발 NC/Nga mouse에서 도고 온천수 유황 성분의 효과
Effect of DOGO phreatic water containing sulphur on Atopic Dermatitis in NC/Nga mouse 원문보기

韓方眼耳鼻咽喉皮膚科學會誌 = The journal of Korean Medicine Ophthalmology & Otolaryngology & Dermatology, v.26 no.3, 2013년, pp.36 - 53

장문희 (대전대학교 한의과대학 사상체질의학과) , 고가연 (대전대학교 한의과대학 사상체질의학과) , 안요찬 (대전대학교 경영대학 병원경영학과) , 안택원 (대전대학교 한의과대학 사상체질의학과)

Abstract ▼ AI-Helper

Objectives : The purpose of this study is to investigate the effects of DOGO phreatic water containing sulphur on Atopic Dermatitis in NC/Nga mouse. Methods : We made DOGO phreatic water removed sulphur using Twin Alternating Sulfate Eater. After making atopic dermatitis caused by sensitizing NC/Nga mouse to DNCB(dinitrochlorobenzene), we made mouse swim in tanks each filled with distilled water, tap water, DOGO phreatic water(contain sulphur), DOGO phreatic water(remove sulphur) for 30minutes everyday. 3weeks later, we analyzed skin clinical score, total IgE levels(by ELISA), WBC differential counting(Neutrophils, Monocytes), absolute cell number of $Neutrophil^+Gr-1^+$, CCR3 mRNA expressions(by Real-time PCR), IL-4, IFN-${\gamma}$ production levels(by ELISA), histologic test(by H&E staining, toluidine blue staining). Results : The results of making NC/Nga mouse induced atopic dermatitis swim in tanks filled with DOGO phreatic water(contain sulphur) are as follows. 1. Skin clinical scores were decreased significantly in comparison to control group. 2. Total IgG levels were decreased significantly in comparison to control group. 3. WBC differential counting(Neutrophils, Monocytes) were decreased significantly in c.mparison to control group. 4. Absolute cell number of $Neutrophil^+Gr-1^+$ were decreased significantly in comparison to control group. 5. CCR3 mRNA expressions were decreased significantly in comparison to control group. 6. IL-4, IFN-${\gamma}$ production levels were decreased significantly in comparison to control group. 7. The epithelial tissue thickness, leucocytes infiltration, erythema, edema, excoriation, scaling, mast cells infiltrations in dorsal skin were decreased in comparison to control group. Conclusions : These results indicate that DOGO phreatic water(contain sulphur) can be used for helping treat atopic dermatitis.

주제어

AI 본문요약
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문제 정의

이에 본 연구에서는 온천의 효능 중 화학적 효과에 입각하여 유황 성분이 포함된 도고 온천수를 이용하여 아토피 피부염에 대한 치료 효과에 대한 연구를 하였다. 본 연구를 시행한 파라다이스 스파 도고 온천은 충청남도 아산시 도고면 기곡리와 선장면 신성리에 위치하고 있으며 약알카리천, 약염천에 속하는 유황천으로 수온은 25∼32.
이에 본 연구에서는 유황 성분이 포함된 도고 온천수의 아토피 피부염에 대한 치료 효과를 확인하기 위하여, 아토피 피부염을 발현시킨 NC/Nga mouse를 이용하여 도고 온천수와 탈유황 도고 온천수의 입욕수영을 통하여 피부발진 점수를 측정하고, 면역글로블린-E, 백혈구내 호중구 및 단핵구 빈도, 등 피부조직내 총 호중구 세포수, 등피부조직의 Eoxatin 2와 CCR3 mRNA 유전자 발현, 비장세포 배양 상충액에서 사이토카인 수준 측정, 등피부조직 변화 관찰 등을 통하여 유의한 결과를 얻었기에 보고하는 바이다.

가설 설정

1. 피부발진 점수가 유의성 있게 감소하였다.

