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문제 정의
- 본 연구에서 간 기능에 미치는 영향에 대해 알아보기 위해 혈청내 Transaminase 중 AST(aspartate transaminase), ALT(alanine transaminase)를 측정하였는데 AST, ALT는 간장의 손상을 측정하는 민감한 지표이다. AST는 간, 심장, 근골격계, 신장, 뇌에 존재하는 효소로써 이들 조직이 손상되면 혈중으로 유리되어 수치가 증가하고, ALT는 간에 대부분 존재하는 효소로 간 손상 시 수치가 증가한다 30).
- 본 연구에서는 레이저침 시술이 신경병성 동통에 미치는 영향을 파장대별 발현양상에 따라 관찰하기 위해서, 기타의 조건은 동일하게 하면서 각각 파장대를 달리하는 5개의 레이저침군을 구성하였다. 관찰의 방법은 tibial &sural nerve transection(TST)로 유발된 동통유발 흰쥐에 대하여 파장대별로 레이저침을 시행한 후 plantar withdrawal response 동통지수, 혈액학적 변화, 혈청학적 변화, 증체량 및 신경조직반응 등을 각각의 파장대별 레이저침군과 정상군, TST control군을 비교하면서 관찰하였다.
- 이에 Tibial &sural nerve transection(TST)으로 유발된 동통유발 흰쥐에 대하여 양릉천(GB34)ㆍ현종(GB39)에 파장대별로 레이저침을 시행한 후 plantar withdrawal response 동통지수, 혈액학적 변화, 혈청학적 변화, 증체량 및 신경조직반응을 관찰하여 다음과 같은 결과를 얻었기에 보고하는 바이다.
- 이에 본 연구에서는 현재 레이저침 시술에 다용되고 있는 830 nm와 함께 532 nm, 650 nm, 904 nm, 1064 nm의 동통에 대한 유효성 실험을 통하여 레이저침의 파장대별 발현양상을 비교 분석해보고자 하였다. 이에 Tibial &sural nerve transection(TST)으로 유발된 동통유발 흰쥐에 대하여 양릉천(GB34)ㆍ현종(GB39)에 파장대별로 레이저침을 시행한 후 plantar withdrawal response 동통지수, 혈액학적 변화, 혈청학적 변화, 증체량 및 신경조직반응을 관찰하여 다음과 같은 결과를 얻었기에 보고하는 바이다.
제안 방법
- Reverse transcription temperature cycle은 42℃에서 1시간 동안 cDNA synthesis, 94℃에서 5분 동안 denature 그리고 4℃에서 5분 동안 cooling시키는 단계를 거쳤다. Bax, Bcl-2, metabotropic glutamate receptor 5(mGluR5)유전자에 대한 흰쥐의 특이 primer는 PCRpremix kit(Bioneer, Korea)를 사용하였다. Polymerase chain reaction은 cDNA 2 μl, sense primer 1 μl, antisense primer 1 μl, DEPC-treated water를 PCR premix(Bioneer, Korea)에 넣었다.
- 분리된 혈청은 측정하기 전까지는 4℃에 보관하였다. GOT는 GOT/AST-PIII Slide(Fujifilm Corporation, Japan)로, GPT는 GPT/ALT-PIII Slide(Fujifilm Corporation, Japan)로, BUN은 BUN-PIII Slide(Fujifilm Corporation, Japan)로, Creatine은 Creatine-PIII Slide(Fujifilm Corporation, Japan)로 Fuji Dri-Chem Clinical Chemistry Analyzer(DRI-Chem 4000ie, Fujifilm Corporation, Japan)를 이용하여 측정하였다.
- Polymerase chain reaction은 cDNA 2 μl, sense primer 1 μl, antisense primer 1 μl, DEPC-treated water를 PCR premix(Bioneer, Korea)에 넣었다. PCR temperature cycle은 cDNA의 증폭을 위하여 95℃ 에서 300초 동안 pre-denaturation, 94℃에서 40초 동안 melting, 55℃에서 40초 동안 annealing, 72℃에서 90초 동안 extension 하는 과정을 30회 반복 수행하였다.
