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문제 정의
- 따라서 본 연구에서는 홍삼추출물과 생약복합추출물이 주요 기능성분은 다르지만 면역활성이라는 생리활성 측면에서 동일한 효과를 인정하고 있어서 수지상세포, 대식세포 및 비장세포 등의 다양한 면역세포를 마우스를 통하여 직접 분리하여 두 물질을 병용 처리하였을 때 나타나는 면역활성의 작용에 관하여 평가해 보았다.
- 본 연구는 홍삼추출물(홍삼단)과 생약복합추출물(헤모힘)이 주요 기능성분은 다르지만 면역활성이라는 생리활성 측면에서 동일한 효과를 인정하고 있어서 이들의 병용 처리가 면역세포에 어떠한 영향을 미치는지에 대해 알아보기 위하여 수행되었다. 면역활성능에 관한 평가를 진행하기 위하여 마우스의 골수에서 분리한 미분화 골수세포를 선천면역에서 중요한 역할을 수행하는 대식세포 및 수지상세포로 분화시킨 후 홍삼추출물과 생약복합추출물을 병용 처리하였을 때 대식세포 및 수지상세포의 세포 증식능 및 사이토카인의 분비능이 증가되는 것으로 관찰되었다.
- 이러한 표현형인 CD는 같은 종류의 세포를 분리하거나 분석하는 연구에도 매우 유용하게 사용되며, 또한 세포의 활성화와 관련하여 중요한 지표로 사용되기도 한다(19). 본 연구에서는 대식세포와 수지상세포가 활성화되었을 때 가지는 표현형인 CD80 과 CD86의 발현에 관하여 유세포 분석기를 통하여 분석하였다(Fig. 4). 홍삼추출물과 생약복합추출물을 각각 200 μg/ mL로 고정하여 처리하고 병용 처리구에서는 홍삼추출물 100 μg/mL와 생약복합추출물 100 μg/mL 농도로 동시에 처리하였을 때 각각 독립적으로 처리된 그룹보다 병용으로 처리된 그룹에서 탐식세포의 표면 활성 인자인 CD80과 CD86의 발현이 더욱더 증가된 것을 관찰할 수 있었다(Fig.
- 본 연구에서도 홍삼추출물과 생약복합추출물의 병용 처리가 비장세포의 사이토카인 분비 특성에 미치는 영향에 관하여 알아보기 위하여 홍삼추출물과 생약복합추출물을 각각 또는 병용 처리하여 Th1 세포가 분비하는 대표적인 사이토카인인 IL-2, IFN-γ와 Th2 세포가 분비하는 대표적인 사이토카인인 IL- 4, 10의 분비능에 관하여 측정하였다(Fig. 7).
- 따라서 면역증강물질의 면역활성을 확인하는데 있어서 면역 T 세포의 활성화를 알아보기 위하여 비장세포를 주로 사용한다(23). 앞선 연구 결과를 통하여 홍삼 농축 분말과립 및 헤모힘의 병용처리는 선천면역계를 담당하는 탐식세포를 활성시킨다는 결론을 도출할 수 있었고, 후천면역계를 담당하는 T세포에 대한 면역상승 효과를 알아보기 위하여 비장 조직으로부터 비장세포를 분리하여 홍삼추출물과 생약복합추출물을 병용 처리하여 면역상승 효과에 관하여 알아보았다.
- 홍삼추출물과 생약복합추출물의 병용 처리가 대식세포 및 수지상세포 등의 탐식세포의 활성에 어떠한 영향을 미치는 알아보기 위하여 활성화된 대식세포 및 수지상세포가 분비하는 사이토카인의 분비능에 관하여 알아보았다. 생체 외부로부터 병원체가 유입되면 면역세포들은 숙주를 방어하기 위하여 활성화된다.
제안 방법
- 1주간의 순화를 마친 마우스를 경추 탈골법으로 희생시킨 후 비장을 무균적으로 적출하여 10%의 FBS와 항생제 penicillin과 streptomycin(100 unit/mL, 100 μg/mL)을 함유한 RPMI-1640 배지로 세척한 후 tissue grinder(Corning Costar, Corning, NY, USA)로 균질화하여 비장세포를 유리시켰다.