제안 방법

1차 도포 후 7일째부터는, 1주일에 3회씩 3주간 0.4% DNCB 용액 150 ㎕를 재차 도포(10주령∼13주령)하여 아토피 피부염을 유발시켰다.
7주령의 NC/Nga mouse를 1주일 동안 적응시킨 후 NC/Nga mouse의 등에 귀 하단부에서부터 꼬리 상단부까지 전체를 제모하고 24시간 방치 후 1%의 DNCB(dinitrochlorobenzene)가 들어 있는 아세톤 :올리브오일(3 : 1) 200 ㎕를 제모 부위에 도포하고, 3일 후 2차 도포하였다. 1차 도포 후 7일째부터는, 1주일에 3회씩 3주간 0.
After NC/Nga mice of each groups were treated with swimming in each tanks, WBC differential counting (Neutrophils, Monocytes) were checked in serum.
Atopic dermatitis-like skin NC/Nga mouse의 등피부조직을 적출하여 각각에 RNAzol^B 500㎕를 넣고 용해될 때까지 homogenizer로 분쇄하였으며 이 조직분쇄 혼합 부유액에 클로로포름(CHCl₃) 50 ㎕를 첨가한 후 15초간 다시 혼합하였다. 이를 얼음에 15분간 방치한 후 13,000 rpm에서 원심분리한 후 약 200 ㎕의 상청액을 회수하여 2-propanol 200 ㎕와 동량 혼합 후 천천히 흔들고 얼음에서 15분간 방치하였으며, 이를 다시 13,000 rpm에서 원심 분리한 후 80% EtOH로 수세하고 3분간 vaccum pump에서 건조하여 RNA를 추출하였다.
Cytokine 유전자 발현은 SYBR^Ⓡ Green PCR Master mix를 사용하였고, 내부 기준은 GAPDH로 Taqman probe를 사용하였으며, primer의 최종농도가 200 nM이 되게 반응시켰다. CCR3와 Eotaxin mRNA 발현은 등피부조직에서 관찰하였고 cDNA를 합성하여 분석하였다. Real time quantitative PCR의 조건은 전변성은 2min at 50℃, 10min 94℃, 그리고 40cycles을 0.
Real time quantitative PCR은 7500 Real-Time PCR system을 이용하여 수행하였으며 Mouse Olionucleotid의 염기배열은 다음과 같다. Cytokine 유전자 발현은 SYBR^Ⓡ Green PCR Master mix를 사용하였고, 내부 기준은 GAPDH로 Taqman probe를 사용하였으며, primer의 최종농도가 200 nM이 되게 반응시켰다. CCR3와 Eotaxin mRNA 발현은 등피부조직에서 관찰하였고 cDNA를 합성하여 분석하였다.
NC/Nga mouse 실험 14주 후에 실험을 종료하고 비장을 적출하여 100 mesh로 비장세포를 분리하였으며, 전날 CD3 mAb 1 ㎍/㎖을 96well plate에 코팅하여 4℃ 냉장고에서 하루 밤을 보내게 한 다음 D-PBS로 2회 수세하였다. 분리한 비장세포는 ACK 용액으로 RBC를 제거한 후 DNCB extract가 코팅된 각각의 well에 5x10⁵ 세포씩 5% FBS-DMEM 배양액에서 48시간 동안 배양한 후, 원심분리기 2,000 rpm에서 3분간 원심분리한 후 200 ㎕의 배양상청액을 얻었으며 배양상청액내의 IL-4(BioSource, USA)와 IFN-γ(BioSource, USA)의 수준 측정은 ELISA로 측정하였다.
NC/Nga mouse로부터 비장을 적출하여 비장세포를 분리하고 T cell-specific mitogen인 CD3 mAb(BD, USA)와 함께 일정시간 배양한 후 배양액으로부터 Th1(IFN-γ), Th2 사이토카인(IL-4) 농도를 ELISA로 측정하였다.