- 관찰의 방법은 tibial &sural nerve transection(TST)로 유발된 동통유발 흰쥐에 대하여 파장대별로 레이저침을 시행한 후 plantar withdrawal response 동통지수, 혈액학적 변화, 혈청학적 변화, 증체량 및 신경조직반응 등을 각각의 파장대별 레이저침군과 정상군, TST control군을 비교하면서 관찰하였다.
- 다음 cycle에서 72℃에서 600 초 동안 extension 단계를 거쳐 Bax 유전자증폭을 primer(senseprimer: 5'-CATCTTCTTCCAGATGGTGA-3', antisense primer: 5'-GTTTCATCCAGGATCGAGCAG-3'), Bcl-2 유전자증폭을 primer(senseprimer: 5'-CGG- TTCAGGTACTCAGTCAT-3', antisense primer: 5'-ACTTTGCACAGATGTCCAGT-3'), metabotropic glutamate receptor (mGluR)5 유전자증폭을 primer(senseprimer: 5'-TCCAATCTGCTCCTCC TACC-3', antisense primer: 5'-CAACGATGAAGAACTCT GCG-3')를 이용하여 Mastercycler gradient(Eppendorf, Germany)에서 시행하였다.
- 동통에 미치는 영향을 관찰하기 위해서 tibial &sural nerve transection(TST)로 유발된 동통유발 흰쥐에 대하여 양릉천ㆍ현종에 파장대별로 레이저침을 시행한 후 다음과 같은 결과를 얻었다.
- 양릉천(GB34)은 fibula head 전하방의 요함처에, 현종(GB39)은 fibular면쪽으로 popliteal crease에서 lateral malleolus의 prominence까지의 연결선상에서 lateral malleolus 상방에서 인체와 상응되는 부위에 취하였다. 레이저침 처치는 1주에 2회씩 총 6회를 좌우 교차 시행하였다.
- 마지막 치료 시술후 다음날 호흡 마취하고 심장천자하여 혈액을 얻었고, 채혈에 의하여 얻어진 혈액 중 약 100 μl를 EDTA-bottle에 넣은 후 곧바로 Multispecies Hematology Analyser(950, Hemavet, USA)에 주입하여 leukocytes계인 WBC(white blood cell), NE(neutrophils), LY(lymphocytes), MO(monocytes)을 측정하였다.
- 모두 35마리의 흰쥐는 정상군(Intact, n=5), tibial &sural nerve transection으로 동통을 유발시킨 후 레이저침 처치를 하지 않은 대조군(TST control, n=5), tibial &sural nerve transection으로 동통을 유발시킨 후 양릉천(GB34)현종(GB39)에 530 nm 레이저침(10 mw, 20 Hz)을 시행한 군(L532, n=5), tibial &sural nerve transection으로 동통을 유발시킨 후 양릉천(GB34)현종(GB39)에 650 nm 레이저침(10 mw, 20 Hz)을 시행한 군 (L650, n=5), tibial &sural nerve transection으로 동통을 유발시킨 후 양릉천(GB34)현종(GB39)에 830 nm 레이저침(10 mw, 20 Hz)을 시행한 군(L830, n=5), tibial &sural nerve transection으로 동통을 유발시킨 후 양릉천(GB34)현종(GB39)에 904 nm 레이 저침(10 mw, 20 Hz)을 시행한 군(L904, n=5), tibial &sural nerve transection으로 동통을 유발시킨 후 양릉천(GB34)현종 (GB39)에 1064 nm 레이저침(10 mw, 20 Hz)을 시행한 군(L1064, n=5)으로 나누었다.
- 모든 처리를 거친 뇌 조직을 gelatine-coated slide에 고정하고 공기를 제거하면서 cover glass를 덮은 후 광학현미경(Nikon, Japan)을 200배 확대하여 central gray에서 c-fos에 대한 immunoreactive 발현을 counting하였다.
- Von Frey 방식은 이질통에 대한 withdrawal response를 정량화하여 측정할 수 있어서 신경병성 동통 모델에서 다용되는 방법이다. 본 연구에서 동통치료효과 관찰을 위해 시행한 행동학적 검사중 물리적 자극에 대한 회피반응의 측정에 기존의 von Frey 방식을 발전시킨 방법인 Dynamic Plantar Aesthesiometer를 이용하여 점진적으로 힘을 증가시키면서 물리적 이질통을 유발하여 withdrawal response의 reaction time과 force intensity를 관찰하였다.
