[논문]<tex>${\\alpha}1$</tex>,3-Galactosyltransferase 유전자 좌위에서 Membrane Cofactor Protein을 효과적으로 발현하는 자성 돼지 섬유아세포의 생산

오건봉; 김벨라; 황성수; 옥선아; 임석기; 박진기

doi:10.12750/jet.2013.28.3.289

${\\alpha}1$,3-Galactosyltransferase 유전자 좌위에서 Membrane Cofactor Protein을 효과적으로 발현하는 자성 돼지 섬유아세포의 생산
Generation of Female Porcine Fibroblasts Expressing Efficiently Membrane Cofactor Protein at ${\\alpha}1$,3-Galactosyltransferase locus 원문보기

Journal of embryo transfer = 한국수정란이식학회지, v.28 no.3, 2013년, pp.289 - 295

오건봉 (농촌진흥청 국립축산과학원 동물바이오공학과) , 김벨라 (농촌진흥청 국립축산과학원 동물바이오공학과) , 황성수 (농촌진흥청 국립축산과학원 동물바이오공학과) , 옥선아 (농촌진흥청 국립축산과학원 동물바이오공학과) , 임석기 (농촌진흥청 국립축산과학원 동물바이오공학과) , 박진기 (농촌진흥청 국립축산과학원 동물바이오공학과)

Abstract ▼ AI-Helper

Xenotransplantation of pig organs into primates results in fatal damage, referred as hyperacute rejection (HAR), and acute humoral xenograft rejection (AHXR), to the organ graft mediated by antibodies pre-existing and newly-producing in primates against their cognate pig antigens. Functional ablation of ${\alpha}1$,3-galactosyltransferase (Gal-T KO) of pig which is an enzyme involved in synthesis of Gala1-3Galb1-4GlcNAc-R antigen is essentially required to prevent HAR. Moreover, additional genetic modification under Gal-T KO background for enforced expression of human complement regulatory proteins which can inhibits complement activation is known to effectively imped HAR and AHXR. In this study, we constructed a membrane cofactor protein (MCP) expression cassette under control of human $EF1{\alpha}$ promoter. This cassette was inserted between homologous recombination regions corresponding to Gal-T locus. Subsequently this vector was introduced into ear skin fibroblasts of female pig by nucleofection. We were able to obtained 40 clones by neomycin selection and 4 clones among them were identified as clones targeted into Gal-T locus of MCP expression cassette by long-range PCR. Real time RT-PCR was shown to down-regulation of Gal-T expression. From these results, we demonstrated human $EF1{\alpha}$ promoter could induce efficient expression of MCP on cell surface of fibroblasts of female pig.

주제어

AI 본문요약
AI-Helper

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문제 정의

현재까지 보고된 동형접합 Gal-T KO 돼지의 경우는 G1(또는G2) 웅성 이형접합 Gal-T KO 돼지와 G2 자성 이형접합 Gal-T KO 돼지와의 퇴교배에 의해 생산되었다. 본 연구는 이미 개발된 Gal-T 유전자 좌위에 MCP 과발현 카세트가 삽입된 웅성 이형접합 체세포(Ko 등, 2013)에 추가적으로 Gal-T 좌위에 MCP 과발현 카세트가 삽입된 자성 체세포를 생산하여 동형접합 형질전환 돼지 생산 기간을 단축시키고자 실시하였다. 이를 위하여 우선 MCP 과발현을 위하여 돼지의 세포에서 효율적인 유전자 발현을 유도한다고 알려진 EF1α 프로 모터(Londrigan 등, 2007)를 발현조절 부위로 사용한 MCP 과발현 카세트를 재료 및 방법에서 기술한 바와 같이 제작하였다.

가설 설정

PCR screening to verify insertion of pEF1a-MCP-IRES/neo cassette into the Gal-T locus for female clones. A : Strategy to screen successful Gal-T targeting events for female clones. The MCP expression cassette was inserted between the 5-kb left arm and the 2-kb right arm corresponding to the Gal-T genomic sequences.