NC/Nga mouse를 아무처리도 하지 않은 정상군, 등을 제모한 후 0.4% DNCB를 2주간 도포하고 증류수에서 3주간 오전 11시에서 30분간 입욕 수영 시킨 군을 대조군(CT), 등을 제모한 후 0.4% DNCB를 2주간 도포하고 수돗물에서 3주간 오전 11시에서 30분간 입욕 수영을 시킨 군(TW), 등을 제모한 후 0.4% DNCB를 2주간 도포하고 도고 온천수에서 3주간 오전 11시에서 30분간 입욕 수영을 시킨 군(DG-PW), 등을 제모한 후 0.4% DNCB를 2주간 도포하고 유황 성분제거 도고 온천수에서 3주간 오전 11시에서 30분간 입욕 수영을 시킨 군(DG-PW-SO₄^RE)으로 나누어 설정하였다(Fig. 1).
NC/Nga mouse를 이용하여 아무처리 하지 않은 정상군, 등을 제모한 후 0.4% DNCB를 2주간 도포하고 증류수에서 3주간 오전 11시에서 30분간 입욕 수영 시킨 군을 대조군(CT), 등을 제모한 후 0.4% DNCB를 도포하고 수돗물에서 입욕 수영 시킨 군(TW), 등을 제모한 후 0.4% DNCB를 도포하고 도고 온천수에서 입욕 수영 시킨 군(DG-PW), 등을 제모한 후 0.4% DNCB를 도포하고 유황성분제거 도고 온천수에서 입욕 수영 시킨 군(DG-PW-SO₄^RE)으로 나누어 본 실험을 진행하였다(Fig. 1).
NC/Nga mouse의 후안와 정맥총에서 10주, 12주, 14주에 capillery tube를 이용하여 약 100 ㎕의 혈액을 채혈한 후 원심분리기 6,500 rpm에서 20분간 원심분리한 후 30 ㎕의 혈청을 분리하였다. 혈청은 취하여 -70℃에 냉동 보관하였고 NC/Nga mouse의 혈청 내 IgE 농도 측정은 ELISA로 IgE 수준을 측정하였다.
그리고 다시 2회 수세 후 완충용액으로 세척한 다음 Avidin-HRP conjugeted antibody 100 ㎕를 처리하고 1시간 실온에서 방치한 후 다시 세척하였다. 또한 TMB 기질을 100 ㎕씩 분주하고 암소에서 30분간 방치한 후 100 ㎕의 stop 용액을 처리한 후 ELISA reader 450 ㎚에서 흡광도를 측정하였다.
15min at 95℃, 1 min at 60℃에서 수행하였다. hydrocortinsone 도포군과 야생화 추출물 투여군의 대조군은 내부 기준은 GAPDH를 사용하여 목표 그룹의 Quantitative PCR은 y=x(1+e)n(x:starting quantity, y : yield, n : number of cycles, e : efficiency)로 계산하여 RQ(relative quantitative)을 측정하였다.
혈청은 취하여 -70℃에 냉동 보관하였고 NC/Nga mouse의 혈청 내 IgE 농도 측정은 ELISA로 IgE 수준을 측정하였다. 각 well에 NC/Nga mouse에서 10주, 12주, 14주에 채혈한 혈청 5 ㎕(1/10 dilution)와 dilution buffer 45 ㎕를 혼합하여 각 well에 분주하고, 2시간 동안 25℃ 실온에서 방치한 후 2회 washing 완충용액으로 세척한 다음, biotin- conjugated anti IgE를 넣고 2시간 방치하였다. 그리고 다시 2회 수세 후 완충용액으로 세척한 다음 Avidin-HRP conjugeted antibody 100 ㎕를 처리하고 1시간 실온에서 방치한 후 다시 세척하였다.
그 조직부분은 염증을 일으키는 표피, 진피, 각질세포, 호중구, 호산구, 그 외 다른 세포와 부종을 식별하는 hematoxyline / eosin(H&E) 염색과 비만세포를 염색하는 toluidine blue 염색으로 비만세포의 침윤을 광학현미경(x200, Nikon, Japan)으로 관찰하였다.
