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문제 정의
- 경제적 여건 등으로 기르는 고양이를 유기함에 따라 집고양이가 길고양이 되는 개체수가 급격이 증가하고 있다. 하지만 포획되어 유기동물보호소에 보호 중인 고양이는 개에게도 전염될 수 있는 환경이라 함께 조사하였다.
제안 방법
- GPT는 간세포 이상 시 빠르게 증가하는 지표로서 개 17∼78 U/L, 고양이 22∼84 U/L 의 정상치 기준으로 판정했으며, GGT는 간세포 및 담관에 질환을 나타내는 지표로서 개 5∼14 U/L, 고 양이 1∼10 U/L을 기준으로 제조사의 설명서에 따라 실시하였다.
- 2013년 3월부터 8월까지 광주지역 동물보호소의 유기동물 건강검진 시 무작위로 선정한 개 265두와 고양이 35두를 포함한 총 300두에 대하여 경정맥이나 요추골 피부정맥에서 3 mL를 채혈하여 시험에 공하였다. 각 개체별 검사결과는 곧바로 통보하여 보호 동물의 관리에 활용하였다.
- gondii에 의한 감염 항체검사를 위해 ID Screen Toxoplasmosis Indirect Kit (IDVET, France, 일 명: TG kit)를 사용하여 제조사의 설명에 따라 실시하였다. 각 시료의 ELISA 흡광도는 450 nm에서 측정하였으며, 양성에 대해 PCR검사하였다(오, 2014).
- Rabies II kit, Bio-Rad, France, 일명 RV kit)를 사용하여 제조사의 설명에 따라 실시하였다. 각 시료의 흡광도를 측정 파장 450 nm, 참조 파장 620 nm에서 측정하였으며, 혈중 바이러스 항체가 0.5 EU/mL 이상 을 양성으로 판정하였다(Kim 등, 2011). 광견병의 경우 대부분 백신을 수행하고 있으며, 야외 광견병 바이러스 감염에 의한 감염항체와의 구분되지 않으므로 병원체에 대한 유전자검사는 하지 않았다.
- 광주지역 동물보호소에서 보호·관리중인 유기동물의 건강 실태를 알아보고자, 2013년 3월부터 8월까지 300두의 유기동물에 대해 개체별 혈액 생화학치 및 심장사상충, 톡소플라스마, 브루셀라병, 광견병과 같은 인수공통전염병에 대한 혈청학적 검사를 실시하였다.
- 따라서 이번 조사에서는 광주동물보호소의 유기동물의 건강상태를 알 수 있는 혈액 생화학치 검사와 인수공통전염병인 심장사상충증, 톡소플라스마증, 브루셀라병, 광견병에 대한 항원·항체 생성율을 조사하였다.
- 유기동물 혈액 생화학검사는 자동혈액화학치검사기 FUJI DRI-CHEM 4000Ⓡ (FUJI, USA)을 이용하여 간과 심장의 이상 상태를 알 수 있는 glutamic oxaloacetic transaminase (GOT), glutamic pyruvic transaminase (GPT), γ-glutamic transaminase (GGT)를 검사 하였다.
- 통상의 T. gondii에 의한 감염 항체검사를 위해 ID Screen Toxoplasmosis Indirect Kit (IDVET, France, 일 명: TG kit)를 사용하여 제조사의 설명에 따라 실시하였다. 각 시료의 ELISA 흡광도는 450 nm에서 측정하였으며, 양성에 대해 PCR검사하였다(오, 2014).
- 시료를 멸균 phosphate buffered saline (PBS)에 균질 화시켜 3,000 rpm에서 10분간 원심 분리 후 상층액 300 μL를 취하였다. 핵산추출은 자동핵산추출장비 Malcom Mag Genex (PNE 080, JAPAN)를 이용하여 추출한 후, ND-1000 (Nanodrop, USA)으로 DNA/RNA 의 순도를 측정하였다. D.
