[논문]형질전환 소 난자의 동결보존기술 개발

엄상준; 양정석; 이수민; 조소영; 임준교; 허영태; 허영남; 구본철; 정기수; 김광재; 김지태; 김남형; 고대환

doi:10.12750/jet.2013.28.3.185

형질전환 소 난자의 동결보존기술 개발
Development of Cryopreservation Technique of Transgenic Bovine Embryos 원문보기

Journal of embryo transfer = 한국수정란이식학회지, v.28 no.3, 2013년, pp.185 - 191

엄상준 (상지영서대학교 동물생명산업과) , 양정석 (상지영서대학교 동물생명산업과) , 이수민 (상지영서대학교 동물생명산업과) , 조소영 (상지영서대학교 동물생명산업과) , 임준교 (충북대학교 축산학과) , 허영태 (충북대학교 축산학과) , 허영남 (충북대학교 축산학과) , 구본철 (대구가톨릭대학교 의학과) , 정기수 (강원도가축위생시험소 남부지소) , 김광재 (강원도가축위생시험소 남부지소) , 김지태 (강원도가축위생시험소 남부지소) , 김남형 (충북대학교 축산학과) , 고대환 (상지영서대학교 동물생명산업과)

Abstract ▼ AI-Helper

The purpose of this study is to improve production efficiency of vitrified-thawed transgenic bovine embryos. Transgenic bovine embryos were produced by injection of FIV-GFP lentiviral vector into perivitelline space of in vitro matured MII stage oocytes, and then in vitro fertilization. EGFP-expressing transgenic bovine blastocysts were cultured in serum-containing and serum-free medium. These blsatocysts were vitrified by pull and cut (PNC) container made with 0.25 cm plastic straw. Results indicate that total developmental rates of normal IVF embryo cultured in serum-containing and-free medium into blastocyst were not significantly different (22.3 vs 21.5%) and those of GFP-expressing transgenic bovine embryo into blastocyst showed no significant difference between serum-containing (13.9%) and-free medium (13.1%). However, developmental rate of GFP transgenic embryo was significantly (P<0.05) lower than its of normal IVF embryos. In additional study, we vitrified GFP transgenic normal bovine blastocysts using PNC vitrification method. Survival rate of vitrified-thawed GFP transgenic blastocyst (23.1%) was significantly (P<0.05) lower than its of normal blastocysts (68.9%). Although, survival rate of vitrified-thawed GFP transgenic blastocyst was lower than its of normal blastocyst, our result may suggested that PNC vitrification method is feasible to cryopreserve transgenic embryos. Our next plan will be the production of GFP express transgenic bovine derived from vitrified-thawed embryos using PNC method.

주제어

AI 본문요약
AI-Helper

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문제 정의

따라서 본 연구는 형질전환 소 난자의 동결보존 기술을 개발하여 형질전환 소 생산 효율성을 보다 증진시키고자 실시하였다. 이를 위하여 최근 개발된 PNC 동결용기를 이용한 초자화 동결방법을 응용하여 GFP가 발현되는 형질전환 소 배반포를 동결하였다.
본 실험에 사용한 lentivirus vector는 Feline immunodeficiency virus(FIV)에 근간을 둔 FIV-GFP로서, 표지 유전자인 GFP 유전자를 전이시키기 위한 목적으로 구축하였다. FIV-GFP는 pCDF1-MCS2-EF1-Puro(System Biosciences, USA) vector에 GFP 표지 유전자(Clontech, USA)와 외래 유전자 발현을 증가시키기 위한 인자인 woodchuck hepatitis virus post-transcriptional regulatory element(WPRE) 서열을 도입하여 구축하였다.
최근 본 연구진은 EGFP 발현 형질전환 소를 생산하였다 (Xu 등, 2013). 하지만 수란우에 이식 후 과잉 형질전환 난자의 손실이 있었으며, 이러한 문제를 해결하고자, 본 연구는 형질전환 소 수정란의 동결 보존 후 산자 생산 효율성 증진을 위하여 실시하였다. 우선 소 형질전환 수정란의 이식 후 수태율을 높이고, 형질전환 송아지 생산을 성공시키기 위하여 형질 전환 수정란의 체외배양을 위한 최적의 무혈청 배양법을 개발하고자 실시하였다.
하지만 수란우에 이식 후 과잉 형질전환 난자의 손실이 있었으며, 이러한 문제를 해결하고자, 본 연구는 형질전환 소 수정란의 동결 보존 후 산자 생산 효율성 증진을 위하여 실시하였다. 우선 소 형질전환 수정란의 이식 후 수태율을 높이고, 형질전환 송아지 생산을 성공시키기 위하여 형질 전환 수정란의 체외배양을 위한 최적의 무혈청 배양법을 개발하고자 실시하였다. 그 결과, Table 1에서 보는 바와 같이 일반 체외수정란과 GFP 발현 형질전환 수정란의 경우에 있어서, 일반 체외수정란과 GFP 발현 형질전환 수정란 간의 배반포로의 배발달에 있어서는 유의적으로 GFP 발현 형질전환 수정란이 낮은 배반포율을 보였지만(P<0.
최근 본 연구진은 EGFP 발현 형질전환 소를 생산하였다 (Xu 등, 2013). 하지만 수란우에 이식 후 과잉 형질전환 난자의 손실이 있었으며, 이러한 문제를 해결하고자, 본 연구는 형질전환 소 수정란의 동결 보존 후 산자 생산 효율성 증진을 위하여 실시하였다. 우선 소 형질전환 수정란의 이식 후 수태율을 높이고, 형질전환 송아지 생산을 성공시키기 위하여 형질 전환 수정란의 체외배양을 위한 최적의 무혈청 배양법을 개발하고자 실시하였다.