기기는 열탕추출기(대웅, DWT-1800T, Korea), 감압 증류장치(Rotary vaccum evaporator, BUCHI B-480, Switzerland), 동결 건조기(freeze dryer, EYELA FDU-540, Japan), CO2배양기(Forma scientific Co., U.S.A.), 원심분리기(한일과학, Korea), plate shaker(Lab-Line, U.S.A.), spectrophotometer (Shimazue, Japan), Bio-freezer(Sanyo, Japan), Quantitative RealTime PCR(Applied Biosystems, U.S.A.), ELISA leader(Molecular Devices, U.S.A.), HPLC(Waters Co. Milford, MA, USA) 등을 사용하였다.
그리고 다시 2회 수세 후 완충용액으로 세척한 다음 Avidin-HRP conjugeted antibody 100 ㎕를 처리하고 1시간 실온에서 방치한 후 다시 세척하였다. 또한 TMB 기질을 100 ㎕씩 분주하고 암소에서 30분간 방치한 후 100 ㎕의 stop 용액을 처리한 후 ELISA reader 450 ㎚에서 흡광도를 측정하였다.
분리한 비장세포는 ACK 용액으로 RBC를 제거한 후 DNCB extract가 코팅된 각각의 well에 5x105 세포씩 5% FBS-DMEM 배양액에서 48시간 동안 배양한 후, 원심분리기 2,000 rpm에서 3분간 원심분리한 후 200 ㎕의 배양상청액을 얻었으며 배양상청액내의 IL-4(BioSource, USA)와 IFN-γ(BioSource, USA)의 수준 측정은 ELISA로 측정하였다.
아토피 유발 NC/Nga mouse를 도고 온천수와 유황성분 제거 도고 온천수에서 입욕 수영을 시켜 아토피 피부염 치료에 미치는 영향을 살펴본 결과 유황성분이 포함된 도고 온천수에서 대조군과 비교하여 다음과 같은 유의한 결과를 얻었다.
NC/Nga mouse로부터 비장을 적출하여 비장세포를 분리하고 T cell-specific mitogen인 CD3 mAb(BD, USA)와 함께 일정시간 배양한 후 배양액으로부터 Th1(IFN-γ), Th2 사이토카인(IL-4) 농도를 ELISA로 측정하였다. 아토피 피부염이 발생되면 모든 Th2 사이토카인이 CD3 mAb 자극에 의해 크게 증가하게 되며, 시험물질이 Th2 사이토카인을 감소시키는지 평가하였다.
역전사 반응은 준비된 총 RNA 2 ㎍을 DNase I(10 U/㎕) 2U/tube를 37℃ heating block에서 30분간 반응한 후 75℃에서 10 분 동안 변성시켰고, 이에 2.5 ㎕ 10 mM dNTPs mix, 1 ㎕ random sequence hexanucleotides(25 pmole/25㎕), RNA inhibitor로서 1 ㎕ RNase inhibitor(20 U/㎕), 1 ㎕ 100 mM DTT, 4.5㎕ 5×RT buffer(250 mM Tris-HCl, pH 8.3, 375 mM KCl, 15 mM MgCl2)를 가한 후, 1 ㎕의 M-MLV RT(200 U/㎕)를 다시 가하고 DEPC 처리된 증류수로서 최종 부피가 20 ㎕가 되도록 하였다.
8 ㎖를 채취하였다. 전혈을 바이오톡스텍(주)(청주, 충청북도)에 의뢰하여 혈액 중 백혈구와 호중구, 호산구의 총 세포수를 자동 혈액 분석기로 측정하였다.
NC/Nga mouse의 후안와 정맥총에서 10주, 12주, 14주에 capillery tube를 이용하여 약 100 ㎕의 혈액을 채혈한 후 원심분리기 6,500 rpm에서 20분간 원심분리한 후 30 ㎕의 혈청을 분리하였다. 혈청은 취하여 -70℃에 냉동 보관하였고 NC/Nga mouse의 혈청 내 IgE 농도 측정은 ELISA로 IgE 수준을 측정하였다. 각 well에 NC/Nga mouse에서 10주, 12주, 14주에 채혈한 혈청 5 ㎕(1/10 dilution)와 dilution buffer 45 ㎕를 혼합하여 각 well에 분주하고, 2시간 동안 25℃ 실온에서 방치한 후 2회 washing 완충용액으로 세척한 다음, biotin- conjugated anti IgE를 넣고 2시간 방치하였다.

