선택한 단어 수는 입니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
선택한 단어 수는 30입니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
문제 정의
- 부각되었다[23]. 외식산업과 급식문화가 점점 증가하고그에 따라 식중독 발생도 증가하는 시점에서, 본 연구는 2012 년부터 2015년까지 4년간 부산지역에서 발생한 식중독 사례를 대상으로 원인 병원체인 Norovirus를 검출하여 유전자의염기서열 분석을 통해 유전자형의 분포에 관한 분석을 수행함으로써, 부산지역의 발생한 식중독의 Norovirus 유행 양상을파악하여 Norovirus 식중독의 확산 방지 및 예방 대책 수립을위한 기초 자료를 제공하고자 한다.
제안 방법
- Wash solution Ⅱ, Wash solution Ⅲ으로 각각 동일한 방법으로 진행한 후 Magnetic stand에서정체시켜 상층액을 완전히 제거한 후 Elution buffer 100 ul를넣는다. 5분간 incubation시킨 후 60℃ Hot block에서 10분간정체시시키고, Magnetic stand에서 30초간 정체시킨 후 상층액을 수거하여 cDNA 합성을 위한 Real-Time RT-PCR과 RT- PCR 단계를 위한 RNA로 사용하였다.
- First PCR product 2 ul를 이용해 특이적인 primer 첨가한 후 Semi nested PCR을 수행하였으며 94℃에서 5분간 denatu- ration시킨 후 94℃ 30초, 56℃ 30초, 72℃45초를 1회로 25 cy- cle을 반복한 후 72℃에서 7분간 유지 반응시켰다.
- Viral nucleic acid extraction kit (Green Mate Biotech, Korea)를 사용하여 RNA를 추출하였다. 분변부유액 150 ul에 Lysis & Bingding buffer 300 ul를 넣고 vortex하여 실온에서 5분간 incubation시킨 후 Magnetic bead 20 ul를 넣고 진탕한후 10분간 incubation시킨다.
- 1 Cycle Sequencing Kit (Applied Biosystems, USA)와 ABI 3730XL Genetic Analyzer (Applied Biosystems, USA)를 이용해 sequencing 분석을 하였다. 분석된 염기서열은 DNAstar (Madison, USA)를 통해 Align하여, Kroneman A 등이 제안한 Norovirus Genotyping Tool (http://www.rivm.nl/mpf/ norovirus/typingtool)을 통하여 Norovirus의 genotype을 결정하였다[22].
- 증폭된 PCR product는 ExoSAP-IT Kit (Affymetrix, USA) 를 이용하여 정제하였고 이를 template으로 하여 Terminator v3.1 Cycle Sequencing Kit (Applied Biosystems, USA)와 ABI 3730XL Genetic Analyzer (Applied Biosystems, USA)를 이용해 sequencing 분석을 하였다. 분석된 염기서열은 DNAstar (Madison, USA)를 통해 Align하여, Kroneman A 등이 제안한 Norovirus Genotyping Tool (http://www.
- 최종 PCR product를 SYBR safe (Invitrogen, USA)를 넣은 1.5% agarose gel (TaKaRa, Japan)에 loading한 후 전기영동하여 Image analyzer (BIO-RAD, USA)로 band를 확인하였다.
- 추출된 RNA 10 ul를 실시간중합효소연쇄반응 기법을 이용한 검출을 위하여 Norovirus Real-Time RT-PCR kit (Bioneer, Korea)를 이용하여 45℃ 30분간 reverse transcription를 수행하고, 95℃ 10분 반응 후, 95℃15초 45 cycles로 Denaturation 한 후 56℃ 1분 Annealing & Extention하였다.
- 같다. 추출된 RNA를 20 ul취하여 특이적인 primer 첨가 후 Veriti thermal cycler (Applied Biosystems, USA)를 이용하여 47℃ 에서 40분간 reverse transcription을 수행하여 cDNA를 합성하였다. 이를 94℃ 15분간 denaturation시킨 후, 94℃ 30초, 54 ℃ 30초, 72℃ 45초를 1회로 35 cycle을 반복한 후 72℃에서 7분간 유지 반응시켰다.
