추출방법이 모르티에렐라(Mortierella)속 유래 단세포유지 지방질과 아라키돈산 추출 수율에 미치는 영향 Effect of Extraction Methods on the Extraction Yield of Total Lipid and Arachidonic Acid from Single Cell Oil, Mortierella sp.원문보기
아라키돈산(AA)은 포유동물에 식품을 통해 섭취되는 필수지방산으로써 동물조직에서 추출되어 이용되어 왔다. 경제적으로 AA를 생산하기 위하여 토양으로부터 AA를 다량으로 생산하는 모르티에렐라 종으로 확인된 M-12균주를 선발하였다. 균체로부터 지방질과 AA를 효율적으로 추출하기 위하여 전처리 공정, 공정 순서, 추출 용매, 추출 방식, 입자 크기 등을 달리하여 추출 효율을 분석하였다. M-12를 GY배지로 $25^{\circ}C$에서 7일 배양하여 동결건조한 시료를 사용하였을 때 지질방 중 47% 이상의 AA를 함유하고 있었다. 지방질 추출 효율은 균체의 젖은 상태와 건조 상태로 나눈 전처리 공정에 따라 큰 차이를 보이지 않았다. 클로로폼과 메탄올(2:1) 용액을 추출 용매로 사용하였을 때 가장 높은 추출율을 보였으며 헥세인이나 아이소헥세인도 우수한 추출 효율을 나타내었다. 균체를 분쇄하기 위하여 blending, ultrasonication, Ultra-turrex homogenization 등 기계적 분쇄방법을 사용하였으나 추출 효율은 큰 차이를 보이지 않았다. 균체 입자가 고울수록 유지의 추출 효율은 높게 나타났고 추출 시간보다는 추출 시 입자 크기가 추출 효율에 더 큰 영향을 주는 것으로 나타났다. 그러나 추출된 유지를 분획하여 지방산 조성을 분석한 결과 neutral lipids 내에 AA의 함량이 65.3-68.9%로 가장 높게 나타났다.
아라키돈산(AA)은 포유동물에 식품을 통해 섭취되는 필수지방산으로써 동물조직에서 추출되어 이용되어 왔다. 경제적으로 AA를 생산하기 위하여 토양으로부터 AA를 다량으로 생산하는 모르티에렐라 종으로 확인된 M-12균주를 선발하였다. 균체로부터 지방질과 AA를 효율적으로 추출하기 위하여 전처리 공정, 공정 순서, 추출 용매, 추출 방식, 입자 크기 등을 달리하여 추출 효율을 분석하였다. M-12를 GY배지로 $25^{\circ}C$에서 7일 배양하여 동결건조한 시료를 사용하였을 때 지질방 중 47% 이상의 AA를 함유하고 있었다. 지방질 추출 효율은 균체의 젖은 상태와 건조 상태로 나눈 전처리 공정에 따라 큰 차이를 보이지 않았다. 클로로폼과 메탄올(2:1) 용액을 추출 용매로 사용하였을 때 가장 높은 추출율을 보였으며 헥세인이나 아이소헥세인도 우수한 추출 효율을 나타내었다. 균체를 분쇄하기 위하여 blending, ultrasonication, Ultra-turrex homogenization 등 기계적 분쇄방법을 사용하였으나 추출 효율은 큰 차이를 보이지 않았다. 균체 입자가 고울수록 유지의 추출 효율은 높게 나타났고 추출 시간보다는 추출 시 입자 크기가 추출 효율에 더 큰 영향을 주는 것으로 나타났다. 그러나 추출된 유지를 분획하여 지방산 조성을 분석한 결과 neutral lipids 내에 AA의 함량이 65.3-68.9%로 가장 높게 나타났다.
An oleaginous fungus was isolated from soil and identified as Mortierella sp. (M-12) for producing arachidonic acid (AA). Cell disruption methods, extraction methods, and particle sizes of freeze-dried biomass were tested to achieve maximum extraction of total lipids and AA. M-12 grown in glucose ye...