대상 데이터

동물은 실험 당일까지 고형사료(항생제 무첨가, 삼양사료 Co.)와 물을 충분히 공급하고 온도 22±2℃, 습도 55±15%, 12시간 light-dark cycle의 환경을 유지하며 1주간 적응시킨 후 실험에 사용하였다.
본 실험에 사용된 시약은 diethyl pyrocarbonate(DEPC), chloroform, trichloroacetic acid, isopropanol, Tris-HCl, KCl, MgCl2, 적혈구 용혈액(ACK lysis solution), DMEM 배양액, dulbecco's phosphate buffered saline(D-PBS), Sulforhodamin B(SRB), 2-isopropanol, Sodium dodecyl sulfate(SDS), antibiotics, 표준시료로 사용한 rutin과 quercetin은 Sigma사(USA) 제품을 사용하였으며, 우태아혈청(fetal bovine serum, FBS)은 Hyclone사(Logan, USA) 제품을, anti-CD3-PE(phycoerythrin), anti-CD4-FITC(fluorescein isothiocyanate), anti-B220-PE, anti-Gr-1-PE, anti-CD8-FITC, anti-CD3 mAb 등은 Pharmingen사 (Torreyana, USA) 제품을, IL-4, IL-5, IFN-γ, IL-13 ELISA kit는 BioSource 사 (California, USA) 제품을, IgE ELISA kit는 SHIBAYAGI사(Shibukawa, Japan) 제품을, 기타 일반 시약은 특급 시약을 사용하였다.
본 연구를 시행한 파라다이스 스파 도고 온천은 충청남도 아산시 도고면 기곡리와 선장면 신성리에 위치하고 있으며 약알카리천, 약염천에 속하는 유황천으로 수온은 25∼32.5℃이며 2009년 보양온천으로 지정되어 있다12).
아토피 피부염 병변을 관찰하기 위하여 수컷이며 7주령의 20~22g NC/Nga mouse(SLC, Inc, Japan)를 중앙실험동물에서 공급받았다. 동물은 실험 당일까지 고형사료(항생제 무첨가, 삼양사료 Co.
최종 실험종료 후 heparin (20 IU) 30 ㎕ 처리된 3㎖ 주사기로 심장 혈액 0.8 ㎖를 채취하였다. 전혈을 바이오톡스텍(주)(청주, 충청북도)에 의뢰하여 혈액 중 백혈구와 호중구, 호산구의 총 세포수를 자동 혈액 분석기로 측정하였다.

데이터처리

각 실험군 결과값은 unpaired student's T-test 통계프로그램을 사용하여 통계 처리하였으며, p<0.05이하의 수준에서 유의성 검정을 실시하였다(* : p<0.05, ** : p<0.01, *** : p<0.001).

이론/모형

피부발진 육안 평가는 Yamamoto¹³⁾의 평가항목을 참고하여 소양을 동반한 홍반, 구진(살갖에 돋는 발진), 인설(비듬), 가피(딱지), 태선화 등의 증상을 0(없음), 1(경증), 2(중증), 3(고증)으로 개체마다 육안 평가하여 아토피 피부발진을 판단하였다.

