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문제 정의
- 따라서 본 연구에서는 등 반복 폐쇄 첩포 시험 실시 및 안면부 사용성 시험으로의 전환 가능성을 면포 평가와 여드름 육안평가를 통해 검토하고 기존의 연구에서는 제안하지 않았던 Oil red O staining 방법을 도입하여 국내 실정에 맞는 평가 방법을 구축하기 위한 분석방법과 해석에 대한 기준을 마련하고자 하였다.
- 여드름은 크게 염증성 여드름과 비염증성 여드름으로 분류되며 피지분비, 모공각화 정도, 호르몬 불균형, 여드름 균의 활성화에 따라 그 원인과 관리의 접근방법이 다양하다. 여드름 피부를 가진 사람들을 위한 화장품이 개발되고 시중에 출시되면서 여드름 화장품 성분이 면포를 유발할 가능성을 확인하기 위해 면포 유발 평가 시험법의 필요성을 가지게 되었고, 이를 위한 연구가 진행되었다. Fulton 등이 1976년에 발표한 “Non-comedogenic cosmetics”를 시작[8]으로 1979년에 Kligman과 Kwong이 사람의 피지를 토끼 귀에 적용시킨 방법[9,10]을 토대로 화장품 원료에 대한 면포 유발 평가 시험에 대해 발표하였다[11].
- 또한 시험 방법적 측면에서도 시험 부위가 등이라는 점과 장기간 폐쇄된 환경에서 면포 유발 여부를 확인해야 한다는 점에서 실제 제품을 얼굴에 사용하여 발생되는 결과와 상이할 가능성을 가지고 있었다. 따라서 본 연구를 통해 이러한 한계점을 극복하고 국내 실정에 맞는 평가 방법의 구축을 위해 시험 부위와 시료 적용방법의 전환이 가능한지를 확인하여 결과에 대한 해석의 기준을 마련하고자 인체적용 시험을 실시하였다.
- 이러한 결과들을 통해 논코메도제닉 시험이 국내 환경에서도 적용이 가능하다는 결론을 내릴 수 있었으며, 더불어 평가의 정확성을 높이기 위해 면포 채취를 통해 얻은 샘플에 지질염색을 시행하는 것이 도움이 되리라 생각된다. 앞서 실시한 시험 이외에 실제 제품을 사용하는 환경을 통한 안면부 사용성 시험을 추가적으로 진행하여 시험 부위의 전환 가능성을 확인해 보았다. 동일 피험자를 대상으로 얼굴 사용 후에 면포 채취를 실시하였다.
제안 방법
- 여드름 평가법의 인체적용 시험은 2012년 4월 20일 Institutional Review Board (IRB) 승인 후 연구를 진행하였다. 연구자에 의해 피험자 선정/제외 기준에 적합하다고 판단된 피험자가 직접 방문하여 연구자로부터 연구에 대한 시험의 목적과 개요, 시험 방법 및 인체적용 시험 참가에 따른 위험성과 이상반응에 대하여 충분한 설명을 들은 후 자신의 인적 사항과 인체적용 시험 연구 동의서를 작성하고 성별, 연령, 연락처 및 병력과 같은 개인증례기록서(Case Report Form; CRF)를 작성하였다. 시험시료의 경우, 논코메도제닉 제품으로 판매중인 보습제와 자외선 차단제를 선정하였고 피험자를 두 군으로 나누어 각각의 시험시료를 적용하였다.
- 본 시험 방법은 Kligman method[3]로 잘 알려진 시험 방법으로 피험자를 두 그룹(A, B군)으로 나누어 Figure 1과 같이 등 상부를 척추 중심으로 양쪽을 3부위로 나누어 시험 부위를 각각 4 × 4 cm2/site로 표시하고, 무도포 부위(음성대조군), cocoa butter(양성대조군, CIRANDA 제조, 스페인), 피험자 군에 따라 시료 A, B [P 하이포알러제닉 로션(Stifel 제조, 미국)/보습제, E 하우스 선프라이즈 내추럴코렉터(아모레퍼시픽 제조, 한국)/자외선 차단제]를 0.3 mL씩 각각 무작위로 도포하여 폐쇄 첩포를 시행하였다.
- 6세)으로 시험을 완료하였다(Table 2). 인체적용 시험 가이드라인에 따라 진행하는 것을 원칙으로 하였으며 피험자들은 시험에 대한 정보의 비밀 유지 및 성실의 의무를 다 하였다.