제안 방법

이렇게 구축된 FIV-GFP vector는 난자 내에 GFP 유전자의 도입을 위해서 고농도의 virus stock을 생산하였다. 293FT 세포에 각각의 expression vector와 packaging vector들을 calci- um phosphate 방법으로 co-transfection 시켜서 virus를 생산하였으며, 4℃에서 16,700 rpm으로 90분간 vertical rotor(Beckman 70Ti, CA, USA)를 이용한 초원심 분리 방법으로 1,000배 이상 농축하였다. 이후 상층액을 완전히 제거한 후 침전물에 DMEM/FBS를 첨가하여 4℃에서 16시간 방치한 후 재부유하였다.
IVD 배양액의 경우, 체외수정란은 IVD 배양액으로 2∼3회 세정 후 전배양으로 평형이 끝난 100 μl IVD 배양액에 15개의 난자를 48시간 배양하였고, 이후 배양 48시간마다 신선한 IVD배양액으로 교체하였다. CR1aa 배양액의 경우 체외수정란은 100 ㎕의 0.3% BSA가 첨가된 CR1aa 배양액으로 48시간동안 배양시킨 후 분할이 이루어진 난자만을 선별하였으며, 이후 48시간 마다 신선한 20% FBS가 첨가된 CR1aa 배양액으로 교체하였다. 이들 체외수정란의 배양은 7∼9일 동안 실시하여 배반포로의 발달을 유도하였다.
FIV-GFP vector를 난자 내 도입을 위해서 미성숙난자를 체외성숙 후 18시간째에 난구세포를 제거 후 미세조작기를 이용하여 위란강 내로 5∼10 pl의 바이럴 벡터를 주입하였다.
본 실험에 사용한 lentivirus vector는 Feline immunodeficiency virus(FIV)에 근간을 둔 FIV-GFP로서, 표지 유전자인 GFP 유전자를 전이시키기 위한 목적으로 구축하였다. FIV-GFP는 pCDF1-MCS2-EF1-Puro(System Biosciences, USA) vector에 GFP 표지 유전자(Clontech, USA)와 외래 유전자 발현을 증가시키기 위한 인자인 woodchuck hepatitis virus post-transcriptional regulatory element(WPRE) 서열을 도입하여 구축하였다. 이렇게 구축된 FIV-GFP vector는 난자 내에 GFP 유전자의 도입을 위해서 고농도의 virus stock을 생산하였다.
05), 각각 배반포의 발달은 배양액에 혈청을 첨가하여 배양하였을 때와 무혈청 배양액에서 배양하였을 때의 차이가 없었다. 또한 GFP 발현 형질전환 수정란 유래 배반포의 대리모에 이식 후 배발생능을 검정하기 위하여, 본 연구에서 확립된 무혈청 배양법과 혈청 첨가배양법으로 발생시킨 GFP 발현 형질전환 수정란 유래의 배반포를 이식용 straw에 장착 후 일부는 현장에서 대리모에 이식하고, 나머지는 회수하여 연구실의 배양기에서 재배양하여 부화율로 생존율을 조사하였다. 그 결과, 일반 체외수정란 유래의 배반포는 부화율에 비교하여 GFP 발현 형질전환 수정란 유래의 배반포의 부화율이 유의하게 낮았지만(P<0.
미성숙 난포란의 체외성숙을 위해서는 TCM-199 배양액(Gibco)에 10% FBS, 5 μg/ml Folltro pin, 1 μg/ml estradiol 17-β가 첨가된 체외성숙용 배양액을 사용하였으며, 난포란은 50 μl 체외성숙 배양액에 10개씩 투입하여 5% CO2체외 배양기에서 24시간 동안 체외성숙을 유도하였다.
