혈관내피세포에서 c-Jun N-terminal kinase에 의해 조절되는 세포사멸에 고농도의 피노실빈이 미치는 효과 Apoptotic Effect of Pinosylvin at a High Concentration Regulated by c-Jun N-Terminal Kinase in Bovine Aortic Endothelial Cells원문보기
피노실빈은 소나무 등에서 흔히 관찰되는 스틸벤노이드이다. 혈관내피세포에서 ~pM에서 ~nM 정도의 낮은 농도의 피노실빈은 세포성장, 세포이동, 항염증반응을 유도한다. 그러나 최근에 고농도의 피노실빈이 소 대동맥 내피세포의 세포사를 유발하고 있음이 보고되었으나, 그 자세한 기전이나 경로 연구가 미흡하여 이번 연구에서 고농도 피노실빈의 세포사 유발 경로를 규명하기 위한 실험을 수행하였다. 고농도의 피노실빈은 caspase-3 절단, 포스파티딜 세린의 플립플롭, 핵 분절 등을 유도하는 것으로 보아 세포사멸을 통한 세포사를 유발함을 알았다. 또한 혈청기아나 100 μM etoposide에 의하여 촉발하는 caspase-3 활성/핵분절이 추가적으로 증가하는 현상이 관찰되었다. 이는 피노실빈이 일으키는 세포사멸은 혈청기아나 etoposide에 의해 일어나는 세포사멸과는 다른 경로로 진행됨을 의미하므로 고농도의 피노실빈에 의해 촉발되는 세포신호전달을 탐색한 결과, JNK와 eNOS가 관여함을 알았다. 두 신호전달 물질 중에 어느 것이 피노실빈 유도 세포사에 중요한 지를 알기 위한 추가적인 실험을 진행하였다. 그 결과, JNK 억제자인 SP-600125는 피노실빈에 의한 세포사멸을 억제하였으나, eNOS 억제자인 L-NAME은 아무런 영향이 없는 것으로 보아 JNK가 피노실빈에 의해 유발되는 세포사멸에 관여하는 세포신호 전달물질임을 알았다.
피노실빈은 소나무 등에서 흔히 관찰되는 스틸벤노이드이다. 혈관내피세포에서 ~pM에서 ~nM 정도의 낮은 농도의 피노실빈은 세포성장, 세포이동, 항염증반응을 유도한다. 그러나 최근에 고농도의 피노실빈이 소 대동맥 내피세포의 세포사를 유발하고 있음이 보고되었으나, 그 자세한 기전이나 경로 연구가 미흡하여 이번 연구에서 고농도 피노실빈의 세포사 유발 경로를 규명하기 위한 실험을 수행하였다. 고농도의 피노실빈은 caspase-3 절단, 포스파티딜 세린의 플립플롭, 핵 분절 등을 유도하는 것으로 보아 세포사멸을 통한 세포사를 유발함을 알았다. 또한 혈청기아나 100 μM etoposide에 의하여 촉발하는 caspase-3 활성/핵분절이 추가적으로 증가하는 현상이 관찰되었다. 이는 피노실빈이 일으키는 세포사멸은 혈청기아나 etoposide에 의해 일어나는 세포사멸과는 다른 경로로 진행됨을 의미하므로 고농도의 피노실빈에 의해 촉발되는 세포신호전달을 탐색한 결과, JNK와 eNOS가 관여함을 알았다. 두 신호전달 물질 중에 어느 것이 피노실빈 유도 세포사에 중요한 지를 알기 위한 추가적인 실험을 진행하였다. 그 결과, JNK 억제자인 SP-600125는 피노실빈에 의한 세포사멸을 억제하였으나, eNOS 억제자인 L-NAME은 아무런 영향이 없는 것으로 보아 JNK가 피노실빈에 의해 유발되는 세포사멸에 관여하는 세포신호 전달물질임을 알았다.
Pinosylvin is a stilbenoid found in the Pinus species. Pinosylvin at ~pM to ~nM concentrations induces cell proliferation, cell migration and anti-inflammatory activity in endothelial cells. However, it was recently reported that pinosylvin at high concentrations (50 to 100 μM) induces cell de...
