[논문]스테비올 및 그 유도체의 세포연접 관련 클라우딘 8 발현 조절을 통한 세포이동 저해효과

최선경; 조남준; 조욱민; 심중현; 김기광; 황형서

doi:10.15230/scsk.2016.42.4.403

스테비올 및 그 유도체의 세포연접 관련 클라우딘 8 발현 조절을 통한 세포이동 저해효과
Inhibitory Effect of Steviol and Its Derivatives on Cell Migration via Regulation of Tight Junction-related Protein Claudin 8 원문보기

大韓化粧品學會誌 = Journal of the society of cosmetic scientists of Korea, v.42 no.4, 2016년, pp.403 - 412

최선경 (충남대학교 생화학과) , 조남준 (충남대학교 생화학과) , 조욱민 (세명대학교 한방화장품과학과) , 심중현 (세명대학교 한방화장품과학과) , 김기광 (충남대학교 생화학과) , 황형서 (세명대학교 한방화장품과학과)

초록
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밀착연접(tight junction, TJ)은 인접하는 표피 세포 사이를 서로 연결 및 접합하여 전해질과 수분의 이동을 조절할 뿐만 아니라 세포 내 신호를 전달하고 세포분열을 조절하는 등 다양한 기능을 갖고 있는 것으로 알려졌다. 또한 최근 연구에 따르면 TJ 관련 단백질들의 비정상적 발현은 암 발생 및 진행과 밀접한 관련이 있는 것으로 보고되었으며, TJ 구성 단백질의 발현 조절은 피부 장벽 강화 및 보습 조절과 연관된 것으로 알려졌다. 본 연구에서는 세포 장벽 조절을 통해 피부 보습 조절에 관여하는 새로운 화장품 소재를 발굴하기 위해 여러가지 소재들에 대한 스크리닝을 수행하였다. 이 중 인공 감미료 소재로 널리 사용되는 스테비올 및 당 유도체(스테비오사이드)의 미백 및 주름 개선 등의 효능에 대한 기존 보고에 따라, 이들에 의한 TJ 조절 메커니즘을 확인하기 위해 다양한 세포 활성 기능 시험을 수행하였다. MTS (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium, inner salt)를 이용한 실험을 통하여 스테비올은 human keratinocyte cell line인 HaCaT 세포에 $250{\mu}M$ 까지 독성을 나타내지 않음을 확인하였다. Quantitative real-time PCR을 이용한 TJ 관련 단백질들의 mRNA 발현 변화를 통하여 스테비올에 의한 TJ 조절 기능을 확인하였다. 그 결과, 스테비올은 TJ 관련 단백질 중 특이적으로 claudin 8을 대조군 대비 30% 수준까지 감소시키는 것을 관찰하였다. 또한, 세포이동에 의한 영향을 관찰한 결과 스테비올 처리에 의해 세포이동이 현저히 저해되는 것을 확인하였다. 마지막으로 세포 장벽의 투과성 변화를 관찰하기 위해 표피세포 피부저항(transepithelial electric resistance, TEER) 분석 결과 스테비올에 의한 세포투과성(cell permeability) 또한 증가되는 것을 관찰하였다. 이에 반해, 스테비올 유도체(스테비오사이드, 리바우디오사이드)에서는 $1000{\mu}M$까지 세포 독성이 거의 나타나지 않을 뿐만 아니라 claudin 8 발현 억제 및 세포이동 저해현상도 관찰되지 않았다. 스테비올은 HaCaT 세포의 세포 독성, claudin 8 발현 억제, 그리고 세포 이동의 저해효과를 보이는 반면 스테비올 당 유도체인 스테비오사이드, 리바우디오사이드는 세포 독성 및 세포이동에 영향이 없는 것으로 나타난 본 연구 결과들은 스테비올 당 유도체가 향후 화장품 원료로써 스테비올보다 적합한 소재임을 시사한다.

