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문제 정의
- 이에 저자는 휴발성 유기용매인 TMA로 접촉성 과민반응을 유도한 BALB/c 마우스를 대상으로 귀의 부종, 귀 조직의 백혈구 침윤, 혈청 IgE와 귀 밑 림프절(auricula lymph node)의 CD4+/CD8+의 비율, 케모카인 및 Th2 사이토카인의 생산에 解毒四物湯이 미치는 효과를 조사하여 유의한 결과를 얻었기에 보고하는 바이다.
제안 방법
- 이에 저자는 解毒四物湯이 아토피 피부염의 치료에서 어떤 기전과 효능을 나타내는지를 실제로 알아보기 위하여, 산업사회에서 빈번히 사용되는 유기용매인 TMA을 활용하여 Fig. 1과 같이 Balb/c 마우스를 대상으로 실험 설계한 후 解毒四物湯 추출물의 농도별 투여에 따른 접촉성 과민반응의 조절여부를 조사하였다. 그 결과 解毒四物湯의 투여는 농도에 의존적으로 TMA 유도 접촉성 과민반응을 현저히 억제하는 우수한 효과가 있었다.
- TMA 감작과 공격은 Fukuyama 등23)의 방법을 약간 변형하여 50 ㎕ TMA(10%)를 옆구리에 3일간 연속으로 하루에 1회씩 5일 간격으로 3회 도포하였으며, 29일에 25 ㎕ TMA(10%)를 3일간 연속으로 귀에 공격하였다. 이와 같이 TMA를 반복적으로 피부에 도포시켜 귀의 두께와 조직학적 특징을 조사한 결과 정상대조군에 비해서 현저히 그 두께가 증가하였고, 정상 대조군에 비해 매우 심하게 표피층(epidermis)이 두꺼워졌으며, 진피층의 혈관이 확장되어 있음을 확인하고, 표피와 진피층에 단핵백혈구, 비만세포 및 호산구의 침윤이 매우 높게 나타나 염증현상이 유발됨을 확인하였다.
- 解毒四物湯의 구성 비율은 Table 1과 같이 각 약재를 1돈(4g)씩 동량으로 정량하여 총 10첩(320g)을 한약추출기(일광기계, 신토불이 황토약탕기)에 주입하였고, 정수기(월드린, 역삼투압 정수기)에서 정수된 물 5000㎖를 첨가하여 100℃에서 2시간 30분 동안 전탕하였다
- 귀 조직의 백혈구 침윤에 미치는 解毒四物湯의 효과를 알아보기 위해서, Wright Giemsa, Congo red 또는 Toluidine blue 염색을 하여 단핵세포(mononuclear cell) 호중구 (neutrophil), 비만세포(mast cell) 및 호산구(eosinophil)의 침윤을 조사하였다
- 스트레스가 해소된 8주령의 BALB/c 마우스를 5마리씩 분주하여 TMA로 감작하기 2시간 전부터 대조군과 실험군은 각각 생리식염수와 解毒四物湯 추출물(HSTE, 50-200 ㎎/㎏ 체중)을 하루에 1회씩 17일간 경구투여 하였으며, 공격일인 29일부터는 TMA로 공격전 30분에 20 ㎕ HSTE(3%)를 도포하였다.
- 1과 같이 실험설계를 하여 수행하였다. 요약하여 설명하면, TMA 감작과 공격은 Fukuyama 등18)의 방법을 약간 변형하여 50 ㎕ TMA(10%)를 옆구리에 3일간 연속으로 하루에 1회씩 5일 간격으로 3회 도포하였으며, 29일에 25 ㎕ TMA(10%)를 3일간 연속으로 귀에 공격하였다.
- 이에 저자는 解毒四物湯이 아토피 피부염의 치료에서 어떤 기전과 효능을 나타내는지를 실제로 알아보기 위하여, 산업사회에서 빈번히 사용되는 유기용매인 TMA을 활용하여 Fig. 1과 같이 Balb/c 마우스를 대상으로 실험 설계한 후 解毒四物湯 추출물의 농도별 투여에 따른 접촉성 과민반응의 조절여부를 조사하였다.
대상 데이터
- Anti-mouse CD3, anti-mouse CD28, FITC conjugated anti-mouse CD4와 PE-conjugated anti-mouse CD8 mAb는 PharMingen사(San Diego, CA, USA)로부터 구입하였다
- Trimellitic anhydride (TMA), acetone, isopropylmyristate, biotin-conjugated monoclonal rat anti-mouse IgE mAb 또는 biotin-conjugated monoclonal rat anti-mouse IgG1 mAb, avidin-alkaline phosphatas, ρ-nitrophenyl-phosphate 등은 Sigma- Ardrich사(St Louis, MO)로 부터 구입하였다. RPMI 1640, streptomycin/penicillin, glutamine, 우태아혈청(FBS)은 Gibco/BRL사(Grand Island, NY.
