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문제 정의
- 본 연구는 우리나라 최대의 해안사구지역으로 알려진 신두리 해안사구에 자생하고 있는 8종의 해안사구식물과 공생 하는 내생진균을 분리 및 동정하였다. 그리고 신두리 해안사구 식물내생 진균류를 분류학적으로 분석하였고, 내생진균의 종 다양성을 확인하기 위하여, 6종류의 다양한 지수를 적용하여 종 풍부도(Species richness) 및 종 다양성 지수 (Species diversity index)를 분석하였다.
- 그리고 갯잔디에서 분리된 내생진균은 Eurotiomycetes강에 속하는 Eurotiales목의 Penicillium속, Talaromyces속과 Sordariomycetes강에 속하는 Hypocreales 목에 속하는 Fusarium속이 확인되었다. 본 연구에서 분리및 동정된 내생진균들의 유연관계를 확인하기 위하여 계통 수를 작성하여 확인하였다. 작성된 계통수는 가장 많은 비율을 나타내고 있는 자낭균문에 속하는 Eurotiomycetes강의 Eurotiales목과 그리고 Eurotiales목과 가까운 유연관계인 Onygenales목에 속하는 내생진균을 나타내었고(Fig.
- 본 연구에서는 우리나라 최대의 해안사구로 알려진 신두리 해안사구에 자생하는 해안사구식물들의 내생진균에 대한 연구로서, 해안사구식물과 공생하고 있는 내생진균류를 분리 및 동정을 수행하여 분리된 내생진균들의 유연관계를 확인하기 위하여 계통분석을 수행하였으며, 다양성 지수를 적용하여 사구식물 8종에 따른 내생진균의 다양성을 확인 하였다.
제안 방법
- 신두리 해안사구에 자생하는 해안사구식물의 뿌리로부터 분리된 내생진균류의 동정으로 ITS 영역의 염기서열을 확인 하기 위하여, 동결건조 상태의 내생진균류의 균체를 DNeasy Plant mini kit (QIAgen, Valencia, CA, USA)를 사용하여 genomic DNA를 추출하여 PCR의 주형으로 사용하였다[5, 7]. Genomic DNA로부터 rDNA-ITS 영역을 증폭하기 위해 ITS1과 ITS4 primer를 사용하였다[9, 10, 24, 25]. 그리고 내생진균의 동정을 위하여, polymerase chain reaction (PCR) 조건은 최종농도 Tris-HCl 10 mM (pH 8.
- 5% agarose gel에서 전기영동 후, ethidium bromide (EtBr, Sigam-aldrich, USA)을 사용하여 20분 염색한 후, UV transilluminator로 전기영동밴드를 확인하였다[24, 25]. PCR 반응 후, 전기영동 단편들은 QIAquick PCR purification kit (Qiagen Inc., Germany)를 사용하여정제하였으며, ABI PRISM BigDye Terminator Cycle Sequencing Kit (PE Biosystems, Foster City, CA, USA) 를 사용하여 염기서열 결정 반응을 수행하였다. 반응 DNA 단편들은 ABI 310 DNA sequencer (Perkin Elmer, Foster City, CA, USA)를 사용하여 염기서열을 결정하였다[24].
- 1 unit의 Ex-Taq DNA polymerase (Takara, Japan)를 사용하였다. PCR 반응조건은 (95o C, 2 min) predenaturation, (95o C, 30 sec) denaturation, (49.5-54.5o C,1 min) annealing, (72o C, 1 min) extension, (35 cycles) total cycles, (72o C, 7 min) final extension으로 수행하였고, 증폭된 PCR 산물은 1.5% agarose gel에서 전기영동 후, ethidium bromide (EtBr, Sigam-aldrich, USA)을 사용하여 20분 염색한 후, UV transilluminator로 전기영동밴드를 확인하였다[24, 25]. PCR 반응 후, 전기영동 단편들은 QIAquick PCR purification kit (Qiagen Inc.
- 신두리 해안사구에서 채집한 해안사구식물의 뿌리의 토양을 세척하고, 계면활성제(Tween 80, Duksan, South Korea) 를 10분간 2회 처리한 후에 멸균증류수(Sterile distilled water)로 세척하였다. 그리고 과염소산(Perchloric acid, 1%, Duksan, South Korea)을 10분간 2회 처리한 후, 멸균증류수로 세척하여 수분을 제거하였으며, 식물 뿌리시료를 3~4 cm 길이로 절단하여 실험재료로 사용하였다[24, 25]. 식물뿌리시료로부터 내생진균을 분리하기 위하여, 스트렙토마이신(Streptomycin, Sigam-aldrich, USA) 80 ppm이 함유된 Hagem minimal (HM) 배지를 사용하였고, 식물뿌리시료를 최소배지에 올려 25o C 조건에서 배양하였다[7, 19, 23, 25].
