Objectives: Hwangryunhaedok-tang (HH) is a representative heat clearing multiherb prescription. We evaluated the protective effect of HH against heat stress exposure in mice. Methods: Six weeks old ICR mice were used for this study. After $43^{\circ}C$ heat stress for 15 minutes, we evalu...
Objectives: Hwangryunhaedok-tang (HH) is a representative heat clearing multiherb prescription. We evaluated the protective effect of HH against heat stress exposure in mice. Methods: Six weeks old ICR mice were used for this study. After $43^{\circ}C$ heat stress for 15 minutes, we evaluated the changes of motor activity and c-fos expression level to determine the proper heat stress and evaluation time. The subjects were divided into 4 groups (1. control group, 2. heat stress group with normal saline, 3. heat stress group with administration of 100 mg/kg, and 4. heat stress group with administration of 1000 mg/kg). After oral administration of HH once a day for 3 days, 2, 3, 4 groups were exposed to $43^{\circ}C$ heat stress for 15 minutes. Then, we evaluated the motor activity for 120 minutes and analyzed the c-fos expression using western blot. We investigated the effect of HH and its ingredients on c-fos expressions after heat stress. The mice were administrated HH, Scutellariae Radix, Coptidis Rhizoma, Phellodendri Cortex, and Gardeniae Fructus for 3 days. After one hour of last treatment, the mice were exposed to heat stress at $43^{\circ}C$ for 15 min. After two hours, the hypothalamus was dissociated and lysed to measure c-fos expression. Results: After oral administration of HH for 3 days, motor activity was recovered insignificantly. 100 mg/kg HH treatment reduced the c-fos expression after heat stress but insignificantly. Among the ingredients of HH, Coptidis Rhizoma and Scutellariae Radix treatment groups significantly reduced the c-fos after stress. Conclusions: These results show that Hwangryunhaedok-tang may be effective to reduce the heat stress response.
Objectives: Hwangryunhaedok-tang (HH) is a representative heat clearing multiherb prescription. We evaluated the protective effect of HH against heat stress exposure in mice. Methods: Six weeks old ICR mice were used for this study. After $43^{\circ}C$ heat stress for 15 minutes, we evaluated the changes of motor activity and c-fos expression level to determine the proper heat stress and evaluation time. The subjects were divided into 4 groups (1. control group, 2. heat stress group with normal saline, 3. heat stress group with administration of 100 mg/kg, and 4. heat stress group with administration of 1000 mg/kg). After oral administration of HH once a day for 3 days, 2, 3, 4 groups were exposed to $43^{\circ}C$ heat stress for 15 minutes. Then, we evaluated the motor activity for 120 minutes and analyzed the c-fos expression using western blot. We investigated the effect of HH and its ingredients on c-fos expressions after heat stress. The mice were administrated HH, Scutellariae Radix, Coptidis Rhizoma, Phellodendri Cortex, and Gardeniae Fructus for 3 days. After one hour of last treatment, the mice were exposed to heat stress at $43^{\circ}C$ for 15 min. After two hours, the hypothalamus was dissociated and lysed to measure c-fos expression. Results: After oral administration of HH for 3 days, motor activity was recovered insignificantly. 100 mg/kg HH treatment reduced the c-fos expression after heat stress but insignificantly. Among the ingredients of HH, Coptidis Rhizoma and Scutellariae Radix treatment groups significantly reduced the c-fos after stress. Conclusions: These results show that Hwangryunhaedok-tang may be effective to reduce the heat stress response.
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문제 정의
본 연구는 寒冷한 성질의 대표 처방인 黃連解毒湯의 효능이 전통적 한의학의 寒熱 이론에 따른 활용 효과에 대해서 실험적으로 검증해보고자 하였다. 이에 외열 스트레스를 주어 熱邪가 침입하는 환경을 만들어 그로 인한 변화를 관찰하고, 黃連解毒湯을 경구 투여한 후에 운동성 변화와 스트레스를 받으면 증가되는 것으로 알려진 c-fos의 농도변화를 관찰하여 유의한 결과를 얻었기에 보고하는 바이다.
본 연구는 寒冷한 성질의 대표 처방인 黃連解毒湯의 효능이 전통적 한의학의 寒熱 이론에 따른 활용 효과에 대해서 실험적으로 검증해보고자 하였다. 이에 외열 스트레스를 주어 熱邪가 침입하는 환경을 만들어 그로 인한 변화를 관찰하고, 黃連解毒湯을 경구 투여한 후에 운동성 변화와 스트레스를 받으면 증가되는 것으로 알려진 c-fos의 농도변화를 관찰하여 유의한 결과를 얻었기에 보고하는 바이다.