- 분리된 total RNA 3 μg과 2.5 μl Oligo(dT), DEPC-treated water를 RT premix(Bioneer, Korea)에 넣어 Mastercycler gradient(Eppendorf, Germany)를 이용하여 20 μl cDNA를 합성하여 PCR 증폭을 위한 template로 사용하였다.
- 수술 후 3일째부터 4일에 1회씩 Dynamic Plantar Aesthesiometer(UGO BASILE 37450, Italy)를 이용하여, 각각 이에 대한 철회반응(withdrawal response)을 망으로 된 cage에 옮겨 5분간 안정시킨 후 총 6회 관찰하였다.
- 양릉천ㆍ현종에 시술한 파장대별 레이저침이 TST(Tibial and Sural nerve Transection)로 유발된 neuropathic pain 백서에 미치는 영향을 plantar withdrawal response법으로 측정한 reaction time, force intensity에 대하여 관찰하였다.
- 원심분리로 얻어진 상층액에 500 μl 의 isopropanol(sigma, USA)을 첨가하여 실온상태에서 5분 동안 방치한 후 RNA pellet을 얻기 위하여 4℃, 14,000 rpm에서 8분간 원심분리하고, 원심분리로 생긴 pellet에 냉장 보관된 70% ethanol 과 함께 DEPC를 넣고 4℃, 7,500 rpm에서 5분간 원심분리 후 pellet만 남기고 모두 제거하고, 남은 ethanol은 실온에서 5분간 방치시켜 건조시킨 다음 DEPC-treated water에 녹여 spectrophotometer(Eppendorf, Germany)에서 OD260 값을 읽어 RNA 의 순도 및 농도를 정량화하였다.
- 이렇게 증폭된 Bax, Bcl-2, mGluR5의 DNA를 ethidium bromide(EtBr, 10 mg/ml)를 포함한 1.5% agarose gel상에서 0.5x TBE buffer(80 mM Tris-HCL, 80 mM boric acid, 2 mM EDTA, pH 8.3)로 70 V에서 전기 영동시켜 관찰한 후 Image Station(Kodak, USA)을 이용하여 촬영하였으며, Kodak MI Software(Kodak, USA)를 이용하여 측정하였다.
- 이후 common peroneal nerve는 남겨두고, tibial nerve와 sural nerve는 현미경 하에서 6.0 silk thread로 결찰한 후 transection하였다. 절개된 부위는 kanamycin을 점적하고 피부를 봉합하였다.
- 0 silk thread로 결찰한 후 transection하였다. 절개된 부위는 kanamycin을 점적하고 피부를 봉합하였다.
- 척수 신경 손상에 의한 척수신경 세포에서의 변화가 apoptosis 와 상관성이 있다고 하는 보고가 있으며 22), 본 연구에서는 세포사 멸과 관련된 주요한 지표로서 알려진 Bax, Bcl-2 및 Bax/Bcl-2 ratio를 관찰하였다 23).
- 체중이 약 230∼250 g의 7주령 Sprague Dawley계의 雄性의 흰쥐를 항온항습 환경의 사육장(실내온도 24±1℃, 습도 60±5%)내에서 고형사료(pellet, GMO, Korea)와 물을 충분히 공급하면서 1주일 이상 실험실 환경에 적응시켰으며, 실험기간 동안에는 물과 고형사료를 자유롭게 섭취하도록 하였다.
- 흰쥐를 isoflurane 2.5%로 도입, 마취후 고관절 후측의 피부를 절개한 후 실체 줌 현미경을 사용하여 biceps femoris muscle 사이의 sciatic nerve을 찾아 tibial nerve 와 common peroneal nerve 및 sural nerve를 확인한 후 microforcep으로 주변조직 및 혈관으로부터 분리시겼다.
대상 데이터
- 본 연구를 위하여 prototype으로 제작된 Laser Acupuncture System을 사용하였으며, 이는 광주과학기술원 레이저나노가공연구실에서 제작하였으며 주요한 제원과 시스템 사양은 다음과 같다(Table 1).
- 본 연구를 위해 선택한 양릉천(GB34)혈위는 족소양담경의 合 穴이며 八會穴 중 筋會에 해당하는 경혈이다. 현종, 환도, 풍시 등과 배합하여 半身不遂, 下肢痲痺를 치료하는 주치효능이 있다.