제안 방법

EF1a-IRES/Neo을 포함한 pBluescript KS II + 벡터를 제한효소 Not I을 사용하여 EF1α 프로모터와 IRES 사이를 절단한 후 Klenow large fragment(NEB, MA, USA)를 처리하여 Not I 위치 염기서열을 변경하였다.
이들 클론의 일부 세포는 공여세포로 제공하기 위하여 분주한 후 동결 보존하였고, 나머지 세포들은 계속 배양을 실시하여 이로부터 유전체 DNA를 추출하였다. EF1a-MCP-IRES/neo 벡터가 Gal-T 좌위에 삽입 되었는지 명확하게 알아보기 위하여 상동 재조합 영역의 바깥쪽에 위치한 프라이머를 이용한 F-PCR 을 수행하였다. Fig.
Arrows indicate the PCR primers used to verify successful targeting events, B : Preliminary PCR analysis was performed using crude lysates with primers 12 and 138, located at the neomycin resistance sequence and outside the right arm, respectively, C : The genomic DNA of preliminary positive clones was isolated and applied as template for F-PCR. Four morphologically active proliferating preliminary positive clones were selected to perform a PCR analysis using primers 146 and 143, which resulted in 8-kb and 11.9-kb bands corresponding to the endogenous sequence and the EF1a-MCP-IRES/neo cassette targeted at the Gal-T locus, respectively. On the size marker (SM), 8 kb and 10 kb indicate the corresponding sizes to the 1-kb ladder(Bioneer, Korea).
1mM β-mercaptoethanol(Invitrogen), 1% antibiotic/antimycotic(Invitrogen)을 첨가한 배양액에서 유지되었다. Gal-T KO/EF1a-MCP-IRES/neo 벡터를 제한효소 Not I을 처리하여 선형으로 만든 후 Amaxa Basic Nucleofector Kit for primary mammalian fibroblasts(#VPI-1002; Lonza, Koln, Germany)를 사용하여 자성 섬유아세포에 도입하였다.
MCP 과발현 카세트가 Gal-T 유전자 좌위에 적중되었는지는 미량의 세포 용해물을 주형으로 프라이머 12 (5’-TCGTGCTTTACGGTATCGCCGCTCCCGATT-3’)와138(5’-TTATAGAGAAACAAGAGTCCTAATTGACTTGT-3’)을 이용한 NeoPCR과, 세포의 유전체 DNA를 주형으로 프라이머 146(5’-AATGGTGGAGAGTAGCTGGGAATGTTACAG –3’)과 143(5’-AACTTGCACCATGAAGTCTCTGCACTCCA G-3’)을 이용한 F-PCR 분석을 수행하였다.
MCP 유전자가 과발현하는지를 알아보기 위하여 MCP 특이적인 프라이머를 사용하여 RT-PCR을 수행하였다. 분석에 이용된 #17078과 #17079 두 클론 모두 MCP를 과발현한다는 것을 알 수 있었다(Fig.
제한효소 PvuII를 사용하여 분리한 MCP cDNA를 염기서열이 변경된 Not I에 삽입하였다(pEF1a-MCP-IRES/ neo). pEF1a-MCP-IRES/neo 벡터를 제한효소 Sma I과 Xba I을 사용하여 절단한 후 Klenow large fragment(NEB)를 처리하여 염기서열을 변형시켰다. 변형된 부분을 Sma I을 사용하여 절단된 Gal-T KO 벡터(Ko 등, 2013)에 삽입하여 Gal-T KO/EF1a-MCP-IRES/neo 벡터를 완성하였다.
이전의 연구(Ko 등, 2013)에서 Gal-T가 이형 접합 형태로 KO되면 Gal-T 발현량이 감소한다는 것을 보여주었다. 그래서 본 연구에서도 Gal-T 발현량을 알아보고자 #17078과 #17079자성 클론으로부터 총 RNA를 추출하여 real time RT-PCR 분석을 실시하였다. 그 결과, 두 클론 모두 정상의 세포보다 Gal-T의 발현이 감소하였고, 그 감소율이 웅성의 것(Ko 등, 2013)과 유사하여 EF1a-MCP-IRES/neo 벡터가 Gal-T 좌위에 삽입되었다는 것을 추가로 증명할 수 있었다(Fig.
1 벡터(Invitrogen, CA, USA) 프로모터를 제한효소 Nhe I과 Not I으로 절단하여 분리하였고, pIRESneo3벡터의 Nhe I와 Not I 부분에 삽입하였다. 그러고 나서 다시 제한효소 EcoRV와 Sal I를 사용하여 EF1a-IRES/neo 부분만 분리한 후 pBluescript II KS + 벡터(Stratagene, CA, USA)의 제한효소 Sma I과 Sal I 위치에 삽입하였다. EF1a-IRES/Neo을 포함한 pBluescript KS II + 벡터를 제한효소 Not I을 사용하여 EF1α 프로모터와 IRES 사이를 절단한 후 Klenow large fragment(NEB, MA, USA)를 처리하여 Not I 위치 염기서열을 변경하였다.