- 3 mL씩 각각 무작위로 도포하여 폐쇄 첩포를 시행하였다. 48 h 후 및 72 h 후에 각각 patch 제거와 재첩포를 반복하였다. 이 과정을 4주 동안 주 3회(월, 수, 금) 반복하여 총 12회 폐쇄 첩포를 시행하였다.
- 48 h 후 및 72 h 후에 각각 patch 제거와 재첩포를 반복하였다. 이 과정을 4주 동안 주 3회(월, 수, 금) 반복하여 총 12회 폐쇄 첩포를 시행하였다.
- 폐쇄 첩포 각 회차에 첩포 제거 30 min 경과 후에 국제 접촉피부염연구회(ICDRG)의 피부자극 판정 기준에 따라 홍반, 부종 및 구진 등의 피부자극 유무를 확인하였다(Table 3).
- 피험자 A군은 시료 A를, B군은 시료 B를 각각 안면부 전체에 8주간 사용하도록 하였다. 시험 시작 전(0주)과 4주, 8주 후에 방문하여 얼굴 부위 중 굴곡이 가장 적은 이마에서 면포를 채취하였고, 채취 방법은 등 상부 면표 채취 방법과 동일하게 진행하였다.
- 피험자 A군은 시료 A를, B군은 시료 B를 각각 안면부 전체에 8주간 사용하도록 하였다. 시험 시작 전(0주)과 4주, 8주 후에 방문하여 얼굴 부위 중 굴곡이 가장 적은 이마에서 면포를 채취하였고, 채취 방법은 등 상부 면표 채취 방법과 동일하게 진행하였다.
- 피험자의 여드름 중증도 평가는 GAGS에 근거하여 0, 4, 8주에 평가하였다. GAGS는 부위에 따른 여드름 score의 합을 계산하여 여드름 중증도를 평가하였다(Table 4).
- 피험자의 여드름 중증도 평가는 GAGS에 근거하여 0, 4, 8주에 평가하였다. GAGS는 부위에 따른 여드름 score의 합을 계산하여 여드름 중증도를 평가하였다(Table 4).
- 등 상부와 이마에서 채취한 면포 표본의 염색 전, 후에 현미경(iMegascope System/(주)썸텍, 한국) 사진을 촬영하였다. 떼어낸 표본 전체에서 무작위로 1 cm2 크기의 5부위를 선택하여 사진 상에 보이는 면포와 모낭의 개수를 세었다(Figure 2) [6].
- 떼어낸 표본 전체에서 무작위로 1 cm2 크기의 5부위를 선택하여 사진 상에 보이는 면포와 모낭의 개수를 세었다(Figure 2) [6]. 염색 전에 촬영한 표본 사진과 염색 후에 촬영한 표본 사진을 판독하여 각각의 결과값 차이를 비교하였다. 또한 (주)엘리드에서 촬영한 표본 사진을 인하대학교 의과대학 피부과학 교실의 2인의 연구자가 판독하여 엘리드의 결과와 비교함으로써 본 연구 결과에 대한 타기관 검증을 수행하였다.
- 염색 전에 촬영한 표본 사진과 염색 후에 촬영한 표본 사진을 판독하여 각각의 결과값 차이를 비교하였다. 또한 (주)엘리드에서 촬영한 표본 사진을 인하대학교 의과대학 피부과학 교실의 2인의 연구자가 판독하여 엘리드의 결과와 비교함으로써 본 연구 결과에 대한 타기관 검증을 수행하였다.
- 본 연구에 대한 타당성 여부를 확인하기 위해 시료 적용 전, 각 시험 부위의 면포 수에 대한 모낭 수의 비(이하 모낭/면포)의 사전 동질성 검정을 실시하였다. 시험시료의 적용 후 면포의 유발 여부를 무도포 및 유발물질 도포 부위의 결과와 비교하여 확인하였다.
- 본 연구에 대한 타당성 여부를 확인하기 위해 시료 적용 전, 각 시험 부위의 면포 수에 대한 모낭 수의 비(이하 모낭/면포)의 사전 동질성 검정을 실시하였다. 시험시료의 적용 후 면포의 유발 여부를 무도포 및 유발물질 도포 부위의 결과와 비교하여 확인하였다.