An oleaginous fungus was isolated from soil and identified as Mortierella sp. (M-12) for producing arachidonic acid (AA). Cell disruption methods, extraction methods, and particle sizes of freeze-dried biomass were tested to achieve maximum extraction of total lipids and AA. M-12 grown in glucose yeast media at $25^{\circ}C$ for 7 days contained 35.5% total lipid, and 47% of the total lipid was AA. Lipid extraction yield from wet biomass was shown to be similar to that in a dry state. Maximum lipid extraction was achieved using a mixture of chloroform and methanol (2:1) as an extraction solvent. Different mechanical cell disruption methods did not affect lipid extraction yields. The smaller the particle size of the biomass, the better the lipid extraction yield was observed. Particle size of biomass was shown to more strongly affect lipid extraction than extraction time. The highest AA content was observed in the class of neutral lipids.
An oleaginous fungus was isolated from soil and identified as Mortierella sp. (M-12) for producing arachidonic acid (AA). Cell disruption methods, extraction methods, and particle sizes of freeze-dried biomass were tested to achieve maximum extraction of total lipids and AA. M-12 grown in glucose yeast media at $25^{\circ}C$ for 7 days contained 35.5% total lipid, and 47% of the total lipid was AA. Lipid extraction yield from wet biomass was shown to be similar to that in a dry state. Maximum lipid extraction was achieved using a mixture of chloroform and methanol (2:1) as an extraction solvent. Different mechanical cell disruption methods did not affect lipid extraction yields. The smaller the particle size of the biomass, the better the lipid extraction yield was observed. Particle size of biomass was shown to more strongly affect lipid extraction than extraction time. The highest AA content was observed in the class of neutral lipids.
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문제 정의
습식 추출 방식은 미생물 균체를 건조시키는 과정 없이 균체 회수 후 곧 바로 유지를 추출함으로써 건조 공정을 생략하여 에너지 소비를 절약할 수 있다. 본 연구에서는 모르티에렐라 속 균이 생산하는 지방질과 AA를 효과적으로 추출하기 위하여 전처리 방법과 추출 용매 선정 등의 추출 조건을 최적화하였다.
제안 방법
M-12 지방질의 종류를 분석하기 위하여 silicic acid column chromatography를 사용하였다(19). Activation된 규산을 유리관에 충전하고 클로로폼, 아세톤, 메탄올을 차례로 흘려 지방질을 중성지방질(neutral lipid), 당지방질(glycolipid), 인지방질(phospholipid)로 분획하였고, 분획된 지방질 종류는 TLC로 확인하였다(20).
M-12 균체에서 AA를 효과적으로 추출하기 위하여 균체를 전처리하거나 추출 용매를 달리 하여 유지 추출 수율을 비교하였다(Table 2). 젖은균체, 동결균체, 동결건조(Freeze-Dried) 균체를 CM 용액에 24시간 침지하여 추출하여 지방질 함량과 AA의 함량을 비교한 결과, 동결 건조한 균체를 시료로 사용할 경우 지방질 추출 효율이 35.
M-12로부터 AA를 효과적으로 추출하기 위한 추출 용매를 선택하기 위하여 10 종류의 추출용매를 사용하여 Soxhlet법으로 추출된 지방질의 양을 측정하였다(Table 3). 동결건조한 균체를 CM 용액으로 90에서 10시간 환류시켜 지방질을 추출할 경우 지방질 함량은 23.
운반기체는 헬륨을 25 mL/분로 사용하였으며 split ratio을 1:50으로 조정하였다. 각 지방산의 피크들은 머무름 시간을 비교하여 확인하였으며, 지방산의 함량은 동정된 각 피크의 면적을 구한 뒤 각각의 면적 비를 백분율로 나타내었다.
