[논문]담배가루이(Bemisia tabaci, Aleyrodidae, Hemiptera)에서 Virus-induced Gene Silencing (VIGS) Vector를 이용하기 위한 cDNA Library 제작

고나연; 임현섭; 유용만; 윤영남

doi:10.5656/ksae.2015.04.0.004

담배가루이(Bemisia tabaci, Aleyrodidae, Hemiptera)에서 Virus-induced Gene Silencing (VIGS) Vector를 이용하기 위한 cDNA Library 제작
Construction of cDNA Library for Using Virus-induced Gene Silencing (VIGS) Vector with the Sweetpotato Whitefly, Bemisia tabaci(Hemiptera: Aleyrodidae) 원문보기

한국응용곤충학회지 = Korean journal of applied entomology, v.54 no.2, 2015년, pp.91 - 97

고나연 (충남대학교 농업생명과학대학 응용생물학과) , 임현섭 (충남대학교 농업생명과학대학 응용생물학과) , 유용만 (충남대학교 농업생명과학대학 응용생물학과) , 윤영남 (충남대학교 농업생명과학대학 응용생물학과)

초록
AI-Helper

담배가루이(Bemisia tabaci)는 외래해충으로 바이러스벡터로 작용하여, 토마토의 토마토황하잎말림병바이러스(TYLCV)를 비롯한 약 100여종의 바이러스를 매개하는 중요한 해충이다. 본 연구에서는 VIGS vector를 이용하여 담배가루이 방제를 위한 target 유전자들을 선발하기 위해 gateway system을 이용한 담배가루이 cDNA library 제작을 시도하였다. 첫 번째 방법으로 oligo d(T) primer를 사용하였을 때, 평균 약 1 kb의 insert와 $1.4{\times}10^4cfu$의 titer를 확인하였다. 그러나 insert size가 너무 커서 적절하지 않았다. 두 번째 방법으로 attB-N25 random primer를 이용하고, sonication을 6초 실시하여 다시 진행하였다. 그러나 확인되는 insert size는 다소 컸고, 몇몇은 insert가 너무 작아서 밴드가 확인 되지않았으며, $1.04{\times}10^54cfu$의 titer를 확인할 수 있었다. 세 번째 방법으로는 oligo d(T) primer를 이용하였고, sonication을 2초 실시하였다. 그 결과 300 bp~600 bp size의 insert가 확인되었으나, electro transformation을 사용한 첫번째, 두번째 방법에 비해 heat shock transformation을 사용하여 titer가 $5.2{\times}10^24cfu$로 매우 낮은 것을 확인 할 수 있었다. 결과적으로 cDNA library를 만들 때 먼저 random primer를 사용하여 First strand를 합성하여 poly A를 제거하고, 다음으로 sonication을 1초 실시하여 300~700 bp정도의 적절한 size의 insert를 생성하고, 마지막으로 electro-transformation을 실시하여 transformation 효율을 높인다면 VIGS vector에 적합한 cDNA library를 만들 수 있을 것으로 사료 된다.

Abstract ▼ AI-Helper

The sweetpotato whitefly, Bemisia tabaci, is the major insect pest that transmitted over 100 plant viruses including tomato yellow leaf curl virus (TYLCV) of tomato plant as virus vector in the world. In this study, cDNA library of whitefly was constructed using Gateway system for selecting target gene in order to control of B. tabaci using virus-induced gene silencing (VIGS) vector with RNAi. First of all, when using oligo d(T) rimer, the calculated titer of cDNA library was confirmed with $1.4{\times}10^4$ clones and average insert sizes was confirmed with 1 kb. However, insert size was very big for construction of cDNA. Otherwise, when using attB-N25 random primer and sonication for 6 sec, the calculated titer of cDNA library was confirmed with $1.04{\times}10^5$ clones. But mostly insert band wasn't identified on the electrophoresis, because it seemed that insert size is too small (${\leq}100bp$), also the size of identified insert was somewhat big. Finally, when using oligo d(T) primer and sonication for 1 sec, cDNA insert of whitefly was appropriated for VIGS with 300-600 bp. However, cDNA sequence included a poly A and titer was very low to $5.2{\times}10^2$ clones. It was supposed that heat shock transformation was used instead of electro-transformation. It is considered that when constructing cDNA library for using VIGS vector, (1) random primer should be used for First strand cDNA synthesis in order to remove poly A and (2) sonication for 1 sec should be performed in order to get appropriated insert size and (3) electro-transformation should be performed in order to improve transformation efficiency.