Abstract ▼ AI-Helper

The tight junction, one of Intercellular junctions, performs a variety of biological functions by bonding adjacent cells, including the barrier function to control the movement of the electrolyte and water. Recent studies have revealed that unusual expression of tight junction-related genes have been shown to be related in cancer development and progression. Recently, there are many reports that control of tight junction proteins expression is closely related to the skin moisture. In this study, we are focusing on the regulating mechanism of tight junction-associated genes by the steviol and its derivatives. Steviol, used as a sweetner, is known to chemical compound isolated from stevia plant. The MTS (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium, inner salt) assay was carried out in HaCaT cells (human keratinocyte cell line) in order to determine the cytotoxicity. As a result, while steviol showing cytotoxicity from $250{\mu}M$, steviol derivatives are not cytotoxic more than $250{\mu}M$ concentration. We have observed a change in the tight junction protein via quantitative real-time PCR. Claudin 8 among tight junction proteins is only significantly reduced up to 30% in the presence of steviol. In addition, cell migration was inhibited by steviol, not by stevioside and rebaudioside. Finally, we could observe that steviol, not stevioside and rebaudioside, is able to increase the skin barrier permeability through the transepithelial electric resistance (TEER) measurements. These results suggest that the steviol and its derivatives are specifically acts on the tight junction related gene expression, but steviol derivatives are more suitable as a cosmetic material.

주제어

AI 본문요약
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문제 정의

또한, 암세포 전이에 있어서 세포 adhesion과 junction 관련 단백질의 변화 중 claudin 유전자의 변화가 특히 중요하게 작용할 것으로 추정된다[34]. 따라서 본 연구에서는 스테비올이 피부를 구성하는 각질 형성 세포의 생물학적 메커니즘에 미치는 영향을 알아보기 위해 대표적인 TJ 관련 유전자인 claudin mRNA 발현량을 측정하였다. MTS 실험 결과 세포 생존율에 영향을 주지 않는 것으로 확인된 250 µM 농도 조건하에서 스테비올을 48 h 동안 처리한 후 internal standard로 β-actin을 이용하여 대조군 대비 스테비올 처리군의 claudin 1, 4, 6, 7, 8의 mRNA 발현량을 비교해 보았다.
여러 요인들에 의한 피부장벽 기능 약화는 피부 건조, 주름 발생의 일차적 원인이 된다고 볼 수 있다. 따라서 본 연구에서는 피부장벽 강화를 통한 보습과 피부 노화 방지에 효과적인 소재 발굴을 위해 피부장벽을 강화 기능을 수행하는 TJ 관련 단백질의 조절 메커니즘을 연구하였다. 본 연구에서는 피부 주름 개선 효과 및 미백 기능성 화장품 소재로 활용되고 있는 스테비올 및 그 유도체들이 TJ과 피부장벽 기능 조절 메커니즘을 확인하고자 하였다.
또한, 세포 이동은 상처 치유 시 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있어 기능성 화장품 개발에 있어서 고려해야 할 사항 중의 하나이다. 본 연구에서는 스테비올과 그 유도체가 세포 이동에 미치는 영향을 확인하기 위해 cell migration assay를 이용하여 세포 이동 실험을 수행하였다. 세포 배양 과정에서 세포 배양 용기에 wound를 남기고 빈 공간에 세포들이 성장 및 이동을 통해 복구되는지를 관찰하기 위해 흔적이 복구되는 거리를 측정함으로 세포의 이동 속도를 비교하는 실험기법이다.
따라서 본 연구에서는 피부장벽 강화를 통한 보습과 피부 노화 방지에 효과적인 소재 발굴을 위해 피부장벽을 강화 기능을 수행하는 TJ 관련 단백질의 조절 메커니즘을 연구하였다. 본 연구에서는 피부 주름 개선 효과 및 미백 기능성 화장품 소재로 활용되고 있는 스테비올 및 그 유도체들이 TJ과 피부장벽 기능 조절 메커니즘을 확인하고자 하였다. MTS assay를 통해 스테비올과 스테비오사이드 및 리바우디오사이드를 인간 유래 각질 형성 세포인 HaCaT 세포에 처리하여 세포독성이 있는 농도를 확인하였고, 스테비올의 경우 250 µM의 농도에서 세포 생존율에 영향을 미쳤으나 스테비오사이드 및 리바우디오사이드는 1000 µM의 농도까지 세포의 생존율에 큰 영향이 없음을 확인하였다.
이에 본 연구에서는 여러 가지 화장품 소재 중에 피부 주름개선 및 미백 기능성 소재로 기 활용되고 있는 스테비올 및 그 유도체들의 TJ 관련 유전자 발현 조절, 세포이동 및 피부 세포투과도 기능 변화에 대해 조사하고자 하였다.