- 무균환경에서 사육된 7주령의 암컷 BALB/c 마우스는 중앙동물실험실(서울)사로 부터 구입하였다. 마우스는 1주일간 스트레스를 해소하기 위해 1주일간 낮과 밤의 주기를 12시간씩 고정하여 사료(중앙동물실험실)와 멸균 물을 공급하면서 사육한 후 실험동물위원회의 실험 규정에 준하여 실험에 사용하였다.
- 실험에 사용한 解毒四物湯의 구성 藥材는 (주)옴니허브에서 구입하였다
이론/모형
- PGE2의 측정은 R&D사가 제시한 방법에 준하여 ELISA법으로 측정하였다.
- 배양액으로부터 IL-4, IL-5, IL-13, IFN-γ, MCP-1/CCL2 및 MIP-1α/CCL3의 immunoassay는 R&D사가 제시한 ELISA 방법에 의하여 측정하였다.
- 혈청내 IgE 및 IgG1의 정량은 Sandwich ELISA법으로 측정하였다
성능/효과
- 以上의 結果는 解毒四物湯 추출물(HSTE)이 TMA로 유도된 접촉성 과민반응을 抑制하는 效果가 있음을 보여주었다. 따라서 아토피 피부염 등의 알러지성 피부질환 治療에 解毒四物湯을 유용하게 活用할 수 있을 것으로 思料된다.
- 1과 같이 Balb/c 마우스를 대상으로 실험 설계한 후 解毒四物湯 추출물의 농도별 투여에 따른 접촉성 과민반응의 조절여부를 조사하였다. 그 결과 解毒四物湯의 투여는 농도에 의존적으로 TMA 유도 접촉성 과민반응을 현저히 억제하는 우수한 효과가 있었다.
- TMA는 일반적으로 인체 및 모델 동물의 혈청 IgE 양을 높이는 것으로 알려져 있는데, 증가된 IgE는 비만세포와 호염구에서 FcεRI와 매우 높은 결합을 통하여 기관지염, 알러지성 고초열, 아토피 피부염 등과 같은 환경성 알러지성 질환을 유발 한다31-35). 본 연구의 결과 解毒四物湯을 처리할 경우 혈청 IgE를 효과적으로 억제(Fig. 5)한 반면, 면역능 향상에 도움을 주는 IgG1의 경우 고농도(400 ㎎/㎏)에서만 억제하는 경향을 보였고 50-100 ㎎/㎏에서는 큰 영향을 미치지 않은 것으로 조사되었다.
- 이번 실험에서 解毒四物湯은 TMA로 접촉성 과민반응이 유도된 쥐의 귀 두께, 귀 조직의 백혈구 침윤, 혈청내 IgE 및 auricula lymph node 세포의 케모카인과 Th2 사이토카인을 현저히 억제하는 효과를 나타내었다. 이러한 본 연구의 결과는 아토피 피부염을 비롯한 알러지성 피부질환 치료에 解毒四物湯을 유용하게 활용할 수 있음을 증명하였다.
- TMA 감작과 공격은 Fukuyama 등23)의 방법을 약간 변형하여 50 ㎕ TMA(10%)를 옆구리에 3일간 연속으로 하루에 1회씩 5일 간격으로 3회 도포하였으며, 29일에 25 ㎕ TMA(10%)를 3일간 연속으로 귀에 공격하였다. 이와 같이 TMA를 반복적으로 피부에 도포시켜 귀의 두께와 조직학적 특징을 조사한 결과 정상대조군에 비해서 현저히 그 두께가 증가하였고, 정상 대조군에 비해 매우 심하게 표피층(epidermis)이 두꺼워졌으며, 진피층의 혈관이 확장되어 있음을 확인하고, 표피와 진피층에 단핵백혈구, 비만세포 및 호산구의 침윤이 매우 높게 나타나 염증현상이 유발됨을 확인하였다. 그러나 解毒四物湯을 투여한 실험군에서는 투여량에 의존적으로 귀의 두께가 줄어들었을 뿐만 아니라 백혈구의 침윤이 현저히 줄어들었다(Fig.
후속연구
- 이러한 본 연구의 결과는 아토피 피부염을 비롯한 알러지성 피부질환 치료에 解毒四物湯을 유용하게 활용할 수 있음을 증명하였다. 그러나 아토피 피부염 등 알레르기성 피부질환의 치료에 임상적으로 적용하기 위해서는 解毒四物湯의 항염증에 대한 자세한 작용기전이 앞으로도 계속 硏究되어야 할 것으로 思料된다.
- 以上의 結果는 解毒四物湯 추출물(HSTE)이 TMA로 유도된 접촉성 과민반응을 抑制하는 效果가 있음을 보여주었다. 따라서 아토피 피부염 등의 알러지성 피부질환 治療에 解毒四物湯을 유용하게 活用할 수 있을 것으로 思料된다.
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