주제어

AI 본문요약
AI-Helper

* AI 자동 식별 결과로 적합하지 않은 문장이 있을 수 있으니, 이용에 유의하시기 바랍니다.

문제 정의

본 연구에서는 VIGS 벡터를 사용하여 담배가루이 RNAi 방제를 위한 target유전자를 선발하기 위해 방법을 조금씩 수정해가며 VIGS vector에 적절한 담배가루이 cDNA library를 제작을 시도하였다.
본 연구에서는 VIGS 벡터를 사용하여 담배가루이 RNAi 방제를 위한 target유전자를 선발하기 위해 방법을 조금씩 수정해가며 VIGS vector에 적절한 담배가루이 cDNA library를 제작을 시도하였다.

제안 방법

300~700 bp의 cDNA insert를 만들기 위해 정제한 mRNA를 Vcx 750 watt ultrasonic processor (SONICS & MATERIALS)를 사용하여 sonication을 6초동안 실시하였다.
400~500 bp의 cDNA insert를 만들기 위해 first strand cDNA를 Vcx 750 Watt ultrasonic processor (SONICS & MATERIALS)를 사용하여 sonication을 2초동안 실시하였다.
Electro MAX™DH10B™T1 Phage Resistant Cells (Invitrogen)를 사용하여 1.8 kV, 200 Ω, 25 µF의 조건으로 electro-transformation을 실시하였다.
잘려진 mRNA 단편을Biotin-attB2-N₍₂₅₎ primer를 사용하여 first strand cDNA를 합성하였다(Table 1). First strand cDNA를 RNaseⅠ을 처리하여 cDNA를 제외한 주형 RNA를 제거해 주었다. 다시 Ethanol down 후 double-strand 5’attB1 adapter을 T4 DNA ligase를 사용하여 ligation 시켰다(Table 1).
Kit를 사용하여 cDNA purification을 실시한 후, LA Taq™ DNA polymerase (Takara)와 attB1- adapter-U primer를 사용하여 second strand를 합성하였다(Table 1).
Kit를 사용하여 cDNA purification을 실시한 후, LA Taq™ DNA polymerase (Takara)와 attB1-adapter-U primer를 사용하여 second strand를 합성하였다(Table 1).
Kit를 사용하여 cDNA purification을 실시한 후, LA Taq™ DNA polymerase (Takara)와 attB1-adapter-U를 사용하여 second strand를 합성하였다(Table 1).
5 mM KCl, 10 mM MgCl₂, 10 mM MgSO₄, 20 mM glucose)를 1 ml 추가한 뒤 37℃에서 1시간 shaking incubate 후 cDNA library를 10^-4까지 연속희석 하여 kanamycin (1 μg/ml)을 포함한 LB plate배지 100 μL씩 도말하여 37℃에서 overnight하였다. Overnight 후 colony를 카운팅하여 titer를 측정하였으며, fraction 별 랜덤하게 12개의 plasmid를 isolation 후 제한효소 BsrGⅠ(NEB)을 처리하여 cutting한 뒤 전기영동을 통해 담배가루이 cDNA library insert 크기를 확인 하였다.
C 배지를 1 ml 추가한 뒤 37℃에서 1시간 shaking incubate 후 cDNA library를 10^-4까지 연속 희석 하여 kanamycin (1 μg/ml)을 포함한 LB plate 배지 100 μL씩 도말하여 37℃에서 overnight 하였다. Overnight 후 colony를 카운팅하여 titer를 측정하였으며, fraction 별 랜덤하게 12개의 plasmid를 isolation한 뒤 제한효소 BsrGⅠ(NEB)을 처리하여 cutting 후 전기영동을 통해 담배가루이 cDNA library insert 크기를 확인하였다.
C 배지를 1 ml 추가한 뒤 37℃에서 1시간 shaking incubate 후 cDNA library를 10^-4까지 연속 희석 하여 gentamicin (1 μg/ml)을 포함한 LB plate배지 100 μL씩 도말하여 37℃에서 overnight 하였다. Overnight 후 colony를 카운팅하여 titer를 측정하였으며, 랜덤하게 10개의 plasmid를 isolation한 뒤 pDONR 207 F와 pDONR 207 R로 PCR을 실시하여 전기영동을 통해 담배가루이 cDNA library insert 크기를 확인 한 후 적절한 크기의 insert는 sequencing(Macrogen)을 의뢰하여 sequence를 확인하였다.