성능/효과

2. IgE 수준이 유의성 있게 감소하였다.
3. 백혈구내 호중구 및 단핵구 수가 각각 유의성 있게 감소하였다.
4. 등피부조직내 Neutrophil⁺ Gr-1⁺ MSC의 총세포수가 유의성 있게 감소하였다.
5. 등피부조직 Eoxatin 2와 CCR3 mRNA 유전자 발현이 각각 유의성 있게 감소하였다.
6. 비장세포 배양 상층액에서 IL-4와 IFN-γ 생성량이 각각 유의성 있게 감소하였다.
7. 등피부조직의 상피조직의 두께, 백혈구 침윤, 홍반, 부종, 찰과상, 딱지가 감소하였으며 비만세포도 감소하였다.
대조군(CT)의 피부발진 점수는 DNCB를 도포한 후 계속 증가하였고, 도고 온천수에서 입욕 수영 시킨 군(DG-PW)은 대조군(CT)에 비하여 28.3% 이상 유의성 있게(p<0.01) 감소하였다.
실험 종료 후 등피부를 절단하여 H&E 염색 하여 분석한 결과, 정상군에 비하여 대조군 (CT)의 상피조직이 부종으로 현저하게 확장되었고 leucocytes의 침윤, erythema, edema, excoriation, scaling도 보이고 있다. 도고 온천수에서 입욕 수영 시킨 군(DG-PW)과 유황성분 제거 도고 온천수에서 입욕 수영 시킨 군(DG-PW-SO4^RE)은 대조군(CT)에 비하여 상피조직의 두께가 현저하게 줄었고, leucocytes의 침윤 및 erythema, edema, excoriation, scaling 등은 보이지 않아 부종이 거의 사라진 것을 알 수 있다. 유황성분을 제거한 도고 온천수에서 입욕 수영 시킨 군(DG_PW-SO4^RE)과 수돗물에서 입욕 수영 시킨 군(TW)에서는 대조군(CT)에 비하여 차이가 나타나지 않았다.
도고온천수에서 입욕 수영 시킨 군(DG-PW)은 WBC 내의 호중구 및 단핵구 빈도(%)가 대조군(CT)에 비하여 각각 35%(p<0.01)와 38.4%(p<0.05) 이상 유의성 있게 감소하였다.
또한 등피부에 침윤된 비만세포를 관찰하기 위하여 toluidine blue 염색 하여 분석한 결과, 정상군에 비하여 대조군(CT)의 비만세포가 현저하게 증가되었고, 도고 온천수에서 입욕 수영 시킨 군(DG-PW)은 대조군(CT)에 비하여 비만세포가 거의 사라진 것을 알 수 있다. 유황성분을 제거한 도고 온천수에서 입욕 수영 시킨 군(DG-PW-SO4^RE)과 수돗물에서 입욕 수영 시킨 군(TW)에서는 대조군(CT)에 비하여 차이를 나타나지 않았다(Fig.
또한 등피부에 침윤된 비만세포를 관찰하기 위하여 toluidine blue 염색 하여 분석한 결과, 정상군에 비하여 대조군(CT)의 비만세포가 현저하게 증가되었고, 도고 온천수에서 입욕 수영 시킨 군(DG-PW)은 대조군(CT)에 비하여 비만세포가 거의 사라진 것을 알 수 있었다(Fig. 10).
먼저 도고 온천 원수와 이를 쌍둥이 탱크 황산염 정수장치로 정수된 물을 준비하여 성분을 비교한 결과 도고 온천수는 pH7.8로 조사되며 황산 이온이 검출되었으나 정수된 도고 온천수에서는 pH8.1로 조사되며 황산 이온이 검출되지 않았다(Fig. 2, Fig. 3). 이런 유황천은 우리 나라에서 비교적 많이 발견되는 온천으로 심장질환, 피부병, 만성관절질환, 류머티즘에 효과가 있으며⁴²⁾ 만성 관절 질환이나 만성피부질환, 신경통 등에 효과가 있다고 알려져 있다²²⁾.
먼저 피부 발진 점수를 살펴보면 대조군(CT)의 피부발진 점수는 DNCB를 도포한 후 계속 증가하였고, 도고 온천수에서 입욕 수영 시킨 군(DG-PW)은 대조군(CT)에 비하여 28.3% 이상 유의성 있게(p<0.01) 감소하다(Fig. 4).
실험 종료 후 등피부를 절단하여 H&E 염색 하여 분석한 결과, 정상군에 비하여 대조군 (CT)의 상피조직이 부종으로 현저하게 확장되었고 leucocytes의 침윤, erythema, edema, excoriation, scaling가 보이고 있었으며, 도고 온천수에서 입욕 수영 시킨 군(DG-PW)은 대조군(CT)에 비하여 상피조직의 두께가 현저하게 줄었고, leucocytes의 침윤 및 erythema, edema, excoriation, scaling 등은 보이지 않아 부종이 거의 사라진 것을 알 수 있다.
실험 종료 후 등피부를 절단하여 H&E 염색 하여 분석한 결과, 정상군에 비하여 대조군 (CT)의 상피조직이 부종으로 현저하게 확장되었고 leucocytes의 침윤, erythema, edema, excoriation, scaling도 보이고 있다.