- 시험시료 도포 전과 후의 모낭/면포에 대한 차이를 분석하였다. A군에서 3개의 시험 부위 간 차이에 대하여 반복측정 분산분석을 실시한 결과, 시험 부위 간 모낭/면포는 유의한 차이가 있는 것으로 나타났으며(p = 0.
- 염색 후 모낭/면포에 대한 차이를 분석하였다. A군에서 3개의 시험 부위 간 차이에 대하여 반복측정 분산분석을 실시한 결과, 시험 부위 간 모낭/면포는 유의한 차이가 있는 것으로 나타났으며(p < 0.
- 실제 사용을 통한 면포 유발 여부 확인과 그에 따른 여드름 진행 정도를 육안평가를 이용하여 상관성을 확인하였다.
- 4명의 연구자가 읽은 모낭과 면포 개수의 대해 Oil red O 염색 전, 후의 일치도(ICC)를 비교하였다. ICC value값의 기준은 κ ≤ 0.
- 등 상부 폐쇄 첩포 시험 기간 동안 제품에 대한 피부자극 평가를 실시하였고, 시험기간 동안 도포된 시료에 의한 특별한 피부 자극 및 이상반응은 발생하지 않았다.
- 현재 외국에서 실시하고 있는 방법으로써 논코메도 제닉 시험(non-comedogenic test)을 이용하여 국내 환경에서도 동일한 결과를 얻을 수 있을지에 대한 시험 타당성 여부를 검증함과 동시에 실제 화장품의 사용방법에 맞게 안면부에 도포하여 얻어진 결과가 기존 시험방법의 결과와 상관성을 보이는지 확인하였다. 시험시료는 ‘논코메도제닉’으로 판매되는 보습제와 전성분에서 면포 유발 가능성이 높은 원료[14]가 5가지 이상 배합된 자외선 차단제를 선택하였다.
- 결과 분석 방법은 cyanoacrylate glue를 통해 슬라이드 글라스에 채취된 면포와 모낭의 흔적을 1 cm2 당 개수로 파악하여 면포 수에 대한 모낭 수의 비(모낭/면포)를 구하여 시료 적용 전, 후의 면포 유발 여부를 확인하는 것이다. 따라서 면포와 모낭의 개수를 정확하게 파악하는 것이 가장 중요하다.
- 앞서 실시한 시험 이외에 실제 제품을 사용하는 환경을 통한 안면부 사용성 시험을 추가적으로 진행하여 시험 부위의 전환 가능성을 확인해 보았다. 동일 피험자를 대상으로 얼굴 사용 후에 면포 채취를 실시하였다. 이때 GAGS를 이용한 육안평가도 함께 진행하여 면포 유발 여부에 대한 여드름 발생 경향성을 확인하였다.
- 동일 피험자를 대상으로 얼굴 사용 후에 면포 채취를 실시하였다. 이때 GAGS를 이용한 육안평가도 함께 진행하여 면포 유발 여부에 대한 여드름 발생 경향성을 확인하였다. 등에 적용한 시험결과와 마찬가지로 안면부 사용성 시험의 결과 또한 면포를 유발하지 않았고, 이들 결과 간의 상관분석 결과는 얼굴 적용시험의 염색 후 분석 결과와 상관성이 있음을 밝힐 수 있었다.
- 본 연구에서는 시험시료가 무도포와 유발 물질 도포 부위와의 분산분석을 이용하여 시료의 ‘논코메도제닉’을 판정하였고, 이런 시험 방법과 통계적 기법이 실험의 타당성을 확보할 수 있는 방법이라 생각된다. 타기관 검증을 위해 면포와 모낭의 사진 판독을 인하대학교 의과대학 피부과학 교실과 함께 진행하였고, 각 기관 간의 큰 차이가 없어 본 평가법에 대한 객관성과 신뢰성을 확인할 수 있었다.
대상 데이터
- 연구자에 의해 피험자 선정/제외 기준에 적합하다고 판단된 피험자가 직접 방문하여 연구자로부터 연구에 대한 시험의 목적과 개요, 시험 방법 및 인체적용 시험 참가에 따른 위험성과 이상반응에 대하여 충분한 설명을 들은 후 자신의 인적 사항과 인체적용 시험 연구 동의서를 작성하고 성별, 연령, 연락처 및 병력과 같은 개인증례기록서(Case Report Form; CRF)를 작성하였다. 시험시료의 경우, 논코메도제닉 제품으로 판매중인 보습제와 자외선 차단제를 선정하였고 피험자를 두 군으로 나누어 각각의 시험시료를 적용하였다.