건조균체 입자크기가 지방질 추출에 미치는 영향을 보기 위하여 막자사발로 분쇄한 균체를 20메시(mesh)와 40메시의 체를 사용하여 거른 후, 입자 크기에 따라 rough (20메시 미통과분, ≥0.841 mm), medium (20메시는 통과하나 40메시를 통과하지 않은 획분, 0.42 mm≤m<0.841 mm), fine (40메시를 통과한 획분, <0.42 mm) 등 세 부분으로 나누어 헥세인(hexane)을 용매로 사용하여 Soxhlet법으로 6-12시간 연속 환류 추출하였다.
균체 지방질을 대량으로 추출하기 위하여 균체를 세 가지 방법으로 준비하였다. 균체를 회수하여 증류수로 한 번 씻은 후 젖은 균체(Wet)를 CM 용액에 24시간 침지하여 추출하거나, 세척한 균체를 −40℃의 냉동고에서 동결시킨 후(Frozen) 용매에 침지하여 추출하거나, 동결건조한 균체를 용매에 침지하여 추출하여 지방질 함량과 AA의 함량을 비교하였다.
경제적으로 AA를 생산하기 위하여 토양으로부터 AA를 다량으로 생산하는 모르티에렐라 종으로 확인된 M-12균주를 선발하였다. 균체로부터 지방질과 AA를 효율적으로 추출하기 위하여 전처리 공정, 공정순서, 추출 용매, 추출 방식, 입자 크기 등을 달리하여 추출 효율을 분석하였다. M-12를 GY배지로 25℃에서 7일 배양하여 동결건조한 시료를 사용하였을 때 지질방 중 47% 이상의 AA를 함유하고 있었다.
균체를 회수하여 증류수로 한 번 씻은 후 젖은 균체(Wet)를 CM 용액에 24시간 침지하여 추출하거나, 세척한 균체를 −40℃의 냉동고에서 동결시킨 후(Frozen) 용매에 침지하여 추출하거나, 동결건조한 균체를 용매에 침지하여 추출하여 지방질 함량과 AA의 함량을 비교하였다.
동결건조된 균체를 기계적인 방법을 사용하여 세포벽을 파괴한 후 CM=2:1 용액으로 지방질을 추출하였다(Table 6). 건조만 하고 추출 전 기계적 분쇄로 세포벽을 파괴하지 않고 지방질을 추출한 경우(29.
모르티에렐라 종 균주로 확인된 M-12를 GY배지에 배양하여회수한 후 균체의 지방질 함량 및 지방산 조성을 분석하였다(Table 1). M-12를 25에서 7일간 배양하여 균체를 동결건조 시킨 후 추출하였을 때 조지방질 함량은 건조 균체의 35.
본 연구에서 모든 실험은 세 번 반복으로 행하였으며, 수치는 세 실험값의 평균값으로 나타내었다. 모든 결과는 일원배치 분산분석을 사용하여 5% 유의 수준에서 분석하였으며, 사용한 프로그램은 SAS software (Version 8.
분쇄와 건조공정의 순서가 지방질의 추출에 미치는 영향을 조사하기 위하여 균체를 blender를 사용하여 먼저 분쇄한 후 건조하는 ‘선분쇄‚ 후건조’ 공정과, 균체를 건조한 후에 분쇄를 하는 ‘선건조 후분쇄’ 공정을 사용하여 지방질 추출 효율을 측정하였다(17).
동결건조된 균체 약 1g를 원통여지에 담고 유기용매의 종류에 따라 추출온도를 달리한 Soxhlet법에 의하여 16시간 연속 환류 추출한 후, 감압농축시켜 용매를 제거하고 CM를 사용하여 정제하였다(15). 추출용액을 0.088% KCl 용액으로 2번 세척한 후 감압증발 장치를 이용하여 유기용매를 날려 보내고, 질소가스를 불어 넣어 잔존 용매를 제거한 후, 감압건조하여 무게를 재어 균체의 지방질 함량(Total lipids, % w/w)을 측정하였다. 추출 조건을 달리하여 추출한 경우 추출 효율은 지방질 추출량(Total lipids extracted, TLE, % w/w)으로 표시하였다.