데이터처리
- 실험 성적은 평균값과 표준오차(mean±S.E.)로 표시하였으며, Window용 SPSS(version 21, SPSS)를 이용하여, 비모수적 방법 중 Mann-Whitney U test를 시행하여 실험군 간의 통계적 유의성을 관찰하였다.
성능/효과
- 1) AST 변화: AST 변화를 관찰한 결과, intact군은 82.4±3.06 U/l, TST control군은 103.0±6.57 U/l, L532군은 74.5±4.88 U/l, L650군은 63.3±12.07 U/l, L830군은 83.3±2.20 U/l, L904 군은 69.3±4.06 U/l, L1064군은 86.3±3.80 U/l를 각각 나타내었다.
- 1) White blood cell(WBC)변화: WBC 변화를 관찰한 결과, intact군은 3.51±0.21 K/μl, TST control군은 5.46±0.59 K/μl, L532군은 6.30±0.85 K/μl, L650군은 4.18±0.49 K/μl, L830 군은 4.58±0.83 K/μl, L904군은 3.24±0.48 K/μl, L1064군은 4.36±0.59 K/μl를 나타내었다.
- 1)Bax 변화: Bax 변화를 관찰한 결과, intact군은 112.8±4.1 (*1000 OD), TST control군은 139.2±4.1(*1000 OD), L532군은 123.0±3.0(*1000 OD), L650군은 129.0±3.4(*1000 OD), L830 군은 124.9±3.5(*1000 OD), L904군은 120.6±3.3(*1000 OD), L1064군은 116.3±3.6(*1000 OD)를 나타내었다.
- 2) ALT 변화: ALT 변화를 관찰한 결과, intact군은 28.2±5.72 U/l, TST control군은 29.2±1.64 U/l, L532군은 30.3±3.58 U/l, L650군은 26.2±4.73 U/l, L830군은 28.4±1.60 U/l, L904군은 30.8±3.38 U/l, L1064군은 27.5±5.01 U/l를 각각 나타내었다.
- 2) Bcl-2 변화: Bcl-2 변화를 관찰한 결과, intact군은 114.3±3.6(*1000 OD), TST control군은 99.5±3.1(*1000 OD), L532군은 134.8±3.4(*1000 OD), L650군은 106.7±3.3(*1000 OD), L830군은 111.9±4.4(*1000 OD), L904군은 104.6±3.7 (*1000 OD), L1064군은 110.1±4.3(*1000 OD)를 나타내었다.
- 2) Neutrophils(NE)변화: NE 변화를 관찰한 결과, intact군은 0.66±0.06 K/μl, TST control군은 1.32±0.15 K/μl, L532군은 1.25±0.17 K/μl, L650군은 0.88±0.08 K/μl, L830군은 1.06±0.19 K/μl, L904군은 0.90±0.26 K/μl, L1064군은 1.21±0.18 K/ μl를 나타내었다.
- 3) Bax/Bcl-2 ratio 변화: Bax/Bcl-2 변화를 관찰한 결과, intact군은 0.99±0.06(Index), TST control군은 1.40±0.08 (Index), L532군은 0.91±0.04(Index), L650군은 1.21±0.06 (Index), L830군은 1.12±0.07(Index), L904군은 1.16±0.06 (Index), L1064군은 1.06±0.07(Index)를 나타내었다.
- 3) Lymphocytes(LY)변화: LY 변화를 관찰한 결과, intact군은 2.71±0.16 K/μl, TST control군은 3.93±0.42 K/μl, L532군은 4.79±0.68 K/μl, L650군은 3.09±0.44 K/μl, L830군은 3.30±0.59 K/μl, L904군은 2.21±0.23 K/μl, L1064군은 2.94±0.49 K/μl를 나타내었다.
- 4) Monocytes(MO)변화: MO 변화를 관찰한 결과, intact군은 0.12±0.01 K/μl, TST control군은 0.20±0.03 K/μl, L532군은 0.25±0.02 K/μl, L650군은 0.19±0.03 K/μl, L830군은 0.19±0.05 K/μl, L904군은 0.10±0.02 K/μl, L1064군은 0.18±0.02 K/μl를 나타내었다.