- 태안군 신두리 해안사구에 자생하는 해안사구식물에 따른 내생진균의 다양성 분석을 위하여 동정된 내생진균류의 속 (Genus)을 확인하였다. 그리고 내생진균들의 종 풍부도와 종다양성 지수를 적용하여 비교하였다. 종 풍부도는 Mehinick’s index (Dmn) [22]와 Margalef's richness (Dmg) [13]를 적용 하여 분석하였고, 종 다양성 지수는 Fisher’s alpha index (α)[2], Shannon’s diversity index (H’) [11, 15, 17], Simpson's index (D) [11, 16], Simpson's diversity index (1-D) [11, 16]를 적용하여 분석하였다.
- 해안사구식물의 뿌리로부터 분리된 내생진균의 염기서열을 ClustalX 프로그램으로 다중정렬을 수행한 후, Lasergene 7과 BioEdit 프로그램을 사용하여 염기서열을 확인하였다. 그리고 내생진균의 계통학적 분석은 MEGA 5.1프로그램 Neighbor-Joining (NJ: 1000 bootstrap replicates) 방법을 이용하여 분석하였으며[18], 내생진균의 유전적인 동정을 위하여 rDNA-ITS 영역의 염기서열을 NCBI의 nucleotide blast 데이터와 비교하여 확인하였다[24].
- Genomic DNA로부터 rDNA-ITS 영역을 증폭하기 위해 ITS1과 ITS4 primer를 사용하였다[9, 10, 24, 25]. 그리고 내생진균의 동정을 위하여, polymerase chain reaction (PCR) 조건은 최종농도 Tris-HCl 10 mM (pH 8.5), MgCl21.5 mM, dNTPs 200 nM, KCl 40 mM이고, 10 pmol의 primer와 0.1 unit의 Ex-Taq DNA polymerase (Takara, Japan)를 사용하였다. PCR 반응조건은 (95o C, 2 min) predenaturation, (95o C, 30 sec) denaturation, (49.
- 그리고 식물뿌리시료 단면에서 내생진균류를 toothpicking 하였고, HM 배지에 획선도말법(Streaking)을 이용하여 다시 25o C 조건에서 배양하였다. 그리고 식물뿌리 내생진균을 potato dextrose agar (PDA, Difco, USA)에 계대배양하였고, 균사의 형태, 색상 등을 확인하고 선별하여 순수 분리하였다[24, 25]. 해안사구식물의 뿌리에서 순수 분리한 내생진균류의 동정을 위하여, potato dextrose broth (PDB, Difco, USA)에서 7일동안 120 rpm으로 25o C 조건하에서 진탕배양 (shake culture) 하였으며, 여과지를 사용하여 내생진균의 균체(mycobiont)를 동결건조하여 동정을 위한 시료로 사용하였다[24, 25].
- 식물뿌리시료로부터 내생진균을 분리하기 위하여, 스트렙토마이신(Streptomycin, Sigam-aldrich, USA) 80 ppm이 함유된 Hagem minimal (HM) 배지를 사용하였고, 식물뿌리시료를 최소배지에 올려 25o C 조건에서 배양하였다[7, 19, 23, 25]. 그리고 식물뿌리시료 단면에서 내생진균류를 toothpicking 하였고, HM 배지에 획선도말법(Streaking)을 이용하여 다시 25o C 조건에서 배양하였다. 그리고 식물뿌리 내생진균을 potato dextrose agar (PDA, Difco, USA)에 계대배양하였고, 균사의 형태, 색상 등을 확인하고 선별하여 순수 분리하였다[24, 25].
- 본 연구는 우리나라 최대의 해안사구지역으로 알려진 신두리 해안사구에 자생하고 있는 8종의 해안사구식물과 공생 하는 내생진균을 분리 및 동정하였다. 그리고 신두리 해안사구 식물내생 진균류를 분류학적으로 분석하였고, 내생진균의 종 다양성을 확인하기 위하여, 6종류의 다양한 지수를 적용하여 종 풍부도(Species richness) 및 종 다양성 지수 (Species diversity index)를 분석하였다.
- 채집한 해안사구식물은 모래지치(Argusia sibirica), 갯메꽃(Calystegia soldanella), 갯그령(Elymus mollis), 반디지치(Lithospermum zollingeri), 갯무(Raphanus sativus), 솔장다리(Salsola collina), 왕잔디 (Zoysia macrostachya) 및 갯잔디(Zoysia sinica)이며, 신두리 해안사구의 다양한 지역에서 식물샘플들을 채집하여 실험재료로 사용하였다(Table 1). 그리고 해안사구식물들은 식물 종에 따라 식물코드(Plant code)로 분류하여 본 연구에 사용하였다.