제안 방법

12-well plate 0.4 µm pore transparent PET membrane(Corning, USA)에, HaCaT 5.0 × 104 cells/insert 밀도로 seed하여 TEER 측정값이 100 ∼ 120 ohm⋅cm2까지 도달하도록 배양한 뒤, 250 µM의 steviol과 steviol 유도체를 처리한 후 0, 12, 24 h 간격으로 TEER 값을 측정하였다.
2X Prime Q-master mix (Genet Bio, Korea) 10µL, 10 pmol/µL forward primer와 10 pmol/µL reverse primer를 각각 1.5 µL, nuclease free water 2 µL, 합성한 후 1/5로 희석시킨 cDNA 5 µL를 넣은 뒤 95 ℃에서 3min 후 95 ℃에서 denaturation 20 s, 58 ℃에서 annealing 20 s, 72 ℃에서 elongation 20 s를 40 cycle 실시하는 조건 하에서 AriaMx (Agilent, USA)를 이용하여 qRT-PCR을 수행하였다.
HaCaT 세포를 10% fetal bovine serum (FBS, Welgene, Korea)과 1% 항생제(100 U/mL penicillin, 100 µg/mL streptomycin, Welgene, Korea)를 첨가한 Dulbecco’s modified Eagle medium (DMEM, Welgene, Korea)을 이용하여 표준 세포 배양법인 37 ℃, 5% CO2 조건에서 배양하였다.
MTS 실험 결과 세포 생존율에 영향을 주지 않는 것으로 확인된 250 µM 농도 조건하에서 스테비올을 48 h 동안 처리한 후 internal standard로 β-actin을 이용하여 대조군 대비 스테비올 처리군의 claudin 1, 4, 6, 7, 8의 mRNA 발현량을 비교해 보았다.
그 후 각각의 well에 스테비올과 스테비오사이드, 리바우디오사이드를세포 생존율에 영향을 미치지 않는 250 µM로 처리하여 다시 48 h 동안 배양하였다. 각 시료가 첨가된 배지를 제거한 후 RiboEx (Geneall, Korea) 1 mL로 세포를 lysis 한 다음, hybrid-R RNA purification kit (Geneall, Korea)를 이용하여 RNA를 추출하고 Qubit 2.0 fluorometer (Invitrogen, USA)로 정량하였다. 이렇게 추출하여 정량한 total RNA로 cDNA를 합성하기 위하여 total RNA 2 µg, dNTP mix (10 mM) 2 µL, random hexamer(100 pmol/µL) 2 µL를 넣은 후 DEPC-treated water로 총 부피 20 µL가 되도록 조정하였다.
배양 중인 HaCaT 세포의 표면에 200p tip을 이용하여 wound를 만든 다음, 각 well에 스테비올과 스테비오사이드, 리바우디오사이드를 세포 생존율에 영향을 미치지 않는 250 µM로 처리하여 다시 24 h 동안 배양하였다. 그 후 healing 정도를 현미경을 통해서 관찰하였으며, 현미경을 통하여 남아 있는 wound의 거리를 측정한 다음 시료를 처리하지 않은 대조군 대비 시료첨가군의 상처 치료 정도를 백분율로 표시하여 상대적인 closure rate를 측정하였다.
30%의 세포 생존율을 보여 높은 세포 독성을 나타낸 반면에, 스테비오사이드와 리바우디오사이드는 스테비올과 같은 농도에서도 세포 독성이관찰되지 않았다. 그다음으로 스테비올 유도체인 스테비오사이드와 리바우디오사이드의 claudin family의 mRNA 발현량을 살펴보았다. 스테비오사이드와 리바우디오사이드는 스테비올과 마찬가지로 250 µM 농도에서 실험하였다.
따라서 그 이후 실험에서는 HaCaT 세포의 생존율에 영향을 주지 않으면서 스테비올의 효과를 극대화하기 위해 HaCaT 세포처리 최고 농도인 250 µM로 진행하였다.
49%로 상처 치료 복구율이 억제된 것으로 보아 claudin 8이 각질 세포인 HaCaT 세포의 이동에 중요한 역할을 한 것으로 추측되어 진다(Figure 5B). 또한 우리는 스테비올과 스테비오사이드, 리바우디오사이드에 의한 세포장벽 기능 강화 및 cell permeability 감소효과를 관찰하기 위해 TEER 값(ohm)을 측정하였다. 정상적인 세포배양 조건인 대조군(control) 121.