실험종료 후 10주령, 12주령, 15주령에서 채혈하여 혈청 내 IgE 수준을 측정한 결과, 10주령 NC/Nga mouse에서 자연적으로 증가가 되고 DNCB를 도포한 대조군(CT)은 15주에서 DNCB를 도포하지 않은 정상군보다 약 37% 이상 IgE 수준이 증가 되었다. 최종 15주에서는 도고 온천수에서 입욕 수영 시킨 군(DG-PW)이 대조군(CT)에 비하여 21.
실험종료 후 10주령, 12주령, 15주령에서 채혈하여 혈청 내 면역글로블린-E 수준을 측정한 결과, 10주령 NC/Nga mouse에서 자연적으로 증가가 되고 대조군(CT)은 15주에서 정상군보다 약 37% 이상 증가 되었으며, 최종 15주에서는 도고 온천수에서 입욕 수영 시킨 군(DG-PW)이 대조군(CT)에 비하여 21.7% 이상 유의성 있게(p<0.01) 감소하였다(Fig. 5).
실험종료 후 등피부조직에서 세포를 분리하여 Eoxatin 2와 CCR3 mRNA 유전자 발현을 분석한 결과, DNCB를 도포하지 않은 정상군에 비하여 대조군(CT)이 Eoxatin 2와 CCR3 mRNA 유전자 발현이 현저하게 증가하였다. 도고 온천수에서 입욕 수영 시킨 군(DG-PW)은 Eoxatin 2와 CCR3 mRNA 유전자 발현이 대조군(CT)에 비하여 각각 유의성 있게(p<0.
실험종료 후 등피부조직에서 세포를 분리하여 Eoxatin 2와 CCR3 mRNA 유전자 발현을 분석한 결과, 정상군에 비하여 대조군(CT)에서는 증가하였으며, 도고 온천수에서 입욕 수영 시킨 군(DG-PW)은 대조군(CT)에 비하여 각각 유의성 있게(p<0.001) 감소하였다(Fig. 8).
실험종료 후 비장세포를 분리하여 anti-CD3로 자극하며 48시간 배양 후 비장세포 배양 상층액에서 IL-4와 IFN-Ɣ의 생산량을 분석한 결과, DNCB를 도포하지 않은 정상군에 비하여 대조군(CT)에서 IL-4와 IFN-Ɣ의 생산량이 현저하게 증가하였다. 도고 온천수에서 입욕 수영 시킨 군(DG-PW)은 IL-4와 IFN-Ɣ의 생산량이 대조군(CT)에 비하여 각각 유의성 있게(p<0.
실험종료 후 비장세포를 분리하여 anti-CD3로 자극하며 48시간 배양 후 비장세포 배양 상층액에서 IL-4와 IFN-Ɣ의 생산량을 분석한 결과, 정상군에 비하여 대조군(CT)에서는 증가하였으며, 도고 온천수에서 입욕 수영 시킨 군(DG-PW)은 대조군(CT)에 비하여 각각 유의성 있게(p<0.001) 감소하였다(Fig. 9).
실험종료 후 채혈하여 WBC 내의 호중구 및 단핵구 빈도(%)를 측정한 결과, 정상군에 비하여 대조군(CT)에서는 증가하였으며, 도고 온천수에서 입욕 수영 시킨 군(DG-PW)은 대조군(CT)에 비하여 각각 35%(p<0.01)와 38.4%(p<0.05) 이상 유의성 있게 감소하였다(Fig. 6).
실험종료 후 채혈하여 WBC 내의 호중구 빈도(%)를 측정한 결과, DNCB를 도포하지 않은 정상군에 비하여 대조군(CT)이 호중구 및 단핵구 빈도(%)가 증가 하였다. 도고온천수에서 입욕 수영 시킨 군(DG-PW)은 WBC 내의 호중구 및 단핵구 빈도(%)가 대조군(CT)에 비하여 각각 35%(p<0.
실험종료 후 혈액에서 PBMC와 등피부조직에서 세포를 분리하여 Neutrophil⁺ Gr-1⁺ MSC의 총세포수를 측정한 결과, DNCB를 도포하지 않은 정상군에 비하여 대조군(CT)의 Neutrophil⁺ Gr-1⁺ MSC의 총세포수가 현저하게 증가하였다. 도고 온천수에서 입욕 수영 시킨 군(DG-PW)은 Neutrophil⁺ Gr-1⁺ MSC의 총세포수가 대조군(CT)에 비하여 48.
실험종료 후 혈액에서 PBMC와 등피부조직에서 세포를 분리하여 Neutrophil+ Gr-1+ MSC의 총세포수를 측정한 결과, 정상군에 비하여 대조군(CT)에서는 증가하였으며, 도고 온천수에서 입욕 수영 시킨 군(DG-PW)은 대조군(CT)에 비하여 48.4% 이상 유의성 있게(p<0.01) 감소하였다(Fig. 7).
8로 조사 되었다. 온천 원수를 쌍둥이 탱크 황산염 제거장치로 정수한 후 실시한 수질검사에서는 거의 모든 항목이 동일한 수치였으나 황산이온이 검출 되지 않았으며 pH8.1로 약간 상승되었다(Fig. 2, 3).
최종 15주에서는 도고 온천수에서 입욕 수영 시킨 군(DG-PW)이 대조군(CT)에 비하여 21.7% 이상 유의성 있게(p<0.01) 감소하였다.