본 연구는 형질전환 소 수정란의 동결 보존 후 산자 생산 효율성 증진을 위하여 실시하였다. 본 연구를 위해서 형질전환 소 수정란의 생산은 FIV-GFP 바이럴 벡터를 체외 성숙된 소 난자의 위란강에 주입 후 체외수정을 통하여 생산하였으며, 이렇게 생산된 GFP 발현 형질전환 수정란 유래의 배반포를 PNC를 이용하여 동결하였다. 그 결과, 우선 일반 체외수정란의 경우에 있어서 배양액에 혈청을 첨가하여 배양 시 배반포로의 발달율은 22.
본 연구의 체외수정을 위해서는 동결정액을 융해하여 체외 수정을 실시하였으며, 동결정액은 37℃에서 융해 후 융해된 동결정액을 10 ml BO(Brackett와 Oliphant) 배양액과 혼합하여 원심분리 방법으로 세척한 후, 체외 성숙된 난자가 각각 10개씩 침지가 되어 있는 50 ㎕ Fert-TALP 배양액에서 처리된 정자를 1×106/ml 농도로 주입 후 18시간 동안 공배양함으로써 체외수정을 유도하였다.
생산된 체외수정 유래 배반포의 동결을 위해서는 10% glycerol + 10% FBS가 함유된 PBS 용액(37℃)에 5분간, 10% glycerol + 20% ethylene glycol + 10% FBS가 함유된 PBS에 5분, 25% glycerol + 25% ethylene glycol + 10% FBS가 함유된 PBS에 1분 각각 배반포를 침지 후 5개 정도의 배반포를 Kim 등(2010)에 의해서 개발된 방법을 응용하여 개발된 0.25 ml straw를 이용하여 만든 PNC에 loading한 후 액체질소에 침지하여 동결하였다(Fig. 1). 이후 동결보존 중인 배반포의 융해를 위해서는 액체질소에 침지된 PNC를 꺼내어 손으로 전체를 잡고 해동 후 즉시 37℃의 0.
소 GFP 발현 형질전환 수정란은 0.25 ml straw와 PNC 동결용기를 이용하여 초자화 동결 방법으로 동결 융해 후 생존율을 조사하였다(Table 3). 그 결과, 0.
이 연구로 기존에 광범위하게 사용되고 있는 1∼5% 수준의 형질전환 산자 생산효율을 지닌 수정란의 전핵에 유전자를 미세 주입하는 기술(Wall, 1996) 내지는 Schnieke 등(1997)에 의하여 개발된 체세포 복제 기술보다 월등히 개선된 효율로 형질전환 소를 생산하였다.
따라서 본 연구는 형질전환 소 난자의 동결보존 기술을 개발하여 형질전환 소 생산 효율성을 보다 증진시키고자 실시하였다. 이를 위하여 최근 개발된 PNC 동결용기를 이용한 초자화 동결방법을 응용하여 GFP가 발현되는 형질전환 소 배반포를 동결하였다.
1). 이후 동결보존 중인 배반포의 융해를 위해서는 액체질소에 침지된 PNC를 꺼내어 손으로 전체를 잡고 해동 후 즉시 37℃의 0.5 M, 0.25 M와 0.125 M sucrose가 함유된 PBS에 각각 1분간 침지 후 회수된 배반포는 IVD 배양액에서 배양하였다.
소 미성숙난자의 회수를 위해서는 도축된 소의 난소들을 38℃에 보관하여 실험실로 수송 후 18 gauge의 주사침이 부착된 10 ml 주사기를 이용하여 흡인하였으며, 2∼6 mm 크기의 가시난포만을 회수하여 이를 15 ml 원심 분리관에 분주하고 10분간 정치시켰다. 이후 원심 분리관 하단의 침전물을 채취하여 TL-HEPES 배양액을 첨가 후 실체 현미경 하에서 난자의 세포질이 균일하고, 난구세포가 치밀한 미성숙 난포란 만을 회수하여 실험에 공시하였다. 미성숙 난포란의 체외성숙을 위해서는 TCM-199 배양액(Gibco)에 10% FBS, 5 μg/ml Folltro pin, 1 μg/ml estradiol 17-β가 첨가된 체외성숙용 배양액을 사용하였으며, 난포란은 50 μl 체외성숙 배양액에 10개씩 투입하여 5% CO₂체외 배양기에서 24시간 동안 체외성숙을 유도하였다.