PCR product는 ethanol down 후 pDONR™207 Vector (Invitrogen)와 BP recombination을 실시하였다.
PCR증폭은 initial denaturation 94℃에서 5분간 실시하고, denaturation 94℃에서 45초, annealing 58℃에서 45초, extension 72℃에서 1분으로 20cycles을 실시한 후, 마지막으로 extension을 72℃에서 5분간 실시하였다. PCR 결과는 agarose gel에서 전기영동을 통해 분석하였다. PCR product는 ethanol down 후 pDONR^™207 Vector (Invitrogen)와 BP recombination을 실시하였다.
첫 번째 방법으로, oligo d(T) pimer를 사용하였으며, gateway cloning이 가능하도록 att sequence를 붙여 Biotin-attB2-oligod(T) primer를 제작하여 first strand를 합성하였다. Size fractionating을 5번 실시 하였으며, 그 중 농도가 좋았던 4번, 5번 fraction tube를 BP recombination을 실시하였다. 그 결과, pDONR 222 vector 부분은 약2.
Transformation된 sample에 SOC 배지(2% tryptone, 0.5% yeast extract, 10 mM NaCl, 2.5 mM KCl, 10 mM MgCl2, 10 mM MgSO4, 20 mM glucose)를 1 ml 추가한 뒤 37℃에서 1시간 shaking incubate 후 cDNA library를 10-4까지 연속희석 하여 kanamycin (1 μg/ml)을 포함한 LB plate배지 100 μL씩 도말하여 37℃에서 overnight하였다.
Trizol reagent(MRC)를 사용하여 담배가루이 total RNA를 추출한 후, 이 total RNA로부터 FastTrack^Ⓡ MAG mRNA isolation Kit (Invitrogen)를 사용하여 mRNA를 분리하였다.
cDNA library 제작은 Super Script® Full length cDNA Library Construction Kit II protocol (Invitrogen)을 기본으로 방법을 조금씩 수정하여 실험을 실시하였다.
cDNA의 크기에 따라 총 5개의 fraction으로 분리한 cDNA를 각각 1.5 ml tube에 넣어 ethanol down을 실시한 후, 이중 4번과 5번 fraction을 각각 pDONR™222 vector (Invitrogen)의 att P1, P2 site를 attB1, B2site를 갖는 담배가루이 cDNA 단편으로 교체하는 BP recombination을 실시하였다.
두 번째 방법으로, 작은 size의 insert를 만들고자 sonication을 6초동안 실시하여 mRNA 잘라주었다. 그리고 좀더 다양한 cDNA를 합성하기 위해 N25 random primer에 att sequence를 추가하여 Biotin-attB2-(N)₂₅ primer를 제작하여 first strand를 합성한 후 9번의 size fractionating을 실시한 뒤 농도가 높은 5번과 9번 fraction product를 사용하여 BP recombination을 실시하였다. 그 결과, 총 24개의 밴드 중 8개의 밴드가 확인 되었으며, background vector는 4개의 sample에서 확인이 되었다.
다시 Ethanol down 후 attB1-adapter-U와 attB1-adapter-L를 annealing시켜 주문 제작한 double-strand 5’attB1 adapter을 T4 DNA ligase를 사용하여 ligation 시켰다(Table 1).
두 번째 방법으로, 작은 size의 insert를 만들고자 sonication을 6초동안 실시하여 mRNA 잘라주었다. 그리고 좀더 다양한 cDNA를 합성하기 위해 N25 random primer에 att sequence를 추가하여 Biotin-attB2-(N)₂₅ primer를 제작하여 first strand를 합성한 후 9번의 size fractionating을 실시한 뒤 농도가 높은 5번과 9번 fraction product를 사용하여 BP recombination을 실시하였다.