균체의 지방산 조성은 AOCS Ce2-66법에 따라 분석하였다(21). 추출하여 정제한 지방질을 14% BF3/MeOH로 메틸에스터 시킨 후 Hewlett Packard 5890 Series II (Hewlett-Packard, Wilmington, DE, USA)로 분석하였다. 칼럼은 Supelcowax-10 모세관 컬럼(30 cm×0.
대상 데이터
경제적으로 AA를 생산하기 위하여 토양으로부터 AA를 다량으로 생산하는 모르티에렐라 종으로 확인된 M-12균주를 선발하였다.
본 실험에서는 토양으로부터 분리하여 모르티에렐라 속으로 동정된 균주 중 유지 생산효율이 가장 높은 균주 M-12를 선발하여 AA 생산 균주로 사용하였다. 추출 실험을 위하여 M-12를 GY(glucose-yeast)배지로 25℃에서 7일 동안 배양하여 동결건조한 균체를 추출 실험의 기준 시료로 사용하였다.
지방질 및 AA 추출 공정을 최적화하는데 사용된 시료로써 배양 후 회수한 젖은 상태의 균체, 동결만 시킨 균체, 동결건조한 균체 등 세 종류를 사용하였다. 균체의 세포벽을 파괴하기 위하여 ultrasonic disintegrators를 이용한 sonication 방법으로 0.
본 실험에서는 토양으로부터 분리하여 모르티에렐라 속으로 동정된 균주 중 유지 생산효율이 가장 높은 균주 M-12를 선발하여 AA 생산 균주로 사용하였다. 추출 실험을 위하여 M-12를 GY(glucose-yeast)배지로 25℃에서 7일 동안 배양하여 동결건조한 균체를 추출 실험의 기준 시료로 사용하였다. 사용된 용매는 특별한 설명이 없으면 모두 분석용 시약급이었다.
Diethylether, hexane, hexane/iso-propanol, iso-octane도 비교적 좋은 지방질 추출 효과를 나타내었다. 침지법에 적합한 추출 용매를 선발하기 위하여 10종류의 추출 용매를 사용하였다(Table 4). 동결건조된 균체를 CM 용액에 침지시켰을 때 지방질 함량이 29.
데이터처리
본 연구에서 모든 실험은 세 번 반복으로 행하였으며, 수치는 세 실험값의 평균값으로 나타내었다. 모든 결과는 일원배치 분산분석을 사용하여 5% 유의 수준에서 분석하였으며, 사용한 프로그램은 SAS software (Version 8.2; SAS, Cary, NC, USA)이었다. 실험값들의 표준편차가 3% 이내로 나온 경우에는 표준편차나 오차막대를 표시하지 아니 하였다.
이론/모형
지방질 및 AA 추출 공정을 최적화하는데 사용된 시료로써 배양 후 회수한 젖은 상태의 균체, 동결만 시킨 균체, 동결건조한 균체 등 세 종류를 사용하였다. 균체의 세포벽을 파괴하기 위하여 ultrasonic disintegrators를 이용한 sonication 방법으로 0.1 W/mL로 10분간 처리하거나(16), Waring blender (LB10S, Waring Co., Winsted, MN, USA)에서 glass beads를 이용하여 15분간 처리하는 방법(17), Ultra-Turrax (T-25, IKA, Staufen, Germany)를 이용하여 13,500 rpm에서 1분간 처리하는 homogenization 방법(18) 등을 사용하였다. 건조균체 입자크기가 지방질 추출에 미치는 영향을 보기 위하여 막자사발로 분쇄한 균체를 20메시(mesh)와 40메시의 체를 사용하여 거른 후, 입자 크기에 따라 rough (20메시 미통과분, ≥0.
균체의 지방산 조성은 AOCS Ce2-66법에 따라 분석하였다(21). 추출하여 정제한 지방질을 14% BF3/MeOH로 메틸에스터 시킨 후 Hewlett Packard 5890 Series II (Hewlett-Packard, Wilmington, DE, USA)로 분석하였다.