데이터처리

실험결과의 처리군 간의 유의성 검정을 위한 통계처리를 위해서는 SAS program의 Chi-square를 실시하였으며, 유의성은 p<0.05 이하만을 인정하였다.

이론/모형

3. Vitrified-thawed GFP expressed blastocysts by using PNC method(arrow indicate GFP expressed blastocysts).

성능/효과

그 결과, 0.25 ml straw와 PNC 초자화 동결 방법을 이용하였을 경우에 동결 융해 후 회수율은 각각 95.7%와 98.5%로 차이가 없었지만, 생존율에 있어서는 각각 57.1%와 72.5%로써 PNC가 straw보다 현저하게 높았다(P<0.05).
그 결과, Table 1에서 보는 바와 같이 일반 체외수정란과 GFP 발현 형질전환 수정란의 경우에 있어서, 일반 체외수정란과 GFP 발현 형질전환 수정란 간의 배반포로의 배발달에 있어서는 유의적으로 GFP 발현 형질전환 수정란이 낮은 배반포율을 보였지만(P<0.05), 각각 배반포의 발달은 배양액에 혈청을 첨가하여 배양하였을 때와 무혈청 배양액에서 배양하였을 때의 차이가 없었다.
본 연구를 위해서 형질전환 소 수정란의 생산은 FIV-GFP 바이럴 벡터를 체외 성숙된 소 난자의 위란강에 주입 후 체외수정을 통하여 생산하였으며, 이렇게 생산된 GFP 발현 형질전환 수정란 유래의 배반포를 PNC를 이용하여 동결하였다. 그 결과, 우선 일반 체외수정란의 경우에 있어서 배양액에 혈청을 첨가하여 배양 시 배반포로의 발달율은 22.3%로써 무혈청 배양 시 21.5%와 차이가 없었으며, GFP 발현 형질전환 수정란의 배발달에 있어서 배양액에 혈청을 첨가하여 배양 시 배반포로의 발달율은 13.9%로써 무혈청 배양 시 13.1%와 차이가 없었다. 그러나 일반 체외수정란에 비교하여 GFP 발현 형질전환 수정란의 배발달에 있어서 유의적으로 낮았다(P<0.
그 결과, 일반 체외수정란 유래의 배반포는 부화율에 비교하여 GFP 발현 형질전환 수정란 유래의 배반포의 부화율이 유의하게 낮았지만(P<0.05), GFP 발현 형질전환 수정란 유래의 배반포 사이에서는 배양액에 혈청 첨가 유무에 따른 부화율에 차이는 보이지 않았다.
이러한 GFP 발현 형질전환 수정란이 일반 체외수정란의 배발달보다 낮은 이유는, 난자에 lentiviral vector system을 이용하여 GFP 유전자 도입을 위한 미세조작과 외래유전자인 GFP 유전자의 난자 내로의 도입 및 발현에 따른 원인이 발달 저해 현상을 야기시킨 것으로 사료된다. 그렇지만 본 결과에서는 일반 체외수정란 간과 GFP 발현 형질전환 수정란 간의 체외배양에는 무혈청 배양액과 혈청 배양액 간의 유의적 차이가 없었다. 이러한 무혈청 배양액으로 배양하였을 경우에 혈청배양액을 사용하였을 때와 배발달에 차이가 없는 원인으로는 현재 시판 중인 무혈청 배양액은 항산화제와 성장인자인 selenium, taurine, insulin, bFGF(Basic Fibroblast Growth Factor) 등 여러 배발달 증진 물질들이 함유되어 있기 때문에, 혈청의 첨가 없이 무혈청 배양액만으로도 배발생이 가능한 것으로 사료된다.