- , Germany)를 사용하여정제하였으며, ABI PRISM BigDye Terminator Cycle Sequencing Kit (PE Biosystems, Foster City, CA, USA) 를 사용하여 염기서열 결정 반응을 수행하였다. 반응 DNA 단편들은 ABI 310 DNA sequencer (Perkin Elmer, Foster City, CA, USA)를 사용하여 염기서열을 결정하였다[24].
- 그리고 종 다양성 지수의 값이 높은 수치가 나올수록 다양성은 높고, 낮은 수치가 나올수록 종 다양성은 낮게 분포하는 것을 의미하고 있다. 본 연구에서는 6종류의 종 풍부 도와 종 다양성 지수로 나타내었으며, 지수마다 나타내는 식의 척도가 조금씩 다르기 때문에 6종류의 지수를 적용하여 비교분석하였다.
- 신두리 해안사구에 자생하는 해안사구식물의 뿌리로부터 분리된 내생진균류의 동정으로 ITS 영역의 염기서열을 확인 하기 위하여, 동결건조 상태의 내생진균류의 균체를 DNeasy Plant mini kit (QIAgen, Valencia, CA, USA)를 사용하여 genomic DNA를 추출하여 PCR의 주형으로 사용하였다[5, 7]. Genomic DNA로부터 rDNA-ITS 영역을 증폭하기 위해 ITS1과 ITS4 primer를 사용하였다[9, 10, 24, 25].
- 신두리 해안사구에서 채집한 해안사구식물의 뿌리의 토양을 세척하고, 계면활성제(Tween 80, Duksan, South Korea) 를 10분간 2회 처리한 후에 멸균증류수(Sterile distilled water)로 세척하였다. 그리고 과염소산(Perchloric acid, 1%, Duksan, South Korea)을 10분간 2회 처리한 후, 멸균증류수로 세척하여 수분을 제거하였으며, 식물 뿌리시료를 3~4 cm 길이로 절단하여 실험재료로 사용하였다[24, 25].
- 태안군 신두리 해안사구에 자생하는 해안사구식물에 따른 내생진균의 다양성 분석을 위하여 동정된 내생진균류의 속 (Genus)을 확인하였다. 그리고 내생진균들의 종 풍부도와 종다양성 지수를 적용하여 비교하였다.
- 8S와 ITS2를 포함하는 ITS-rDNA 영역에 의해 분석되었다. 해안사구식물로부터 분리된 내생진균에 대하여 다양한 지수를 적용하여 분석하였다. 해안사구식물로부터 분리된 모든 내생진균은 Capnodiales (3.
- 해안사구식물의 뿌리로부터 분리된 내생진균의 동정을 수행하였고, 각 식물의 내생진균 ITS 염기서열을 이용하여 NCBI의 GenBank에서 blast search를 수행하였다. 그 결과, 가장 유의성이 높은 균주들을 확인하였으며 염기서열을 GenBank에 등록하여, 모래지치(JX238530-JX238548), 갯메꽃(JX238562-JX238572), 갯그령(JX238576-JX238583), 반디지치(JX238589-JX238606), 갯무(JX238615- JX238623), 솔장다리(JX238624-JX238637), 왕잔디(JX238667- JX238681), 그리고 갯잔디(JX238682-JX238685)로부터 분리된 균주들의 accession number를 제공받았다(Table 2).
- 해안사구식물의 뿌리로부터 분리된 내생진균의 염기서열을 ClustalX 프로그램으로 다중정렬을 수행한 후, Lasergene 7과 BioEdit 프로그램을 사용하여 염기서열을 확인하였다. 그리고 내생진균의 계통학적 분석은 MEGA 5.
- 그리고 식물뿌리 내생진균을 potato dextrose agar (PDA, Difco, USA)에 계대배양하였고, 균사의 형태, 색상 등을 확인하고 선별하여 순수 분리하였다[24, 25]. 해안사구식물의 뿌리에서 순수 분리한 내생진균류의 동정을 위하여, potato dextrose broth (PDB, Difco, USA)에서 7일동안 120 rpm으로 25o C 조건하에서 진탕배양 (shake culture) 하였으며, 여과지를 사용하여 내생진균의 균체(mycobiont)를 동결건조하여 동정을 위한 시료로 사용하였다[24, 25].