균체의 지방질(Total lipids) 함량은 Soxhlet법(14)과 Folch’s solvent (chloroform : methanol=2:1, CM)를 이용한 침지법(15)에 따라 측정하였고 필요에 따라 추출용매를 달리하여 실험하였다.
동결건조 균체 시료를 만들기 위하여 균체를 동결 전에 균질화하고 동결건조한 후 이를 다시 균질화하였다. 대량의 균체에서 지방질을 효과적으로 추출하기 위한 방법을 찾기 위하여 침지법(15)과 Soxhlet법을 사용하여 추출 효율을 비교하였다. 침지법을 사용하는 경우에는 건조 균체 100 g이나 이에 해당되는 젖은 균체나 동결균체를 추출 용매 2L에 넣고 24시간 동안 서서히 교반하면서 지방질을 추출한 후 4시간 동안 정치시켜 용해되지 않은 고체물질을 침전시키고, 용액을 거름종이(Whatman No.
균체의 지방질(Total lipids) 함량은 Soxhlet법(14)과 Folch’s solvent (chloroform : methanol=2:1, CM)를 이용한 침지법(15)에 따라 측정하였고 필요에 따라 추출용매를 달리하여 실험하였다. 동결건조된 균체 약 1g를 원통여지에 담고 유기용매의 종류에 따라 추출온도를 달리한 Soxhlet법에 의하여 16시간 연속 환류 추출한 후, 감압농축시켜 용매를 제거하고 CM를 사용하여 정제하였다(15). 추출용액을 0.
조지방질은 필요에 따라 Folch’s washing으로 정제하였으며, Soxhlet법을 이용하여 추출할 경우 용매의 비등점에 따라 추출 온도를 달리 하여 추출하였다.
침지법이나 Soxhlet법으로 지방질을 추출할 때 추출용매에 따른 지방질의 추출 효율을 측정하였다. 추출 용매는 극성에 따라 다양한 용매를 사용하였는데 butanol, cyclo-hexane, iso-hexane, iso-octane, hexane, hexane/iso-propanol (1:1), diethylether, hexane/iso-propanol (2:1), chloroform/methanol (1:1), chloroform/ methanol (2:1) 등이 사용되었다.
성능/효과
CM 용액을 사용하여 침지법으로 추출한 M-12 지방질을 silicic acid column chromatography를 사용하여 neutral lipids (NL), glycolipids (GL), phospholipids (PL)로 분획하여 함량을 측정한 결과 NL이 65.3-68.9%, GL이 가 27.5-29.7%, PL이 3.6-5.1%로 나타났다(Table 5). NL의 AA 함량은 30.
5% (w/w)로 가장 높게 나타났다. Diethylether, hexane, hexane/iso-propanol, iso-octane도 비교적 좋은 지방질 추출 효과를 나타내었다. 침지법에 적합한 추출 용매를 선발하기 위하여 10종류의 추출 용매를 사용하였다(Table 4).
M-12 건조균체를 분쇄한 후 입자 크기에 따라 rough, medium, fine 세 가지 시료로 분획하고 헥세인으로 6시간 추출한 결과 지방질 추출양은 8.4, 11.6, l4.2%로 나타나 입자가 고울수록 추출율은 높아졌다(Table 7). 헥세인으로 12시간 추출하였을 때에는 각각 9.
1%로 나타났다(Table 5). NL의 AA 함량은 30.8%로 나타났으며, glycolipids에서는 39.9%로 가장 높게 나타났다. 세 가지 지방질 분획 중의AA 함량이 23.
균체를 분쇄하기 위하여 blending, ultrasonication, Ultra-turrex homogenization 등 기계적 분쇄방법을 사용하였으나 추출 효율은 큰 차이를 보이지 않았다. 균체 입자가 고울수록 유지의 추출 효율은 높게 나타났고 추출 시간보다는 추출 시 입자크기가 추출 효율에 더 큰 영향을 주는 것으로 나타났다. 그러나 추출된 유지를 분획하여 지방산 조성을 분석한 결과 neutral lipids 내에 AA의 함량이 65.