05). 따라서 이상의 결과는 비록 PNC 초자화 동결 방법을 이용하여 GFP 발현 형질전환 수정란 유래 배반포를 동결 융해를 하였을 경우, 일반 체외 수정란 유래의 배반포 보다는 생존율이 낮았지만, 성공적으로 동결 보존을 하는데 성공하였다. 추후 동결 보존된 GFP 발현 형질전환 수정란 유래 배반포를 대리모에 이식을 통하여 GFP 발현 형질전환 소를 생산할 것이다.
또한 GFP 발현 형질전환 수정란 유래 배반포를 동결 보존하기 위하여 PNC 초자화 동결 방법을 이용하여 GFP 발현 형질전환 수정란 유래 배반포를 동결 융해를 하였을 경우에는 부화율이 23.1%로써 일반 체외 수정란 유래 배반포는 68.9% 보다는 유의하게 낮게 나타났다(P<0.05).
또한 Table 2에서 보는 바와 같이 배반포를 이식용 straw에 장착 후 일부는 현장에서 대리모에 이식하고, 나머지는 회수하여 연구실의 배양기에서 재배양하여 부화율로 생존율을 조사한 결과에 있어서는, 일반 체외수정란 유래의 배반포는 부화율이 92.1%인 반면, GFP 발현 형질전환 수정란 유래의 배반포의 경우에는 부화율이 혈청 첨가 배양에서 배양되었을 때에는 65.8%와 무혈청 배양액에서 배양되었을 때에는 68.1%로써, 일반 체외수정란 유래의 배반포에 비교하여 GFP 발현 형질전환 수정란 유래의 배반포는 유의하게 낮은 부화율을 보였다(P<0.05).
비록 일반 체외수정란 유래의 배반포를 초자화 동결 융해를 하였을 때 0.25 ml straw보다는 PNC를 동결 용기로 이용하는 것이 좋았지만, 이 PNC 초자화 동결 방법을 이용하여 GFP 발현 형질전환 수정란 유래의 배반포를 동결 융해를 하였을 때는 일반 체외수정란 유래의 배반포보다 현저하게 부화율은 낮았고, 퇴화률은 높았다(P<0.05).
이러한 PNC 동결방법을 이용하여 일반 체외수정란과 GFP 형질전환 수정란 유래의 배반포를 동결융해 후 부화율과 퇴행률을 조사한 결과는 Table 4에서 보는 바와 같이 일반 체외수정란 유래의 배반포는 부화율과 퇴행률이 각각 68.9%와 31.1%로써, GFP 발현 형질전환 수정란 유래의 배반포의 23.1%와 76.9%보다 현저하게 부화율은 높았고, 퇴화률은 낮았다(P<0.05).
이상의 결과로 현재 PNC를 동결 용기로 사용하여 소 배반포를 초자화 동결하는 방법은 본 연구진에 의해서 최초로 수행된 결과이며, 비록 일반 체외 수정란 유래의 배반포보다는 동결 융해 후 많은 배반포가 퇴행이 되었지만, GFP 발현 형질 전환 수정란 유래의 배반포는 성공적으로 동결 보존에 성공하였다. 우리는 이후의 연구에서는 이렇게 동결 보존된 GFP 발현 형질전환 소 배반포를 대리모에 이식하여 산자를 생산할 것이다.
체외수정란을 체외배양 시 배양액에 혈청을 첨가 유무에 따른 배발달을 조사한 결과는 Table 1에서 보는 바와 같이 일반 체외수정란의 경우에 있어서 배양액에 혈청을 첨가하여 배양하였을 때에는 배반포로의 발달율은 22.3%로써 무혈청 배양액으로 배양하였을 때의 21.5%와 차이가 없었으며, GFP 발현 형질전환 수정란의 경우에 있어서도 배반포의 발달은 배양액에 혈청을 첨가하여 배양하였을 때에는 13.9%로써 무혈청 배양액에서 배양하였을 때의 13.1%와 차이가 없었다. 그러나 일반 체외수정란과 GFP 발현 형질전환 수정란 간의 배반포로의 배발달에 있어서는 유의적으로 GFP 발현 형질전환 수정란이 낮은 배반포율을 보였다(P<0.