본 연구에서 사용한 스테비올 및 스테비올 당 유도체(스테비오사이드, 리바우디오사이드)들은 Table 1에 제시된 바와 같이 모두 (주)마크로케어에서 제조 및 생산하고 동결 건조한 순도 95% 이상 분말원료를 사용하였다. 또한, 이에 대한 검증을 위해 Sigma (USA)를 통해 개별 구매하여 실험결과를 검증하였다.
마지막으로 스테비올과 스테비오사이드, 리바우디오사이드의 세포 이동 속도를 비교해 보았다(Figure 5A). 스테비올과 같은 농도인 250 µM의 스테비오사이드와 리바우디오사이드를 24 h 배양한 후 상처 치료 복구율을 확인해 본 결과 스테비오사이드는 99.
스테비올과 그 유도체인 스테비오사이드와 리바우디오사이드의 비교 실험을 통하여 스테비올과 유도체가 생물학적으로 얼마나 차이가 있는지 알아보았다. 먼저 스테비올과 그 유도체인 스테비오사이드와 리바우디오사이드가 HaCaT 세포에 미치는 세포 독성을 비교하기 위하여 MTS assay를 수행하였다. 그 결과 스테비올은 62.
그리고 스테비올에 의해 세포 이동 또한 저해된다는 사실이 관찰되었다. 스테비올과 그 유도체인 스테비오사이드와 리바우디오사이드의 비교 실험을 통하여 스테비올과 유도체가 생물학적으로 얼마나 차이가 있는지 알아보았다. 먼저 스테비올과 그 유도체인 스테비오사이드와 리바우디오사이드가 HaCaT 세포에 미치는 세포 독성을 비교하기 위하여 MTS assay를 수행하였다.
스테비올과 스테비오사이드, 리바우디오사이드 처리에 의한 세포의 이동성을 확인하기 위하여 cell migration assay를 실시하였다. 6-well plate에 HaCaT 세포를 6 × 10⁵ cells/well로 분주하고, 세포가 plate에 confluent 될 때까지 배양해 주었다.
추후 실험에는 이렇게 합성한 cDNA를 1/5로 희석시켜 사용하였다. 스테비올과 스테비오사이드, 리바우디오사이드 처리에 의해 TJ 관련 유전자인 claudin family의 mRNA 발현량을 비교해 보기 위하여 quantitative real-time PCR (qRT-PCR)을 실시하였다. 2X Prime Q-master mix (Genet Bio, Korea) 10µL, 10 pmol/µL forward primer와 10 pmol/µL reverse primer를 각각 1.
스테비올과 스테비오사이드, 리바우디오사이드가세포 독성에 미치는 영향을 알아보기 위해 MTS(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium, inner salt) assay를 수행하였다. 96-well plate에 HaCaT 세포를 5,000 cells/well로 분주하여 24h 동안 배양하였다.
스테비올과 스테비올 유도체가 상피세포 간 장벽(epithelial barrier)에 미치는 영향을 확인하기 위하여 transepithelial electric resistance (TEER)를 측정하였다. 12-well plate 0.
스테비올이 세포의 증식 및 독성에 미치는 영향을 확인하기 위해 인간 유래 각질 형성세포인 HaCaT 세포를 배양하고 각각의 농도별로 처리하여 MTS assay를 수행하였다. 농도 범위는 기존 논문을 참고하여 0 ∼ 1000 µM로 설정하였다.
양성 대조군으로 resveratrol (50 µM), 음성대조군은 deoxynivalenol (DON, 5 µM)을 사용하여 세포 장벽 강화를 비교 측정하였다[31].
이렇게 추출하여 정량한 total RNA로 cDNA를 합성하기 위하여 total RNA 2 µg, dNTP mix (10 mM) 2 µL, random hexamer(100 pmol/µL) 2 µL를 넣은 후 DEPC-treated water로 총 부피 20 µL가 되도록 조정하였다.
그 후 microplate reader(Molecular Devices, USA)를 이용하여 492 nm에서 흡광도를 측정하였다. 이렇게 측정한 흡광도를 시료를 처리하지 않은 대조군 대비 시료를 처리한 세포의 생존율을 백분율로 표시하여 상대적인 세포 독성을 측정하였다.