- 따라서 주조직적합성 복합체의 발현 증가는 탐식세포의 활성화에 매우 밀접한 관련이 있으며, 본 연구에서도 홍삼추출물과 생약복합추출물 병용 처리가 탐식세포인 대식세포 및 수지상세포의 활성화에 미치는 영향에 대해 평가하기 위하여 홍삼추출물과 생약 복합추출물을 각각 200 μg/mL로 고정하여 처리하고 병용 처리구에서는 홍삼추출물 100 μg/mL와 홍삼추출물과 생약 복합추출물 100 μg/mL 농도로 동시에 처리하였을 때 대식 세포 및 수지상세포의 세포 표면 활성 인자인 MHC class (II)의 발현에 관하여 유세포 분석기를 사용하여 분석해보았다.
- 또한 대식세포로의 분화를 유도하기 위해 10% FBS가 포함된 Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM)에 2 mM L-glutamin, 100 unit/mL penicillin/streptomycin, 50 μM mercaptoethanol, 0.1 mM non-essential amino acid, 1 mM sodium pyruvate, 25 ng/mL macrophage colony stimulating factor(MC-SF, R&D System)를 첨가하여 4일 동안 배양하였다.
- 본 연구에서도 홍삼 추출물과 생약복합추출물을 골수세포로부터 분화시킨 대식세포 및 수지상세포에 각각 200 μg/mL의 농도로 고정하여 처리하고 병용 처리구에서는 홍삼추출물 100 μg/mL와 생약복합추출물 100 μg/mL 농도로 동시에 처리하였을 때 나타나는 사이토카인의 분비능의 변화를 Fig. 3에 나타냈다.
- 분리한 미분화 골수세포를 수지상세포로 분화시키기 위하여 10% fetal bovine serum(FBS)이 포함되어 있는 Roswell Park Memorial Institute(RPMI) 1640 배지(Invitrogen Co.)에 2 mM L-glutamin, 100 unit/mL penicillin/streptomycin, 50 μM mercaptoethanol, 0.1 mM non-essential amino acid, 1 mM sodium pyruvate, 20 ng/mL granulocyte-macrophage colony stimulating factor(GM-CSF, R&D System, Minneapolis, MN, USA), 20 ng/mL IL-4(R&D System)를 첨가하여 8일 동안 배양하였다.
- 1주간의 순화를 마친 마우스를 경추 탈골법으로 희생시킨 후 비장을 무균적으로 적출하여 10%의 FBS와 항생제 penicillin과 streptomycin(100 unit/mL, 100 μg/mL)을 함유한 RPMI-1640 배지로 세척한 후 tissue grinder(Corning Costar, Corning, NY, USA)로 균질화하여 비장세포를 유리시켰다. 세포현탁액에 적혈구를 제거하기 위하여 RBC lysis buffer(BD Biosciences)를 첨가하여 적혈구를 제거하였고, 혈구계수기를 이용하여 세포수를 측정하였다.
- 항체의 비 특이적인 결합을 방지하기 위하여 회수된 각각의 세포에 1 μg/mL의 Fcγ I/III (BD Biosciences)을 처리하여 4°C에서 20분간 반응시킨 후, 대식 세포와 수지상 세포 표면 활성 인자 분석을 위하여 anti-CD80-PE, anti-CD86-PE, anti-MHC I 및 II-PE (BD Biosciences)와 같은 세포 표면 항체를 각각 1,000배 희석하여 각각의 세포에 처리하고 30분 동안 반응시키고 유세포 분석기(FACS callibur, BD Biosciences)를 이용하여 홍삼추출물과 생약복합추출물의 병용 처리가 대식세포 및 수지상세포의 세포 표면 활성 인자의 발현에 미치는 영향에 관하여 분석하였다.
- 홍삼추출물과 생약복합추출물의 병용 처리가 대식세포 및 수지상세포에 대한 세포 증식능(cell proliferation)에 미치는 영향을 측정하기 위하여 마우스 골수세포로부터 분화된 대식세포 및 수지상세포를 각각 96 well plate(BD Bio-sciences, San Jose, CA, USA)에 well당 3×105개로 분주한 후, 홍삼추출물과 생약복합추출물을 각각 100 μg/mL 및 200 μg/mL의 농도 또는 홍삼추출물 100 μg/mL와 생약복합추출물 100 μg/mL를 동시에 처리하여 37℃로 유지되는 5% CO2 세포 배양기에서 24시간 배양한 후, 대식세포 및 수지상세포의 세포 증식능을 MTT 방법에 의하여 측정하였다.