Pinosylvin is a stilbenoid found in the Pinus species. Pinosylvin at ~pM to ~nM concentrations induces cell proliferation, cell migration and anti-inflammatory activity in endothelial cells. However, it was recently reported that pinosylvin at high concentrations (50 to 100 μM) induces cell death in bovine aortic endothelial cells. In this study, we conducted a series of experiments to discover how pinosylvin at a high concentration (50 μM) induces endothelial cell death. Pinosylvin at the high concentration was shown to induce endothelial cell apoptosis through enhancing caspase-3 activity, flip-flop of phosphatidyl serine, and nuclear fragmentation. We found that pinosylvin at the high concentration additively increased caspase-3 activity enhanced by serum-starvation or treatment with 100 μM etoposide. We also determined that pinosylvin at the high concentration promoted activations of c-Jun N-terminal kinase (JNK) and endothelial nitric oxide synthetase (eNOS). We further ran a series of experiments to find out which signaling molecule plays a critical role in the pinosylvin-induced apoptosis. We finally found that SP-600125, a JNK inhibitor, had an inhibitory effect on the pinosylvin-induced endothelial cell death, but L-NAME, an eNOS inhibitor, had no effect. These data indicate that JNK is involved in the pinosylvin-induced apoptosis. Collectively, pinosylvin at high doses induces cell apoptosis via JNK activation.
Pinosylvin is a stilbenoid found in the Pinus species. Pinosylvin at ~pM to ~nM concentrations induces cell proliferation, cell migration and anti-inflammatory activity in endothelial cells. However, it was recently reported that pinosylvin at high concentrations (50 to 100 μM) induces cell death in bovine aortic endothelial cells. In this study, we conducted a series of experiments to discover how pinosylvin at a high concentration (50 μM) induces endothelial cell death. Pinosylvin at the high concentration was shown to induce endothelial cell apoptosis through enhancing caspase-3 activity, flip-flop of phosphatidyl serine, and nuclear fragmentation. We found that pinosylvin at the high concentration additively increased caspase-3 activity enhanced by serum-starvation or treatment with 100 μM etoposide. We also determined that pinosylvin at the high concentration promoted activations of c-Jun N-terminal kinase (JNK) and endothelial nitric oxide synthetase (eNOS). We further ran a series of experiments to find out which signaling molecule plays a critical role in the pinosylvin-induced apoptosis. We finally found that SP-600125, a JNK inhibitor, had an inhibitory effect on the pinosylvin-induced endothelial cell death, but L-NAME, an eNOS inhibitor, had no effect. These data indicate that JNK is involved in the pinosylvin-induced apoptosis. Collectively, pinosylvin at high doses induces cell apoptosis via JNK activation.
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문제 정의
세포사는 세포괴사(necrosis), 세포사멸(apoptosis) 및 오토 파지(autophagy) 등으로 세분화되기 때문에 피노실빈에 의해 유도되는 세포사가 어떤 종류의 세포사 인지 규명하고자 하였다. 고농도의 피노실빈이 유도하는 세포사의 경우, 위의 실험결과를 통해 알 수 있듯이 세포가 위축되는 현상이 관찰되었 기 때문에 세포사멸로 진행되는 세포사일 가능성이 매우 높 다.
이번 연구는 고농도의 피노실빈이 혈관내피세포의 세포사 를 유도할 뿐만 아니라 기존에 알려지지 않았던 고농도의 피 노실빈이 촉발하는 세포사 신호전달경로들을 규명하였고, 특히 어느 신호전달경로가 가장 중요하게 세포사를 조절하는 지를 결정하였다.
가설 설정
고농도의 피노실빈이 eNOS와 JNK의 활성을 유도하고, ERK나 Akt의 활성을 감소시킨다는 것을 위의 실험결과를 통해 알 수 있었다. 따라서 아마도 JNK 혹은 eNOS의 증가된 활성 혹은 ERK나 Akt의 변화된 활성이 고농도의 피노실빈에 의하여 유도되는 세포사멸을 조절한다는 가설을 설정하였다. 이를 증명하기 위하여 BAEC에 각 신호전달물질의 활성을 억 제하는 억제자들을 전처리한 후, 고농도의 피노실빈을 처리하여 일어나는 세포사의 변화를 관찰하였다.