대상 데이터
- 98주의 내생진균은 신두리 해안사구에 자생하고 있는 해안사구식물의 뿌리로부터 분리하였다. 8종의 해안사구식물 샘플은 모래지치(Argusia sibirica), 갯메꽃(Calystegia soldanella), 갯그령(Elymus mollis), 반디지치(Lithospermum zollingeri), 갯무(Raphanus sativus), 솔장다리(Salsola collina), 왕잔디 (Zoysia macrostachya) 및 갯잔디(Zoysia sinica)이며, 신두리 해안사구로부터 채집되었다. 그리고 분리된 내생진균들은 ITS1, 5.
- 태안군 신두리 해안사구에 자생하고 있는 8종의 해안사구 식물의 뿌리로부터 254주를 분리하였고, 형태적으로 다른 내생진균 98주를 최종 선별하였다. 그리고 해안사구식물로부터 분리된 균주는 모래지치로부터 19주, 갯메꽃으로부터 11주, 갯그령으로부터 8주, 반디지치로부터 18주, 갯무로부터 9주, 솔장다리로부터 14주, 왕잔디로부터 15주, 그리고 갯잔디로부터 4주를 선별하였다.
- 본 연구는 충청남도 태안군 신두리 해안사구에 자생하는 8종의 해안사구식물을 채취하였다. 채집한 해안사구식물은 모래지치(Argusia sibirica), 갯메꽃(Calystegia soldanella), 갯그령(Elymus mollis), 반디지치(Lithospermum zollingeri), 갯무(Raphanus sativus), 솔장다리(Salsola collina), 왕잔디 (Zoysia macrostachya) 및 갯잔디(Zoysia sinica)이며, 신두리 해안사구의 다양한 지역에서 식물샘플들을 채집하여 실험재료로 사용하였다(Table 1).
- 그리고 과염소산(Perchloric acid, 1%, Duksan, South Korea)을 10분간 2회 처리한 후, 멸균증류수로 세척하여 수분을 제거하였으며, 식물 뿌리시료를 3~4 cm 길이로 절단하여 실험재료로 사용하였다[24, 25]. 식물뿌리시료로부터 내생진균을 분리하기 위하여, 스트렙토마이신(Streptomycin, Sigam-aldrich, USA) 80 ppm이 함유된 Hagem minimal (HM) 배지를 사용하였고, 식물뿌리시료를 최소배지에 올려 25o C 조건에서 배양하였다[7, 19, 23, 25]. 그리고 식물뿌리시료 단면에서 내생진균류를 toothpicking 하였고, HM 배지에 획선도말법(Streaking)을 이용하여 다시 25o C 조건에서 배양하였다.
- 본 연구는 충청남도 태안군 신두리 해안사구에 자생하는 8종의 해안사구식물을 채취하였다. 채집한 해안사구식물은 모래지치(Argusia sibirica), 갯메꽃(Calystegia soldanella), 갯그령(Elymus mollis), 반디지치(Lithospermum zollingeri), 갯무(Raphanus sativus), 솔장다리(Salsola collina), 왕잔디 (Zoysia macrostachya) 및 갯잔디(Zoysia sinica)이며, 신두리 해안사구의 다양한 지역에서 식물샘플들을 채집하여 실험재료로 사용하였다(Table 1). 그리고 해안사구식물들은 식물 종에 따라 식물코드(Plant code)로 분류하여 본 연구에 사용하였다.
- 태안군 신두리 해안사구에 자생하고 있는 8종의 해안사구 식물의 뿌리로부터 254주를 분리하였고, 형태적으로 다른 내생진균 98주를 최종 선별하였다. 그리고 해안사구식물로부터 분리된 균주는 모래지치로부터 19주, 갯메꽃으로부터 11주, 갯그령으로부터 8주, 반디지치로부터 18주, 갯무로부터 9주, 솔장다리로부터 14주, 왕잔디로부터 15주, 그리고 갯잔디로부터 4주를 선별하였다.
이론/모형
- 종 풍부도는 Mehinick’s index (Dmn) [22]와 Margalef's richness (Dmg) [13]를 적용 하여 분석하였고, 종 다양성 지수는 Fisher’s alpha index (α)[2], Shannon’s diversity index (H’) [11, 15, 17], Simpson's index (D) [11, 16], Simpson's diversity index (1-D) [11, 16]를 적용하여 분석하였다.
