[논문]제주 국내 미기록 자생버섯

고평열; 이향범; 이승학; 전용철

doi:10.4489/kjm.2015.43.3.142

제주 국내 미기록 자생버섯
New Records of Fungi Growing on Jejudo 원문보기

한국균학회지 = The Korean journal of mycology, v.43 no.3, 2015년, pp.142 - 148

고평열 (제주대학교 생물산업학부) , 이향범 (전남대학교 응용생물공학부) , 이승학 (제주대학교 생물산업학부) , 전용철 (제주대학교 생물산업학부)

초록
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본 연구에서는 제주도에서 채집된 야생버섯 표본 중에서 국내 미기록종으로 동정된 버섯 5종을 보고하고자 한다. 이들 버섯은 형태적 특징 및 미세구조를 관찰한 결과 Ramariopsis subtilis, Coltriciella pusilla, Lactifluus ochrogalactus, Microstoma insititium, Morchella semilibera로 동정되었다. 또한 Lactifluus ochrogalactus와 Microstoma insititia는 DNA의 internal transcribed spacer (ITS) 염기서열 분석을 통하여 재동정하였다.

Abstract ▼ AI-Helper

In this study, among the wild mushrooms collected on Jeju Island for the recently 9 years, 5 species are newly reported to Korea. They are identified as Ramariopsis subtilis, Coltriciella pusilla, Lactifluus ochrogalactus, Microstoma insititium and Morchella semilibera based on macromorphological and microscopic observation. In addition, Lactifluus ochrogalactus and Microstoma insititia were re-identified by analysis of internal transcribed spacer of ribosomal DNA.