대상 데이터
- 2013년 3월부터 8월까지 광주지역 동물보호소의 유기동물 건강검진 시 무작위로 선정한 개 265두와 고양이 35두를 포함한 총 300두에 대하여 경정맥이나 요추골 피부정맥에서 3 mL를 채혈하여 시험에 공하였다. 각 개체별 검사결과는 곧바로 통보하여 보호 동물의 관리에 활용하였다.
- D. immitis, T. gondii, B. canis 검사용 Maxime PCR PreMix (iNtRON, Korea)를 사용하였으며, RNase-free water를 첨가하여 총 20 μL 용량으로 실험하였다(Na 등, 2013).
- immitis의 면역학적 항원검사는 Enzyme linked immunosorbent assay (ELISA), Hemagglutination test, Immunochromatagraphy 등이 사용되고 있다. 본 실험 에서는 혈장, 혈청, 전혈을 모두 사용할 수 있도록 개 발하여 판매되고 있는 Heartworm Antigen Canine SNAP 4Dx Heartworm kit (IDEXX Laboratories, Inc, USA, 일명: DI kit)를 사용하였다 (Park, 2010). D.
- 이번 연구는 2013년 3월부터 8월까지 광주지역 동물보호소에 입소한 유기동물 300두를 무작위로 선정하여 건강실태를 조사하였다.
이론/모형
- 각각의 primer는 다음과 같다. D. immitis는 Kim 등(2009), T. gondii는 Sung 등(2012), B. canis는 Kwon 등(2009)이 제시한 방법에 따라 PCR을 수행한 후, 결과 판독을 위해 Mupid-21 (Cosmo, USA)으로 전기영동 후, Luminescent Image Analyzer (ImageQuant LAS400, Fujifilm)사용하여 해당 바이러스 유전자 밴드 유무를 확인하였다(Na 등, 2013)
- 유기동물의 광견병 바이러스 면역항체 검사는 ELISA를 이용한 Rabies antibody test kit (PlateliaⓇ Rabies II kit, Bio-Rad, France, 일명 RV kit)를 사용하여 제조사의 설명에 따라 실시하였다. 각 시료의 흡광도를 측정 파장 450 nm, 참조 파장 620 nm에서 측정하였으며, 혈중 바이러스 항체가 0.
성능/효과
- 1. 유기동물의 혈액 생화학치 GOT, GPT, GGT에 대한 검사결과 기준치 이상이 각각 49.7%, 36.3%, 78.0%로 관찰 되었으며, 인수공통전염병과 상관성이 있었다.
- 2. 유기동물의 인수공통전염병 검사결과 D. immitis의 항원 양성률은 10%로 검출되었으며, T. gondii의 항체 검출률이 6.3%로 관찰되었고, B. canis는 항체가 가 모든 시료에서 검출되지 않았다.
- 3. 유기동물이 버려지기 전 예방접종률을 추정할 수 있는 광견병의 면역항체 양성률은 10%이었으며, 대부분의 유기동물의 항원·항체 검출률은 3∼5월 봄에 높게 나타났다.
- 300두에 대한 RV kit 검사 결과 유기견 9.8% (26/ 265), 유기 고양이 11.4% (4/35)에서 항체 양성을 보였다. 유기견의 품종 중 Mixed 6.
- 4. 유기견의 품종별 분류에서 잡종견이 가장 많았고, D. immitis, T. gondii, B. canis의 검출률이 17.2%였으며, Maltese 17.5%, Poodle 21.4%, Shih Tzu 7.7%, Yorkshir 16.7%로 확인되었다.
- 3%)에서만 나타났다. B. canis의 항체 양성률은 유기견과 유기고양이 모두 검출되지 않았고, RV의 면역양체 양성률은 유기견에서 수컷(12.5%)이 암컷(6.2%)보다 높았고, 연령별로는 수컷이 3세(16.1%), 2세(10.0%), 1세 미만(4.5%)순이었고, 암컷은 5세 이상(22.1%), 3세(7.5%)순으로 나타났으나, 유기고양이에서는 암컷(11.8%)과 수컷(11.1%)이 비슷하였고, 연령별로는 암컷이 1세 미만(33.3%), 수컷도 1세 미만(13.3%)에서 나타났다(Table 3).