- 4) mGluR5 변화: mGluR5 변화를 관찰한 결과, intact군은 119.7±2.7(*1000 OD), TST control군은 104.8±2.7(*1000 OD), L532군은 115.8±2.4(*1000 OD), L650군은 114.0±2.2 (*1000 OD), L830군은 107.8±2.3(*1000 OD), L904군은 110.3± 2.7(*1000 OD), L1064군은 107.3±2.2(*1000 OD)를 나타내었다.
- AST 변화에서 대조군에 비하여 L532군, L650군, L830군은 유의한 감소를 나타내었으며, AST가 근골격계에 존재하는 효소이기도 하고 근골격 조직의 손상시에 혈중으로 유리된다고 하는 것에 비추어 볼 때, L532군, L650군, L830군은 조직손상의 회복을 촉진하는 작용이 있는 것으로 사료된다.
- Bax 변화에서 대조군에 비하여 L532군, L904군, L1064군이 유의한 감소를 보이고 Bax/Bcl-2 ratio에서 대조군에 비하여 L532 군, L1064군이 유의한 감소를 나타내었다. 반면에 Bcl-2 변화에서 대조군에 비하여 L532군이 유의한 증가를 나타내었다.
- Dynamic Plantar Aesthesiometer를 이용하여 TST로 유발된 동통에 대한 plantar withdrawal response의 reaction time 변화에 대한 파장대별 레이저침의 시술에 따른 군간 비교 결과, TST control군(이하 대조군)에 비하여 L532군은 3회째, 4회째, 6회째에 유의한 감소를, L650군은 2회째, 6회째에 유의한 감소를, L830군은 6회째에 유의한 감소를, L904군은 3회째에 유의한 감소를, L1064군은 2회째, 6회째에 유의한 감소를 각각 나타내었으며, 또한 force intensity 변화에서도 대조군에 비하여 L532군은 3회째, 4회째, 6회째에 유의한 감소를, L650군은 6회째에 유의한 감소를, L830군은 6회째에 유의한 감소를, L904군은 3회째에 유의한 감소를, L1064군은 6회째에 유의한 감소를 각각 나타내었다. 즉 plantar withdrawal response의 reaction time 변화와 force intensity 변화에서 대조군에 비하여 레이저침군 모두는 6회 관찰 중 1차례 이상 유의한 감소를 나타내었으며, L532군이 6회 관찰 중 3차례의 유의한 감소를 나타내어 유효성이 좀 더 높은 것으로 사료된다.
- Force intensity 변화에 대한 파장대별 레이저침의 시술횟수에 따른 군간 비교한 결과, intact군에 비하여 TST control군은 1회∼6회째까지 모두 유의한 증가를 나타내었고, TST control군에 비하여 L532군은 3회째, 4회째, 6회째에 유의한 감소를 나타내었고, L650군은 6회째에 유의한 감소를 나타내었고, L830군은 6회째에 유의한 감소를 나타내었고, L904군은 3회째에 유의한 감소를 나타내었고, L1064군은 6회째에 유의한 감소를 나타내었다(Fig. 2).
- 3 (expression index)를 나타내었다. Intact군에 비하여 TST control 군은 유의한 증가를 나타내었고, TST control군에 비하여 L532군, L650군, L830군, L904군, L1064군 모두는 유의한 감소를 나타내었다(Fig. 7, 8).
- 18 K/ μl를 나타내었다. Intact군에 비하여 TST control 군은 유의한 증가를 나타내었고, TST control군에 비하여 L650군은 유의한 감소를 나타내었다(Fig. 10).
- 02 K/μl를 나타내었다. Intact군에 비하여 TST control 군은 유의한 증가를 나타내었고, TST control군에 비하여 L904군은 유의한 감소를 나타내었다(Fig. 12).
- 59 K/μl를 나타내었다. Intact군에 비하여 TST control 군은 유의한 증가를 나타내었고, TST control군에 비하여 L904군은 유의한 감소를 나타내었다(Fig. 9).
- 80 U/l를 각각 나타내었다. Intact군에 비하여 TST control군은 유의한 증가를 나타내었고, TST control군에 비하여 L532군, L650군, L830군은 유의한 감소를 나타내었다(Fig. 13).
- 6(*1000 OD)를 나타내었다. Intact군에 비하여 TST control군은 유의한 증가를 나타내었고, TST control군에 비하여 L532, L904, L1064군은 유의한 감소를 나타내었다(Fig. 3).
