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문제 정의
- 본 연구는 참전복에서 일어나는 기질적 변성변화를 조직병리학적 분석으로 관찰하여 정의하기 위해 전라남도 완도군의 전복 가두리양식장에서 임상적으로 건강한 참전복을 1년 7개월 동안 매달 6-10마리 샘플링하여 조직병리학적으로 관찰하였다.
제안 방법
- 후 고정은 개체를 3가지 단면으로 분리하여 각각의 장기들을 평가할 수있도록 하였다. 3가지 단면은 치설, 새하선이 나오는 단면, 폐각근, 아가미, 신장, 장이 나오는 단면, 소화선, 생식선이 나오는 단면으로 동일 고정액으로 24시간 동안 후 고정을 실시하였다. 후고정이 완료된 후 전처리기계(Leica TP 1020, Germany)를 통하여 파라핀 침투를 시키고 포매기(Medite TBS 88, Germany)를 사용하여 포매를 실시하였다.
- 이후 Rotary형 조직박절기(Leica RM 2125 RTS, Germany)을 사용하여 4-5 μm 두께의 박편을 얻어 상법상에 따라 Harris hematoxylin-eosin 염색과 Giemsa 염색을 실시하여 광학현미경(Olympus BX50, Japan)으로 검경하였다. 검경 후 현미경용 디지털 카메라(Olympus DP72, Japan)로 촬영하였다.
- 수온, 염분은 표층에서 2 m 이내 범위에서 다목적 수질 측정기(Ysi YSI6820, USA)를 이용하여 매월 샘플링 시기에 함께 측정하였다.
- 따라서 감염증에 의한 증상이 아닌, 환경적 요인이나 내인성 인자에 의해 일어난 증상으로 여겨진다. 이에 먼저 어장의 염분 및 온도를 측정하여 근육 변성이 일어난 추세와 비교를 실시하였다. 염분과 근육변성을 비교하였을 때, 서로의 상관성이 없는 것으로 측정이 되었다(자료 미게재).
- 이후 Rotary형 조직박절기(Leica RM 2125 RTS, Germany)을 사용하여 4-5 μm 두께의 박편을 얻어 상법상에 따라 Harris hematoxylin-eosin 염색과 Giemsa 염색을 실시하여 광학현미경(Olympus BX50, Japan)으로 검경하였다.
- 전복의 폐각근을 패각과의 접착부를 기준으로 80 μm의 깊이까지 폐각근의 변성도를 측정하여 동일 병변이 폐각근의 면적에서 우점적으로 관찰될 때 정상, 종창, 위축 소견으로 나누었다.
- 조직병리학적 분석을 위해 샘플링한 참전복을 패각을 제거한 후 Bouin's solution에 24시간 동안 전 고정을 하였다.
- 전복의 폐각근을 패각과의 접착부를 기준으로 80 μm의 깊이까지 폐각근의 변성도를 측정하여 동일 병변이 폐각근의 면적에서 우점적으로 관찰될 때 정상, 종창, 위축 소견으로 나누었다. 한 샘플링의 모든 패체에서 이러한 소견을 나누었으며 이를 합산하여 비중을 추산하였다.
- 조직병리학적 분석을 위해 샘플링한 참전복을 패각을 제거한 후 Bouin's solution에 24시간 동안 전 고정을 하였다. 후 고정은 개체를 3가지 단면으로 분리하여 각각의 장기들을 평가할 수있도록 하였다. 3가지 단면은 치설, 새하선이 나오는 단면, 폐각근, 아가미, 신장, 장이 나오는 단면, 소화선, 생식선이 나오는 단면으로 동일 고정액으로 24시간 동안 후 고정을 실시하였다.
- 3가지 단면은 치설, 새하선이 나오는 단면, 폐각근, 아가미, 신장, 장이 나오는 단면, 소화선, 생식선이 나오는 단면으로 동일 고정액으로 24시간 동안 후 고정을 실시하였다. 후고정이 완료된 후 전처리기계(Leica TP 1020, Germany)를 통하여 파라핀 침투를 시키고 포매기(Medite TBS 88, Germany)를 사용하여 포매를 실시하였다. 이후 Rotary형 조직박절기(Leica RM 2125 RTS, Germany)을 사용하여 4-5 μm 두께의 박편을 얻어 상법상에 따라 Harris hematoxylin-eosin 염색과 Giemsa 염색을 실시하여 광학현미경(Olympus BX50, Japan)으로 검경하였다.
대상 데이터
- 전라남도 완도군 소안면, 보길면, 노화읍 등 3군데의 지역에 위치하고 있는 각각의 전복 가두리양식장에서 입식 시기가 같은 참전복을 2011년 1월부터 2012년 7월까지 1년 7개월 동안 매달 6-10마리를 샘플링하였다.
성능/효과
- 이러한 변성은 Giemsa 염색상에서 세균 및 기생충은 검출되지 않았으며, H & E 염색상과 비교하여 보았을 때 바이러스 감염의 증상인 inclusion body를 관찰할 수 없었다. 또한, 변성 부위에 염증성 세포의 증가나 침윤이 관찰되지 않았으므로 병원성 감염에 의한 결과가 아니라는 것을 추정할 수 있었다(Fig. 2). 따라서 감염증에 의한 증상이 아닌, 환경적 요인이나 내인성 인자에 의해 일어난 증상으로 여겨진다.
- 보길면의 어가에서는 소안면의 결과와 약간 다르게, 11년도 1월부터 4월까지 다소 높은 빈도의 근육변성을 보였지만 전체적인 경향은 소안면과 유사하게 고수온기에 비대 및 위축소견이 높아지는 경향을 보이며 저수온기에서는 비대 및 위축소견이 완화되는 경향을 보였으며, 12년도 역시 유사한 결과를 보였다(Fig. 3).
- 1). 비대가 일어난 개체는 정상 및 비대의 근육섬유가 관찰되는 반면, 위축이 일어난 개체에서는 근섬유의 괴사와 연결되는 것으로 추정되는 위축 소견 및 비대의 소견이 복합적으로 관찰되었다. 따라서 변성의 단계로 보았을 때, 비대의 과정에서 심화되어 위축으로 나타나는 것으로 여겨진다.
- 염분과 근육변성을 비교하였을 때, 서로의 상관성이 없는 것으로 측정이 되었다(자료 미게재). 이에 반하여 수온과 근육변성은 상관성을 띄는 것을 볼 수 있었는데, 먼저 소안면의 어가에서 온도와 폐각근의 근육 변성의 빈도를 분석하면, 11년도에서는 수온이 낮아질수록 대체적으로 비대 및 위축 소견이 완화되는 경향을 보이며, 수온이 높아질수록 비대 및 위축 소견이 증가하는 경향을 보인다. 특히, 고수온기인 11년 5월부터 9월까지 비대 및 위축소견이 다른 달에 비해 많이 나타나며, 이후, 증상이 완화되는 경향을 보인다.
- 전라남도 완도군에서 샘플링한 참전복을 H&E 염색을 통하여 조직병리학적으로 관찰한 결과, 폐각근을 제외한 모든 장기는 정상적인 구조 및 세포를 유지하고 있는 것으로 나타났다.
후속연구
- 따라서 폐각근에서 일어나는 이러한 병변이 패체의 건강도를 측정할 수 있는 한 방법으로서 제안할 수 있으며, 지속적인 모니터링으로 패체의 건강도를 양호하게 유지시켜 폐사를 줄일 수 있는 한 방안으로 소개를 할 수 있을 것으로 사료된다.
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