주제어

AI 본문요약
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문제 정의

본 연구에서는 제주도에서 채집된 야생버섯 표본 중에서 국내 미기록종으로 동정된 버섯 5종을 보고하고자 한다. 이들 버섯은 형태적 특징 및
제안 방법
- 2006년부터 2014년까지 채집된 제주도에 자생하는 야생 버섯 2,000여점 중에서 국내 미기록 종으로 추정되는 버섯의 형태와 미세구조를 관찰하였다. 형태적 관찰은 건조된 자실체의 일부를 5 mm 내외의 절편으로 만들어 모든 세포가 원래 상태로 회복되도록 최종적으로 72℃에서 10분간 안정화시킨 후 4℃에서 보관하였다. PCR 산물은 1% 아가로스겔에서 30분간 전기영동하고 예상되는 크기의 band를 확인하였다. 후)미세 구조를">미세구조를 관찰하였다. 관찰된 버섯은 기존의 버섯분류관련 문헌 등[4-6]과, DNA 시퀀싱 결과, 원기재문 등을 비교하여 동정하였다. 동정된 Phosphate buffer로 15분씩 3차례 씻은 후 1% osmium tetroxide에 담가 4^oC의 냉장고에 2시간 동안 2차 고정한 후 다시 phosphate buffer로 씻어냈다. 그 후 상온에서 ehtanol 50%, 70%, 90%, 95%, 100%의 농도로 각 10분씩 탈수시키고 isoamyl acetate 30%, 50%, 70%, 100% 로 각 10분씩 치환시켰다. 치환된 시료를 critical point dryer (SPI 13200; SPI Supplies, West Chester, PA, USA)를 이용해 임계점 건조시키고, sputter cater로 10 mA에서 후)미세 구조를">미세구조를 관찰한 결과 Ramariopsis subtilis, Coltriciella pusilla, Lactifluus ochrogalactus, Microstoma insititium, Morchella semilibera로 동정되었다. 또한 Lactifluus ochrogalactus와 Microstoma insititia는 DNA 의 internal transcribed spacer (ITS) 염기서열 분석을 통하여 재동정하였다.
- 후)광학현미경(Axiplan2;">광학현미경(Axiplan2; Carl Zeiss, Oberkochen, Germany)으로 검경하였다. 또한 드로잉현미경(Zeize Daiplan, Germany)으로 포자, 담자기, 조직 등을 관찰하였다.
- 미세구조를 관찰하기 위해서 시료를 5 × 5 mm의 크기로 3~4개를 잘라서 2% glutaraldehyde에 담가서 2시간 동안 1차 고정하였다.
- 후)본보고에서는">본 보고에서는 최근 9년 동안 제주지역에서 채집되어 제주대학교 친환경농업연구소 생물표본실에 보관되어 있는 야생버섯 표본들 중 국내 미기록종으로 확인된 5종을 발굴하여 버섯의 특징에 맞는 각각의 형태 및 미세구조적 특징을 도해하였다. 이는 국내에 자생하는 야생버섯류의 후)70%에탄올과">70% 에탄올과 증류수에 각각 2~3분간 담가 시료가 충분히 부풀어질 때까지 반복하였다. 부드러워진 절편을 수수깡에 끼워 면도날로 가능한 얇게 절단한 후, 1% congo red 용액과 1% phloxine 용액으로 각각 2~3초간 염색하였다. 포자, 균사 및 조직 상태를 후)100%로">100% 로 각 10분씩 치환시켰다. 치환된 시료를 critical point dryer (SPI 13200; SPI Supplies, West Chester, PA, USA)를 이용해 임계점 건조시키고, sputter cater로 10 mA에서 120초 간 gold (Au/pb)로 코팅시킨 후, 주사전자현미경(JSM-6700F; JEOL, Tokyo, Japan)을 이용하여 포자 및 담자기의 미세구조를 관찰하였다. 관찰된 버섯은 기존의 부드러워진 절편을 수수깡에 끼워 면도날로 가능한 얇게 절단한 후, 1% congo red 용액과 1% phloxine 용액으로 각각 2~3초간 염색하였다. 포자, 균사 및 조직 상태를 광학현미경(Axiplan2; Carl Zeiss, Oberkochen, Germany)으로 검경하였다. 또한 드로잉현미경(Zeize Daiplan, Germany)으로 포자, 담자기, 조직 등을 관찰하였다.
대상 데이터
- Habits & Habitats: 이른 봄 4월 하순에서 5월 초에 제주조릿대 숲에서 채집되었다.
- Specimen examined: 제주도 조천읍 선흘리 동백동산에서 채집. RSNB NO: JUK13078.
- Specimen examined: 한라산 국립공원 어리목 탐방안내소 진입로에서 채집. 해발 900 m, RSNB NO: JUK10074.
- 측사는">5D). 측사는 성숙하지 않은 자낭 모양이다(Fig. 5C).
- 해발">채집. 해발 900 m, RSNB NO: JUK10074. 2010.
이론/모형
- DNA 염기서열 분석을 통한 재동정을 위하여 보관된 건조시료를 Kim 등[8]의 drilling 방법으로 genomic DNA를추출하였고, 프라이머는 ITS1F (CTT GGT CAT TTA GAG GAA GTA A)와 ITS4 (TCC TCC GCT TAT TGA TAT GC)를 사용하여 polymerase chain reaction (PCR) 반응을 수행하였다. 각 반응의 단계는 먼저 95℃에서 5분간 predenaturation한 후, 94℃에서 1분간 denaturation, 56℃에서 1분간 annealing, 72℃에서 1분간 elongation을 하였고 이 과정을 35 cycle 반복하였다.
- 후)염기서열 분석은">염기서열분석은 sequencing 분석전문 업체인 마크로젠에 의뢰하였고 분석된 염기서열들은 NCBI (National Center for Biotechnology Information)의 Basic Local Alignment Search Tool (BLAST)를 이용하여 동정하였다[9].