제안 방법
5% FBS가 포함된 DMEM 배지로 12시간 이상 혈청기아 시킨 후 다양한 농도의 피노실빈을 0~ 48시간 동안 처리하였다. 20 μM PD-98059 (ERK 억제자, Enzo Life Science, Farmingdale, NY, USA), 2.5 μM L-NAME (eNOS 억제자, Cell Signaling, Danvers, MA, USA), 1 μM wortmannin (AKT 억제자, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA), 10 μM SP-600125 (JNK 억제자, Enzo Life Science), 10 μM SB-203580 (p38 억제자, Enzo Life Science) 등의 억제자는 피노실빈을 처리하기 1시간 전에 처리하였다. 시간 경과에 따른 변화를 현미경을 이용해 사진 촬영하여 기록했으며, 세포 사멸 비율은 세포사멸 세포(원형 탈착 부유 세포)를 계산하여 결정하였다[12, 22].
1차 항체는 caspase-3, p~ERK, ERK, p~Akt, Akt, p~p38 MAP kinase, p38 MAP kinase, p~JNK, JNK, p~eNOS, eNOS (Cell Signaling)를 표적으로 하는 항체를 사용하였다. 2차 항 체와 연속적으로 반응시킨 후, 이를 화학발광 검출법을 통해 X-선 필름에 감광시켜 단백질을 검출하였다.
1% SDS, 1mM phenylmethylsulfonyl fluoride)으로 분해한 뒤, 원심분리를 통해 상층액을 획득했다. Bio-Rad DC assay kit (Bio-Rad, Hercules, CA, USA)를 이용해 세포 분해 액의 단백질량을 측정하였으며 동일한 양의 단백질을 SDS- PAGE (polyacrylamide gel electrophoresis)에 의해 분리시켰 다. 분리된 단백질을 polyvinylidene fluoride (PVDF) 막 (Millipore, Billerica, MA, USA)으로 전달시킨 후, 분석하고자 하는 표적 단백질에 특이적으로 결합하는 1차 항체와 반응시 켰다.
Caspase-3 활성은 Caspase-3 Colorimetric Activity Assay Kit (Chemicon, Temecula, CA, USA)를 이용해 Ac-DEVD- pNA를 기질로 하여 측정하였다. BAEC를 전면 성장 시킨 후 혈청기아 배지에서 100 μM etoposide (ETO, Sigma-Aldrich) 또는 50 μM 피노실빈을 12시간 이상 처리한 뒤 세포를 분해하였다.
이와 같은 결과는 피노실빈에 의하여 유도 되는 세포사를 JNK가 조절하고 있음을 강력히 암시한다. JNK 의 억제 효과가 세포사멸에서도 나타나는 지를 확인하기 위하여, SP-600125를 전처리하고 고농도의 피노실빈을 처리한 후 Hoechst 33258로 핵을 염색하여 핵 분절 현상을 관찰하였다. 그 결과 Fig.
본 연구의 실험 결과는 고농도의 피노실빈이 혈관내피세포 의 세포사멸을 유발하는 경로를 규명한 것으로도 그 의미가 크다. 고농도의 피노실빈이 세포사를 유발하는 경로가 JNK의 활성화를 통해 이루어 짐을 관찰하였다. JNK 신호전달 물질이 세포사멸에 관여한다는 것은 이미 잘 알려져 있고[3], 본 연구의 실험 결과도 이를 지지한다.
BAEC을 Conroy’s fixative로 10분 동안 고 정시키고 phosphate buffered saline (PBS)으로 세척하고 10분 동안 공기 중에서 건조시켜 주었다. 그 후 Hoechst 33258(12.5 μg/ml, Sigma-Aldrich)로 상온에서 30분 동안 세포를 염색시 킨 후, PBS로 세척해주고 형광 현미경(Zeiss autoplan 2, Jena, Germany)으로 핵을 관찰하였다.
세포사 분석을 위하여 Apo- Scan Annexin V-FITC apoptosis detection kit (BioBud, Seongnam, Korea)를 이용하여 세포를 Annexin V-FITC와 propidium iodide (PI)로 염색하였다. 그 후 flow cytometry (Guava easyCyte system, Milipore)를 이용하여 분석하였다.
또한 두 종류의 자극, 즉 혈청기아와 ETO (100 μM)의 처리 로 내피세포의 세포사멸을 촉발할 때, 고농도의 피노실빈을 함께 처리하면 세포사멸이 어떻게 되는지 관찰하였다. 그 결과, Fig.