대상 데이터
- 2%인 71건이 Norovirus 검출되었고, 이 중 66건이 환자에서 검출되었고, 5건이 조리종사자에서 검출되었다. 본 연구 대상 중 109건이 조리종사자 검체로써, 역학조사 당시 조사대상 전체 조리종사자들은 장염, 복통, 구토 등의 증세가 없어 현장에서 음식 조리에 참여하고 있었다. 따라서 조리종사자의 Norovirus 양성 5건은 무증상 조리종사자의 Norovirus 검출 사례라 할 수 있다.
- 본 연구에서는 2012년부터 2015년까지 부산지역에서 2인 이상 발생된 식중독으로 16개 보건소로부터 의뢰된 분변 검체 총 581건(환자 472건, 조리종사자 109건)을 사용하였다. 대변 검체는 1 g을 취해 멸균된 PBS (Sigma, USA) 9 ml에 희석하고 직장도말의 경우 1 ml의 PBS에 분변을 풀어주고 3분간 vor- texing 강하게 한 후 4℃, 3, 000 rpm에서 30분간 원심분리 하여 상층 액을 사용하였다.
- 최근에는 2012년 11월 2012-Sydney 변이주가 전세계적으로 출현하여 Norovirus 관련 식중독의 발생 증가를 야기하였다[15, 36]. 본 연구에서는 GII-4형이 원인이 된 식중독사례는 4사례가 있었는데, 2012년도 1사례 1건 검출, 2013년 1사례에서 2건, 2014년 2사례 중 각각 1건, 4건이 검출된 바가있지만, 환자가 속출하는 대유행은 없었다. 특히, 2015년도 부산지역에서는 GII-4형이 원인이 된 집단 발생은 단 한 건도없었으며, 2012~2013년에 유행했던 GII-6형이 다시 우세한 분포양상을 나타냈다.
데이터처리
- ANOVA의 Scheffe 검정을 통하여 연령대간의 다중 비교분석을 실시하였다. Table 6에 결과를 보면, 11~20세 인원과 다른 모든 연령대들과의 다중비교에서 유의수준 p-value 값이 0.
- Norovirus 검출된 결과에서 시사점을 제시하기 위해 ANOVA 통계분석을 실시하였다. 데이터들의 다중비교분석을 위하여 Scheffe 검정을 추가적으로 실행하였다.
- 실시하였다. 데이터들의 다중비교분석을 위하여 Scheffe 검정을 추가적으로 실행하였다. 이러한 통계적인 분석을 위하여 SPSS (ver.
- 연령대간의 유의한 정도를 파악하기 위하여 ANOVA 분석 방법을 실시하였다. ANOVA 분석의 결과 Table 5를 참조해보면, 유의수준 p-value값이 0.
성능/효과
- 1건이었다. 2012년 2월 초등학교 급식 후 발생한 식중독 사례는 환자에서는 GI-1, GI-2, GI-3, GI-5, GII-1, GII-4, GII-6으로 다양한 유전자형의 발생이 있었으며, 조리종사자 2명은 GI-3, GII-5, GII-6가 검출되어 환자와 유사한 유전자형도 있었고, GII-5형은 환자에서는 검출되지 않았으나 조리 종사자는 감염되어 있었다. 또한 GI, GⅡ의 복합 감염은 환자뿐 아니라 조리종사자에서도 확인되었다.
- Genotype 분석 결과, 71건의 양성 검체 중 GI genogroup에서는 4가지 genotype (GI-1, GI-2, GI-3, GI-5), GII genogroup 에서는 5가지 genotype (GII-1, GII-4, GII-5, GII-6, GII-17)으로부산지역 Norovirus 원인 식중독에서는 다양한 유전자형이 검출되었다.
- Norovirus genogroup별로 볼 때, GI genogroup 20건 (28.2%), GII genogroup 51건(71.8%)으로 GII genogroup의 발생이 월등히 높았다. 이는 부산지역의 급성설사질환 감시 사업 결과인 GI genogroup 21.
- 따라서 본 연구를 통해 2012년부터 2015년까지 최근 4년동안 부산지역의 집단 식중독 발생에 대한 Norovirus 감염실태와 그 유전자형 유행 분포 양상을 분석할 수 있었다. 또한앞으로의 식중독 예방 및 관리에 대한 기초적인 역학적 자료를 제공할 수 있을 것으로 사료되며, 향후 부산지역에서 발생되는 식중독의 원인 바이러스와 유전자형의 분포 양상에 대한지속적인 모니터링이 필요할 것으로 판단되며 이를 통해 새로운 Norovirus 유전자형에 의한 대형 식중독 발생을 조기에탐지하고 예방할 수 있을 것으로 기대된다.