- Leukocytes 변화에서 대조군에 비하여 WBC의 경우 L904군이 유의한 감소를 나타내었고, NE의 경우 L650군이 유의한 감소를 나타내었고, LY 의 경우 L904군이 유의한 감소를 나타내었고, MO 의 경우 L904군이 유의한 감소를 나타내었다. 즉 L904군은 WBC, LY, MO에서 각각 유의한 감소를 보여 동일한 변화를 나타내었으며, 또한 L650군은 NE에서 유의한 감소를 나타내었는데, 이는 염증 관련 지표에 일정한 영향을 미치는 것으로 사료된다.
- Leukocytes 변화에서 대조군에 비하여 WBC의 경우 L904군이, NE의 경우 L650군이, LY의 경우 L904군이, MO의 경우 L904군이 유의한 감소를 각각 나타내었고, Aminotransaminase 변화에서 대조군에 비하여 AST의 경우 L532군, L650군, L830군은 유의한 감소를 나타내었다.
- Plantar withdrawal response의 reaction time 및 force intensity 변화에서 대조군에 비하여 L532군은 3회째, 4회째, 6회째에 L650군에서 reaction time은 2회째, 6회째에, force intensity 은 6회째, L830군은 6회째에, L904군은 3회째에, L1064군에서 reaction time은 2회째, 6회째에 force intensity은 6회째에 각각 유의한 감소를 나타내었다.
- Reaction time 변화에 대한 파장대별 레이저침의 시술횟수에 따른 군간 비교한 결과, intact군에 비하여 TST control군은 1회∼6회째까지 모두 유의한 증가를 나타내었고, TST control군에 비하여 L532군은 3회째, 4회째, 6회째에 유의한 감소를 나타내었고, L650군은 2회째, 6회째에 유의한 감소를 나타내었고, L830군은 6회째에 유의한 감소를 나타내었고, L904군은 3회째에 유의한 감소를 나타내 었고, L1064군은 2회째, 6회째에 유의한 감소를 나타내었다(Fig. 1).
- mGluR5 변화에서 대조군에 비하여 L532군, L650군이 유의한 증가를 나타내었으며, c-fos 발현에서 대조군에 비하여 L532군, L650군, L830군, L904군, L1064군 모두는 유의한 감소를 나타내었다.
- 본 연구의 Bax 변화에서 대조군에 비하여 L532, L904, L1064 군은 유의한 감소를 나타내었는데, L532군은 약 11.6%, L904군은약 13.4%, L1064군은 약 16.5%의 감소율을 나타내어 본 연구의 TST control에 의해 유발된 척수신경세포의 변화에 영향을 미치는 것으로 사료되며, 즉 세포사멸의 촉진인자를 감소시키는 효과가 L1064군이 가장 크게 나타나고, 그 다음으로는 L904군, L532군의 순으로 나타났다.
- 본 연구의 Bax/Bcl-2 ratio 변화에서 대조군에 비하여 L532군, L1064군은 유의한 감소를 나타내었는데, L532군은 약 35.0%, L1064군은 약 24.3%의 감소율을 나타내어 L532군이 가장 크게 효과를 발현시키고, 그 다음으로는 L1064군이 효과적인 것으로 나타났다. 즉 Bax/Bcl-2 ratio가 감소되면 최종적으로 세포사멸도 억제되어 손상 부위의 신경세포 보호작용을 효과적으로 발현하는 것으로 사료된다.
- 본 연구의 Bcl-2 변화에서 대조군에 비하여 L532군은 유의한 증가를 나타내었는데, 약 35.5%의 증가율을 나타내었다. 즉 세포사멸의 억제인자를 증가시키는 효과가 L532군에서 유의하게 발현된 것으로 사료되며, 이는 Bax의 결과와 상관성을 갖는 것으로 나타났다.
- 본 연구의 c-fos 단백질 변화에서 파장대별 레이저침 시술군 모두에서 대조군에 비하여 유의한 감소를 나타내어 레이저침이 동통 억제 작용을 발휘된 것으로 사료된다.
- 본 연구의 mGluR5 변화에서 대조군에 비하여 L532군, L650군은 유의한 증가를 나타내었는데, L532군은 9.5%의 증가율을, L650 군은 8.8%의 증가율을 나타내었으며, 이는 신경손상에 대하여 신경보호 및 신경조직 형성에 일정한 작용을 발휘한 것으로 사료된다.