Etoposide (ETO)는 topoisomerase II와 복합체를 형성하여 DNA 사슬의 재연결을 방해하여 DNA 사슬을 파괴 하는 시약으로 BAEC의 세포사를 유도하는 양성 대조군으로 사용하였다. 본 실험에서는 ETO를 100 μM로 처리하여 BAEC 의 세포사가 유도됨을 관찰하였다. 흥미롭게도 50 μM의 피노 실빈이 100 μM의 ETO와 유사한 효과를 나타내는 것으로 보 아, 피노실빈이 ETO보다 더 강력하게 세포사를 유도함을 알 수 있었다.
전면 성장한 BAEC을 24시간 동안 혈청기아 시킨 후 50 μM 피노실빈을 24시간 처리하였다. 세포사 분석을 위하여 Apo- Scan Annexin V-FITC apoptosis detection kit (BioBud, Seongnam, Korea)를 이용하여 세포를 Annexin V-FITC와 propidium iodide (PI)로 염색하였다. 그 후 flow cytometry (Guava easyCyte system, Milipore)를 이용하여 분석하였다.
Louis, MO, USA), 10 μM SP-600125 (JNK 억제자, Enzo Life Science), 10 μM SB-203580 (p38 억제자, Enzo Life Science) 등의 억제자는 피노실빈을 처리하기 1시간 전에 처리하였다. 시간 경과에 따른 변화를 현미경을 이용해 사진 촬영하여 기록했으며, 세포 사멸 비율은 세포사멸 세포(원형 탈착 부유 세포)를 계산하여 결정하였다[12, 22].
따라서 아마도 JNK 혹은 eNOS의 증가된 활성 혹은 ERK나 Akt의 변화된 활성이 고농도의 피노실빈에 의하여 유도되는 세포사멸을 조절한다는 가설을 설정하였다. 이를 증명하기 위하여 BAEC에 각 신호전달물질의 활성을 억 제하는 억제자들을 전처리한 후, 고농도의 피노실빈을 처리하여 일어나는 세포사의 변화를 관찰하였다. Fig.
고농도의 피노실빈이 유도하는 세포사의 경우, 위의 실험결과를 통해 알 수 있듯이 세포가 위축되는 현상이 관찰되었 기 때문에 세포사멸로 진행되는 세포사일 가능성이 매우 높 다. 이를 증명하기 위하여, 세포사멸의 특징인 caspase-3 활성 화와 phosphatidyl serine의 플립플롭, 핵의 분절 등이 고농도 의 피노실빈에 의해 나타나는 지 관찰하였다. Fig.
전면 성장한 BAEC을 0.5% FBS가 포함된 DMEM 배지로 12시간 이상 혈청기아 시킨 후 다양한 농도의 피노실빈을 0~ 48시간 동안 처리하였다. 20 μM PD-98059 (ERK 억제자, Enzo Life Science, Farmingdale, NY, USA), 2.
전면 성장한 BAEC을 12시간 동안 혈청기아 시킨 후 혈청기 아 상태 유지, 100 μM ETO 또는 50 μM 피노실빈을 24시간 동안 처리하였다. BAEC을 Conroy’s fixative로 10분 동안 고 정시키고 phosphate buffered saline (PBS)으로 세척하고 10분 동안 공기 중에서 건조시켜 주었다.
피노실빈의 세포사에 미치는 효과를 평가하기 위하여 피노 실빈을 농도별(0.1~50 μM)로 처리한 후 재료 및 방법에 기술 한 방법으로 BAEC의 세포사를 관찰하였다. Fig.
대상 데이터
분리된 단백질을 polyvinylidene fluoride (PVDF) 막 (Millipore, Billerica, MA, USA)으로 전달시킨 후, 분석하고자 하는 표적 단백질에 특이적으로 결합하는 1차 항체와 반응시 켰다. 1차 항체는 caspase-3, p~ERK, ERK, p~Akt, Akt, p~p38 MAP kinase, p38 MAP kinase, p~JNK, JNK, p~eNOS, eNOS (Cell Signaling)를 표적으로 하는 항체를 사용하였다. 2차 항 체와 연속적으로 반응시킨 후, 이를 화학발광 검출법을 통해 X-선 필름에 감광시켜 단백질을 검출하였다.