균체를 먼저 분쇄하여 건조시킨 “선분쇄 후건조 시료가 먼저 건조한 후에 분쇄한 “선건조 후분쇄” 시료보다 지방질 추출이 잘 되는 것으로 나타났다(Table 8).
클로로폼과 메탄올(2:1) 용액을 추출 용매로 사용하였을 때 가장 높은 추출율을 보였으며 헥세인이나 아이소헥세인도 우수한 추출 효율을 나타내었다. 균체를 분쇄하기 위하여 blending, ultrasonication, Ultra-turrex homogenization 등 기계적 분쇄방법을 사용하였으나 추출 효율은 큰 차이를 보이지 않았다. 균체 입자가 고울수록 유지의 추출 효율은 높게 나타났고 추출 시간보다는 추출 시 입자크기가 추출 효율에 더 큰 영향을 주는 것으로 나타났다.
균체 입자가 고울수록 유지의 추출 효율은 높게 나타났고 추출 시간보다는 추출 시 입자크기가 추출 효율에 더 큰 영향을 주는 것으로 나타났다. 그러나 추출된 유지를 분획하여 지방산 조성을 분석한 결과 neutral lipids 내에 AA의 함량이 65.3-68.9%로 가장 높게 나타났다.
동결건조된 균체를 CM 용액에 침지시켰을 때 지방질 함량이 29.4±0.7% (w/w)로 가장 높게 나타났다.
동결건조한 균체를 CM 용액으로 90에서 10시간 환류시켜 지방질을 추출할 경우 지방질 함량은 23.7±0.5% (w/w)로 가장 높게 나타났다.
이는 CM 용액을 사용할 경우 극성지방질이 많이 추출되기 때문으로 사료된다. 또한 예상한대로 균체를 건조(dried)만 해서 추출한 경우보다 건조 후 분쇄를 하고 추출하였을 때 추출 효율이 더 높았다. 전처리 공정의 순서와 추출 용매가 지방질의 종류조성에 미치는 영향을 Table 9에 나타내었다.
균체를 먼저 분쇄하여 건조시킨 “선분쇄 후건조 시료가 먼저 건조한 후에 분쇄한 “선건조 후분쇄” 시료보다 지방질 추출이 잘 되는 것으로 나타났다(Table 8). 또한 추출 용매는 CM 용액이 Hexane:Ethanol (9:1, H:E=9:1) 용액보다 높은 추출 효율을 보였다. 이는 CM 용액을 사용할 경우 극성지방질이 많이 추출되기 때문으로 사료된다.
9%로 가장 높게 나타났다. 세 가지 지방질 분획 중의AA 함량이 23.5-39.9%인 점으로 보아 실험에 사용된 균체가 충분한 유지축적 단계를 거칠 경우 AA의 함량은 증가될 수 있을 것으로 사료된다.
전처리 공정의 순서와 추출 용매가 지방질의 종류조성에 미치는 영향을 Table 9에 나타내었다. 순수한 헥세인만을 사용하여 분쇄 후 건조한 시료에서 지방질을 추출하였을 때 neutral lipid의 함량이 87.7%로 가장 높았다. 그러나 CM 용액을 사용하였을 경우 총지방질 함량은 24.
즉 Soxhlet법이나 침지법 모두에서 CM 용액을 사용할 경우 추출 효율이 가장 높았으나, 침지법을 사용할 경우 Soxhlet법을 사용할 경우보다 높은 추출율을 보였다. 전체적으로 생체 시료로부터 지방질을 효과적으로 추출하는 추출용매로서 극성을 가진 메탄올이나 아이소프로판올(iso-propanol), 비극성의 클로로폼이나 헥세인을 혼합하여 사용할 때 추출 효율이 높았다. 이는 수분이 함유된 상태의 시료로부터 지방질을 분리하는 경우 이러한 용매들이 3 용매계, 즉 두 종류의 추출 용매와 물로 이루어진 환경을 만들어 결합지질을 유리시키는 동시에 인지질 등의 극성지질과 친화성이 증대되어 효과적으로 지방질을 추출하기 때문인 것으로 사료된다(23).