- 피험자는 Table 1과 같이 선정기준과 제외기준에 따라 모집하였고 A군 27명, B군 26명으로 시작하여 각 군별 5명이 중도 탈락하여 A군 22명(남성 8명, 여성 14명 / 평균나이 27.3세), B군 21명(남성 8명, 여성 13명 / 평균나이 24.6세)으로 시험을 완료하였다(Table 2). 인체적용 시험 가이드라인에 따라 진행하는 것을 원칙으로 하였으며 피험자들은 시험에 대한 정보의 비밀 유지 및 성실의 의무를 다 하였다.
- Kligman method에 따라 시험시료를 적용한 각 시험 부위에 적용 전과 12회 적용 후, 총 2회에 걸쳐 면포 채취를 실시하였다[4]. 채취방법은 cyanoacrylate glue(Henkel Loctite 401, 아일랜드)를 슬라이드 글라스에 1 ~ 2 방울 떨어뜨려 시험 부위에 부착시키고 cyanoacrylate glue가 건조된 후 바로 시험 부위에서 떼어내어 표본을 얻었다.
- 시험시료는 ‘논코메도제닉’으로 판매되는 보습제와 전성분에서 면포 유발 가능성이 높은 원료[14]가 5가지 이상 배합된 자외선 차단제를 선택하였다.
- (주)엘리드의 연구자 2인과 인하대학교 의과대학 피부과학 교실 연구자 2인이 (주)엘리드에서 실시한 면포 유발 시험에 대한 염색 전, 후의 표본 사진을 각각 판독하였다. 그 결과, 기관 간의 ICC value는 0.
데이터처리
- 등 첩포 시험 결과를 반복측정 분산분석(Repeated Measure ANOVA)을 이용하여 시험의 타당성을 검증하였고, 면포 채취 표본의 사진 평가에서 면포와 모낭의 수가 연구자(기관) 간의 비염색 표본 사진과 염색 표본 사진의 차이가 있는지 평가자 간 일치도(Intra Class Correlation; ICC)를 통해 확인하였다. 대조군과의 비교를 통해 시험시료의 면포 유발 여부를 확인하였고 사용성 평가를 통한 면포 유발 결과와 GAGS 육안평가 결과 및 등 상부 반복 폐쇄 첩포를 통한 면포유발 결과와의 상관관계는 Pearson 상관계수 분석 방법을 이용하여 분석하였다.
- 등 첩포 시험 결과를 반복측정 분산분석(Repeated Measure ANOVA)을 이용하여 시험의 타당성을 검증하였고, 면포 채취 표본의 사진 평가에서 면포와 모낭의 수가 연구자(기관) 간의 비염색 표본 사진과 염색 표본 사진의 차이가 있는지 평가자 간 일치도(Intra Class Correlation; ICC)를 통해 확인하였다. 대조군과의 비교를 통해 시험시료의 면포 유발 여부를 확인하였고 사용성 평가를 통한 면포 유발 결과와 GAGS 육안평가 결과 및 등 상부 반복 폐쇄 첩포를 통한 면포유발 결과와의 상관관계는 Pearson 상관계수 분석 방법을 이용하여 분석하였다. 위의 통계분석은 SPSS 20.
이론/모형
- Kligman method에 따라 시험시료를 적용한 각 시험 부위에 적용 전과 12회 적용 후, 총 2회에 걸쳐 면포 채취를 실시하였다[4]. 채취방법은 cyanoacrylate glue(Henkel Loctite 401, 아일랜드)를 슬라이드 글라스에 1 ~ 2 방울 떨어뜨려 시험 부위에 부착시키고 cyanoacrylate glue가 건조된 후 바로 시험 부위에서 떼어내어 표본을 얻었다.
- 따라서 면포와 모낭의 개수를 정확하게 파악하는 것이 가장 중요하다. 면포 채취를 통해 얻은 샘플에서 모공과 유발된 면포 모두 피지 성분이 있을 것이란 가정 하에 식인성을 높이기 위해 지질 염색 방법 중 하나인 Oil red O staining 방법을 적용해 보았다. 실제 염색 후 사진 판독이 염색 전보다 용이하였고 ICC 분석을 통해 염색 전보다 높은 일치도를 확인할 수 있었다.