소 대동맥 내피세포인 BAEC (bovine aortic endothelial cell)은 세포외 기질에 부착하여 성장하는 세포(adhesion cell) 로, 소의 대동맥에서 추출한 후 계대수가 3에서 10 사이의 일 차세포를 실험에 사용하였다. BAECe 20% 소태아혈청(fetal bovine serum (FBS), Welgene, Seoul, Korea)과 항생제(50 μg/ ml penicillin/streptomycin)가 포함된 DMEM (glucose 1 g/l, Welgene)을 이용하여 37℃, 5% CO2 조건에서 배양하였다.
각 실험 조건에 따라 처리한 BAEC을 분해완충액(50 mM Tris, pH 7.5, 150 mM NaCl, 1% NP-40, 0.5% sodium deoxy- cholate, 0.1% SDS, 1mM phenylmethylsulfonyl fluoride)으로 분해한 뒤, 원심분리를 통해 상층액을 획득했다. Bio-Rad DC assay kit (Bio-Rad, Hercules, CA, USA)를 이용해 세포 분해 액의 단백질량을 측정하였으며 동일한 양의 단백질을 SDS- PAGE (polyacrylamide gel electrophoresis)에 의해 분리시켰 다.
본 실험에 사용된 피노실빈은 기존에 보고된 방법에 의거하여 합성하여 사용하였다[26]. 합성방법을 간략하게 소개하면, 포스포네이트(phosphonate)와 방향족 알데히드(aromatic al- dehyde)를 이용하는 Horner-Wadsworth-Emmons 반응을 수 행하여 3, 5-dimethoxy-trans-stilbene을 생산한 뒤, 190℃에서 pyridine hydr℃hloride 촉매반응을 통하여 피노실빈을 합성 하였다.
데이터처리
실험결과는 mean ± S.E.로 나타내었고 분석된 데이터는 실 험자료로부터 one-way ANOVA를 이용하여 유의성이 있을 경우 post-h℃ test를 통해 95% 수준에서 유의성을 검증하였다.
성능/효과
고농도의 피노실빈이 eNOS와 JNK의 활성을 유도하고, ERK나 Akt의 활성을 감소시킨다는 것을 위의 실험결과를 통해 알 수 있었다. 따라서 아마도 JNK 혹은 eNOS의 증가된 활성 혹은 ERK나 Akt의 변화된 활성이 고농도의 피노실빈에 의하여 유도되는 세포사멸을 조절한다는 가설을 설정하였다.
JNK 의 억제 효과가 세포사멸에서도 나타나는 지를 확인하기 위하여, SP-600125를 전처리하고 고농도의 피노실빈을 처리한 후 Hoechst 33258로 핵을 염색하여 핵 분절 현상을 관찰하였다. 그 결과 Fig. 4C에서 보는 바와 같이 SP-600125를 전처리한 경우에는 SP-600125를 처리하지 않은 세포에서 관찰되었던 핵 분절 현상이 사라졌다. 또한 SP-600125가 고농도 피노실빈에 의하여 촉발되는 caspase-3의 절단에 끼치는 영향을 관찰한 결과, SP-600125 전처리가 caspase-3의 절단을 억제하는 것을 볼 수 있었다(Fig.
또한 두 종류의 자극, 즉 혈청기아와 ETO (100 μM)의 처리 로 내피세포의 세포사멸을 촉발할 때, 고농도의 피노실빈을 함께 처리하면 세포사멸이 어떻게 되는지 관찰하였다. 그 결과, Fig. 2C와 D에서 보는 바와 같이, 고농도의 피노실빈은 혈청기아나 ETO에 의해 유발되는 세포사 혹은 세포사멸을 추가적으로 더 증가시켰다. 이와 같은 현상은 아마도 고농도 의 피노실빈이 ETO나 혈청기아가 유발하는 세포사멸 혹은 세포사의 유도 경로와 다른 독립적인 세포사멸 또는 세포사의 유도 경로를 갖고 있음을 암시한다.
1B에서 선형 그래 프로 나타내었다. 그 결과, 피노실빈 10 μM 이하의 농도에서는 내피 세포의 세포사에 크게 영향을 주지 않았으나, 50 μM 에서 세포사가 통계적으로 유의있게 증가하는 것을 확인할 수 있었다. Etoposide (ETO)는 topoisomerase II와 복합체를 형성하여 DNA 사슬의 재연결을 방해하여 DNA 사슬을 파괴 하는 시약으로 BAEC의 세포사를 유도하는 양성 대조군으로 사용하였다.