대상 데이터

본 연구에서 사용한 스테비올 및 스테비올 당 유도체(스테비오사이드, 리바우디오사이드)들은 Table 1에 제시된 바와 같이 모두 (주)마크로케어에서 제조 및 생산하고 동결 건조한 순도 95% 이상 분말원료를 사용하였다. 또한, 이에 대한 검증을 위해 Sigma (USA)를 통해 개별 구매하여 실험결과를 검증하였다.
실험에 사용된 세포주는 인간 유래 각질형성 세포(human keratinocyte cell line)인 HaCaT으로, 고려대학교 생명공학부에서 분양받아 사용하였다. HaCaT 세포를 10% fetal bovine serum (FBS, Welgene, Korea)과 1% 항생제(100 U/mL penicillin, 100 µg/mL streptomycin, Welgene, Korea)를 첨가한 Dulbecco’s modified Eagle medium (DMEM, Welgene, Korea)을 이용하여 표준 세포 배양법인 37 ℃, 5% CO₂ 조건에서 배양하였다.

데이터처리

모든 통계처리는 Student’s t-test를 이용하여 유의 수준 0.05 (p < 0.05)로 검정하여 수행하였다.

이론/모형

이때 TEER 값은 ohm (Ω) × cm²으로 표시하였다. 본 연구에서 세포 장벽 강화를 확인하기 위해EVOM2 (epithelial volt ohm meter 2, World Precision Instruments, USA)를 이용하여 측정하였다. 양성 대조군으로 resveratrol (50 µM), 음성대조군은 deoxynivalenol (DON, 5 µM)을 사용하여 세포 장벽 강화를 비교 측정하였다[31].