성능/효과
- 해안사구식물로부터 분리된 내생진균은 모래지치에서 분리된 내생진균은 자낭균문(Ascomycota)에 속하는 Eurotiomycetes강(Class)에 속하는 Eurotiales목(Order)의 Aspergillus 속, Eupenicillium속, Penicillium속과 Leotiomycetes강에 속하는 Helotiales목의 Cadophora속, 그리고 Sordariomycetes 강에 속하는 Hypocreales목의 Fusarium속과 Xylariales 목의 Xylariales속이 분석되었다. 갯메꽃에서 분리된 내생 진균은 자낭균문에 속하는 Dothideomycetes강에 속하는 Capnodiales목의 Cladosporium속과 Eurotiomycetes강에 속하는 Eurotiales목의 Penicillium속, Talaromyces속과 Leotiomycetes강에 속하지만 분류체계가 명확하지 않은 Incertae sedis목으로 분류되는 Oidiodendron속과 Sordariomycetes강에 속하는 Hypocreales목의 Fusarium 속, Nectriaceae속과 분류체계가 명확하지 않은 Incertae sedis목으로 분류되는 Arthrinium속이 분석되었다. 갯그령에서 분리된 내생진균은 자낭균문에 속하는 Eurotiomycetes 강에 속하는 Eurotiales목의 Nectria속, Penicillium속과 Onygenales 목의 Geomyces속과 Leotiomycetes강에 속하지만 분류체계가 명확하지 않은 Incertae sedis목으로 분류되는 Leotiomycetes속과 Sordariomycetes강에 속하는 Hypocreales목의 Gibberella속, 그리고 담자균문(Basidiomycota) 에 속하는 Agaricomycetes강에 속하는 Polyporales목의 Irpex속이 분석되었다.
- 10%)이 가장 많이 분포하는 것으로 나타났다. 갯메꽃으로 부터 분리된 내생진균이 다른 해안사구식물들로부터 분리된 내생진균의 다양성 보다 높은 것으로 확인되었다.
- 그리고 담자균문에 속하는 Agaricomycetes강에 속하는 Russulales목의 Peniophora속이 확인되었다. 갯무에서 분리된 내생진균은 자낭균문에 속하는 Dothideomycetes강에 속하는 Capnodiales목의 Cladosporium속과 Pleosporales 목의 Paraconiothyrium속과 Eurotiomycetes강에 속하는 Eurotiales목의 Penicillium속이 확인되었다. 솔장다리에서 분리된 내생진균은 자낭균문에 속하는 Dothideomycetes강에 속하는 Capnodiales목의 Cladosporium속과 Eurotiomycetes 강에 속하는 Eurotiales목의 Aspergillus속, Penicillium속, Talaromyces속이 확인되었고, Saccharomycetes강에 속하는 Saccharomycetales목의 Meyerozyma속과 Sordariomycetes강에 속하는 Hypocreales목의 Paecilomyces속과 Glomerellales목의 Plectosphaerella속이 확인되었다.
- 해안사구식물의 뿌리로부터 분리된 내생진균의 동정을 수행하였고, 각 식물의 내생진균 ITS 염기서열을 이용하여 NCBI의 GenBank에서 blast search를 수행하였다. 그 결과, 가장 유의성이 높은 균주들을 확인하였으며 염기서열을 GenBank에 등록하여, 모래지치(JX238530-JX238548), 갯메꽃(JX238562-JX238572), 갯그령(JX238576-JX238583), 반디지치(JX238589-JX238606), 갯무(JX238615- JX238623), 솔장다리(JX238624-JX238637), 왕잔디(JX238667- JX238681), 그리고 갯잔디(JX238682-JX238685)로부터 분리된 균주들의 accession number를 제공받았다(Table 2).
- 왕잔디에서 분리된 내생진균은 Eurotiomycetes강에 속하는 Eurotiales목의 Penicillium속과 Leotiomycetes강에 속하는 Helotiales목의 Lachnum속과 Saccharomycetes강에 속하는 Saccharomycetales목의 Meyerozyma속과 Hypocreales목의 Paecilomyces속이 확인되었다. 그리고 갯잔디에서 분리된 내생진균은 Eurotiomycetes강에 속하는 Eurotiales목의 Penicillium속, Talaromyces속과 Sordariomycetes강에 속하는 Hypocreales 목에 속하는 Fusarium속이 확인되었다. 본 연구에서 분리및 동정된 내생진균들의 유연관계를 확인하기 위하여 계통 수를 작성하여 확인하였다.
- 분리된 내생진균은 크게 자낭균문과 담자균문으로 분류되었고, Agaricomycetes강, Dothideomycetes강, Eurotiomycetes강, Leotiomycetes강, Saccharomycetes강, Sordariomycetes강및 분류체계가 명확하지 않은 incertae sedis강으로 분류되 었다. 그리고 내생진균의 목 수준에서 분류는 Polyporales목, Russulales목, Capnodiales목, Pleosporales목, Eurotiales 목, Onygenales목, Mortierellales목, Helotiales목, Saccharomycetales목, Hypocreales목, Xylariales목, Ophiostomatales 목, Glomerellales목 및 분류체계가 명확하지 않은 incertae sedis목으로 확인되었다. 모든 내생진균은 Arthrinium 속(1.