- 홍삼추출물과 생약복합추출물의 병용 처리가 대식세포 및 수지상세포의 세포 증식능에 미치는 영향에 관하여 평가하기 위하여 C57BL/6 마우스로부터 미분화 골수 세포를 분리하여 대식세포 및 수지상 세포로 각각 분화시킨 후, 분화된 대식세포 및 수지상 세포에 홍삼추출물을 100 μg/mL 와 200 μg/mL로 각각 처리하였을 때의 대식세포 및 수지상 세포의 세포 증식능을 Fig. 1에 나타냈다.
- 홍삼추출물과 생약복합추출물의 병용 처리가 대식세포 및 수지상세포의 세포 표면 활성 인자의 발현에 미치는 영향을 측정하기 위하여 마우스 골수세포로부터 분화된 대식세포 및 수지상세포를 각각 6 well plate에 well당 1×106개로 분주한 후, 홍삼추출물과 생약복합추출물을 각각 200 μg/ mL의 농도 또는 홍삼추출물 100 ng/mL와 생약복합추출물 100 ng/mL를 병용하여 처리한 후 24시간 동안 반응시키고 각각의 세포를 회수하였다.
- 홍삼추출물과 생약복합추출물의 병용 처리가 대식세포 및 수지상세포의 활성화에 주는 영향을 직접적으로 평가해 보기 위하여 대식세포 및 수지상세포의 세포 표면에 부착된 세포 표면 활성 인자(cell surface activation marker)인 cluster of differentiation(CD) molecule의 발현에 관하여 유세포 분석기를 통하여 관찰하였다. 다양한 면역세포구들은 세포 표면에 가지고 있는 표면분자구조에 따라 서로를 구분하며, 이러한 구분은 분화집단(cluster of differentiation, CD)이라는 표현형을 사용한다(18).
- 홍삼추출물과 생약복합추출물의 병용 처리가 마우스로부터 분리한 비장세포의 세포 증식능에 미치는 영향에 관하여 평가하기 위하여 C57BL/6 마우스로부터 무균적으로 적출된 비장세포에 홍삼추출물을 100 μg/mL와 200 μg/mL로 각각 처리하였고, 또한 병용 처리구에서는 홍삼추출물 100 μg/mL와 생약복합추출물 100 μg/mL 농도로 동시에 처리하여 비장세포의 증식능을 Fig. 6에 나타내었다.
- 홍삼추출물과 생약복합추출물의 병용 처리가 비장세포의 사이토카인 분비능에 미치는 영향에 관하여 알아보기 위하여 비장 조직으로부터 분리된 비장세포를 48 well plate에 well당 2×106개씩 분주한 후 200 μg/mL 농도의 홍삼추출물과 생약복합추출물을 각각 처리하고, 또는 100 ng/mL 농도의 홍삼추출물과 100 ng/mL 농도의 생약복합추출물을 병용 처리한 후 각각 24시간 동안 반응시키고 배양상등액에 존재하는 사이토카인(IL-2, 4, 10, IFN-γ)의 함량에 관하여 측정하였다.
- 홍삼추출물과 생약복합추출물의 병용 처리가 비장세포의 증식능에 미치는 영향에 관하여 알아보기 위하여 96 well plate에 well당 1×106개의 비장세포를 분주한 후, 홍삼추출물과 생약복합추출물을 각각 100 μg/mL 및 200 μg/mL의 농도 또는 홍삼추출물 100 μg/mL와 생약복합추출물 100 μg/mL를 병용 처리하여 37°C로 유지되는 5% CO2 세포 배양기에서 24시간 배양한 후, WST-1R(Daeil Lap Science, Seoul, Korea) 용액을 각각의 well에 10 μL씩 첨가하고 2시간 동안 반응시킨 후 450 nm에서 흡광도를 측정하여 세포 증식능을 평가하였다.