4C에서 보는 바와 같이 SP-600125를 전처리한 경우에는 SP-600125를 처리하지 않은 세포에서 관찰되었던 핵 분절 현상이 사라졌다. 또한 SP-600125가 고농도 피노실빈에 의하여 촉발되는 caspase-3의 절단에 끼치는 영향을 관찰한 결과, SP-600125 전처리가 caspase-3의 절단을 억제하는 것을 볼 수 있었다(Fig. 4D). 이러한 결과들은 모두 JNK가 고농도의 피노실빈에 의하여 촉발되는 세포사멸에 필수적이면서 또한 세포사멸을 조절하고 있음을 의미한다.
2A에서 보는 바와 같이, 고농도(50 μM)의 피노실빈은 caspcase-3를 절단 시켜 활성화된 작은 caspase-3단편이 Western blot으로 관찰 되었다. 또한 flow cytometry를 통해, Annexin V의 표면 염색 정도를 측정한 결과, 고농도의 피노실빈이 처리된 샘플의 경우 평균형광강도(mean fluorescence intensity, MFI)가 584±9 로, 피노실빈을 처리하지 않은 음성대조군의 MFI (401±7) 보다 45% 정도 상승하였다(Fig. 2B). 이는 phosphatidyl serine이 고농도의 피노실빈에 의해 플립플롭이 일어났음을 의미하는 것으로 피노실빈이 세포사멸을 유도함을 보여주는 결과이다.
본 연구의 실험 결과는 고농도의 피노실빈이 혈관내피세포 의 세포사멸을 유발하는 경로를 규명한 것으로도 그 의미가 크다. 고농도의 피노실빈이 세포사를 유발하는 경로가 JNK의 활성화를 통해 이루어 짐을 관찰하였다.
한편 그 외의 다른 신호전달 물질들의 경우는 변화가 없거나 인산화 정도가 오히려 감소하였다. 즉, ERK나 Akt는 고농도의 피노실빈에 의하여 오히려 인산화 정도가 시약을 처리하지 않은 음성 대조군에 비하여 감소하는 경향이 나타났고, p38 MAP kinase는 변화가 없었다. 이와 같이 ERK의 인산화가 감소하는 현상은 기존에 stilbene 중의 하나인 resveratrol을 고농도로 처리하였을 때 관찰되었던 현상과 일치하는 현상이다[12].
JNK 신호전달 물질이 세포사멸에 관여한다는 것은 이미 잘 알려져 있고[3], 본 연구의 실험 결과도 이를 지지한다. 한편 고농도의 피노실빈은 세 포증식에 관여하는 것으로 알려진 ERK와 Akt의 활성을 억제 하였고, 저농도의 피노실빈이 혈관내피세포에서 ERK와 Akt 를 활성화시키는 현상과는 반대로 작용함을 이번 연구의 실험 결과들을 통해 알 수 있었다[15]. 이와 같이 피노실빈의 농도에 따라 그 효과가 반대로 나타나는 이형효과는 아마도 이러한 신호전달 경로의 차이에서 기인한 것으로 보인다.
본 실험에서는 ETO를 100 μM로 처리하여 BAEC 의 세포사가 유도됨을 관찰하였다. 흥미롭게도 50 μM의 피노 실빈이 100 μM의 ETO와 유사한 효과를 나타내는 것으로 보 아, 피노실빈이 ETO보다 더 강력하게 세포사를 유도함을 알 수 있었다.
후속연구
결과적으로 본 논문은 고농도의 피노실빈에 의해 일어나는 세포사멸 경로의 일부를 규명하였고 동시에 고농도 피노실빈 의 혈관기능과 연계된 의약학적 응용성에 관한 가능성을 보여 주었으며, 추후에 아직 밝혀지지 않은 혈관 내피층의 세포사 에 관한 기전 연구를 위한 기반 자료로 이용될 수 있다.
한편 고농도의 피노실빈에 의하여 유발되는 JNK 활성화의 역할에 관한 해석은 아직 논란의 여지가 많다. 최근의 연구 결과에서도 어떤 논문은 JNK의 활성화가 심혈관계에서 동맥 경화 유발과 연관되어 있음을 보여주는 반면[1, 4], 또 다른 논문에서는 JNK의 활성화가 동맥경화발생을 억제하고 있음을 보여주고 있기 때문에[10], 더 많은 연구결과를 통해 JNK 의 심혈관계 역할이 추후에 규명되어야 할 것이다.
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