- 반디지치에서 분리된 내생진균은 자낭균문에 속하는 Eurotiomycetes강에 속하는 Eurotiales목 Eupenicillium속, Penicillium속과 Sordariomycetes강에 속하는 Ophiostomatales목에 속하는 Sporothrix속이 확인되었으며, 분류체계가 명확하지 않은 Incertae sedis강에 속하는 Mortierellales목의 Mortierella속이 확인되었다. 그리고 담자균문에 속하는 Agaricomycetes강에 속하는 Russulales목의 Peniophora속이 확인되었다. 갯무에서 분리된 내생진균은 자낭균문에 속하는 Dothideomycetes강에 속하는 Capnodiales목의 Cladosporium속과 Pleosporales 목의 Paraconiothyrium속과 Eurotiomycetes강에 속하는 Eurotiales목의 Penicillium속이 확인되었다.
- 그리고 Simpson's diversity index (1-D)는 다양성 지수를 나타내지만 균등성지수(Evenness index)에 대한 의미를 가지고 있다. 그리고 종 다양성 지수의 값이 높은 수치가 나올수록 다양성은 높고, 낮은 수치가 나올수록 종 다양성은 낮게 분포하는 것을 의미하고 있다. 본 연구에서는 6종류의 종 풍부 도와 종 다양성 지수로 나타내었으며, 지수마다 나타내는 식의 척도가 조금씩 다르기 때문에 6종류의 지수를 적용하여 비교분석하였다.
- 그리고 종 풍부도와 종 다양성 지수에서 Cs가 높은 지수(Menhinick's index, Fisher’s alpha index, Shannon diversity index, Margalef's richness)로 확인된 이유는 다른 식물보다 내생진균류의 분포가 가장 다양하기 때문에 높은 지수로 확인된 것으로 생각되며, Simpson's index에서 Zm 이 가장 높은 지수로 확인된 이유는 내생진균류의 다양성은 낮으면서 특정한 속의 분포비율이 가장 높기 때문인 것으로 판단된다.
- 내생진균류의 종 풍부도 Menhinick's index (Dmn)의 적용 시에 Cs에서 2.412로 가장 높았고, Rs에서 가장 낮은 수치를 나타내었으며, Margalef's richness (Dmg)는 Cs에서 2.290으로 가장 높은 지수와 Rs에서 0.910으로 가장 낮은 지수를 나타내었다.
- 내생진균류의 종 풍부도를 확인하기 위하여 Mehinick’s index (Dmn)를 적용하였을 때, Asd (1.377), Cs (2.412), Em (2.121), Lz (1.414), Rs (1.000), Sc (1.871), Zm (1.033), Zs (1.500)로 확인되었으며, Margalef's richness (Dmg) 다양성 지수의 적용은 Asd (1.700), Cs (2.920), Em (2.410), Lz (1.730), Rs (0.910), Sc (2.274), Zm (1.110), Zs (1.443)으로 확인되었다.
- 그리고 내생진균의 목 수준에서 분류는 Polyporales목, Russulales목, Capnodiales목, Pleosporales목, Eurotiales 목, Onygenales목, Mortierellales목, Helotiales목, Saccharomycetales목, Hypocreales목, Xylariales목, Ophiostomatales 목, Glomerellales목 및 분류체계가 명확하지 않은 incertae sedis목으로 확인되었다. 모든 내생진균은 Arthrinium 속(1.02%), Aspergillus속(3.06%), Cadophora속(2.04%), Cladosporium 속(3.06%), Eupenicillium속(2.04%), Fusarium 속(5.10%), Geomyces속(1.02%), Gibberella속(1.02%), Irpex 속(1.02%), Lachnum속(1.02%), Leotiomycetes속(1.02%), Meyerozyma속(2.04%), Mortierella속(2.04%), Nectria속 (2.04%), Nectriaceae속(1.02%), Oidiodendron속(1.02%), Paecilomyces속(2.04%), Paraconiothyrium속(1.02%), Penicillium속(59.18%), Peniophora속(1.02%), Plectosphaerella속 (1.02%), Sporothrix속(1.02%), Talaromyces속(4.08%), Xylariales속(1.02%)으로 분류되는 것을 확인하였다. 분리된 내생진균 중에서 분류체계가 명확하지 않은 Mortierella 속, Arthrinium속, Oidiodendron속, Leotiomycetes속이 확인되었으며, 내생진균류 중에서 종이 확인되지 않은 24균주가 확인되었다(Fig.