- 홍삼추출물의 처리가 대식세포 및 수지상세포의 사이토카인 분비능에 미치는 영향을 측정하기 위하여 마우스 골수 세포로부터 분화된 대식세포 및 수지상세포를 각각 48 well plate에 well당 7×105개로 분주한 후, 홍삼추출물과 생약복합추출물을 각각 100 μg/mL 및 200 μg/mL의 농도 또는 홍삼추출물 100 μg/mL와 생약복합추출물 100 μg/mL를 동시에 처리하여 37ºC로 유지되는 5% CO2 세포 배양기에서 24시간 배양한 후, 배양 상등액에 포함되어 있는 IL-6 및 tumor necrosis factor(TNF)-α의 함량을 측정하였다.
대상 데이터
- 본 연구에 사용된 실험동물은 한국원자력연구원 동물실험윤리위원회의 승인을 받아 진행하였다(KAERI-IACUC- 2013-001). C57BL/6 마우스로부터 골수 채취용 주사기 (BD Biosciences, San Diego, CA, USA)를 이용해 대퇴부 골수를 채취하였다. 채취한 골수를 차가운 phosphate buffered saline(PBS, Invitrogen Co.
- 본 실험에서 사용한 생약복합추출물(제품명: 헤모힘, HemoHIM)은 (주)에터미(Gongju, Korea)에서 구입하였고, 홍삼추출물(제품명: 홍삼단)은 우송대학교 벤처기업인 (주)홍삼단(Daejeon, Korea)에서 각각 구입하여 사용하였다. 실험동물은 6주령(18~20 g)의 C57BL/6 웅성 마우스를 Orient사(Seongnam, Korea)로부터 구입하여 사용하였다.
- 실험동물은 6주령(18~20 g)의 C57BL/6 웅성 마우스를 Orient사(Seongnam, Korea)로부터 구입하여 사용하였다. 분양받은 마우스는 동물사육실 내부 환경에 1주간 순화시킨 후 미분화 골수세포 및 비장세포를 채취하기 위하여 사용하였다.
- 본 실험에서 사용한 생약복합추출물(제품명: 헤모힘, HemoHIM)은 (주)에터미(Gongju, Korea)에서 구입하였고, 홍삼추출물(제품명: 홍삼단)은 우송대학교 벤처기업인 (주)홍삼단(Daejeon, Korea)에서 각각 구입하여 사용하였다. 실험동물은 6주령(18~20 g)의 C57BL/6 웅성 마우스를 Orient사(Seongnam, Korea)로부터 구입하여 사용하였다. 분양받은 마우스는 동물사육실 내부 환경에 1주간 순화시킨 후 미분화 골수세포 및 비장세포를 채취하기 위하여 사용하였다.
데이터처리
- Statistical analysis was performed using the Student's two tailed t-test with a significance level of **P<0.01 and ***P<0.001.
- Statistical analysis was performed using the Student's two tailed t-test with a significance level of *P< 0.05 and **P<0.01.
- Statistical analysis was performed using the Student's two tailed t-test with a significance level of *P<0.05 and **P<0.01.
- Statistical analysis was performed using the Student's two tailed t-test with a significance level of *P<0.05.
- 이상의 실험에서 얻어진 결과는 Statistical Package for Social Sciences(SPSS, 21, IBM, Armonk, NY, USA)를 이용하여 one way ANOVA test로 분석하였으며, 시료 간의 유의성은 Student's two tailed t–test로 P<0.05 수준에서 비교하였다.
이론/모형
- 세포 배양기에서 24시간 배양한 후, 배양 상등액에 포함되어 있는 IL-6 및 tumor necrosis factor(TNF)-α의 함량을 측정하였다. 사이토카인의 측정은 enzyme linked immunosorbent assay(ELISA) kit(BD Biosciences)를 사용하여 측정하였다.
성능/효과
- 2에 나타냈다. 각각의 대식세포 및 수지상세포에서 홍삼추출물과 생약복합추출물의 처리는 농도 의존적으로 세포의 증식능을 증가시키는 것으로 나타났으며, 병용 처리구에서는 각각 단독으로 처리한 처리구에 비하여 유의적으로 높게 세포 증식능이 증가되는 것으로 나타났다. 이러한 결과로 미루어 보아 홍삼추출물과 생약복합추출물 처리는 대식세포 및 수지상세포에 대한 세포독성을 일으키지 않는 것으로 판단되며, 홍삼추출물 및 생약복합추출물의 처리는 단독으로 처리하였을 때보다 병용으로 처리하였을 때 세포 증식능의 증가에 더 큰 영향을 미치는 것으로 나타났다.