본 연구는 寒冷한 성질의 대표 처방인 黃連解毒湯의 효능이 전통적 한의학의 寒熱 이론에 따른 활용 효과에 대해서 실험적으로 검증해보고자 하였다. 이에 외열 스트레스를 주어 熱邪가 침입하는 환경을 만들어 그로 인한 변화를 관찰하고, 黃連解毒湯을 경구 투여한 후에 운동성 변화와 스트레스를 받으면 증가되는 것으로 알려진 c-fos의 농도변화를 관찰하여 유의한 결과를 얻었기에 보고하는 바이다.
제안 방법
본 실험을 수행하기 전 열 자극 조건 및 열 자극 후 변화 확인 시점을 확립하기 위하여, chamber(Jeio Tech, Korea)를 이용한 43℃ 15분 열 자극 후 30분간 직장, 귀, 꼬리, 몸의 체온 변화를 측정하였다. 또한, 열 자극 후 120분간 운동능 차이 및 hypothalamus의 c-fos 발현양 변화를 측정하였다.
본 실험을 수행하기 전 열 자극 조건 및 열 자극 후 변화 확인 시점을 확립하기 위하여, chamber(Jeio Tech, Korea)를 이용한 43℃ 15분 열 자극 후 30분간 직장, 귀, 꼬리, 몸의 체온 변화를 측정하였다. 또한, 열 자극 후 120분간 운동능 차이 및 hypothalamus의 c-fos 발현양 변화를 측정하였다.
제1군은 대조군으로 아무 처리하지 않았고, 제2군은 열 자극 군으로 식염수를 3일간 1일 1회 경구 투여하였고, 제3군은 黃連解毒湯 100 mg/kg을 투여한 군이며, 제4군은 黃連解毒湯 1000 mg/kg을 투여한 군이다. 실험군에는 식염수에 용해시킨 黃連解毒湯을 3일간 1일 1회 경구 투여하였다. 3일째 되는 날 제1군을 제외한 2, 3, 4군은 43℃ chamber에 15분간 넣어 열 자극을 가하였다.
黃連解毒湯의 열 자극에 대한 영향 평가 실험은 4개의 군으로 나누어서 진행하였다. 제1군은 대조군으로 아무 처리하지 않았고, 제2군은 열 자극 군으로 식염수를 3일간 1일 1회 경구 투여하였고, 제3군은 黃連解毒湯 100 mg/kg을 투여한 군이며, 제4군은 黃連解毒湯 1000 mg/kg을 투여한 군이다. 실험군에는 식염수에 용해시킨 黃連解毒湯을 3일간 1일 1회 경구 투여하였다.
제1군(대조군) 및 제2군(열 자극 군)은 식염수를 3 일간 1일 1회 경구 투여하였다. 제3군(黃連解毒湯 1000 mg/kg 투여군), 제4군(황금 474.9 mg/kg 투여군), 제5군(황련 165.5 mg/kg 투여군), 제6군(황백 175.8 mg/kg 투여군) 및 제7군(치자 281.7 mg/kg 투여군)은 식염수에 용해시킨 각 추출물을 3일간 1일 1회 경구 투여하였다. 3일째 되는 날 제1군을 제외한 2, 3, 4군은 43℃ chamber에 15분간 넣어 열 자극을 가하였다.
대상 데이터
본 연구에 사용된 antibody는 anti-rabbit c-fos(Enzo Life Sciences, US), anti-mouse-β-actin(Santa Cruz, USA), anti-rabbit 또는 mouse-horseradish peroxidase(HRP, Assay Designs, USA)를 사용하였으며, protein assay는 BioVision(USA)을 사용하였다. 기타 사용된 모든 시약은 분석 등급 이상으로 Sigma-Aldrich사에서 구입한 것을 사용하였다.
본 연구에 사용된 웅성 ICR 쥐 6주령은 Daehan Biolink(Korea)에서 구입하였다. 물과 사료는 자유롭게 섭취하도록 하였고, 온도(22±2℃), 습도(53±3%) 및 명암주기(12시간)는 자동적으로 조절되도록 하였다.
본 연구에서 사용한 黃連解毒湯 및 구성 약재의 추출물은 한상용 등의 논문에 발표된 시료와 동일한 것을 사용하였다15). 실험에 사용한 黃連解毒湯의 구성 약제는 경북 안동시 옴니허브에서 구입하였으며, ≪外臺祕要≫에 수록된 1濟의 기본 구성 배합에 따라 아래의 Table 1과 같이 제조하여 한풍제약에 의뢰하여 추출 후 최종 파우더 형태로 받아 사용하였다.
. 실험에 사용한 黃連解毒湯의 구성 약제는 경북 안동시 옴니허브에서 구입하였으며, ≪外臺祕要≫에 수록된 1濟의 기본 구성 배합에 따라 아래의 Table 1과 같이 제조하여 한풍제약에 의뢰하여 추출 후 최종 파우더 형태로 받아 사용하였다. 실험 전까지 -20℃에 보관하였으며, 사용 전 3차 증류수에 추출 시료를 넣어 완전히 용해시킨 후 사용하였다.