- 갯그령에서 분리된 내생진균은 자낭균문에 속하는 Eurotiomycetes 강에 속하는 Eurotiales목의 Nectria속, Penicillium속과 Onygenales 목의 Geomyces속과 Leotiomycetes강에 속하지만 분류체계가 명확하지 않은 Incertae sedis목으로 분류되는 Leotiomycetes속과 Sordariomycetes강에 속하는 Hypocreales목의 Gibberella속, 그리고 담자균문(Basidiomycota) 에 속하는 Agaricomycetes강에 속하는 Polyporales목의 Irpex속이 분석되었다. 반디지치에서 분리된 내생진균은 자낭균문에 속하는 Eurotiomycetes강에 속하는 Eurotiales목 Eupenicillium속, Penicillium속과 Sordariomycetes강에 속하는 Ophiostomatales목에 속하는 Sporothrix속이 확인되었으며, 분류체계가 명확하지 않은 Incertae sedis강에 속하는 Mortierellales목의 Mortierella속이 확인되었다. 그리고 담자균문에 속하는 Agaricomycetes강에 속하는 Russulales목의 Peniophora속이 확인되었다.
- 09%)으로 확인되었다. 본 연구에서는 8종의 식물로부터 내생진균을 분석한 결과 Eurotiales 목과 Hypocreales 목의 Penicillium 속(59.18%)과 Fusarium속 (5.10%)이 가장 많이 분포하는 것으로 나타났다. 갯메꽃으로 부터 분리된 내생진균이 다른 해안사구식물들로부터 분리된 내생진균의 다양성 보다 높은 것으로 확인되었다.
- 02%)으로 분류되는 것을 확인하였다. 분리된 내생진균 중에서 분류체계가 명확하지 않은 Mortierella 속, Arthrinium속, Oidiodendron속, Leotiomycetes속이 확인되었으며, 내생진균류 중에서 종이 확인되지 않은 24균주가 확인되었다(Fig. 3)
- 해안사구식물로부터 분리된 모든 내생진균은 2문, 6강, 13목으로 분류가 되었고, 24속으로 분류되는 것을 확인 하였으며, 분류체계가 명확하게 연구되지 않은 incertae sedis 에 속하는 내생진균들이 포함되는 것을 할 수 있었다. 분리된 내생진균은 크게 자낭균문과 담자균문으로 분류되었고, Agaricomycetes강, Dothideomycetes강, Eurotiomycetes강, Leotiomycetes강, Saccharomycetes강, Sordariomycetes강및 분류체계가 명확하지 않은 incertae sedis강으로 분류되 었다. 그리고 내생진균의 목 수준에서 분류는 Polyporales목, Russulales목, Capnodiales목, Pleosporales목, Eurotiales 목, Onygenales목, Mortierellales목, Helotiales목, Saccharomycetales목, Hypocreales목, Xylariales목, Ophiostomatales 목, Glomerellales목 및 분류체계가 명확하지 않은 incertae sedis목으로 확인되었다.
- 갯무에서 분리된 내생진균은 자낭균문에 속하는 Dothideomycetes강에 속하는 Capnodiales목의 Cladosporium속과 Pleosporales 목의 Paraconiothyrium속과 Eurotiomycetes강에 속하는 Eurotiales목의 Penicillium속이 확인되었다. 솔장다리에서 분리된 내생진균은 자낭균문에 속하는 Dothideomycetes강에 속하는 Capnodiales목의 Cladosporium속과 Eurotiomycetes 강에 속하는 Eurotiales목의 Aspergillus속, Penicillium속, Talaromyces속이 확인되었고, Saccharomycetes강에 속하는 Saccharomycetales목의 Meyerozyma속과 Sordariomycetes강에 속하는 Hypocreales목의 Paecilomyces속과 Glomerellales목의 Plectosphaerella속이 확인되었다. 왕잔디에서 분리된 내생진균은 Eurotiomycetes강에 속하는 Eurotiales목의 Penicillium속과 Leotiomycetes강에 속하는 Helotiales목의 Lachnum속과 Saccharomycetes강에 속하는 Saccharomycetales목의 Meyerozyma속과 Hypocreales목의 Paecilomyces속이 확인되었다.