배양 중인 섬유아세포를 Hank’s balanced salt solution(HBSS)로 3회 세척 후, enzyme-free cell dissociation solution(EMD Millipore Corporation, MA, USA)을 처리하여 세포를 부유하였다. 그리고 1시간 0℃에서 fluorescein isothiocyanate(FITC) -conjugated anti-CD46 항체(BioLegend, CA,USA)와 배양한 후유세포 분석기(BD FACSvantageTMSE, Germany)로 측정했다
본 연구에서 EF1α 프로모터의 조절에 의해 membrane co- factor protein(MCP) 과발현을 유도하는 카세트를 제작한 후, Gal-T 좌위에 삽입시킨 자성 돼지 섬유아세포를 생산하였다.
이를 위해 기존에 생산된 Gal-T KO 형질전환 돼지를 기본으로 다양한 형질전환 돼지와의 교배를 통해 다중 형질전환 돼지들이 생산되었다(Ramsoondar 등, 2003; Takahagi 등, 2005; Petersen 등, 2009; Phelps 등, 2009; Ekser 등, 2010; Lin 등, 2010). 본 연구에서는 Gal-T 좌위에 MCP 과발현 카세트를 삽입시킨 자성 체세포주를 생산하여 공여세포로 제공되고 있다. 이전의 연구에서 웅성 체세포주를 성공적으로 생산한 바(Ko 등, 2013) 자성과 웅성 형질전환 돼지를 생산한다면, 이 돼지의 교배를 통해 Gal-T 좌위에 MCP 과발현 카세트가 삽입된 동형접합 돼지를 생산할 것이며, 이를 통해 형질전환 돼지 생산을 위해 필요한 시간 및 관리 비용이 크게 감소되는 효과를 얻을 것으로 생각된다.
사람 EF1α 프로모터는 pBudCE4.1 벡터(Invitrogen, CA, USA) 프로모터를 제한효소 Nhe I과 Not I으로 절단하여 분리하였고, pIRESneo3벡터의 Nhe I와 Not I 부분에 삽입하였다.
이에 본 연구에서는 EF1α 프로모터의 조절에 의해 MCP 과발현을 유도하는 카세트를 제작하였고, 이를 Gal-T 좌위에 삽입시킬 수 있는 벡터를 제작한 후 자성 돼지 섬유아세포에 nucleofection 방법으로 도입하였다. 선별 과정을 거쳐 40개의 클론을 확보하였고 PCR 스크리닝을 통해 4개의 클론에서 MCP 과발현 카세트가 Gal-T 좌위에 삽입된 것을 확인하였다. 이 클론은 양적 역전사 중합효소 연쇄반응 방법으로 Gal-T의 발현량이 감소한다는 것을 보여주었다.
섬유아세포로부터 총 RNA는 RNeasy Mini Kit(Qiagen, Hilden, Germany)를 사용하여 추출하였다. cDNA는 oligo-dT 프라이머와 Super Script III First Strand cDNA Synthesis Kit(Invitrogen)를 이용해 합성하였다.
Table 1에서 보여준 것처럼 nucleofetion 방법으로 Gal-T KO 벡터를 도입한 결과, neomycin 처리에도 생존한 40개의 클론을 선별하였고, 이 클론을 각각 회수하여 배양을 실시하여 10 cm 크기의 범위까지 증식하는 4개의 클론을 확보할 수 있었다. 이 클론을 상동 재조합 영역의 범위에 벗어난 위치의 염기서열을 프라이머로 F-PCR을 수행하여 4개의 모든 클론의 Gal-T 좌위에 MCP 과발현 카세트가 삽입된 것을 확인하였다. 본 연구의 Gal-T KO 효율은 10%로서, 이전의 연구에서 보여준 FuGENETM6 방법의 2.
이를 위하여 우선 MCP 과발현을 위하여 돼지의 세포에서 효율적인 유전자 발현을 유도한다고 알려진 EF1α 프로 모터(Londrigan 등, 2007)를 발현조절 부위로 사용한 MCP 과발현 카세트를 재료 및 방법에서 기술한 바와 같이 제작하였다.
이에 본 연구에서는 EF1α 프로모터의 조절에 의해 MCP 과발현을 유도하는 카세트를 제작하였고, 이를 Gal-T 좌위에 삽입시킬 수 있는 벡터를 제작한 후 자성 돼지 섬유아세포에 nucleofection 방법으로 도입하였다.
EF1a-IRES/Neo을 포함한 pBluescript KS II + 벡터를 제한효소 Not I을 사용하여 EF1α 프로모터와 IRES 사이를 절단한 후 Klenow large fragment(NEB, MA, USA)를 처리하여 Not I 위치 염기서열을 변경하였다. 제한효소 PvuII를 사용하여 분리한 MCP cDNA를 염기서열이 변경된 Not I에 삽입하였다(pEF1a-MCP-IRES/ neo). pEF1a-MCP-IRES/neo 벡터를 제한효소 Sma I과 Xba I을 사용하여 절단한 후 Klenow large fragment(NEB)를 처리하여 염기서열을 변형시켰다.
프라이머 5’-ATCAGCTGA TGGAGCCTCCCGGCCGC-3’와 5’-GCCAGCTGTCAGCCTCT CTGCTCTGCTGGA-3’을 이용하여 MCP cDNA의 양쪽 말단에 제한효소 Pvu II 염기서열을 위치시켰다.