젖은균체, 동결균체, 동결건조(Freeze-Dried) 균체를 CM 용액에 24시간 침지하여 추출하여 지방질 함량과 AA의 함량을 비교한 결과, 동결 건조한 균체를 시료로 사용할 경우 지방질 추출 효율이 35.5±1.1% (w/w)로 가장 효과적이었으나, 지방산 조성에서는 큰 차이를 보이지 않았다.
1% (w/w)이었다. 주요 지방산은 AA, palmitic acid, oleic acid, linoleic acid의 순으로 나타났으며, AA의 함량은 46.7%로 측정되었다. 일반적인 모르티에렐라 종 균체의 경우 지방질 함량은 18-21% 수준이며 AA의 함량은 17-19% 수준으로써, M-12의 유지 생산 효율이 높았으며, M-12 균체에서 유지를 제외한 나머지 균체가 시간당 유지를 생산하는 양을 비율로 나타내는 비유지생산계수(specific lipid production rate (g lipid/g lipid-free biomass/h)도 높았다(22).
7% (w/w)로 가장 높게 나타났다. 즉 Soxhlet법이나 침지법 모두에서 CM 용액을 사용할 경우 추출 효율이 가장 높았으나, 침지법을 사용할 경우 Soxhlet법을 사용할 경우보다 높은 추출율을 보였다. 전체적으로 생체 시료로부터 지방질을 효과적으로 추출하는 추출용매로서 극성을 가진 메탄올이나 아이소프로판올(iso-propanol), 비극성의 클로로폼이나 헥세인을 혼합하여 사용할 때 추출 효율이 높았다.
8%의 유지 수율을 보였는데 이들 결과로 미루어보아 지방질의 추출 효율은 추출 시간보다는 추출 시입자의 크기에 더 많은 영향을 받는 것으로 사료된다. 추출된 지방질의 AA함량은 33.9-38.3%로써 입자의 크기나 추출시간에 큰 영향을 받지는 않는 것으로 나타났으며 입자 크기가 작을수록 추출효율이 높았다. 따라서 균체 지방질 추출의 경우에도 다른 유량자원의 유지 추출에서와 마찬가지로 입자를 작게 하여 표면적을 최대로 하는 것이 추출 효율을 제고시킨 것으로 사료된다(24).
반면 건조 상태의 균체에서 지방질을 추출하는 경우에는 비극성의 헥세인이나 다이에틸에테르(diethylether)가 추출용매로 사용될 수 있다. 추출용매를 CM 용액으로 동일하게 사용할 경우 침지법에서의 추출 수율이 Soxhlet법에 의한 추출 효율보다 높게 나타났다. 추출 시간은 침지법의 경우 24시간이 소요되지만 Soxhlet법은 10-16시간이 소요되어 상대적으로 신속한 추출이 이루어졌지만 침지법을 사용할 경우 환류 추출 시 소요되는 에너지를 절약할 수 있을 것으로 사료된다.
지방질 추출 효율은 균체의 젖은 상태와 건조 상태로 나눈 전처리 공정에 따라 큰 차이를 보이지 않았다. 클로로폼과 메탄올(2:1) 용액을 추출 용매로 사용하였을 때 가장 높은 추출율을 보였으며 헥세인이나 아이소헥세인도 우수한 추출 효율을 나타내었다. 균체를 분쇄하기 위하여 blending, ultrasonication, Ultra-turrex homogenization 등 기계적 분쇄방법을 사용하였으나 추출 효율은 큰 차이를 보이지 않았다.