성능/효과

Claudin 8의 mRNA 발현량을 감소시킨 스테비올만 대조군 대비 37.33 ± 10.49%로 상처 치료 복구율이 억제된 것으로 보아 claudin 8이 각질 세포인 HaCaT 세포의 이동에 중요한 역할을 한 것으로 추측되어 진다(Figure 5B).
HaCaT 세포를 배양한 plate에 흠집을 낸 후 250 µM 스테비올을 24 h 동안 처리한 뒤 현미경으로 확인한 결과 육안으로도 대조군에 비해 스테비올 처리군이 세포이동 및 상처 치료 거리가 확연하게 감소한 것을 관찰할 수 있었다(Figure 3A).
HaCaT 세포에 스테비올을 농도별로 처리한 후 24 h 뒤 MTS assay를 실시한 결과 스테비올 0 ∼ 62.5 µM까지는 세포 증식률이 점차 증가하여 62.5 µM에서 118.86 ± 4.31%로 가장 높은 세포 증식률을 보였다(Figure 1).
MTS assay를 통해 스테비올과 스테비오사이드 및 리바우디오사이드를 인간 유래 각질 형성 세포인 HaCaT 세포에 처리하여 세포독성이 있는 농도를 확인하였고, 스테비올의 경우 250 µM의 농도에서 세포 생존율에 영향을 미쳤으나 스테비오사이드 및 리바우디오사이드는 1000 µM의 농도까지 세포의 생존율에 큰 영향이 없음을 확인하였다.
TJ 관련 유전자의 mRNA 발현 측정실험 결과 스테비올 250 µM 처리군은 대조군 대비 claudin 8의 발현만을 특이적으로현저하게 감소시키는 것을 확인하였다.
결과적으로 스테비올 250 µM 처리 시 관찰된 피부각질 형성세포의 세포 독성 발생과 TJ 관련 단백질 중 claudin 8의 특이적 발현 억제, 세포이동 억제현상은 스테비올 당 유도체인 스테비오사이드, 리바우디오사이드처리군에서는 전혀 관찰되지 않았다.
그 결과 스테비올은 62.5 µM에서 118.86 ± 4.31%로 가장 높은 세포 생존율을 보이고, 125 µM에서도 114.25 ± 8.20%로 세포 생존율을 증가시킨 반면에 스테비오사이드는 500 µM에서 116.16 ± 5.96%의 세포 생존율을 보여 스테비올보다 더 높은 농도에서도 세포의 생존율을 증가시킨다는 사실을 알 수 있었다(Figure 4A).
반면 스테비올 유도체인 스테비오사이드는 142.0 ± 4.6, 리바우디오사이드는 135.0 ± 0.0로 측정되어 대조군 대비 세포투과성이 감소되고 이를 통해 세포장벽이 강화되는 것을 확인하였다(Figure 5C).
스테비올 125 µM에서도 114.25 ± 8.20%로 높은 세포 증식률이 관찰되어 125 µM까지는 스테비올이 HaCaT 세포의 증식률을 증가시킨다는 사실을 알 수 있었다.
스테비올과 같은 농도인 250 µM의 스테비오사이드와 리바우디오사이드를 24 h 배양한 후 상처 치료 복구율을 확인해 본 결과 스테비오사이드는 99.91 ±9.99%, 리바우디오사이드는 93.46 ± 9.12%로 관찰되었다.
스테비올의 세포 독성 실험 결과 스테비올 125 µM까지는 대조군 대비 HaCaT 세포의 증식률이 증가하였으나, 250 µM에서 세포 생존율이 대조군과 거의 유사하였고, 250 µM 보다 더 높은 농도에서는 세포 독성이 관찰되었다.
앞선 실험에서 스테비올이 1000 µM과 같은 고농도에서는 세포 생존율을 급격히 떨어뜨리고 claudin family 중에서도 특히 claudin 8의 mRNA 발현량을 현저히 감소시킴이 확인되었다.
앞선 실험의 결과로 스테비올의 claudin 8 mRNA 발현량이 0.29 ± 0.14배로 현저히 떨어지는 것을 알 수 있었으나, 스테비오사이드는 1.00 ±0.12, 리바우디오사이드는 1.26 ± 0.19배로 관찰되었다(Figure 4B).
반면 스테비오사이드와 리바우디오사이드는 claudin 8의 발현에 별다른 영향을 보이지 않았다. 이러한 claudin 8 발현 감소가 세포의 이동성에 어떠한 영향을 끼치는지 확인하기 위해 cell migration assay를 실시한 결과, claudin 8을 감소시킨 스테비올 처리군에서만 세포의 이동이 억제되는 반면, 스테비오사이드와 리바우디오사이드 처리군에서는 세포 이동 저해효과가 관찰되지 않았다. 결과적으로 스테비올 250 µM 처리 시 관찰된 피부각질 형성세포의 세포 독성 발생과 TJ 관련 단백질 중 claudin 8의 특이적 발현 억제, 세포이동 억제현상은 스테비올 당 유도체인 스테비오사이드, 리바우디오사이드처리군에서는 전혀 관찰되지 않았다.
이로써 스테비오사이드와 리바우디오사이드는 cludin 1, 4, 6, 7에서 모두 스테비올과 유사하게 대조군과 큰 유의성이 보이지 않음을 알 수 있었다. 이러한 결과는 스테비올과 그 유도체인 스테비오사이드, 리바우디오사이드 중에서도 스테비올이 TJ 관련 유전자인 claudin 8의 mRNA 발현량에 특이적으로 작용한다는 것을 말해준다.
14배까지 현저히 감소함을 알 수 있었다. 이러한 결과는 스테비올이 TJ 관련 유전자 중에서도 특이적으로 claudin 8 유전자 발현을 억제한다는 것을 보여준다.
16배로 관찰되었다(Figure 4C). 이로써 스테비오사이드와 리바우디오사이드는 cludin 1, 4, 6, 7에서 모두 스테비올과 유사하게 대조군과 큰 유의성이 보이지 않음을 알 수 있었다. 이러한 결과는 스테비올과 그 유도체인 스테비오사이드, 리바우디오사이드 중에서도 스테비올이 TJ 관련 유전자인 claudin 8의 mRNA 발현량에 특이적으로 작용한다는 것을 말해준다.
49%의 상처 치료 복구율을 보였다(Figure 3B). 이를 통해 스테비올이 세포의 이동을 저해하여 상처 치료 거리를 감소시키는 것을 확인하였다. 따라서 스테비올은 상처 치유를 목적으로 하는 화장품 개발에는 좋은 소재가 아닐 것으로 예상한다.
정상적인 세포배양 조건인 대조군(control) 121.0 ± 4.6 대비 음성대조군인 4 µM deoxynivalenol (DON)는 113.0 ± 4.4로 TEER 값이 감소한 반면 양성대조군인 resveratrol (Res)은 25 µM, 50 µM 농도 조건에서 각각 128.0 ± 1.7, 133.0 ± 4.6로 TEER 값이 측정되어 농도 의존적으로 증가되는 것을 확인하였다.