- 5). 따라서 이러한 결과로 미루어 보아 홍삼추출물과 생약복합추출물의 병용 처리는 대식세포 및 수지상세포의 세포 표면 활성 인자들의 발현을 직접적으로 증가시켜 면역세포를 활성화시키는 것으로 사료된다.
- 따라서 이러한 탐식세포들의 활성을 조절하는 것은 면역 관련 질병들의 예방 및 치료에 관한 무한한 가능성을 제시하며, 본 연구에서도 마우스 골수로부터 분리한 미분화 골수세포를 탐식세포(대식세포 및 수지상세포)로 분화하여 홍삼농축 분말과립을 처리하였을 때 탐식세포들의 세포 증식능이 증가되는 것을 관찰할 수 있었다.
- 실험 결과 홍삼추출물과 생약복합추출물을 각각 처리한 경우 IL-2 및 IFN-γ와 같은 Th1 세포가 분비하는 사이토카인의 분비가 증가되었으며 병용 처리하였을 경우 더욱더 증가하는 양상을 나타냈다. 또한 홍삼추출물과 생약복합추출물을 각각 또는 병용으로 처리하였을 때 Th2 세포가 분비하는 IL-4 및 IL-10과 같은 사이토카인의 분비량에 대한 변화는 관찰되지 않았다. 이러한 결과로 미루어 보아 홍삼추출물과 생약복 합추출물의 경우 알레르기나 아토피 등의 질병 유발과 밀접한 관련이 있는 Th2 세포의 활성화에는 영향을 주지 않는 것으로 판단되며 홍삼추출물과 생약복합추출물의 병용 처리 시 면역활성과 밀접한 관련이 있는 Th1 세포의 활성화와 관련하여 면역학적인 상승작용을 나타내는 것으로 사료된다.
- 면역활성능에 관한 평가를 진행하기 위하여 마우스의 골수에서 분리한 미분화 골수세포를 선천면역에서 중요한 역할을 수행하는 대식세포 및 수지상세포로 분화시킨 후 홍삼추출물과 생약복합추출물을 병용 처리하였을 때 대식세포 및 수지상세포의 세포 증식능 및 사이토카인의 분비능이 증가되는 것으로 관찰되었다. 또한 활성화된 탐식 (면역)세포의 세포 표면에서 발현되는 CD80과 CD86의 발현과 탐식(면역)세포의 항원제시에 밀접한 관련이 있는 주조직적합성 복합체(MHC class II)의 발현이 홍삼추출물과 생약복합추출물의 병용 처리구에서 유의적으로 증가되는 것으로 관찰되었다. 또한 후천면역에서 중요한 역할을 수행하는 면역 T 세포가 다량으로 분포하는 비장 조직으로부터 비장세포를 분리하여 홍삼추출물과 생약복합추출물을 병용 처리하였을 때 세포 증식능 및 면역활성을 유도하는 Th1 세포가 분비하는 사이토카인의 함량이 증가되는 것으로 나타났다.
- 또한 활성화된 탐식 (면역)세포의 세포 표면에서 발현되는 CD80과 CD86의 발현과 탐식(면역)세포의 항원제시에 밀접한 관련이 있는 주조직적합성 복합체(MHC class II)의 발현이 홍삼추출물과 생약복합추출물의 병용 처리구에서 유의적으로 증가되는 것으로 관찰되었다. 또한 후천면역에서 중요한 역할을 수행하는 면역 T 세포가 다량으로 분포하는 비장 조직으로부터 비장세포를 분리하여 홍삼추출물과 생약복합추출물을 병용 처리하였을 때 세포 증식능 및 면역활성을 유도하는 Th1 세포가 분비하는 사이토카인의 함량이 증가되는 것으로 나타났다. 이러한 결과로 미루어 볼 때 홍삼추출물과 생약복합추출물의 병용 처리는 선천면역뿐만 아니라 후천면역에 관여하는 다양한 면역세포의 활성화에 직・간접적으로 다양한 상승작용을 미치는 것으로 사료된다.