후속연구

특히 사람에의 아토피 피부염 유발과 관련되어 약 20여 종류의 유전자 결함이 확인되고 있다는 측면에서 이들 동물 모델이 사람의 아토피 피부염 특성을 반영하기에는 어려움이 있다⁴⁴⁾. 따라서 치료의 보조 용법으로 사용되기 전에 아토피 피부염 환자들을 대상으로 한 임상 연구가 필요할 것으로 사료되며, 향후 장 등^45,46)의 연구에서 알려진 한방 입욕제와 연계하여 아토피 피부염 치료의 대체 요법으로 온천욕과 함께 한방 입욕제를 이용한 추가적인 연구 및 임상 연구가 필요할 것으로 사료된다.
이상의 결과를 통해 유황 성분이 포함된 도고 온천수는 아토피 유발 NC/Nga mouse에서 알레르기 염증반응을 효과적으로 조절한다고 볼 수 있으며 이러한 기전을 바탕으로 온천 요법을 이용하여 아토피 피부염에 보조 치료로 이용 가능할 것으로 판단된다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	아토피 피부염이란?	아토피 피부염은 피부 건조증, 소양감, 홍반, 부종, 삼출, 가피 등을 특징적인 증상으로 동반하는 대표적인 알레르기성 질환이다1) . 아토피 피부염은 유전적 배경에서부터 음식에 대한 알레르기, 면역학적 이상, 피부장벽의 이상, 환경적, 사회적 인자 및 심인성 요인 등이 복합적으로 연관되어 나타나는 질환으로 면역학적 측면에서 발병 기전을 살펴보면 mast cell, T세포, 호산구 등과 같은 여러 세포들과 CD4+ T세포와 CD8+ T세포 비율의 증가, Th2 매개 cytokine 간의 불균형, IgE 증가 등이 기전으로 알려져 있다2-4).
	온천이란?	온천이란 일종의 지하수로 지표에 자연 용출되거나 인공적인 착정 시추를 실시하여 끌어올린 지하수의 수온이 그 지역의 얕은 지층의 지하수 수온보다 높은 것8)을 말하며 이러한 온천수는 세포의 신진대사를 촉진하고 류마토이드 관절염, 신경통, 골수염, 신 방광 질환, 대사성 질환 등에 효능이 있다고 알려져 있다9).또한, 온천수를 이용한 온천 요법은 건선과 아토피 피부염 등의 피부 질환의 치료에 많이 이용되는데 아직까지 피부 질환들이 호전되는 기전은 완전히 밝혀지지 않았다.
	아토피 유발 NC/Nga mouse를 도고 온천수와 유황성분 제거 도고 온천수에서 입욕 수영을 시켜 아토피 피부염 치료에 미치는 영향을 살펴본 결과 얻은 결론은?	1. 피부발진 점수가 유의성 있게 감소하였다. 2. IgE 수준이 유의성 있게 감소하였다. 3. 백혈구내 호중구 및 단핵구 수가 각각 유의성 있게 감소하였다. 4. 등피부조직내 Neutrophil+ Gr-1+ MSC의 총세포수가 유의성 있게 감소하였다. 5. 등피부조직 Eoxatin 2와 CCR3 mRNA 유전자 발현이 각각 유의성 있게 감소하였다. 6. 비장세포 배양 상층액에서 IL-4와 IFN-γ 생성량이 각각 유의성 있게 감소하였다. 7. 등피부조직의 상피조직의 두께, 백혈구 침윤, 홍반, 부종, 찰과상, 딱지가 감소하였으며 비만세포도 감소하였다.

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저자의 다른 논문 :

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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