후속연구

정확한 피부장벽 기능 조절 메커니즘까지 규명하지는 못하였으나, 스테비올 처리에 따른 특이적 claudin 8 발현 억제 효과는 피부각질형성세포의 세포이동과 밀접한 관련이 있어 나타난 결과라 사료된다. 위의 결과들을 종합해 볼 때 스테비올 보다 스테비올에 당이 붙어 있는 스테비올 유도체가 화장품 소재로 보다 적합하므로 이러한 결과에 대한 정확한 규명을 위해 스테비올 유도체의 물성변화와 세포독성과의 상관관계 규명이 필요하고 스테비올 유도체들의 항노화 효과를 포함한 다양한 효능평가 연구도 필요할 것이다. 이와 더불어 향후 스테비올의 claudin 8 발현 조절 메커니즘에 대한 추가 연구 및스테비올 유도체들의 TJ 관련 메커니즘 연구도 필요할것으로 여겨진다.
위의 결과들을 종합해 볼 때 스테비올 보다 스테비올에 당이 붙어 있는 스테비올 유도체가 화장품 소재로 보다 적합하므로 이러한 결과에 대한 정확한 규명을 위해 스테비올 유도체의 물성변화와 세포독성과의 상관관계 규명이 필요하고 스테비올 유도체들의 항노화 효과를 포함한 다양한 효능평가 연구도 필요할 것이다. 이와 더불어 향후 스테비올의 claudin 8 발현 조절 메커니즘에 대한 추가 연구 및스테비올 유도체들의 TJ 관련 메커니즘 연구도 필요할것으로 여겨진다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	스테비오사이드는 무엇인가?	스테비오사이드(stevioside)는 브라질과 파라과이 등 남아메리카 고산지대에서 주로 자생하는 스테비아(Stevia rebaudiana Bertoni, S. rebaudiana)의 다년생 초본식물로부터 유래된 감미성분이다. 보통 스테비오사이드는 aglycone 부분인 스테비올(steviol)과 3개의 당이 결합된 배당체를 의미한다. 스테비올은 1931년, S.
	스테비오사이드의 특징은 무엇인가?	스테비아 추출물에는 스테비오사이드 및 리바우디오사이드(rebaudioside)가 많이 함유되어 있다. 스테비오사이드는 설탕의 당도 대비 약 200 ∼ 300배 이상을 지니고 있으나 상대적 칼로리가 낮고 열에 강해 기존 합성감미료 대비 안정성이 높아 당 대체 감미료로 널리 이용되고 있다[1,2]. 또한, 스테비올과 그 유도체인 스테비오사이드, 리바우디오사이드는 인체 유해성에 대해 보고되지 않았고 피부 섬유아세포 콜라젠 합성을 통해 피부 탄력 향상 및 주름 개선 효과가 보고되어 있다[3].
	claudin family 단백질과 암세포의 초기 침윤 및 전이 사이의 관계에 관한 예시에는 어떤 것들이 있는가?	따라서 TJ 관련 단백질(claudins, occludin, ZO-1, ZO-2 등) 및 TJ 관련 단백질(E-cadherin 등) mRNA 발현에 관여하는 조절 메커니즘 연구의 중요성이 커지고 있다[19-22]. 그 예로 claudin 1과 claudin 7은 전이성 유방암 세포에서 그 발현이 억제되지만 다른 암 조직에서 claudin 3과 claudin 4 발현량은 현저히 증가된다고 알려진다. 또한 자궁경부암의 경우에는 비종양 조직에 비해 claudin 5와 claudin 9의 발현량이 저해되지만 claudin 8 발현은 오히려 크게 증가된다. Claudin 8은 인간 골육종 세포인 U2OS의 악성 증식에 관여하고 신장암 진단을 위한 바이오 마커로도 사용된다. Na+ 흡수 메커니즘에서는 claudin 8 과발현 조절이 중요하다[23,24]. 이러한 연구들로 볼 때 TJ 관련 단백질의 발현조절은 암 발생 초기 단계의 결과라기보다 구조적 변화 등에 의해 암이 발생되고진행 및 전이에 원인이 되는 것으로 이해되어진다[25-28].

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저자의 다른 논문 :

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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