- 양릉천ㆍ현종에 시술한 파장대별 레이저침이 TST로 유발된 neuropathic pain 흰쥐의 c-fos 단백 발현에 미치는 영향을 관찰한 결과, TST control군에 비하여 intact군은 10.5±1.7(expression index), TST control군은 46.8±4.8(expression index), L532군은 15.0±1.5(expression index), L650군은 24.6±6.6 (expression index), L830군은 17.5±2.6(expression index), L904군은 17.3±0.4(expression index), L1064군은 18.3±2.3 (expression index)를 나타내었다.
- 양릉천ㆍ현종에 시술한 파장대별 레이저침이 TST로 유발된 neuropathic pain 흰쥐의 증체량에 미치는 영향을 관찰한 결과, TST control control군에 비하여 L532군의 경우 1회째∼6회째 모두 유의한 증가를 나타내었고, L830군의 경우 2회째, 4회째, 5회째에 유의한 증가를 나타내었고, L1064군의 경우 1회째, 4회째에 유의한 증가를 나타내었으며, L650군의 경우 4회째에 유의한 감소를 나타내었고, L904군의 경우 3회째∼6회째 유의한 감소를 나타내 었다.
- 이상의 결과를 종합해보면, 레이저침은 전통침과 달리 파장대에 따라 다른 효과를 나타내며 유효성 정도에도 상당한 차이가 있음을 알 수 있었다. Plantar withdrawal response의 reaction time 변화와 force intensity변화에서 대조군에 비하여 레이저침군 모두에서 6회 관찰 중 1차례 이상 유의한 감소를 나타내고, L532군이 6회 관찰 중 3차례의 유의한 감소를 나타내어 좀 더 유효성이 높은 것으로 나타났는데, 특히 L532군은 임상 활용에서도 leg vein treatment에 활용되고 있는 바 7), 본 연구에서도 여러 지표에서 하지의 신경병성 동통에 우수한 치료효과가 있음을 확인할 수 있었으며, 향후 임상에 활용이 기대된다.
- Leukocytes 변화에서 대조군에 비하여 WBC의 경우 L904군이 유의한 감소를 나타내었고, NE의 경우 L650군이 유의한 감소를 나타내었고, LY 의 경우 L904군이 유의한 감소를 나타내었고, MO 의 경우 L904군이 유의한 감소를 나타내었다. 즉 L904군은 WBC, LY, MO에서 각각 유의한 감소를 보여 동일한 변화를 나타내었으며, 또한 L650군은 NE에서 유의한 감소를 나타내었는데, 이는 염증 관련 지표에 일정한 영향을 미치는 것으로 사료된다.
- 양릉천ㆍ현종에 시술한 파장대별 레이저침이 TST로 유발된 neuropathic pain 흰쥐의 증체량에 미치는 영향을 관찰한 결과, TST control control군에 비하여 L532군의 경우 1회째∼6회째 모두 유의한 증가를 나타내었고, L830군의 경우 2회째, 4회째, 5회째에 유의한 증가를 나타내었고, L1064군의 경우 1회째, 4회째에 유의한 증가를 나타내었으며, L650군의 경우 4회째에 유의한 감소를 나타내었고, L904군의 경우 3회째∼6회째 유의한 감소를 나타내었다. 즉 TST control군에 비하여 L532군, L830군, L1064군은 증가하는 경향을 나타내었고, L650군, L904군은 감소하는 경향을 나타내었다(Fig. 15).
- Dynamic Plantar Aesthesiometer를 이용하여 TST로 유발된 동통에 대한 plantar withdrawal response의 reaction time 변화에 대한 파장대별 레이저침의 시술에 따른 군간 비교 결과, TST control군(이하 대조군)에 비하여 L532군은 3회째, 4회째, 6회째에 유의한 감소를, L650군은 2회째, 6회째에 유의한 감소를, L830군은 6회째에 유의한 감소를, L904군은 3회째에 유의한 감소를, L1064군은 2회째, 6회째에 유의한 감소를 각각 나타내었으며, 또한 force intensity 변화에서도 대조군에 비하여 L532군은 3회째, 4회째, 6회째에 유의한 감소를, L650군은 6회째에 유의한 감소를, L830군은 6회째에 유의한 감소를, L904군은 3회째에 유의한 감소를, L1064군은 6회째에 유의한 감소를 각각 나타내었다. 즉 plantar withdrawal response의 reaction time 변화와 force intensity 변화에서 대조군에 비하여 레이저침군 모두는 6회 관찰 중 1차례 이상 유의한 감소를 나타내었으며, L532군이 6회 관찰 중 3차례의 유의한 감소를 나타내어 유효성이 좀 더 높은 것으로 사료된다.