- D. immitis (DI)의 항원 양성률은 10%로서 3∼5월 봄에 높게 검출되었다.
- D. immitis의 검출률은 유기견에서 암컷(13.3%)이 수컷(9.9%)보다 높았고, 연령별로는 암컷이 4세(50.0%), 5세 이상(22.2%), 3세(16.4%)순이었고, 수컷은 3세 (10.7%), 2세(10.0%), 1세 미만(9.1%)순으로 나타났으나, 유기고양이에서는 전혀 검출되지 않았다. T.
- 3% (41/113)로 비슷했다. GGT는 수컷에서 78.9% (120/152), 암컷에서 71.7% (81/113)로 수컷이 기준치 이상으로 높았다. 또한 유기 고양이에서도 수컷이 암컷에서 보다 혈액 생화학치가 높게 측정되었다.
- 7%, 유기 고양이는 80%가 기준치를 초과하였고, 연령별, 성별 검출률은 비슷하였다. GPT는 유기견의 경우 36.2%, 유기 고양이는 37.1%가 기준치를 초과하였고, GGT는 유기견의 경우 75.8%, 유기 고양이는 94.2%가 기준치를 초과하였다(Table 1).
- immitis (DI)의 항원 양성률은 10%로서 3∼5월 봄에 높게 검출되었다. T. gondii (TG)의 경우 항체 검출이 6.3%로 야외 감염에 의한 양성률로 관찰되었으며 D.immitis와 같이 봄에 높게 검출되었다. B.
- canis (BC)의 경우 항체가가 모든 시료에서 검출되지 않았다. 광견병의 면역항체 양성률은 10%로 유기동물이 버려지기 전 예방접종률 추정할 수 있었다(Table 2).
- 또한 항원검사 (DI kit)검사 결과 양성 혈청 30두에 대한 혈액 생화학치 평균치와 표준편차에서도 기준 치 이상을 보였다. 따라서 동물보호소 유기동물이 질병에 많이 노출되어서 발병률이 높을 것으로 막연히 예측되었던 것이 이번 조사에서 건강 상태가 좋지 않은 것으로 확인되었다.
- 0 U/L순으로 기준치를 벗어나 있었다. 또한 TG 항체가 검출 유기견 (n=19)이 검출되지 않은 유기견(n=246)보다 혈액 생 화학치가 상대적으로 높았다(Table 6).
- 7% (81/113)로 수컷이 기준치 이상으로 높았다. 또한 유기 고양이에서도 수컷이 암컷에서 보다 혈액 생화학치가 높게 측정되었다. 이는 암컷의 호르몬이 유충의 성장을 지연시킴으로(황, 2005) 기생충성 질환의 발현이 늦어짐에 따라 간세포와 심혈관 질환이 서서히 진행되어 혈액 생화학치의 측정치가 수컷보다 낮게 나온 것으로 본다.
- 4%가 검출되어 봄철에 높게 나타남을 알 수 있었다. 또한 축종간 비교 결과 유기견이 5.7%가 검출된 반면 유기 고양이는 11.4%로서 상대적으로 높게 검출되었음을 확인 할 수 있었다. 연령과 성별에 따른 비교에서 유기견은 암컷보다 수컷이 높게 검출되었고, 연령에서는 특별한 특이점은 찾아볼 수 없었다.