- 본 연구는 홍삼추출물(홍삼단)과 생약복합추출물(헤모힘)이 주요 기능성분은 다르지만 면역활성이라는 생리활성 측면에서 동일한 효과를 인정하고 있어서 이들의 병용 처리가 면역세포에 어떠한 영향을 미치는지에 대해 알아보기 위하여 수행되었다. 면역활성능에 관한 평가를 진행하기 위하여 마우스의 골수에서 분리한 미분화 골수세포를 선천면역에서 중요한 역할을 수행하는 대식세포 및 수지상세포로 분화시킨 후 홍삼추출물과 생약복합추출물을 병용 처리하였을 때 대식세포 및 수지상세포의 세포 증식능 및 사이토카인의 분비능이 증가되는 것으로 관찰되었다. 또한 활성화된 탐식 (면역)세포의 세포 표면에서 발현되는 CD80과 CD86의 발현과 탐식(면역)세포의 항원제시에 밀접한 관련이 있는 주조직적합성 복합체(MHC class II)의 발현이 홍삼추출물과 생약복합추출물의 병용 처리구에서 유의적으로 증가되는 것으로 관찰되었다.
- 6에 나타내었다. 비장세포에 홍삼추출물과 생약복합추출물 각각의 처리는 농도 의존적으로 비장세포의 증식능을 증가시키는 것으로 나타났으며, 병용 처리구에서는 각각 단독으로 처리한 처리구에 비하여 유의적으로 높게 세포 증식능이 증가되는 것으로 관찰되었다. 이러한 결과로 미루어 보아 홍삼추출물과 생약복합추출물의 처리는 대식세포 및 수지상세포와 같은 선천면역계를 담당하는 탐식세포뿐만 아니라 후천면역을 담당하는 T 세포가 밀집하여 있는 비장으로부터 분리한 비장세포에서도 세포독성을 일으키지 않고 세포 증식능을 유의적으로 증가시키는 것으로 나타났으며, 홍삼추출물과 생약복합추출물의 병용 처리는 비장세포의 증식능에 대해서도 탐식세포의 결과와 유사하게 면역상승 효과를 보이는 것으로 관찰되었다.
- 3에 나타냈다. 실험 결과 홍삼추출물과 생약복합추출물은 각각 처리하였을 때도 사이토카인의 함량을 증가시켰지만 병용으로 처리하였을 때 사이토카인의 분비를 더욱더 증가시키는 것으로 나타났다. 이러한 결과로 미루어 보아 홍삼추출물과 생약복합추출물은 각각을 독립적으로 처리하는 것보다 두 가지를 병용으로 처리하였을 때 면역학적인 상승효과가 더욱더 증가되는 것으로 사료된다.
- 실험 결과 홍삼추출물과 생약복합추출물을 각각 처리한 경우 IL-2 및 IFN-γ와 같은 Th1 세포가 분비하는 사이토카인의 분비가 증가되었으며 병용 처리하였을 경우 더욱더 증가하는 양상을 나타냈다.
- 또한 홍삼추출물과 생약복합추출물을 각각 또는 병용으로 처리하였을 때 Th2 세포가 분비하는 IL-4 및 IL-10과 같은 사이토카인의 분비량에 대한 변화는 관찰되지 않았다. 이러한 결과로 미루어 보아 홍삼추출물과 생약복 합추출물의 경우 알레르기나 아토피 등의 질병 유발과 밀접한 관련이 있는 Th2 세포의 활성화에는 영향을 주지 않는 것으로 판단되며 홍삼추출물과 생약복합추출물의 병용 처리 시 면역활성과 밀접한 관련이 있는 Th1 세포의 활성화와 관련하여 면역학적인 상승작용을 나타내는 것으로 사료된다.
- 각각의 대식세포 및 수지상세포에서 홍삼추출물과 생약복합추출물의 처리는 농도 의존적으로 세포의 증식능을 증가시키는 것으로 나타났으며, 병용 처리구에서는 각각 단독으로 처리한 처리구에 비하여 유의적으로 높게 세포 증식능이 증가되는 것으로 나타났다. 이러한 결과로 미루어 보아 홍삼추출물과 생약복합추출물 처리는 대식세포 및 수지상세포에 대한 세포독성을 일으키지 않는 것으로 판단되며, 홍삼추출물 및 생약복합추출물의 처리는 단독으로 처리하였을 때보다 병용으로 처리하였을 때 세포 증식능의 증가에 더 큰 영향을 미치는 것으로 나타났다.