- 솔장다리에서 분리된 내생진균은 자낭균문에 속하는 Dothideomycetes강에 속하는 Capnodiales목의 Cladosporium속과 Eurotiomycetes 강에 속하는 Eurotiales목의 Aspergillus속, Penicillium속, Talaromyces속이 확인되었고, Saccharomycetes강에 속하는 Saccharomycetales목의 Meyerozyma속과 Sordariomycetes강에 속하는 Hypocreales목의 Paecilomyces속과 Glomerellales목의 Plectosphaerella속이 확인되었다. 왕잔디에서 분리된 내생진균은 Eurotiomycetes강에 속하는 Eurotiales목의 Penicillium속과 Leotiomycetes강에 속하는 Helotiales목의 Lachnum속과 Saccharomycetes강에 속하는 Saccharomycetales목의 Meyerozyma속과 Hypocreales목의 Paecilomyces속이 확인되었다. 그리고 갯잔디에서 분리된 내생진균은 Eurotiomycetes강에 속하는 Eurotiales목의 Penicillium속, Talaromyces속과 Sordariomycetes강에 속하는 Hypocreales 목에 속하는 Fusarium속이 확인되었다.
- 본 연구에서 분리및 동정된 내생진균들의 유연관계를 확인하기 위하여 계통 수를 작성하여 확인하였다. 작성된 계통수는 가장 많은 비율을 나타내고 있는 자낭균문에 속하는 Eurotiomycetes강의 Eurotiales목과 그리고 Eurotiales목과 가까운 유연관계인 Onygenales목에 속하는 내생진균을 나타내었고(Fig. 1), 분리된 내생진균 중에서 비율이 낮은 Dothideomycetes강, Leotiomycetes강, Saccharomycetes강, Sordariomycetes강및 담자균문에 속하는 Agaricomycetes강에 속하는 다양한 목에 속하는 내생진균에 대하여 계통수를 확인하였다(Fig. 2).
- 종 다양성 지수를 확인하기 위하여 Fisher’s alpha index (α)를 적용하였을 때, Cs에서 5.684로 가장 높은 지수와 Rs에서 1.594로 가장 낮은 지수를 나타내었고, Shannon diversity index (H’)의 적용 시에 Cs에서 1.972로 가장 높은 지수와 Rs에서 0.684로 가장 낮은 지수를 나타내 었다.
- 해안사구식물로부터 분리된 모든 내생진균은 2문, 6강, 13목으로 분류가 되었고, 24속으로 분류되는 것을 확인 하였으며, 분류체계가 명확하게 연구되지 않은 incertae sedis 에 속하는 내생진균들이 포함되는 것을 할 수 있었다. 분리된 내생진균은 크게 자낭균문과 담자균문으로 분류되었고, Agaricomycetes강, Dothideomycetes강, Eurotiomycetes강, Leotiomycetes강, Saccharomycetes강, Sordariomycetes강및 분류체계가 명확하지 않은 incertae sedis강으로 분류되 었다.
- 해안사구식물로부터 분리된 내생진균에 대하여 다양한 지수를 적용하여 분석하였다. 해안사구식물로부터 분리된 모든 내생진균은 Capnodiales (3.09%), Eurotiales (70.10%), Glomerellales (1.03%), Helotiales (3.09%), Hypocreales (9.28%), Mortierellales (2.06%), Onygenales (1.03%), Ophiostomatales (1.03%), Pleosporales (1.03%), Polyporales (1.03%), Russulales (1.03%), Saccharomycetales (2.06%), Xylariales (1.03%)로 13개 목과 분류체계가 명확하지 않은 Incertae sedis (3.09%)으로 확인되었다. 본 연구에서는 8종의 식물로부터 내생진균을 분석한 결과 Eurotiales 목과 Hypocreales 목의 Penicillium 속(59.
- 해안사구에 자생하는 해안사구식물의 뿌리로부터 분리된 내생진균의 유전학적 다양성을 확인하기 위하여, 분리된 모든 내생진균류를 확인하였으며, Asd에서 6속 9종(Unidentified species: 8 strains), Cs에서 8속 8종 (Unidentified species:3 strains), Em에서 6속 6종(Unidentified species: 2 strains), Lz에서 6속 9종(Unidentified species: 6 strains), Rs에서 3속 5종(Unidentified species: 3 strains), Sc에서 7속 11종, Zm에서 4속 7종(Unidentified species: 2 strains), Zs에서 3속 4종이 확인되었다.
후속연구
- 본 연구는 우리나라 최대의 해안사구지역으로 알려진 신두리 해안사구에 자생하는 해안사구식물과 공생관계를 이루고 있는 내생진균의 분포 및 다양성을 확인하여, 우리나라 특수환경지역으로 분류되는 염 환경지역의 미생물 분포상과 분류체계가 명확하지 않은 미생물의 분류체계 및 염 환경에 자생하는 균류자원 연구에 기초자료가 될 것이라 생각한다.
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