성능/효과
- 무도포, 유발물질 도포와 시험시료의 적용 전 각 시험 부위에서의 모낭/면포에 대한 차이를 분석한 결과, 비염색 표본의 경우는 시료 A 도포군(p = 0.087)과 시료 B 도포군(p = 0.420), 염색 표본의 경우는 시료 A 도포군(p = 0.076)과 시료 B 도포군(p = 0.088)에서 무도포, 유발물질 도포와 시험시료 간 유의한 차이가 없는 것으로 나타나서 사전 동질성이 있는 것으로 판단하였다(p > 0.05)(Table 5).
- B군에서 3개의 시험 부위 간 모낭/면포는 유의한 차이가 있는 것으로 나타났으며(p < 0.001), 대비 검정 결과, 유발물질 도포 부위의 모낭/면포가 무도포와 시료 B 도포 부위 보다 낮은 것으로 드러났으며, 무도포와 시료 B 도포 부위 간에는 유의한 차이는 없는 것으로 나타났다.
- 시험시료 도포 전과 후의 모낭/면포에 대한 차이를 분석하였다. A군에서 3개의 시험 부위 간 차이에 대하여 반복측정 분산분석을 실시한 결과, 시험 부위 간 모낭/면포는 유의한 차이가 있는 것으로 나타났으며(p = 0.001), 대비검정(Contrast test) 결과, 유발물질 도포 부위의 모낭/면포가 무도포 부위와 시료 A 도포 부위보다 낮은 것으로 드러났으며, 무도포 부위와 시료 A 도포 부위 간에는 유의한 차이는 없는 것으로 나타났다. 도포 전, 후에 대한 시험 부위별 유의차는 무도포 p = 0.
- A군에서 3개의 시험 부위 간 차이에 대하여 반복측정 분산분석을 실시한 결과, 시험 부위 간 모낭/면포는 유의한 차이가 있는 것으로 나타났으며(p < 0.001), 대비 검정 결과, 유발물질 도포 부위의 모낭/면포가 무도포와 시료 A 도포 부위 보다 낮은 것으로 드러났으며, 무도포 부위와 시료 A 간에는 유의한 차이는 없는 것으로 나타났다.
- B군에서 3개의 시험 부위 간 차이에 대한 분석 결과, 시험 부위 간 모낭/면포는 유의한 차이가 있는 것으로 나타났으며(p < 0.001), 대비검정 결과, 유발물질 도포부위의 모낭/면포가 무도포와 시료 B 도포 부위보다 낮았으며, 무도포 부위와 시료 B 간에는 유의한 차이는 없는 것으로 나타났다.
- 주차별 모낭/면포 비율과 GAGS 간의 상관분석을 실시한 결과, 모낭/면포 비율과 GAGS는 유의한 상관관계가 없는 것으로 나타났다(p > 0.05) (Table 9).
- 안면부에서 측정한 0주, 4주, 8주의 모낭/면포 변화에 대한 차이를 분석한 결과, A군의 염색 전 모낭/면포(p = 0.523)와 염색 후 모낭/면포(p = 0.931)는 유의한 변화가 없는 것으로 나타났으며, B군의 염색 전 모낭/면포(p = 0.080)와 염색 후 모낭/면포(p = 0.942) 역시 유의한 변화가 없었다(Table 8).
- 시험 부위를 등에서 실제 화장품의 사용 부위인 얼굴로 대체가 가능한지 상관분석을 통해 확인한 결과, 등과 얼굴의 모낭/면포 비율 간 염색 전에는 상관관계가 없는 것으로 드러났으나, 염색 후에는 등과 얼굴의 모낭/면포 비율에 대한 양의 상관관계가 있는 것으로 나타났다(Table 10).
- 표본 염색 후 ICC값이 염색 전보다 모두 높은 값을 나타내었다. 따라서 염색 전보다 염색 후의 연구자 간의 판독의 차이가 낮은 것으로써, 염색 후 모낭과 면포의 개수를 더 정확하게 파악할 수 있다는 결론을 내릴 수 있었다(Table 11).
- 9 이상으로 높은 일치도를 보였다. 이는 분석 결과의 기관간 차이가 미미한 것으로써 본 연구에서 수행한 시험 방법 및 결과 해석에 대한 신뢰도가 높음을 확인하였다(Table 12).