세 번째 방법으로는 oligo d(T) primer를 사용하여 first strand cDNA를 합성하였으며, first strand 합성 후 sonication을 2초동안 실시하였다. 또한 양쪽에 att adapter를 가지는 cDNA만을 증폭시키기 위해 att sequence를 이용해 PCR을 실시하였다. 그 결과, 약300~600 bp 근처에서 밴드가 희미하게 확인이 되었다(Fig.
정제한 mRNA를 Biotin-attB2-oligo d(T) primer를 사용하여 first strand cDNA를 합성하였다(Table 1). 불순물을 제거하기 위해 Ethanol down 후 RNaseⅠ을 처리하여 cDNA를 제외한 주형 RNA를 제거해 주었다. 다시 Ethanol down 후 attB1-adapter-U와 attB1-adapter-L를 annealing시켜 주문 제작한 double-strand 5’attB1 adapter을 T4 DNA ligase를 사용하여 ligation 시켰다(Table 1).
세 번째 방법으로는 oligo d(T) primer를 사용하여 first strand cDNA를 합성하였으며, first strand 합성 후 sonication을 2초동안 실시하였다. 또한 양쪽에 att adapter를 가지는 cDNA만을 증폭시키기 위해 att sequence를 이용해 PCR을 실시하였다.
Kit를 사용하여 cDNA purification을 실시한 후, LA Taq^™ DNA polymerase (Takara)와 attB1-adapter-U를 사용하여 second strand를 합성하였다(Table 1). 양쪽에 att site를 가지는 cDNA만을 증폭하기 위해 att adapter sequence를 가지는 Biotin-attB2-oligo d(T) primer와 attB1-adapter-U primer를 사용하여 PCR 증폭을 실시하였다. PCR증폭은 initial denaturation 94℃에서 5분간 실시하고, denaturation 94℃에서 45초, annealing 58℃에서 45초, extension 72℃에서 1분으로 20cycles을 실시한 후, 마지막으로 extension을 72℃에서 5분간 실시하였다.
300~700 bp의 cDNA insert를 만들기 위해 정제한 mRNA를 Vcx 750 watt ultrasonic processor (SONICS & MATERIALS)를 사용하여 sonication을 6초동안 실시하였다. 잘려진 mRNA 단편을Biotin-attB2-N₍₂₅₎ primer를 사용하여 first strand cDNA를 합성하였다(Table 1). First strand cDNA를 RNaseⅠ을 처리하여 cDNA를 제외한 주형 RNA를 제거해 주었다.
정제한 mRNA를 Biotin-attB2-oligo d(T) primer를 사용하여 first strand cDNA를 합성하였다(Table 1). 불순물을 제거하기 위해 Ethanol down 후 RNaseⅠ을 처리하여 cDNA를 제외한 주형 RNA를 제거해 주었다.
정제한 mRNA를 Biotin-attB2-oligo d(T) primer를 사용하여 first strand cDNA를 합성한 뒤(Table 1), RNaseⅠ을 처리하여 cDNA를 제외한 주형 RNA를 제거해 주었다. 400~500 bp의 cDNA insert를 만들기 위해 first strand cDNA를 Vcx 750 Watt ultrasonic processor (SONICS & MATERIALS)를 사용하여 sonication을 2초동안 실시하였다.
첫 번째 방법으로, oligo d(T) pimer를 사용하였으며, gateway cloning이 가능하도록 att sequence를 붙여 Biotin-attB2-oligod(T) primer를 제작하여 first strand를 합성하였다. Size fractionating을 5번 실시 하였으며, 그 중 농도가 좋았던 4번, 5번 fraction tube를 BP recombination을 실시하였다.
총 9개의 1.5 ml tube에 나눠 받은 cDNA를 ethanol down 후 농도가 잘 나온 5번과 9번 fraction tube를 각각 pDONR™222 Vector(Invitrogen)와 BP recombination을 실시하였다.