- 실험 결과 홍삼추출물과 생약복합추출물은 각각 처리하였을 때도 사이토카인의 함량을 증가시켰지만 병용으로 처리하였을 때 사이토카인의 분비를 더욱더 증가시키는 것으로 나타났다. 이러한 결과로 미루어 보아 홍삼추출물과 생약복합추출물은 각각을 독립적으로 처리하는 것보다 두 가지를 병용으로 처리하였을 때 면역학적인 상승효과가 더욱더 증가되는 것으로 사료된다.
- 비장세포에 홍삼추출물과 생약복합추출물 각각의 처리는 농도 의존적으로 비장세포의 증식능을 증가시키는 것으로 나타났으며, 병용 처리구에서는 각각 단독으로 처리한 처리구에 비하여 유의적으로 높게 세포 증식능이 증가되는 것으로 관찰되었다. 이러한 결과로 미루어 보아 홍삼추출물과 생약복합추출물의 처리는 대식세포 및 수지상세포와 같은 선천면역계를 담당하는 탐식세포뿐만 아니라 후천면역을 담당하는 T 세포가 밀집하여 있는 비장으로부터 분리한 비장세포에서도 세포독성을 일으키지 않고 세포 증식능을 유의적으로 증가시키는 것으로 나타났으며, 홍삼추출물과 생약복합추출물의 병용 처리는 비장세포의 증식능에 대해서도 탐식세포의 결과와 유사하게 면역상승 효과를 보이는 것으로 관찰되었다.
- 또한 후천면역에서 중요한 역할을 수행하는 면역 T 세포가 다량으로 분포하는 비장 조직으로부터 비장세포를 분리하여 홍삼추출물과 생약복합추출물을 병용 처리하였을 때 세포 증식능 및 면역활성을 유도하는 Th1 세포가 분비하는 사이토카인의 함량이 증가되는 것으로 나타났다. 이러한 결과로 미루어 볼 때 홍삼추출물과 생약복합추출물의 병용 처리는 선천면역뿐만 아니라 후천면역에 관여하는 다양한 면역세포의 활성화에 직・간접적으로 다양한 상승작용을 미치는 것으로 사료된다.
- 홍삼추출물과 생약복합추출물을 각각 200 μg/ mL로 고정하여 처리하고 병용 처리구에서는 홍삼추출물 100 μg/mL와 생약복합추출물 100 μg/mL 농도로 동시에 처리하였을 때 각각 독립적으로 처리된 그룹보다 병용으로 처리된 그룹에서 탐식세포의 표면 활성 인자인 CD80과 CD86의 발현이 더욱더 증가된 것을 관찰할 수 있었다(Fig. 4).
- 따라서 주조직적합성 복합체의 발현 증가는 탐식세포의 활성화에 매우 밀접한 관련이 있으며, 본 연구에서도 홍삼추출물과 생약복합추출물 병용 처리가 탐식세포인 대식세포 및 수지상세포의 활성화에 미치는 영향에 대해 평가하기 위하여 홍삼추출물과 생약 복합추출물을 각각 200 μg/mL로 고정하여 처리하고 병용 처리구에서는 홍삼추출물 100 μg/mL와 홍삼추출물과 생약 복합추출물 100 μg/mL 농도로 동시에 처리하였을 때 대식 세포 및 수지상세포의 세포 표면 활성 인자인 MHC class (II)의 발현에 관하여 유세포 분석기를 사용하여 분석해보았다. 홍삼추출물과 생약복합추출물이 독립적으로 처리된 처리구보다 병용으로 처리된 그룹에서 유의적으로 MHC class(II)의 발현이 증가되는 것을 알 수 있었다(Fig. 5). 따라서 이러한 결과로 미루어 보아 홍삼추출물과 생약복합추출물의 병용 처리는 대식세포 및 수지상세포의 세포 표면 활성 인자들의 발현을 직접적으로 증가시켜 면역세포를 활성화시키는 것으로 사료된다.
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