대상 데이터

MCP cDNA 클론은 21C Frontier Human Gene Bank(Clone ID,hMU002255)에서 구입하였다. 프라이머 5’-ATCAGCTGA TGGAGCCTCCCGGCCGC-3’와 5’-GCCAGCTGTCAGCCTCT CTGCTCTGCTGGA-3’을 이용하여 MCP cDNA의 양쪽 말단에 제한효소 Pvu II 염기서열을 위치시켰다.
Table 1에서 보여준 것처럼 nucleofetion 방법으로 Gal-T KO 벡터를 도입한 결과, neomycin 처리에도 생존한 40개의 클론을 선별하였고, 이 클론을 각각 회수하여 배양을 실시하여 10 cm 크기의 범위까지 증식하는 4개의 클론을 확보할 수 있었다. 이 클론을 상동 재조합 영역의 범위에 벗어난 위치의 염기서열을 프라이머로 F-PCR을 수행하여 4개의 모든 클론의 Gal-T 좌위에 MCP 과발현 카세트가 삽입된 것을 확인하였다.
섬유아세포로부터 총 RNA는 RNeasy Mini Kit(Qiagen, Hilden, Germany)를 사용하여 추출하였다. cDNA는 oligo-dT 프라이머와 Super Script III First Strand cDNA Synthesis Kit(Invitrogen)를 이용해 합성하였다. 유전자 전사체 발현량은 Light Cycler Fast Start DNA Master SYBR I Kit(Roche, Germany)을 이용한 real-time PCR 방법으로 분석하였다.

이론/모형

Nucleofection 방법으로 선형화된 Gal-T KO/EF1a-MCP-IRES /neo 벡터를 자성 귀조직 섬유아세포에 도입하였다. Neomycine 선별 작업을 통해 40개의 클론을 확보하여 48-well 배양접시, 24-well 배양접시로 차례로 옮긴 후 이 중에서 세포 증식이 멈춰 세포 노화기로 추정되는 클론을 제외한 20개의 클론을 대상으로 1차 NeoPCR 유전자형 분석을 실시한 결과, 6개의 클론이 잠정적으로 Gal-T에 KO된 것으로 확인하였다.
cDNA는 oligo-dT 프라이머와 Super Script III First Strand cDNA Synthesis Kit(Invitrogen)를 이용해 합성하였다. 유전자 전사체 발현량은 Light Cycler Fast Start DNA Master SYBR I Kit(Roche, Germany)을 이용한 real-time PCR 방법으로 분석하였다. Gal-T 발현 분석을 위한 프라이머는 5’-TACATCATGGTGGATGAT ATCTC-3’와 5’-GCCTGTAGCTGAGCCACCGACTG-3’를 사용하였고, MCP mRNA 발현을 위한 프라이머는 5’-GAAGC TATGGAGCTCATTGGTAAA-3’와 5’-TTGCTACTGATCCTT TAAGTTCAC-3’를 사용하였다.