이론/모형

본 연구에서는 이전의 제한효소를 이용한 cloning방법을 사용한 cDNA library 제작이 아닌(Leshkowitz et al., 2006), 박테리오파지 λ의 site-specific homologous DNA 재조합 방식을 응용한 gateway cloning방법을 이용하여 cDNA library를 제작하였다.

성능/효과

그 결과, 총 24개의 밴드 중 8개의 밴드가 확인 되었으며, background vector는 4개의 sample에서 확인이 되었다. Background vector를 제외한 나머지 sample에서 평균 insert size가 1.54 kb로 확인 되었고, fraction 9번의 경우12개 sample 모두 insert 밴드가 확인되지 않았다(Fig. 2). 밴드가 확인 되지 않은 것은 single 가닥인 mRNA가 불안정하여 sonication 6초를 실시할 때 너무 잘게 잘려서 100 bp 이하의 너무 작은 insert가 삽입된 것으로 추측되며, 5번 fraction에서 몇 개의 큰 size만 확인된 것으로 추측된다.
멀티 밴드가 뜨는 것은 담배가루이 insert내에 BsrGⅠ영역이 존재하여 뜨는 것으로 추측된다. Background vector를 제외한 나머지 sample의 insert size는 평균 1 kb로 확인 되었으며, 1 kb를 넘는 큰 size의 insert도 많이 확인되었다(Fig. 1). 또한 titer 측정 결과, 1.
배 가량 높게 나타나는 것을 확인 할 수 있었다. Heat shock 보다도 electro transformation 방법이 transformation 효율이 더 높은 것을 확인할 수 있었다. Background vector를 줄이기 위해서는 BP recombination시 담배가루이 DNA를 농도를 농축시킨 후 pDONR vector 보다 더 많은 양을 반응시키면 background vector의 양을 줄일 수 있을 것으로 사료된다.
4). Sequencing 결과 10개 중 3개는 sequencing fail이었고, 모두 poly A를 가지는 것을 확인 할 수 있었다. NCBI blast search 결과 3개의 sample은 담배가루이 유전자로 확인되었으며, 나머지 sample은 NCBI에 데이터 정보가 없었다.
그러나 sonication을실시할 경우 insert의 크기가 감소하는 것을 확인할 수 있었다. mRNA를 sonication 6초를 실시할 경우 mRNA가 불안정하여 100 bp 이하로 잘려 insert 밴드가 확인되지 않는 것으로 추측이 되며, first strand cDNA를 sonication 1초를 실시할 경우300~600bp의 적절한 size를 확인할 수 있었다.
Size fractionating을 5번 실시 하였으며, 그 중 농도가 좋았던 4번, 5번 fraction tube를 BP recombination을 실시하였다. 그 결과, pDONR 222 vector 부분은 약2.47 kb에서 밴드가 확인이 되며, BP reaction이 잘 이루어지지 않은 ccdB와 chloramphenicol 저항성 유전자를 그대로 가지는 background vector의 경우 BsrGⅠ을 처리할 경우 1.5 kb와 800 bp에서 밴드 2개가 확인이 되는데 24개의 밴드 중 2개의 sample에서 background vector가 확인되었다(Fig. 1). 멀티 밴드가 뜨는 것은 담배가루이 insert내에 BsrGⅠ영역이 존재하여 뜨는 것으로 추측된다.
Insert가 300~600 bp에서 다양하게 확인되어 명확한 밴드가 아닌 끌리듯 확인이 된 것으로 추측된다. 또한 heat shock으로 transformation을 실시한 후 pDONR 207 vector sequence를 이용하여 제작한 primer로 랜덤하게 10개의 colony를 PCR한 결과, 300~600 bp 사이에서 다양한 insert가 확인 되었다(Fig. 4). Sequencing 결과 10개 중 3개는 sequencing fail이었고, 모두 poly A를 가지는 것을 확인 할 수 있었다.
또한 titer 측정 결과, 1.04×105cfu의titer를 확인할 수 있었다(Table 2).
또한 titer 측정 결과, 1.4×104cfu의 titer를 확인할 수 있었다(Table 2).
또한 transformation방법은 Electro-transformation방법을 사용할 경우 heat shock transformation방법을 사용할 때보다 titer가 10²배 가량 높게 나타나는 것을 확인 할 수 있었다. Heat shock 보다도 electro transformation 방법이 transformation 효율이 더 높은 것을 확인할 수 있었다.