후속연구

이상의 결과로 현재 PNC를 동결 용기로 사용하여 소 배반포를 초자화 동결하는 방법은 본 연구진에 의해서 최초로 수행된 결과이며, 비록 일반 체외 수정란 유래의 배반포보다는 동결 융해 후 많은 배반포가 퇴행이 되었지만, GFP 발현 형질 전환 수정란 유래의 배반포는 성공적으로 동결 보존에 성공하였다. 우리는 이후의 연구에서는 이렇게 동결 보존된 GFP 발현 형질전환 소 배반포를 대리모에 이식하여 산자를 생산할 것이다.
따라서 이상의 결과는 비록 PNC 초자화 동결 방법을 이용하여 GFP 발현 형질전환 수정란 유래 배반포를 동결 융해를 하였을 경우, 일반 체외 수정란 유래의 배반포 보다는 생존율이 낮았지만, 성공적으로 동결 보존을 하는데 성공하였다. 추후 동결 보존된 GFP 발현 형질전환 수정란 유래 배반포를 대리모에 이식을 통하여 GFP 발현 형질전환 소를 생산할 것이다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	난자의 동결보존 기술의 사용 목적은 무엇이 있는가?	난자의 동결보존 기술은 인간의 불임치료뿐만 아니라, 동물의 유전자원 보존을 위하여 매우 중요한 기술이다(Gandini 등, 2007; Saragusty과 Arav, 2011). 그러나 동결은 난자내의 중요한 미세기관들의 손상으로 인하여 난자의 해동 후 생존율 및 발달율의 저하를 야기한다.
	초자화 동결 방법의 동결용기들이 가진 공통점은 무엇인가?	이러한 초자화 동결방법은 여러 연구자들에 의해서 개선되어 modified droplet-vitrification(Riha, 1991), electron microscopic grids(Park 등, 1999), cryotop (Kuwayama 등, 2005) 및 open pulled straws(Vajta 등, 1998) 등의 동결용기들이 개발되었다. 이러한 개선된 동결용기들의 공통점은 최소량(0.1∼1.0 μl)의 초자화 동결액을 이용하여 난자를 급속냉각시키는 것이며(Aray 등, 1993), 이 최소량의 초자화 동결액의 사용 기술은 냉각과 해동의 속도를 증가시켜 초자화 동결액이 난자에 미치는 독성의 감소를 가져오고 있다(Boldt, 2011). 특히 최근에는 사람의 배반포와 분할란의 초자화 동결용기로써 0.
	난자의 동결보존으로 인해 발생하는 난자 손상은 무엇이 있는가?	난자의 동결보존 기술은 인간의 불임치료뿐만 아니라, 동물의 유전자원 보존을 위하여 매우 중요한 기술이다(Gandini 등, 2007; Saragusty과 Arav, 2011). 그러나 동결은 난자내의 중요한 미세기관들의 손상으로 인하여 난자의 해동 후 생존율 및 발달율의 저하를 야기한다. 대표적인 난자의 손상으로는 투명대의 경화, actin filament의 기형 유도, chromosome의 손상 및 부화와 착상의 저하 등이 있으며(Drobnis 등, 1988; Cohen 등, 1992; De Vos와 Van Steirteghem, 2000), 난자 할구의 부분적 분해현상(lysis)으로 인한 난자의 사멸을 야기한다 (El-Toukhy 등, 2003). 따라서 이러한 문제점들의 해결 없이는 성공적인 난자의 동결보존이 어려운 실정이다.

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Xu YN, Uhm SJ, Koo BC, Kwon MS, Roh JY, Yang JS, Choi HY, Heo YT, Cui XS, Yoon JH, Ko DH, Kim T and Kim NH. 2013. Production of transgenic Korean native cattle expressing enhanced green fluorescent protein using a FIV-based lentiviral vector injected into MII oocytes. J. Genet. Genomics 40: 37-43.

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저자의 다른 논문 :

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표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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