- 따라서 잡종견이 많이 유기되는 이유는 어릴 때는 순종과 차이를 보이지 않고 키우나 시간이 지날수록 크기가 일정하지 않고 커지는 등 모습변화에 따른 순종 선호주의가 키우기가 어려워지는 이유가 되어 유기되는 경향이 있기 때문이라고 보기도 한다(성, 2006). 또한 품종별 1개 이상의 인수공통전염 검출률은 99두를 검사한 잡종견 17.2%를 나타냈다. 그러나 Park(2010)이 보고한 반려동물인 Maltese, Yorkshire Terrier, Poodle 등에서는 DI 가 검출되지 않았다.
- 또한 항원검사 (DI kit)검사 결과 양성 혈청 30두에 대한 혈액 생화학치 평균치와 표준편차에서도 기준 치 이상을 보였다. 따라서 동물보호소 유기동물이 질병에 많이 노출되어서 발병률이 높을 것으로 막연히 예측되었던 것이 이번 조사에서 건강 상태가 좋지 않은 것으로 확인되었다.
- 한편, 톡소플라스마 진단에 있어 PCR이 100% 특이성을 보여 준다고 보고하였다(31, 32). 민감도 좋은 ELISA와 특이도가 좋은 PCR검사 결과를 비교하여 본다면 정확한 감염률을 알 수 있었다. 또한, TG 항체 양성 혈액의 생화학 기준치에서 벗어나 있었다.
- 4%로서 상대적으로 높게 검출되었음을 확인 할 수 있었다. 연령과 성별에 따른 비교에서 유기견은 암컷보다 수컷이 높게 검출되었고, 연령에서는 특별한 특이점은 찾아볼 수 없었다. 유기 고양이의 경우 연령과 성별 특이점은 관찰 되지 않았다.
- 유기 고양이의 혈청에 대한 항체검사(TG kit) 결과 11.4% (4/35)에서 항체가 검출되었으며, 유기견의 혈청에 대한 항체검사 결과 5.7% (15/265)가 검출되었다. 또한 유기견과 유기 고양이의 항체 양성에 대한 PCR검사 결과 모두 음성이었다.
- canis의 인수공통전염병 검출률은 품종에 따라 차이를 보였다(Table 4). 유기견 품종별 검사 두 수는 Mixed 종 99두(37.5%), Maltese 종 57두(21.5%), Poodle 종 28두(10.6%), Shih Tzu 종 26두(9.8%), Yorkshir 종 18두(6.8%) 순으로 Mixed 종이 가장 많이 검사되었으며 인수공통전염병의 양성률은 평균 17%를 보였다.
- 유기견 혈액에 대한 항원검사(DI kit) 결과 11.3% (30/265)에서 양성 반응이 나타났으며, 항원 양성인 전혈의 자충검사 (direct wet smear) 결과 30건 중 9건 (30%)에서 자충이 검경되었다. 또한 자충에 대한 PCR검사 결과 9건 중 7건만 (77.
- 유기견의 Mixed 품종 등 16종에 대한 D. immitis, T. gondii, B. canis의 인수공통전염병 검출률은 품종에 따라 차이를 보였다(Table 4).
- 8%) 검출되었다. 유기견의 품종 중 항원이 제일 많이 검출된 Mixed 종 11.1%의 혈액 생화학 평균치가 GGT 133.9 U/L, GOT 121.5 U/L, GPT 121.5 U/L로 기준치를 크게 벗어났다. 또한 Table 5에서 D.
- 유기동물 건강상태를 확인할 수 있는 혈액 생화학치 측정결과 GOT 49.7%, GPT 36.3%, GGT 78.0%로 기준치 이상을 나타냈다. 이는 유기견이 심장사상충에 감염된 경우 담관에 석회석이 침착되며 유기고양이의 신장과 췌장에 GGT가 기준치 이상으로 높은 농도로 측정 된다(이, 2009).