- 무도포 부위의 경우, 시험 후에 면포가 미미하게 증가되었으나 폐쇄에 따른 현상으로 다른 문헌들과 비교하여 큰 차이를 보이지 않았다. 유발물질의 경우는 다른 연구 결과들과 마찬가지로 면포의 유발이 확인되었으며, 무도포 부위에 비해 통계학적으로 유의한 차이를 나타내었다. ‘논코메도제닉’으로 명기되어 있는 보습제의 경우 양성대조군인 유발물질에 비해 통계적으로 면포 유발 정도가 적었으며, 면포를 유발할 것이라고 예상한 자외선 차단제도 보습제와 마찬가지로 면포를 유발하지 않는 경향을 보였다.
- 면포 채취를 통해 얻은 샘플에서 모공과 유발된 면포 모두 피지 성분이 있을 것이란 가정 하에 식인성을 높이기 위해 지질 염색 방법 중 하나인 Oil red O staining 방법을 적용해 보았다. 실제 염색 후 사진 판독이 염색 전보다 용이하였고 ICC 분석을 통해 염색 전보다 높은 일치도를 확인할 수 있었다. 이러한 결과들을 통해 논코메도제닉 시험이 국내 환경에서도 적용이 가능하다는 결론을 내릴 수 있었으며, 더불어 평가의 정확성을 높이기 위해 면포 채취를 통해 얻은 샘플에 지질염색을 시행하는 것이 도움이 되리라 생각된다.
- 본 연구에서는 시험시료가 무도포와 유발 물질 도포 부위와의 분산분석을 이용하여 시료의 ‘논코메도제닉’을 판정하였고, 이런 시험 방법과 통계적 기법이 실험의 타당성을 확보할 수 있는 방법이라 생각된다.
- 이때 GAGS를 이용한 육안평가도 함께 진행하여 면포 유발 여부에 대한 여드름 발생 경향성을 확인하였다. 등에 적용한 시험결과와 마찬가지로 안면부 사용성 시험의 결과 또한 면포를 유발하지 않았고, 이들 결과 간의 상관분석 결과는 얼굴 적용시험의 염색 후 분석 결과와 상관성이 있음을 밝힐 수 있었다. 염색 전, 후에 대한 상관성 유무가 다른 이유는 염색 전 연구자들 간의 면포와 모낭의 개수에 대한 일관성과 관계성이 약했던 반면 염색 후, 그 결과 값이 보다 명확해지고 관계성이 높아졌기 때문으로 해석된다.
후속연구
- 그러나 대부분 피험자 수에 대한 근거가 부족하였고 결과 분석에 대한 해석이 통일되지 못하였다. 또한 시험 방법적 측면에서도 시험 부위가 등이라는 점과 장기간 폐쇄된 환경에서 면포 유발 여부를 확인해야 한다는 점에서 실제 제품을 얼굴에 사용하여 발생되는 결과와 상이할 가능성을 가지고 있었다. 따라서 본 연구를 통해 이러한 한계점을 극복하고 국내 실정에 맞는 평가 방법의 구축을 위해 시험 부위와 시료 적용방법의 전환이 가능한지를 확인하여 결과에 대한 해석의 기준을 마련하고자 인체적용 시험을 실시하였다.
- 실제 염색 후 사진 판독이 염색 전보다 용이하였고 ICC 분석을 통해 염색 전보다 높은 일치도를 확인할 수 있었다. 이러한 결과들을 통해 논코메도제닉 시험이 국내 환경에서도 적용이 가능하다는 결론을 내릴 수 있었으며, 더불어 평가의 정확성을 높이기 위해 면포 채취를 통해 얻은 샘플에 지질염색을 시행하는 것이 도움이 되리라 생각된다. 앞서 실시한 시험 이외에 실제 제품을 사용하는 환경을 통한 안면부 사용성 시험을 추가적으로 진행하여 시험 부위의 전환 가능성을 확인해 보았다.
- 염색 전, 후에 대한 상관성 유무가 다른 이유는 염색 전 연구자들 간의 면포와 모낭의 개수에 대한 일관성과 관계성이 약했던 반면 염색 후, 그 결과 값이 보다 명확해지고 관계성이 높아졌기 때문으로 해석된다. 이는 기존의 등에 적용한 시험에서 얼굴 적용으로 전환할 수 있는 가능성을 보여주는 결과로 볼 수도 있지만, 안면부 시험의 경우 대조군 설정이 이루어지지 않아 결과 판정이 어려운 점 등의 이유로 앞으로 좀 더 추가적인 연구가 필요할 것으로 생각된다.
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