성능/효과

Remarks: M. conica는 두부가 흑갈색이며, 길고 굵으며 자루는 상대적으로 짧고 가는 반면 M. semilibera의 경우 두부가 짧고 자루 길이의 절반 이하이다. M.
Remarks: M. insititium는 세계자연유산 거문오름 분화구내에서 처음 채집된 후 동 발생지에서 해마다 큰 무리로 발생하는 것으로 확인되었다. 특히 함몰지가 발달하여 습기가 항상 많은 곳에 쓰러진 나무에서 대량으로 발생하였다.
: GU258280)와 99% 상동성을 나타냈고 유사종으로는 Lactarius leonardii로 96%의 유사성을 나타냈다. 또한 표본 JUK08218은 Clavulina castaneipes (EU 669209.1)와 87%의 상동성을 갖는 것으로 나타났다.
본 연구에서는 제주도에서 채집된 야생버섯 표본 중에서 국내 미기록종으로 동정된 버섯 5종을 보고하고자 한다. 이들 버섯은 형태적 특징 및 미세구조를 관찰한 결과 Ramariopsis subtilis, Coltriciella pusilla, Lactifluus ochrogalactus, Microstoma insititium, Morchella semilibera로 동정되었다. 또한 Lactifluus ochrogalactus와 Microstoma insititia는 DNA 의 internal transcribed spacer (ITS)
제주도에 자생하는 야생버섯 중에서 국내 미기록 종으로 추정되는 5종의 버섯에 대하여 DNA를 추출하고 염기서열 분석을 수행한 결과 표본 JUK13040은 Lactifluus ochrogalactus (Accession No.: GU258280)와 99% 상동성을 나타냈고 유사종으로는 Lactarius leonardii로 96%의 유사성을 나타냈다. 또한
후속연구
- 후)야생버섯표본들">야생버섯 표본들 중 국내 미기록종으로 확인된 5종을 발굴하여 버섯의 특징에 맞는 각각의 형태 및 미세구조적 특징을 도해하였다. 이는 국내에 자생하는 야생버섯류의 종 다양성과 분포상 파악을 위한 기초 자료로 이용되리라 본다.
- 후)동정에는">동정 에는 실패하였다. 차후 새로운 표본이 채집되면 건조 전 깨끗한 상태의 표본으로 분자생물학적 동정을 시도해야 할것으로 생각된다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	본 논문에서 버섯의 미세구조를 관찰하기 위해 시료를 1차 고정시킬 때, 어떤 방법을 사용했는가?	미세구조를 관찰하기 위해서 시료를 5 × 5 mm의 크기로 3~4개를 잘라서 2% glutaraldehyde에 담가서 2시간 동안 1차 고정하였다. Phosphate buffer로 15분씩 3차례 씻은 후 1% osmium tetroxide에 담가 4 o C의 냉장고에 2시간 동안 2차 고정한 후 다시 phosphate buffer로 씻어냈다.
	2013년 기준 한국균 류목록에 수록되어 있는 국내에서 자생하는 고등균류의 수는?	제주도 한라산, 곶자왈, 오름 등에서 조사된 자생하는 고등균류는 총 2문 9강 23목 83과 258속 718종 22변종 3아종 12품종으로 743 분류군임이 보고되었다[1, 2]. 한국균 류목록[3]에 의하면 국내에서 자생하는 고등균류는 2013 년 현재 1,900여 종이라고 기록하고 있는 바, 제주도는 고온다습한 기후환경으로 인해 좁은 면적임에도 매우 다양한 버섯 상을 보이고 있음을 알 수 있다[2].
	제주도에서 채집된 야생버섯 표본 중에서 국내 미기록종으로 동정된 버섯 5종의 형태적 특징 및 미세구조를 관찰한 결과 무엇으로 동정이 되었는가?	본 연구에서는 제주도에서 채집된 야생버섯 표본 중에서 국내 미기록종으로 동정된 버섯 5종을 보고하고자 한다. 이들 버섯은 형태적 특징 및 미세구조를 관찰한 결과 Ramariopsis subtilis, Coltriciella pusilla, Lactifluus ochrogalactus, Microstoma insititium, Morchella semilibera로 동정되었다. 또한 Lactifluus ochrogalactus와 Microstoma insititia는 DNA의 internal transcribed spacer (ITS) 염기서열 분석을 통하여 재동정하였다.

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