- 심장사사충의 감염빈도는 수컷이 암컷보다 더 높다고 알려져 있고(Rawlings 등, 2003), 국내의 감염률 조사 역시 수컷이 약간 높았지만 그 유사성은 인정되지 않았다(이희석, 1993). 유기동물의 성별에 따른 혈액 생화학치와 심장사상충 항원과 톡소플라스마와 광견병 항체 검출률을 보면, 유기견 GOT는 수컷에서 44.1% (67/152), 암컷에서 47.8% (54/113)로 암컷이 기준치 이상률이 높았으며, GPT는 수컷에서 36.2% (55/152), 암컷에서 36.3% (41/113)로 비슷했다. GGT는 수컷에서 78.
- 이번 조사는 동물보호소 유기동물에 대한 광견병 바이러스 항체 검출율 조사한 결과, 유기견에서 9.8% (26/265)이었으며, 유기고양이에서는 11.4% (4/35)로 나타났다. 이는 유기동물에 대한 예방접종률이 매우 저조했음을 의미한다.
- 이번 조사에서 3∼5월 8.2%, 6∼8월 3.4%가 검출되어 봄철에 높게 나타남을 알 수 있었다.
- 이번 조사에서 D. immitis 항원 양성율은 10%로 나타났으며, 월별로는 3∼5월인 봄에 높게 나타났다.
- immitis로 확인되어 형태학적 진단의 부정확성과 성충특이항원검사의 한계성을 보고 한 바 있다(Koh 등, 2007). 이번 조사에서도 항원 검사(DI kit) 결과 양성 혈청에 대한 유전자검사 결과 23.3% (7/30)만이 PCR검사 양성으로 검출되었지만 나머지 2두의 항체 양성 혈액은 PCR검사 결과 음성으로 비슷한 양상을 띠었다.
- 또한 유기견과 유기 고양이의 항체 양성에 대한 PCR검사 결과 모두 음성이었다. 항체가 6.1%로 가장 높게 검출된 Mixed의 혈액 생화학 평균치가 GPT 247.8 U/L, GGT 112.1 U/L, GOT 99.0 U/L순으로 기 준치를 벗어나 있었으며, 유기 고양이에서는 GPT 120.5 U/L, GGT 85.3 U/L, GOT 58.0 U/L순으로 기준치를 벗어나 있었다. 또한 TG 항체가 검출 유기견 (n=19)이 검출되지 않은 유기견(n=246)보다 혈액 생 화학치가 상대적으로 높았다(Table 6).
- 혈액 생화학치 측정 결과 GOT는 유기견의 경우 45.7%, 유기 고양이는 80%가 기준치를 초과하였고, 연령별, 성별 검출률은 비슷하였다.
후속연구
- 또한, TG 항체 양성 혈액의 생화학 기준치에서 벗어나 있었다. 따라서 동물보호소 유기동물의 톡소플라스마 감염 예방을 위한 지속적인 실험실검사가 필요한 것으로 생각된다.
- 기존의 혈청학적 검사들이 높은 의양성 또는 위음성 때문에 공시 혈청에 대한 항체(BC kit) 및 PCR검사 (Kwon 등, 2009) 결과 모두 음성으로 확인되었다. 따라서 이번 조사에서는 항체 양성률 0.0% (0/300)이었 지만, 최근 국내 농림축산검역본부에서 개발한 브루셀라균 ONE-STOP 감별진단 키트(Brucella differention PCT kit)를 사용하여 B. canis 등 상동성이 높은 유사 세균을 감별할 수 있게 되어 앞으로 동물보호소 유기 동물에 대한 BC 검출률을 높일 수 있을 것으로 사료 된다.
- 본 연구 결과에 따르면 유기동물에 대한 지속적인 인수공통전염병에 대한 조사가 이루어져야 할 것으로 보며, 동물보호소에서는 적극적인 예방접종 후 분양이 되어야 할 것으로 본다.
- 이번 광주지역의 유기동물에 대한 건강 실태조사 를 통해 유기견에 대한 혈청모니터링 검사를 지속적으로 확대함으로서 인수공통전염병의 위험성을 대비해야 할 것으로 보며, 검사결과 건강한 유기동물이 시민에게 분양되어야 할 것의 본다.
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