성능/효과

EF1a-MCP-IRES/neo 벡터가 Gal-T 좌위에 삽입 되었는지 명확하게 알아보기 위하여 상동 재조합 영역의 바깥쪽에 위치한 프라이머를 이용한 F-PCR 을 수행하였다. Fig. 1에서와 같이 4개의 모든 클론에서 내인성 Gal-T에서 나타날 수 있는 약 8 kb 크기의 밴드와 MCP 과발현 카세트가 정확한 위치에 삽입되었을 경우 나타날 수 있는 약 11.9 kb 크기의 밴드를 보여주어 EF1a-MCP-IRES/neo 벡터가 Gal-T 좌위에 삽입되었다는 것을 확인할 수 있었다(Fig. 1).
Nucleofection 방법으로 선형화된 Gal-T KO/EF1a-MCP-IRES /neo 벡터를 자성 귀조직 섬유아세포에 도입하였다. Neomycine 선별 작업을 통해 40개의 클론을 확보하여 48-well 배양접시, 24-well 배양접시로 차례로 옮긴 후 이 중에서 세포 증식이 멈춰 세포 노화기로 추정되는 클론을 제외한 20개의 클론을 대상으로 1차 NeoPCR 유전자형 분석을 실시한 결과, 6개의 클론이 잠정적으로 Gal-T에 KO된 것으로 확인하였다. 이들 클론의 일부 세포는 공여세포로 제공하기 위하여 분주한 후 동결 보존하였고, 나머지 세포들은 계속 배양을 실시하여 이로부터 유전체 DNA를 추출하였다.
그래서 본 연구에서도 Gal-T 발현량을 알아보고자 #17078과 #17079자성 클론으로부터 총 RNA를 추출하여 real time RT-PCR 분석을 실시하였다. 그 결과, 두 클론 모두 정상의 세포보다 Gal-T의 발현이 감소하였고, 그 감소율이 웅성의 것(Ko 등, 2013)과 유사하여 EF1a-MCP-IRES/neo 벡터가 Gal-T 좌위에 삽입되었다는 것을 추가로 증명할 수 있었다(Fig. 2).
이 클론은 양적 역전사 중합효소 연쇄반응 방법으로 Gal-T의 발현량이 감소한다는 것을 보여주었다. 반면에, MCP의 발현량은 증가하며, 세포 표면에서 효과적으로 발현된다는 것을 보여주었다.
돼지의 장기를 영장류에 이식하면 발생하는 초급성 면역 거부 반응을 극복하기 위한 가장 효율적인 방법은 Gal-T 기능이 완전히 제거된 돼지의 장기를 이식하는 것으로 알려져 있다(Hauschild 등, 2011; Kolber-Simonds 등, 2004; Nottle 등, 2007; Phelps 등, 2003). 본 연구에 사용된 Nucleofection을 포함한 고전적인 유전자의 체세포 도입 방법으로는 특정 유전자의 동형접합 KO 체세포를 생산할 수 없어, 결과적으로 이 세포를 공여세포로 핵이식에 사용하면 이형접합 돼지가 생산된다. 따라서 효율적으로 자손을 증가시키기 위하여 일반적으로 Gal-T가 이형접합의 형태로 KO된 공여 세포는 웅성의 것을 선호하게 된다(Klymiuk 등, 2010).
MCP는 막 관통 당 단백질로서 세포외부 영역에 보체 조절 부분이 존재한다(Liszewski 등, 2005). 본 연구에서 MCP 세포막에서 발현되는지를 알아보기 위해 유세포 분석을 실시하였고, Fig. 3의 B에 나타낸 것처럼 MCP는 세포막에서 효율적으로 발현된다는 것을 확인하였다.
이 클론을 상동 재조합 영역의 범위에 벗어난 위치의 염기서열을 프라이머로 F-PCR을 수행하여 4개의 모든 클론의 Gal-T 좌위에 MCP 과발현 카세트가 삽입된 것을 확인하였다. 본 연구의 Gal-T KO 효율은 10%로서, 이전의 연구에서 보여준 FuGENETM6 방법의 2.3%(Harrison 등, 2002)나 electroporation 방법에 의한 2% 이하(Dai 등, 2002), 8.7% 이하(Ramsoondar 등, 2003)의 결과보다 효율이 더 좋은 결과이었다. Nucleofection은 유전자를 도입하기 어렵다고 알려진 초기세포 특이적인 parameters과 트랜스펙션 용액을 조합시킨 트랜스펙션 방법(Gresch 등, 2004)으로, 다른 연구자들에 의해 green fluorescent protein reporter 유전자를 이용하여 돼지 초기 세포에서 효율적이라는 것이 보고되었다(Nakayama 등, 2007; Sheyn 등, 2008; Skrzyszowska 등, 2008; Dickens 등, 2010).