2%로 나타나 입자가 고울수록 추출율은 높아졌다(Table 7). 헥세인으로 12시간 추출하였을 때에는 각각 9.1, 12.5% 그리고 14.8%의 유지 수율을 보였는데 이들 결과로 미루어보아 지방질의 추출 효율은 추출 시간보다는 추출 시입자의 크기에 더 많은 영향을 받는 것으로 사료된다. 추출된 지방질의 AA함량은 33.
후속연구
미생물에서 지방질을 경제적으로 추출하기 위해서는 에너지를 적게 사용하는 방법이 필요하다. 따라서 대량의 균체 시료에서 지방질을 경제적으로 추출하기 위해서는 에너지가 많이 소용되는 건조 공정을 생략하는 추출 공정의 개발이 필요할 것으로 사료되는데, 젖은 상태에서 지방을 추출하기 위해서는 균체 파쇄 기기에서 균사체가 용이하게 흐르게 하는 것이 중요할 것으로 사료된다. 이 경우 친수성 용매나 물 분자가 지방질의 친수층을 감싸 지방질의 추출을 방해할 수 있는데 이를 해결하면 습식 추출 공정의 상업적인 이용이 가능하리라 사료된다.
질의응답
핵심어
질문
논문에서 추출한 답변
AA는 어떻게 합성되는가?
아라키돈산(arachidonic acid, AA)은 포유류의 지방에 들어 있는 n-6계 필수 지방산의 일종으로 구조의 특성으로 인하여 영하의 낮은 온도에서도 세포막에 유동성을 부여한다(1). 또한 AA는 인체의 조직이나 기관에 존재하는 인지질로부터 phospholipase A2의 작용에 의하여 유리된 후, 산화효소에 의하여 prostaglandin, thromboxane, leukotriene으로 합성되는데, 이 물질들은 혈압 저하, 혈소판 응집·저해, 혈관 확장, 항 종양, 수면 유도 등의 생리활성을 갖는다(2). AA는 식품을 통하여 외부로부터 공급되거나 체내에서 linoleic acid를 기질로 하여 생합성 되는데, 모유에 존재하는 AA는 유아의 두뇌 성장을 촉진시킨다고 알려져 있다(3,4).
아라키돈산의 특징은 무엇인가?
아라키돈산(arachidonic acid, AA)은 포유류의 지방에 들어 있는 n-6계 필수 지방산의 일종으로 구조의 특성으로 인하여 영하의 낮은 온도에서도 세포막에 유동성을 부여한다(1). 또한 AA는 인체의 조직이나 기관에 존재하는 인지질로부터 phospholipase A2의 작용에 의하여 유리된 후, 산화효소에 의하여 prostaglandin, thromboxane, leukotriene으로 합성되는데, 이 물질들은 혈압 저하, 혈소판 응집·저해, 혈관 확장, 항 종양, 수면 유도 등의 생리활성을 갖는다(2).
아라키돈산이 산화효소에 의하여 prostaglandin, thromboxane, leukotriene으로 합성되었을 때 이들의 생리활성은?
아라키돈산(arachidonic acid, AA)은 포유류의 지방에 들어 있는 n-6계 필수 지방산의 일종으로 구조의 특성으로 인하여 영하의 낮은 온도에서도 세포막에 유동성을 부여한다(1). 또한 AA는 인체의 조직이나 기관에 존재하는 인지질로부터 phospholipase A2의 작용에 의하여 유리된 후, 산화효소에 의하여 prostaglandin, thromboxane, leukotriene으로 합성되는데, 이 물질들은 혈압 저하, 혈소판 응집·저해, 혈관 확장, 항 종양, 수면 유도 등의 생리활성을 갖는다(2). AA는 식품을 통하여 외부로부터 공급되거나 체내에서 linoleic acid를 기질로 하여 생합성 되는데, 모유에 존재하는 AA는 유아의 두뇌 성장을 촉진시킨다고 알려져 있다(3,4).
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