- 5%의 증가율을 나타내었다. 즉 세포사멸의 억제인자를 증가시키는 효과가 L532군에서 유의하게 발현된 것으로 사료되며, 이는 Bax의 결과와 상관성을 갖는 것으로 나타났다. 단, Bax에서 유의한 감소를 보인 L1064군, L904군은 Bcl-2에서 약간 증가하는 수준을 보였으나 유의성은 인정되지 않았다.
- Plantar withdrawal response의 reaction time 변화와 force intensity변화에서 대조군에 비하여 레이저침군 모두에서 6회 관찰 중 1차례 이상 유의한 감소를 나타내고, L532군이 6회 관찰 중 3차례의 유의한 감소를 나타내어 좀 더 유효성이 높은 것으로 나타났는데, 특히 L532군은 임상 활용에서도 leg vein treatment에 활용되고 있는 바 7), 본 연구에서도 여러 지표에서 하지의 신경병성 동통에 우수한 치료효과가 있음을 확인할 수 있었으며, 향후 임상에 활용이 기대된다. 즉 신경병성 동통에 대하여 각파장대별 레이저침 시술은 모두 일정한 의의를 갖는 것으로 사료되며, 본 연구에서 채택한 방법으로 볼 때, 동통억제에 대한 레이저침 시술에 있어서 650, 830, 904 파장대 시술은 중등도의 동통 억제 효과를 보였고, 그 다음으로는 1064 파장대의 시술이 좀 더 효과적으로 나타났으며, 532 파장대의 시술이 가장 효과적으로 동통을 억제시킬 수 있음을 관찰하였다.
- 증체량에 있어서는 대조군에 비하여 L532군, L830군, L1064군은 유의한 증가를 나타내었고, L650군, L904군은 유의한 감소를 나타내었다.
후속연구
- 이상의 결과를 종합해보면, 레이저침은 전통침과 달리 파장대에 따라 다른 효과를 나타내며 유효성 정도에도 상당한 차이가 있음을 알 수 있었다. Plantar withdrawal response의 reaction time 변화와 force intensity변화에서 대조군에 비하여 레이저침군 모두에서 6회 관찰 중 1차례 이상 유의한 감소를 나타내고, L532군이 6회 관찰 중 3차례의 유의한 감소를 나타내어 좀 더 유효성이 높은 것으로 나타났는데, 특히 L532군은 임상 활용에서도 leg vein treatment에 활용되고 있는 바 7), 본 연구에서도 여러 지표에서 하지의 신경병성 동통에 우수한 치료효과가 있음을 확인할 수 있었으며, 향후 임상에 활용이 기대된다. 즉 신경병성 동통에 대하여 각파장대별 레이저침 시술은 모두 일정한 의의를 갖는 것으로 사료되며, 본 연구에서 채택한 방법으로 볼 때, 동통억제에 대한 레이저침 시술에 있어서 650, 830, 904 파장대 시술은 중등도의 동통 억제 효과를 보였고, 그 다음으로는 1064 파장대의 시술이 좀 더 효과적으로 나타났으며, 532 파장대의 시술이 가장 효과적으로 동통을 억제시킬 수 있음을 관찰하였다.
- 결론적으로 파장대별 레이저침 시술은 지표별로 일정한 동통억제 효과가 있음을 알 수 있었고, 레이저침을 효과적으로 활용하기 위해서는 적절한 파장대를 선택적으로 적용하는 것이 필요하리라고 사료된다.
- 증체량에 미치는 영향에서 대조군에 비하여 L532군, L830군, L1064군은 증가를 나타내었고, L650군, L904군은 감소를 나타내었으며, 3회째 이후 이의 경향성은 두드러지게 나타났으며, 이의 결과에 대해서는 추후 검증 연구가 필요하리라고 사료된다.
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