- 05보다 낮으므로, 11~20세 연령대는 다른 연령대들과는 확실히 두드러진 차이를 보인다고 할 수 있다. 반면에 10대를 제외한 다른 연령대 사이의 다중 비교에서는 유의수준 p-val- ue가 1.000에 가까움으로써, 연령대간의 유의미한 차이가 없었음을 통계적으로 확인할 수 있었다. 이러한 연령별 분석 결과로 볼 때, 10대를 위한 위생에 대한 기본 교육 및 식중독 예방 교육을 더욱 철저히 실시한다면 Norovirus에 의한 식중독의 확산 방지에 도움이 될 것이다.
- 또한 미국, 영국 등에서 Norovirus 식중독을 일으키는 주요 원인 식품으로 샐러드, 과일, 야채와 같은 신선식품과 햄버거, 케익, 파이, 육류, 아이스크림 등의 다양한 식품이 보고되었다[7]. 본 연구에서 추정되는 주요 원인 음식은 급식이었으며, 그 외 식품으로는 모듬회, 햄버거, 피자, 베이커리로 해산물 외에 다양한 식품군도 Norovirus 식중독 원인으로 추정되는 식품임을 확인하였다.
- 식중독 검체 총 581건 중 12.2%인 71건이 Norovirus 검출되었고, 이 중 66건이 환자에서 검출되었고, 5건이 조리종사자에서 검출되었다. 본 연구 대상 중 109건이 조리종사자 검체로써, 역학조사 당시 조사대상 전체 조리종사자들은 장염, 복통, 구토 등의 증세가 없어 현장에서 음식 조리에 참여하고 있었다.
- 식중독 검사 건수는 2012년 164건, 2013년 107건, 2014년 75건, 2015년 235건으로 총 581건이었다. 이들 중 Real-time RT-PCR 분석 결과 78건 양성(13.4%)이었고, RT-PCR에서는 71건 양성(12.2 %)이었다. 연도별 양성율은 2012년 18.
- 원인 추정 식품을 환자의분변에서 검출된 Norovirus 유전형과 매치한 현황은 Table 8과 같다. 일부 식품과 지하수 사용 업소의 지하수에 대해서는 Norovirus에 대한 유전자 검사 결과는 Norovirus 불검출로 나타났다. 기존 연구들에서는 굴과 같은 해산물이 Norovirus 매개된 식중독을 일으키는 주요 식품으로 알려져 왔다.
후속연구
- 또한앞으로의 식중독 예방 및 관리에 대한 기초적인 역학적 자료를 제공할 수 있을 것으로 사료되며, 향후 부산지역에서 발생되는 식중독의 원인 바이러스와 유전자형의 분포 양상에 대한지속적인 모니터링이 필요할 것으로 판단되며 이를 통해 새로운 Norovirus 유전자형에 의한 대형 식중독 발생을 조기에탐지하고 예방할 수 있을 것으로 기대된다.
- 있다. 이 GII-6형이 부산지역에서는 어떠한 요인으로 꾸준히 우세한유전자형이 되었는지는 여러 환경적 요인에 대한 다각적인연구가 필요할 것으로 생각되며, 앞으로 부산지역의 Norovi- rus 대한 예방 대책 수립에 있어서 GII-6형에 대한 우선적 고려가 되어야 할 것으로 사료된다. 이제까지 부산지역 식중독 발생 사례에 대한 Norovirus의 역학 자료가 미비한 실정이었다.
- 000에 가까움으로써, 연령대간의 유의미한 차이가 없었음을 통계적으로 확인할 수 있었다. 이러한 연령별 분석 결과로 볼 때, 10대를 위한 위생에 대한 기본 교육 및 식중독 예방 교육을 더욱 철저히 실시한다면 Norovirus에 의한 식중독의 확산 방지에 도움이 될 것이다.
- 국내외 보고에서 무증상 조리종사자가 매개한 Norovirus 집단 발생이 종종 보고되고 있는 만큼[16, 19, 33] Norovirus에 무증상 감염된 조리종사자는 임상적 자각 증세는 없지만 Norovirus의 감염원이 될 수 있으므로, 평소 개인위생 관리를 철저히 할 필요가 있다[34]. 향후, 조리 종사자에 대한 기본적인 위생, 식품 조리 및 급식 위생 등의 식중독 예방 교육이 더욱 필요할 것으로 생각된다.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.