후속연구

Heat shock 보다도 electro transformation 방법이 transformation 효율이 더 높은 것을 확인할 수 있었다. Background vector를 줄이기 위해서는 BP recombination시 담배가루이 DNA를 농도를 농축시킨 후 pDONR vector 보다 더 많은 양을 반응시키면 background vector의 양을 줄일 수 있을 것으로 사료된다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	담배가루이는 무엇인가?	담배가루이(Bemisia tabaci)는 노린재목(Hemiptera) 가루 이과(Aleyrodidae)에 속하며, 세계자연보전연맹에서 지정한 세계 100대 침입해충 중 하나이다(Boykin et al., 2007).
	박테리오파지 λ의 site-specific homologous DNA 재조합 방식을 응용한 gateway cloning방법을 통하여 cDNA library를 제작하는 방법의 장점은 무엇인가?	, 2006), 박테리오파지 λ의 site-specific homologous DNA 재조합 방식을 응용한 gateway cloning방법을 이용하여 cDNA library를 제작하였다. 이러한 방법은 담배가루이의 다양한 cDNA를 한번에 간단하게 cloning할 수 있어 cDNA library를 제작하기에 적절하다. 뿐만 아니라 att site를 가지는 entry clone에 있는 이 담배가루이 유전자는 att site를 가지는 Destination 벡터라면 어떤 종류의 벡터든 간단하게 cloning이 가능하여 유용하게 사용될 수 있다.
	담배가루이는 어떤 해충으로 알려져 있는가?	, 2007). 담배가루이는 직접적인 흡즙 피해와 감로배설로 인해 그을음병을 유발하여 시설재배 작물의 수량과 상품성에 큰 영향을 미치는 주요한 해충으로 알려져 있다(Byrne, 1999; Bedford et al., 1994).

참고문헌 (24)

Baulcombe, D. 2004. RNA silencing in plants. Nature 431, 356-363.

상세보기
Baum, J.A., Bogaert, T., Clinton, W., Heck, G.R., Feldmann, P., Ilagan, O., Johnson, S., Plaetinck, G., Munyikwa, T., Pleau, M., Vaughn, T., Roberts, J., 2007. Control of coleopteran insect pests through RNA interference. Nature Biotech. 25, 1322-1326.

상세보기
Bedford, I.D., Briddon, R.W., Brwon, J.K., Rosell, R.C., Markham, P.G., 1994. Geminivirus transmission and biological characterisation of Bemisia tabaci (Gennadius) biotypes from different geographic regions. Ann. Appl. Biol. 125, 311-325.

상세보기
Bettencourt, R., Terenius, O., Faye, I., 2002. Hemolin gene silencing by ds-RNA injected into Cecropia pupae is lethal to next generation embryos. Insect Mol. Biol. 11, 267-271.

상세보기
Boykin, L.M., Shatters, Jr. R.G., Rosell, R.C., Mckenzie, C.L., Bagnall, R.A., De Barro, P., d Frohlich, D.R., 2007. Global relationships of Bemisia tabaci (Hemiptera: Aleyrodidae) revealed using Bayesian analysis of mitochondrial COI DNA sequences. Mol. Phylogen. Evol. 44, 1306-1319.

상세보기
Byrne, D.N., 1999. Migration and dispersal by the sweet potato whitefly, Bemisia tabaci. Agricul. For. Meteorol. 97, 309-316.

상세보기
Christiaens, O., Swevers, L., Smagghe, G., 2014. DsRNA degradation in the pea aphid (Acyrthosiphon pisum) associated with lack of response in RNAi feeding and injection assay. Peptides 53, 307-314.

상세보기
Ghanim, M., Kontsedalov, S., Czosnek, H., 2007. Tissue-specific gene silencing by RNA interference in the whitefly Bemisia tabaci (Gennadius). Insect Biochem. Mol. Biol. 37, 732-738.

상세보기
Hahn, B.S., 2010. Recent studies on development of transgenic plants induced root-knot nematode resistance by RNA interference suppression of nematode genes and nematode prevention. Res. Plant Dis. 16, 10-20.

원문보기 상세보기
Huvenne, H., Smagghe, G., 2010. Mechanisms of dsRNA uptake in insects and potential of RNAi for pest control: A review. J. Insect Physiol. 56, 227-235.

상세보기
Jones, D., 2003. Plant viruses transmitted by whiteflies. Euro. J. Plant Pathol. 109, 197-221.
Lu, Z.C., Wan, F.H., 2011. Using double-stranded RNA to explore the role of heat shock protein genes in heat tolerance in Bemisia tabaci (Gennadius). J. Exp. Biol. 214, 764-769.

상세보기
Leshkowitz, D., Gazit, S., Reuveni, E., Ghanim, M., Czosnek, H., Mckenzie, C., Shatters, R.L., Brown, J.K., 2006. Whitefly (Bemisia tabaci) genome project: analysis of sequenced clones from egg, instar, and adult (viruliferous and non-viruliferous) cDNA libraries. BMC Genomics 7,79.