후속연구

이 거부반응은 사람 및 영장류에는 존재하지 않는 돼지의 항원과 이에 대한 사람 및 영장류에 존재하는 항체의 면역반응에 의해 발생한다. 가장 잘 알려진 항원인 Gal의 합성효소인 Gal-T의 기능이 우선적으로 제거되어야 하며, 추가로 면역반응을 억제시킬 수 있는 보체 조절 단백질이 과발현되면 면역 거부 반응이 효과적으로 제어될 것이라고 제안되었다. 이에 본 연구에서는 EF1α 프로모터의 조절에 의해 MCP 과발현을 유도하는 카세트를 제작하였고, 이를 Gal-T 좌위에 삽입시킬 수 있는 벡터를 제작한 후 자성 돼지 섬유아세포에 nucleofection 방법으로 도입하였다.
Nucleofection은 유전자를 도입하기 어렵다고 알려진 초기세포 특이적인 parameters과 트랜스펙션 용액을 조합시킨 트랜스펙션 방법(Gresch 등, 2004)으로, 다른 연구자들에 의해 green fluorescent protein reporter 유전자를 이용하여 돼지 초기 세포에서 효율적이라는 것이 보고되었다(Nakayama 등, 2007; Sheyn 등, 2008; Skrzyszowska 등, 2008; Dickens 등, 2010). 본 연구와 이전의 연구를 종합해보면 nucleofection은 돼지 초기 섬유아세포에 매우 효율적으로 외래 유전자를 도입시킬 수 있는 트랜스펙션 방법이라고 제안된다.
본 연구에서 EF1α 프로모터의 조절에 의해 membrane co- factor protein(MCP) 과발현을 유도하는 카세트를 제작한 후, Gal-T 좌위에 삽입시킨 자성 돼지 섬유아세포를 생산하였다. 이 세포는 Gal-T 발현량이 감소함과 동시에 MCP를 과발현하는 이형접합체 형태로 Gal-T 유전자가 KO된 것으로 이전의 연구에서 생산한 웅성 체세포(Ko 등, 2013)와 더불어 실제 영장류에 이종 이식 연구에 사용하게 될 동협정합 Gal-T KO 및 MCP 과발현 형질 전환 돼지 생산을 위한 기간 및 비용을 감소시키는 데 크게 기여할 것으로 기대된다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	말기 단계의 장기 부전 환자 치료법 중 가장 좋은 해결책은?	말기 단계의 장기 부전 환자 치료법으로 가장 좋은 해결책은 장기 이식이다. 그렇지만 장기 이식을 대기하는 수여자에 비해 공여자의 수가 극히 적어 이종의 장기를 이식하는 이종이식이 대체 방법의 하나로 제시되고 있다.
	이종이식이 장기 이식의 대체 방법으로 제시되는 이유는?	말기 단계의 장기 부전 환자 치료법으로 가장 좋은 해결책은 장기 이식이다. 그렇지만 장기 이식을 대기하는 수여자에 비해 공여자의 수가 극히 적어 이종의 장기를 이식하는 이종이식이 대체 방법의 하나로 제시되고 있다. 돼지는 사람과 비교했을 때, 그 생리적 특성과 장기의 크기 등 여러 관점에서 대체 장기를 제공하기 위한 가장 적당한 재료로 인식되고 있다.
	영장류에 돼지의 장기를 이식하면 초급성 거부 반응이 발생하는 이유는?	사람과 유사한 면역학적 특성을 보유한 영장류에 돼지의 장기를 이식하면 몇 분에서 몇 시간 안에 이식된 장기가 손상되면서 폐사하게 되는 초급성 거부 반응이 발생한다(Yang과 Sykes, 2007). 이 거부 반응은 사람 및 영장류에는 존재하지 않는 돼지의 Gala1-3Galb1-4GlcNAc-R(Gal) 항원과 이에 대한 사람 및 영장류에 존재하는 Gal 자연항체의 면역 반응에 의해 발생한다(Macher와 Galili, 2008). 그런데 Gal 항원이 제거된 돼지의 장기를 영장류에 이식하면 초급성 거부 반응은 제어되지만, 여전히 급성 체액성(acute humoral rejection)이라 불리는 면역 거부 반응이 발생한다.

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표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

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용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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