데이터처리
모든 측정값은 mean±SEM으로 표시하였다. 본 연구의 통계처리는 Graphpad Prism 5.0(USA) 프로그램을 사용하였으며, one-way ANOVA를 이용하여 평균값의 유의성을 5% 미만의 한계로 조사하였다.
이론/모형
43℃ 15분 열 자극 후 120분간 운동능을 측정하기 위하여 open field test를 실시하였다. 40×25×18 cm testing chamber 안에 쥐를 넣고 120분간 움직임을 기록하였으며 Viewer 프로그램(Biobserver, Germany)을 이용하여 이동 거리를 자동분석 하였다.
성능/효과
2. 약물 투여 후 43℃ 15분간 스트레스를 가한 후 120분 동안 움직인 거리 측정 결과, 스트레스에 의해 움직임이 둔화되었으며, 黃連解毒湯 약물투여군은 통계적으로 유의미한 결과는 나타내지 않았으나 활발해 진 경향성을 보였다.
3. Hypothalamus의 c-fos expression level 측정 결과, 정상군과 스트레스군간 차이는 있으나 스트레스군과 약물군간에 통계적으로 의미 있는 차이를 보이지 않았다.
1. 외열 스트레스 동물 모델 설정을 위해서, ICR mice에 43℃ 15분간 스트레스를 가한 후, 120분 동안 locomotor activity를 측정 한 결과, 정상군과 스트레스군 사이에 통계적으로 유의한 운동능 차이를 보임을 확인 하였고, 외열 스트레스 후 hypothalamus에서 neural activity를 나타내는 c-fos가 꾸준히 증가하는 경향을 보임을 확인 하였다. 따라서, 43℃ 15분간의 외열 스트레스 후 120분을 실험 point로 설정하였다.
후속연구
한의학에서 寒熱虛實의 변증은 치료방향을 결정하는 중요한 요인이 되는데, 류마티스 환자를 대상으로 한 연구20), 과민성 장증후군 환자의 허실21), 월경통22), 중풍환자의 한열허실 변증지표23), 치매24) 등이 발표되었다. 이러한 질환들은 여성의 월경 및 폐경 후 치매 위험성이 높아지는 현상과 밀접한 연관이 있어, 寒熱 자극에 대한 치료 및 처방에 대한 연구가 필요하다.
이상의 연구에서 黃連解毒湯은 외열 스트레스 자극으로 인한 운동성 저하를 개선시키고, 그 기전에 대한 기초 자료가 될 수 있을 것으로 생각된다.
질의응답
핵심어
질문
논문에서 추출한 답변
黃連解毒湯이란?
黃連解毒湯은 黃連, 黃芩, 黃白, 梔子로 구성되어 있어서, 부인과 영역에서도 많이 사용되는 대표적인 寒冷한 처방이다. 이 처방은 일체의 實熱火毒이 三焦에 있는 증상들을 치료하는 효과와 각종 熱病에 활용된다5).
東醫寶鑑에서 黃連解毒湯 및 連繫方의 활용 범위는?
이 처방은 일체의 實熱火毒이 三焦에 있는 증상들을 치료하는 효과와 각종 熱病에 활용된다5). ≪東醫寶鑑≫에서도 黃連解毒湯 및 連繫方은 外科질환, 火熱病, 眼科, 傷寒病등의 20개 영역에서 사용되었고, 부인과 영역에서도 四物湯과 합방하여 崩漏를 다스리고, 安胎하거나, 姙娠惡阻, 帶下 등에서 많이 활용되는 대표적 처방이 된다6). 黃連解毒湯은 약리학적 연구에서도 解熱, 鎭痛, 鎭靜, 腸管의 弛緩作用이 확인되었다7).
黃連解毒湯는 어떤 질환에서 처방되는가?
黃連解毒湯은 黃連, 黃芩, 黃白, 梔子로 구성되어 있어서, 부인과 영역에서도 많이 사용되는 대표적인 寒冷한 처방이다. 이 처방은 일체의 實熱火毒이 三焦에 있는 증상들을 치료하는 효과와 각종 熱病에 활용된다5). ≪東醫寶鑑≫에서도 黃連解毒湯 및 連繫方은 外科질환, 火熱病, 眼科, 傷寒病등의 20개 영역에서 사용되었고, 부인과 영역에서도 四物湯과 합방하여 崩漏를 다스리고, 安胎하거나, 姙娠惡阻, 帶下 등에서 많이 활용되는 대표적 처방이 된다6).
참고문헌 (30)
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백유상. 熱入血室證에 대한 小考. 대한한의원전학회지. 2013;24(4):267-80.
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김형률 등. 東醫寶鑑 中 黃連解毒湯의 活用에 대한 연구. 한방안이비인후피부과학회지. 2009;22(1):195-218.
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박수현 등. 黃連解毒湯과 乾薑附子湯이 LPS 유도에 의한 마우스 혈중 IL-6와 TNF- $\alpha$ 변화에 미치는 영향. 대한한의학방제학회지. 2007;15(1):185-97.
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