상세보기
Liu, E., Page, J.E., 2008. Optimized cDNA libraries for virus-induced gene silencing (VIGS) using tobacco rattle virus. Plant Methods 4, 1-13.

상세보기
Liu, Y., Schiff, M., Dinesh-Kumar, S.P., 2002. Virus-induced gene silencing in tomato. Plant J. 31, 777-786.

상세보기
Lu, R., Martin-Hernandez, A.M., Peart, J.R., Malcuit, I., Baulcombe, D.C., 2003. Virus-induced gene silencing in plants. Methods 30, 296-303.

상세보기
Luo, Y., Wang, X., Yu, D., Chen, B., Kang, L., 2013. Differential responses of migratory locusts to systemic RNA interference via double-stranded RNA injection and feeding. Insect Mol. Biol. 22, 574-583.

상세보기
Price, D.R., Gatehouse, J.A., 2008. RNAi-mediated crop protection against insects. Trends Biotech. 26, 393-400.

상세보기
Sapountzis, P., Duport, G., Balmand, S., Gaget, K., Jaubert-Possamai, S., Febvay, G., Charles, H., Rahbe, Y., Colella, S., Calevro, F., 2014. New insight into the RNA interference response against cathepsin-L gene in the pea aphid, Acyrthosiphon pisum: Molting or gut phenotypes specifically induced by injection or feeding treatments. Insect Biochem. Mol. Biol. 51, 20-32.

상세보기
Secker, A.E., Bedford, I.D., Markham, P.G., Williams, M.E.C., 1998. Squash, a reliable field indicator for the presence of the B biotype of tobacco whitefly, Bemisia tabaci. In: Brighton crop protection conference-pests and Diseases. British Crop Prot. Council, Farnham, UK. pp. 837-842.
Sijen, T., Fleenor, J., Simmer, F., Thijssen, K.L., Parrish, S., Timmons, L., Plasterk, R.H.A., Fire, A., 2001. On the role of RNA amplification in dsRNA-triggered gene silencing. Cell 107, 465-476.

상세보기
Upadhyay, S.K., Chandrashekar, K., Thakur, N., Verma, P.C., Borgio, J.F., Singh, P.K., Tuli, R., 2011. RNA interference for the control of whiteflies (Bemisia tabaci) by oral route. J. Biosci. 36, 153-161.

상세보기
Walshe, D.P., Lehane, S.M., Lehane, M.J., Haines, L.R., 2009. Prolonged gene knockdown in the tsetse fly Glossina by feeding double stranded RNA. Insect Mol. Biol. 18, 11-19.

상세보기
Whyard, S., Singh, A.D., Wong, S., 2009. Ingested double-stranded RNAs can act as species-specific insecticides. Insect Biochem. Mol. Biol. 39, 824-832.

상세보기

저자의 다른 논문 :

LOADING...

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

내보내기 구분	파일저장 인쇄 메일전송
구성항목	기본정보 상세정보 관리번호, 논문명, 저널/프로시딩명, 저자 , 발행년, 권, 호, 시작페이지, 끝페이지, 발행기관 관리번호, 논문명, 대등논문명, 저자 , 저널/프로시딩명, 발행기관, 발행년, 발행언어, 권, 호, 시작페이지, 끝페이지, ISBN, ISSN, 주제분야, 키워드, 초록(한글), 초록(영문), 저자(소속기관)
저장형식	Text(ASCII format) Excel format RefWorks Direct Export RIS format (for Reference Manager, ProCite, EndNote), Scholar's Aids, Mendeley
메일정보	받는사람 (필수) @ 보내는사람 (선택) @ 제목 내용 KISTI 검색결과 이메일 서비스
안내	총 건의 자료가 검색되었습니다. 다운받으실 자료의 인덱스를 입력하세요. (1-10,000) 검색결과의 순서대로 최대 10,000건 까지 다운로드가 가능합니다. 데이타가 많을 경우 속도가 느려질 수 있습니다.(최대 2~3분 소요) 다운로드 파일은 UTF-8 형태로 저장됩니다. 파일의 내용이 제대로 보이지 않을실 때는 웹브라우저 상단의 보기 -> 인코딩 -> 자동선택 여부를 확인하십시오. ~ Text(ASCII format) Excel format